Ultrasonik VialTweeter bilan namuna tayyorlash

Ultrasonik namuna tayyorlash

Ultrasonication is a common technique of sample treatment in order to get the sample ready for analyses such as polymers chain reaction (PCR), Western Blots, assays, molecular sequencing, chromatography etc. Ultrasonication is a technique widely used in laboratories to treat samples pre-analytically. A major advantage of sonication is that the working principle of ultrasound is based on purely mechanical forces. Ultrasonic lysis and cell disruption is achieved by sonomechanical shear forces, which gives ultrasonication the advantage that the solvents used for protein extraction can be used also during lysis. Ultrasonic cell disruptors such as the VialTweeter break the cell walls / membranes and promote mass transfer between cell interior and solvent. Thereby, the analyte (e.g. DNA, RNA, proteins, organelles etc.) are efficiently transferred from the cell matrix into the solvent. This means the steps of quenching and extraction overlap with the ultrasonic cell disruption process, which makes ultrasonic lysis very effective. Furthermore, ultrasonic sample preparation does not require detergents and other lysis reagents, which might alter and destruct the structure of the lysate and is known for the subsequent troubles with purification. Another lysis method, the enzymatic disruption requires long incubation times and delivers often non-reproducible results. Ultrasonic sample preparation overcomes common problems in sample preparation such as tissue homogenization, cell disruption, lysis, protein extraction and lysate solubilization. Since the intensity of the ultrasonic treatment can be exactly controlled and adjusted to the biological sample, degradation and sample loss are avoided. Automatically monitored and controlled sample temperature, pulse mode and sonication duration ensure optimum outcomes.

VialTweeter bir xil sharoitda bir vaqtning o'zida bir nechta namunalarni tayyorlashni talab qiladigan laboratoriya ishlari uchun juda qulaydir. VialTweeter ultratovushli sonotrod bloki bo'lib, u 10 tagacha flakonni (masalan, Eppendorf, tsentriguge, NUNC naychalari, kriyo-flakonlarni) o'z ichiga oladi va ularni aniq nazorat ostida bo'lgan sharoitda sonikatsiya qiladi. Ultratovush energiyasi flakonlarning devorlari orqali namuna muhitiga bog'langanligi sababli, flakonlar davolanish vaqtida yopiq holatda bo'ladi. Shunday qilib, namunalarni yo'qotish va o'zaro ifloslanishdan butunlay qochishadi.

VialTweeter-ga mos shisha va naychalar

VialTweeter Eppendorf, santrifüj, krio-flakonlar va turli xil NUNC flakonlari singari 10 ta konusning yoki dumaloq pastki naychalarni saqlash uchun javob beradi, ammo teshiklar so'rov bo'yicha boshqa flakon va naychaning o'lchamlariga moslashtirilishi mumkin. Iltimos, VialTweeter-ni mos ravishda o'zgartirishimiz uchun qaysi sinov naychalarini ishlatmoqchi ekanligingizni bizga xabar bering. Falcon naychalari va boshqa sinov idishlari, stakan va idishlar kabi kattaroq sinov naychalari uchun VialPress qulay echimdir.

VialPress bilan VialTweeter

VialTweeter-ning o'zi 10 ta naychali teshiklari bilan noyob va yuqori darajada ishlaydigan ultratovush qurilmasi bo'lsa-da, VialPress qo'shimchasi VialTweeter-ni ishlash uchun yanada ko'p qirrali va moslashuvchan qiladi. VialPress - bu VialTweeter-ning aksessuari bo'lib, u VialTweeter old tomoniga Falcon naychalari yoki boshqa kichik va o'rta o'lchamli sinov stakanlari singari kattaroq namunali naychalarni o'rnatishga imkon beradi. Chapdagi rasmda VialTweeter blokda 10 ta Eppendorf flakonini ushlab turgani ko'rsatilgan, VialPress esa ultratovush qilish uchun bitta kattaroq probirkani old tomonga o'rnatgan. VialPress kuchli sonikatsiya uchun 5 tagacha kattaroq sinov naychalarini saqlashga qodir.

