VialTweeter Sonicator bilan namuna tayyorlash
Tahlil qilishdan oldin namunani tayyorlash to'qimalarning gomogenizatsiyasi, lizis, oqsillar, DNK, RNK, organellalar va boshqa hujayra ichidagi moddalarni ekstraktsiyalash, eritish va gazsizlantirish kabi turli xil tahlildan oldingi jarayonlarni talab qilishi mumkin. VialTweeter - bu bir xil sharoitlarda bir vaqtning o'zida bir nechta namunali naychalarni tayyorlaydigan noyob sonikator. Yopiq probirkalarning bilvosita sonikatsiyasi tufayli o'zaro ifloslanish va namunani yo'qotishning oldini oladi.
ultratovush namunasini tayyorlash
Ultrasonikatsiya namunani polimerlar zanjiri reaktsiyasi (PCR), Western Blots, tahlillar, molekulyar ketma-ketlik, xromatografiya va boshqalar kabi tahlillarga tayyorlash uchun namunani qayta ishlashning keng tarqalgan usuli hisoblanadi. analitik tarzda. Sonikatsiyaning asosiy afzalligi shundaki, ultratovushning ishlash printsipi faqat mexanik kuchlarga asoslangan. Ultrasonik liziz va hujayra buzilishiga sonomexanik kesish kuchlari orqali erishiladi, bu ultratovushga afzallik beradi, chunki oqsillarni olish uchun ishlatiladigan erituvchilar liziz paytida ham ishlatilishi mumkin. VialTweeter kabi ultratovushli hujayra buzilishlari hujayra devorlarini / membranalarini buzadi va hujayraning ichki qismi va erituvchi o'rtasida massa almashinuvini ta'minlaydi. Shunday qilib, tahlil qiluvchi modda (masalan, DNK, RNK, oqsillar, organellalar va boshqalar) hujayra matritsasidan erituvchiga samarali o'tkaziladi. Bu shuni anglatadiki, söndürme va ekstraktsiya bosqichlari ultratovushli hujayralarni buzish jarayoni bilan bir-biriga mos keladi, bu ultratovushli lizizni juda samarali qiladi. Bundan tashqari, ultratovushli namunani tayyorlash yuvish vositalarini va boshqa lizis reagentlarini talab qilmaydi, ular lizatning tuzilishini o'zgartirishi va buzishi mumkin va keyingi tozalash bilan bog'liq muammolar bilan mashhur. Lizisning yana bir usuli, fermentativ buzilish uzoq inkubatsiya vaqtlarini talab qiladi va ko'pincha takrorlanmaydigan natijalarni beradi. Ultrasonik namunani tayyorlash namunani tayyorlashda to'qimalarni homogenlashtirish, hujayra buzilishi, lizis, oqsillarni ekstraktsiyalash va lizatni eritish kabi keng tarqalgan muammolarni bartaraf etadi. Ultrasonik davolashning intensivligi aniq nazorat qilinishi va biologik namunaga moslashtirilishi mumkinligi sababli, degradatsiya va namuna yo'qotilishining oldini oladi. Avtomatik ravishda nazorat qilinadigan va boshqariladigan namuna harorati, puls rejimi va sonikatsiya davomiyligi optimal natijalarni ta'minlaydi.
VialTweeter, ayniqsa, bir xil sharoitlarda bir nechta namunalarni bir vaqtning o'zida tayyorlashni talab qiladigan laboratoriya ishlari uchun qulaydir. VialTweeter ultratovush blokli sonotrod bo'lib, u 10 tagacha flakonni (masalan, Eppendorf, santrifuga, NUNC naychalari, kriyo flakonlar) ushlab turadi va ularni aniq nazorat ostidagi sharoitlarda intensiv ravishda sonikatsiya qiladi. Ultrasonik energiya flakonlarning devorlari orqali namunali muhitga ulanganligi sababli, davolash paytida flakonlar yopiq holda saqlanadi. Shunday qilib, namunani yo'qotish va o'zaro kontaminatsiyadan butunlay qochish mumkin.
Ultrasonik namuna tayyorlash birligi VialTweeter: VialTweeter ultratovushli protsessorda sonotrode UP200St
VialTweeter-ga mos keladigan flakonlar va naychalar
VialTweeter Eppendorf, sentrifuga, kriyo flakonlar va turli NUNC flakonlari kabi 10 ta umumiy konussimon yoki dumaloq tubli trubkalarni saqlashga mos keladi, ammo so'rov bo'yicha teshiklarni boshqa flakon va kolba o'lchamlariga moslashtirish mumkin. Iltimos, VialTweeter-ni mos ravishda o'zgartirishimiz uchun qaysi turdagi probirkalardan foydalanmoqchi ekanligingizni bizga xabar bering. Falcon naychalari va boshqa sinov idishlari, stakan va idishlar kabi kattaroq sinov naychalari uchun VialPress qulay echimdir.
VialTweeter modeli VT26dxx, masalan, Falcon naychalari uchun maxsus probirka o'lchamiga moslashtirilgan haqida ko'proq o'qing!
VialPress bilan VialTweeter
VialTweeter-ning o'zi 10 trubkali teshiklari bilan allaqachon noyob va yuqori funktsional ultratovush qurilmasi bo'lsa-da, VialPress qo'shimchasi VialTweeter-ni yanada ko'p qirrali va ishlash uchun moslashuvchan qiladi. VialPress VialTweeter uchun qo'shimcha bo'lib, qisqichli novdadan iborat bo'lib, Falcon naychalari yoki boshqa kichik va o'rta o'lchamdagi sinov stakanlari kabi kattaroq namunali naychalarni VialTweeter old tomoniga mahkamlash imkonini beradi. Chapdagi rasmda VialTweeter blokda 10 ta Eppendorf flakonini ushlab turgani, VialPress esa sonikatsiya uchun old tomonga bitta kattaroq probirkani mahkamlagani ko'rsatilgan. VialPress kuchli sonikatsiya uchun 5 tagacha kattaroq probirkalarni ushlab turishga qodir.
VialTweeter namunasini tayyorlash protokollari
VialTweeter biologik namunalarni sonikatsiya qilish uchun keng qo'llaniladi. Tahlil qilishdan oldin namunalar biokimyoviy yoki biofizikaviy tahlillar va tahlillar uchun tayyorlanishi kerak, masalan, lizis, to'qimalarni homogenlashtirish, oqsillarni ajratib olish, DNK/RNKni kesish, gazsizlantirish va hokazo. VialTweeter bu ultratovush jarayonlarini ishonchli bajaradi va takrorlanadigan natijalarni beradi. VialTweeter-ning keng tarqalgan qo'llanilishi sutemizuvchilar (odam va hayvon) to'qimalarining, shuningdek, bakteriya hujayralari va virus zarralarining lizisi/hujayralarining buzilishidir. VialTweeter bilan muvaffaqiyatli davolangan biologik namunalar orasida inson o'pka epitelial hujayralari, gematopoetik ildiz hujayralari, miyeloid leykemiya hujayralari, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus anthracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptococcus pyogenes, Caulobacter crescentus, Mycoplasma pneumoniae, mikobakteriyalar, Mycobacterium tuberculosis kompleksi (MTBC) va boshqa ko'plab bakterial, botanika va mikrobial hujayralar.
Quyida VialTweeter-ni o'z ichiga olgan bir nechta tanlangan protokollarni topishingiz mumkin.
VialTweeter 1,0, 1,5 va 2,0 ml Eppendorf naychalarini yuqori intensivlikda o'zaro ifloslanishsiz yoki namunani yo'qotmasdan sonikatsiya qiladi.