VialTweeter namunasini tayyorlash protokollari

VialTweeter biologik namunalarni sonikatsiya qilish uchun keng qo'llaniladi. Tahlil qilishdan oldin namunalar biokimyoviy yoki biofizik tahlillar va tahlillar uchun tayyorlanishi kerak, masalan, lizis, to'qima gomogenizatsiyasi, oqsil ekstrakti, DNK / RNK qirqish, degassatsiya va boshqalar. VialTweeter ushbu ultratovush jarayonlarini ishonchli bajaradi va takrorlanadigan natijalarni beradi. VialTweeter-ning keng tarqalgan qo'llanilishi sutemizuvchilar (odam va hayvon) to'qimalarining, shuningdek bakteriyalar hujayralari va virusli zarralarning lizisi / hujayralarining buzilishi hisoblanadi. Muvaffaqiyatli VialTweeter bilan davolash qilingan biologik namunalar orasida inson o'pka epiteliy hujayralari, gemotopoetik ildiz hujayralari, miyeloid leykemiya hujayralari, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus antrasis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptokokk pyogenlari, Caulobacter yarim oyi, Mikoplazma pnevmoniyasi, mikobakteriyalar / Mycobacterium tuberculosis kompleksi (MTBC) va boshqa ko'plab bakterial, botanika va mikrob hujayralari.
Quyida VialTweeter-ni o'z ichiga olgan bir nechta tanlangan protokollarni topishingiz mumkin.

In-Vivo Glutationni aniqlash uchun VialTweeter bilan E.Coli lizisi

MG1655 shtammining esherichia coli bakteriyalari MOPS minimal muhitida umumiy miqdori 200ml bo'lgan, 0,5 A600 ga yetguncha etishtirildi. Madaniyat stressni davolash uchun 50 ml madaniyatga bo'lingan. 0,79 mM allisin, 1 mM diamid yoki dimetil sulfoksid (nazorat) bilan 15 minut inkubatsiyadan so'ng hujayralar 4000 g da 4 ° C da 10 daqiqa davomida yig'ib olindi. Hujayralar granulalarni 700µl KPE tamponda qayta tiklashdan oldin KPE tampon bilan ikki marta yuvilgan. Deproteinatsiya uchun ultratovush bilan hujayralarni buzilishidan oldin (3 x 1 min; VialTweeter ultrasonikator) 300% l 10% (v / h) sulfosalitsil kislotasi qo'shildi. Supero'tkazuvchilar santrifüjdan so'ng yig'ilgan (30 min, 13,000g, 4 ° C). Sulfosalitsil kislota konsentratsiyasi KPE tamponiga 3 ta hajm qo'shilishi bilan 1% gacha kamaytirildi. Umumiy glutation va GSSG o'lchovlari yuqorida aytib o'tilganidek amalga oshirildi. Uyali glutation kontsentratsiyasi E. coli xujayralari hajmi 6,7 × 10-15 litr va hujayra zichligi A600 0,5 (1 × 108 xujayralari ml-1 madaniyatiga teng) asosida hisoblab chiqilgan. GSH kontsentratsiyasi umumiy glutationdan 2 [GSSG] olib tashlash yo'li bilan hisoblab chiqilgan. (Myuller va boshq. 2016)

Grafitli pechning atomik yutilish spektrometriyasidan oldin VialTweeter yordamida hujayra lizisi

Bacillus subtilis 168 (trpC2) 15 minut antibiotik stressiga duchor bo'lgan, keyin hujayralar 3320 xg da yig'ilgan, 100 mM Tris / 1 mM EDTA, pH 7.5 bilan besh marta yuvilgan, 10 mM Trisda qayta tiklangan, pH 7.5 va ultratovush bilan buzilgan. Hielscher VialTweeter asbobida. (Wenzel va boshq. 2014)

Mass spektrometriyadan oldin VialTweeter namunasini tayyorlash

Inson CD34􏰀 gematopoetik ildiz / nasl qoldiruvchi hujayralarining liyofilizatsiyalangan hujayra pelletlari 100 mM ammoniy vodorod karbonatidagi 8 M karbamid karbamididan 10µ􏰇l (200 (l, peptidni suyultirish seriyasiga tayyorlash uchun) qayta tiklandi va Hielscher VialTweeter yordamida ultratovush bilan yordam berildi. 60% amplituda, 60% tsikl va 20s davomiyligi uch marta muz ustida oraliq sovutish bilan. (Omon va boshq. 2019)

VialPress yordamida namunalarni tayyorlash protokollari

Yangi marul (Lactuca sativa) 0,5 g HEPES tamponida (pH 8, KOH sozlangan) 1 g o'simlik (yangi vazn) nisbatida 200, 100, 50 yoki 20 ml tampon eritmasiga bir hil holga keltirildi. Gomogenatning umumiy hajmini 3,5 dan 12 ml gacha ushlab turish uchun o'simlik massasining tampon eritmasi hajmiga nisbati o'zgargan. O'simlik massasining bufer eritma hajmiga nisbati gomogenatning umumiy hajmini 3,5 dan 12 ml gacha ushlab turish uchun o'zgarib, zond bilan bir hil holga keltirishga imkon berdi. Keyin homogenatlar bilvosita ultratovush tekshiruvidan VialTweeter bilan 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Germaniya) bilan jihozlangan UP200St yordamida 3 minut davomida (80% puls va 100% quvvat) o'tkazdilar. Ushbu qurilmadan foydalanish ifloslanishning oldini oldi. (Laughton va boshq. 2019)

VialTweeter yordamida sonikatsiya paytida haroratni ishonchli boshqarish

Harorat biologik namunalarni davolash uchun ayniqsa muhim bo'lgan hal qiluvchi jarayonga ta'sir qiluvchi omil hisoblanadi. Barcha mexanik namunalarni tayyorlash texnikasi kabi ultratovush issiqlikni hosil qiladi. Biroq, VialTweeter-dan foydalanganda namunalarning harorati yaxshi nazorat qilinishi mumkin. Namunalaringizni tahlil qilish uchun VialTweeter va VialPress bilan tayyorlayotganda, ular harorati nazorat qilish va boshqarish uchun sizga turli xil variantlarni taqdim etamiz.

1. Namuna haroratini nazorat qilish: VialTweeter-ni boshqaradigan UP200St ultratovush protsessori aqlli dasturiy ta'minot va ulanadigan harorat sensori bilan jihozlangan. Harorat sensori UP200St-ga ulang va harorat sensori uchini namuna naychalarining biriga joylashtiring. Raqamli rangli sensorli displey orqali UP200St menyusida ultratovush namunasi uchun ma'lum bir harorat oralig'ini o'rnatishingiz mumkin. Ultrasonikator maksimal haroratga yetganda avtomatik ravishda to'xtaydi va namuna harorati belgilangan haroratning pastki qiymatiga tushguncha to'xtaydi. Keyin sonikatsiya yana avtomatik ravishda boshlanadi. Ushbu aqlli xususiyat issiqlik ta'sirida buzilishning oldini oladi.
2. VialTweeter blokini oldindan sovutish mumkin. Titan blokini oldindan sovutish uchun muzlatgichga yoki muzlatgichga VialTweeter blokini qo'ying (faqat transdusersiz sonotrod!) Namunadagi harorat ko'tarilishini kechiktirishga yordam beradi. Iloji bo'lsa, namunaning o'zi ham oldindan sovutilishi mumkin.
3. Sonikatsiya paytida sovutish uchun quruq muzdan foydalaning. Quruq muz bilan to'ldirilgan sayoz laganda ishlating va issiqlik tezda tarqalishi uchun VialTweeter-ni quruq muz ustiga qo'ying.

Biologik, biokimyoviy, tibbiy va klinik laboratoriyalarda kundalik namunalarni tayyorlash uchun butun dunyo bo'ylab mijozlar VialTweeter va VialPress-dan foydalanadilar. UP200St protsessorining aqlli dasturiy ta'minoti va haroratni boshqarish, harorat ishonchli boshqariladi va issiqlik ta'sirida namuna parchalanishiga yo'l qo'yilmaydi. VialTweeter va VialPress bilan ultratovush namunalarini tayyorlash juda ishonchli va takrorlanadigan natijalarni beradi!