- to'qimalarning gomogenizatsiyasi
- hujayra buzilishi & lizis
- protein ekstraktsiyasi
- DNK/RNKni kesish
- hujayra pelletini eritish
- patogenni aniqlash
- gazsizlantirish
- in vitro diagnostika
- tahlildan oldingi davolash (masalan, iz mineral qazib olish, tuproq namunasini tayyorlash)
- proteomika
In-vivo glutationni aniqlash uchun VialTweeter bilan E.Coli lizizi
MG1655 shtammining Escherichia coli bakteriyalari A600 0,5 ga erishilgunga qadar MOPS minimal muhitida 200 ml umumiy hajmda yetishtirildi. Madaniyat stressni davolash uchun 50 ml kulturalarga bo'lingan. 0,79 mM allitsin, 1 mM diamid yoki dimetil sulfoksid (nazorat) bilan 15 daqiqa inkubatsiyadan so'ng hujayralar 4000 g da 4 ° C da 10 daqiqa davomida yig'ib olindi. 700 µl KPE buferida pelletlarni qayta suspenziya qilishdan oldin hujayralar KPE buferi bilan ikki marta yuvildi. Deproteinatsiya qilish uchun hujayralarni ultratovush bilan buzishdan oldin (3 x 1 min; VialTweeter ultrasonikatori) 300 µl 10% (w/v) sulfosalitsil kislotasi qo‘shilgan. Supernatantlar santrifüjdan so'ng yig'ildi (30 min, 13000 g, 4 ° C). 3 hajmli KPE buferi qo'shilishi bilan sulfosalitsil kislota konsentratsiyasi 1% gacha kamaydi. Umumiy glutation va GSSG o'lchovlari yuqorida aytib o'tilganidek amalga oshirildi. Uyali glutation kontsentratsiyasi E. coli hujayralari hajmi 6,7 × 10-15 litr va hujayra zichligi A600 0,5 (1 × 108 hujayra ml-1 madaniyatiga teng) asosida hisoblab chiqilgan. GSH kontsentratsiyasi umumiy glutationdan 2[GSSG] ni ayirish yo'li bilan hisoblangan. (Myuller va boshq. 2016)
VialTweeter bilan alfa-sinuklein fibrilining parchalanishi
VialTweeter sonikatori alfa-sinuklein fibrillalari va lentalarini ishonchli va samarali parchalash uchun keng qo'llaniladi. VialTweeter yordamida alfa-sinuklein parchalanishi uchun batafsil tavsiflar, protokollar va havolalarni topish uchun shu yerni bosing!
Grafit pechining atom yutilish spektrometriyasidan oldin VialTweeter bilan hujayra lizisi
Bacillus subtilis 168 (trpC2) 15 daqiqa antibiotik stressiga duchor bo'ldi, so'ngra hujayralar 3320 xg da yig'ib olindi, besh marta 100 mM Tris/1 mM EDTA, pH 7,5 bilan yuvildi, 10 mM Trisda qayta suspenziya qilindi, pH 75 bilan buzildi. Hielscher VialTweeter asbobida. (Wenzel va boshq. 2014)
Mass-spektrometriyadan oldin VialTweeter namunasini tayyorlash
Odamning CD34-gematopoetik ildiz/progenitor hujayralarining liyofillangan hujayra pelletlari 10µl (peptidlarni suyultirish seriyasi uchun ommaviy HEK293 preparati uchun 200µl) 8 M karbamidda 100 mM ammoniyli vodorodli karbonatli ultratovushli sonikli karbonat bilan qayta suspenziya qilindi. 60% amplituda, 60% tsikli va muz ustida oraliq sovutish bilan uch marta 20s davomiyligi. (Amon va boshq. 2019)
VialPress yordamida namuna tayyorlash protokollari