VialTweeter-ning texnik tafsilotlari

VialTweeter - blok ichidagi teshiklarda 10 tagacha flakonni ushlab turadigan titandan tayyorlangan sonotrod bloki. Bundan tashqari, VialPress yordamida VialTweeter old tomoniga 5 tagacha kattaroq probirkalarni yopishtirish mumkin. VialTweeter ultrasonikatsiya energiyasi ishonchli va bir xil sonikatsiya natijalarini ta'minlash uchun har bir kiritilgan flakonga bir tekis taqsimlanadigan darajada ishlab chiqilgan. Kichkina burilish VialTweeter sonotrode-ni tekis bo'lmagan erga o'rnatadi va sinov naychalarini vertikal ravishda tekislaydi.

VialTweeterning afzalliklari bir qarashda

• Bir vaqtning o'zida 10 ta shisha idishining shiddatli sonikatsiyasi
• Namuna ichiga tomir devori orqali yuqori ultrasonik zichlikdagi bevosita sonikatsiya
• Bilvosita sonikatsiya o'zaro nopoklik va namunani yo'qotishdan qochadi
• Sozlanishi va boshqarish mumkin sonication amplituda tufayli qayta ishlanadigan natijalar
• VialPress sizni katta quvurlarni sonikalash imkonini beradi
• 20 dan 100% gacha sozlanishi amplituda
• 0 dan 100% gacha sozlanishi yurak urish tartibi
• avtoklavlanishi mumkin

VialTweeter-da quvvatlanadi UP200St, 200 vattli kuchli ultratovushli protsessor. UP200St amplituda, sonikatsiya vaqti, pulsatsiya va harorat kabi barcha muhim ultratovush jarayon parametrlarini aniq boshqarish imkonini beradigan aqlli dastur bilan ta'minlangan. Bu VialTweeter-ni biologik va biokimyoviy laboratoriyalarda muvaffaqiyatli takrorlanadigan jarayon natijalari uchun ishonchli vositaga aylantiradi.
Amplituda 20 dan 100% gacha sozlanishi va shu bilan ultratovush intensivligini sizning namunangizga moslashtirishga imkon beradi. Masalan, DNK va RNKning qirqilishi va parchalanishi juda kichik DNK bo'laklari hosil bo'lishining oldini olish uchun yumshoq amplituda talab qiladi, sichqon miyasining to'qima homogenizatsiyasi yuqori intensiv sonikatsiyaga muhtoj. UP200St protsessoridagi aqlli va intuitiv menyu orqali ideal amplituda, sonikatsiya intensivligi va davomiyligini tanlang. Menyu va sozlamalarga rangli sensorli displey orqali osongina kirish va boshqarish mumkin. Sozlamalarda amplituda, pulsatsiya / tsikl rejimi, sonikatsiya davomiyligi, umumiy energiya sarfi va harorat chegaralari kabi sonikatsiya parametrlarini oldindan belgilashingiz mumkin. Tadqiqot va ishlab chiqarishda sinovlar va sinov natijalarining takrorlanishi juda muhimdir. Bu shuni anglatadiki, jarayon shartlarini aniq yozib olish va ultratovush protokollari juda muhimdir. Ma'lumotlarni avtomatik protokollash barcha ultratovush ma'lumotlarini o'rnatilgan SD-kartadagi CSV-faylga yozadi, shunda siz har xil sonikatsiya ishlarini osongina tekshirishingiz va taqqoslashingiz mumkin. Barcha ultratovushli jarayon ma'lumotlariga osongina kirish va ularni CSV fayli sifatida bo'lishish mumkin.
Hielscher Ultrasonics tadqiqot ishingizni engillashtirish va takomillashtirish uchun sizga ilg'or texnologiyalarni taqdim etishga intiladi!