Yangi marul (Lactuca sativa) 0,5 M HEPES tamponida (pH 8, KOH sozlangan) 1 g o'simlik (yangi og'irlik) 200, 100, 50 yoki 20 ml bufer eritmasi nisbatida bir hil holga keltirildi. O'simlik massasining bufer eritmasi hajmiga nisbati umumiy gomogenat hajmini 3,5 dan 12 ml gacha ushlab turish uchun o'zgartirildi. O'simlik massasining bufer eritmasi hajmiga nisbati umumiy homogenat hajmini 3,5 va 12 ml oralig'ida ushlab turish uchun o'zgartirildi, bu esa zond bilan bir xillashtirish imkonini beradi. Keyin homogenatlar 3 min (80% zarba va 100% quvvat) uchun 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Germaniya) bilan jihozlangan VialTweeter bilan UP200St yordamida bilvosita ultratovush tekshiruvidan o'tdi. Ushbu qurilmadan foydalanish ifloslanishning oldini oldi. (Laughton va boshq. 2019)
Ultrasonik protsessorda 10 ta Eppendorf flakonli VialTweeter UP200St
VialTweeter bilan sonikatsiya paytida ishonchli haroratni nazorat qilish
Harorat jarayonga ta'sir qiluvchi hal qiluvchi omil bo'lib, biologik namunalarni davolashda ayniqsa muhimdir. Namuna tayyorlashning barcha mexanik usullari singari, sonikatsiya issiqlik hosil qiladi. Biroq, VialTweeter-dan foydalanganda namunalarning harorati yaxshi nazorat qilinishi mumkin. Biz sizga VialTweeter va VialPress yordamida namunalaringiz haroratini kuzatish va nazorat qilish uchun turli xil variantlarni taqdim etamiz.
- Namuna haroratini kuzatish: VialTweeter-ni boshqaradigan ultratovushli protsessor UP200St aqlli dasturiy ta'minot va ulanadigan harorat sensori bilan jihozlangan. Harorat sensorini UP200St ga ulang va harorat sensori uchini namuna naychalaridan biriga joylashtiring. Raqamli rangli sensorli displey orqali siz UP200St menyusida namunaviy sonikatsiya uchun ma'lum bir harorat oralig'ini o'rnatishingiz mumkin. Ultrasonikator maksimal haroratga erishilganda avtomatik ravishda to'xtaydi va namuna harorati belgilangan harorat ∆ pastki qiymatiga tushguncha pauza qiladi. Keyin sonication yana avtomatik ravishda boshlanadi. Bu aqlli xususiyat issiqlikdan kelib chiqadigan buzilishning oldini oladi.
- VialTweeter bloki oldindan sovutilishi mumkin. Titan blokini oldindan sovutish uchun VialTweeter blokini (faqat transdusersiz sonotrod!) muzlatgichga yoki muzlatgichga qo'ying, namunadagi harorat ko'tarilishini kechiktirishga yordam beradi. Iloji bo'lsa, namunaning o'zi ham oldindan sovutilishi mumkin.
- Sonikatsiya paytida sovutish uchun quruq muzdan foydalaning. Quruq muz bilan to'ldirilgan sayoz patnisdan foydalaning va issiqlik tez tarqalishi uchun VialTweeterni quruq muz ustiga qo'ying.
Butun dunyo bo'ylab mijozlar VialTweeter va VialPress-dan biologik, biokimyoviy, tibbiy va klinik laboratoriyalarda kundalik namuna tayyorlash ishlari uchun foydalanadilar. UP200St protsessorining aqlli dasturiy ta'minoti va haroratni nazorat qilish, harorat ishonchli tarzda boshqariladi va issiqlik ta'sirida namuna degradatsiyasining oldini oladi. VialTweeter va VialPress yordamida ultratovushli namuna tayyorlash juda ishonchli va takrorlanadigan natijalarni beradi!
VialTweeter-ning texnik tafsilotlari
VialTweeter titandan tayyorlangan blokli sonotrod bo'lib, blok ichidagi teshiklarda 10 flakongacha sig'ishi mumkin. Bundan tashqari, VialPress yordamida 5 tagacha kattaroq probirkalarni VialTweeter old qismiga mahkamlash mumkin. VialTweeter shunday ishlab chiqilganki, ultratovush energiyasi ishonchli va bir xil sonikatsiya natijalarini ta'minlash uchun har bir kiritilgan flakonga bir tekis taqsimlanadi. Kichkina pivot VialTweeter sonotrodini notekis erga moslashtiradi va sinov naychalarini vertikal ravishda tekislaydi.
Bir qarashda VialTweeter-ning afzalliklari
- Bir vaqtning o'zida 10 flakongacha intensiv sonikatsiya
- Namuna ichiga tomir devori orqali yuqori ultratovush intensivligida bilvosita sonikatsiya
- Bilvosita sonikatsiya o'zaro kontaminatsiyadan va namunani yo'qotishdan qochadi
- Sozlanishi va boshqariladigan sonikatsiya amplitudasi tufayli takrorlanadigan natijalar
- VialPress sizga kattaroq naychalarni sonikatsiya qilish imkonini beradi
- 20 dan 100% gacha sozlanishi amplituda
- 0 dan 100% gacha sozlanishi impuls rejimi
- Avtoklavlanadigan
VialTweeter tomonidan quvvatlanadi UP200St, 200 vattli kuchli ultratovushli protsessor. UP200St amplituda, sonikatsiya vaqti, pulsatsiya va harorat kabi barcha muhim ultratovush jarayoni parametrlarini aniq nazorat qilish imkonini beruvchi aqlli dasturiy ta'minot bilan jihozlangan. Bu VialTweeterni biologik va biokimyoviy laboratoriyalarda muvaffaqiyatli takrorlanadigan jarayon natijalari uchun ishonchli vositaga aylantiradi.
Amplituda 20 dan 100% gacha sozlanishi mumkin va shu bilan ultratovush intensivligini namunangizga moslashtirishga imkon beradi. Masalan, DNK va RNKning parchalanishi va parchalanishi juda kichik DNK fragmentlari hosil bo'lishining oldini olish uchun yumshoqroq amplitudani talab qiladi, sichqon miyasining to'qimalarining homogenizatsiyasi yuqori intensiv sonikatsiyaga muhtoj. UP200St protsessoridagi aqlli va intuitiv menyu orqali ideal amplituda, sonikatsiya intensivligi va davomiyligini tanlang. Menyu va sozlamalarga osongina kirish va rangli sensorli displey orqali boshqarish mumkin. Sozlamalarda siz amplituda, pulsatsiya, sikl rejimi, sonikatsiya davomiyligi, umumiy energiya kiritish va harorat chegaralari kabi sonikatsiya parametrlarini oldindan o'rnatishingiz mumkin. Tadqiqot va ishlab chiqarishda sinovlar va sinov natijalarining takrorlanishi hal qiluvchi ahamiyatga ega. Bu shuni anglatadiki, jarayon shartlari va sonikatsiya protokollarini aniq qayd etish juda muhimdir. Avtomatik ma'lumotlar protokoli barcha sonikatsiya ma'lumotlarini o'rnatilgan SD-kartadagi CSV fayliga yozadi, shunda siz turli sonikatsiya ishlarini osongina tekshirishingiz va taqqoslashingiz mumkin. Barcha ultratovush jarayoni ma'lumotlariga osongina kirish va CSV fayli sifatida almashish mumkin.
Hielscher Ultrasonics tadqiqot ishingizni engillashtirish va yaxshilash uchun ilg'or texnologiyalar bilan ta'minlashga intiladi!
Bilvosita sonikatsiya uchun VialPress bilan VialTweeter.
Tadqiqot va fanda ultratovushli VialTweeter
VialTweeter 200 vatt quvvatga ega kuchli ultratovushli protsessor bo'lib, u bir vaqtning o'zida bir nechta Eppendorf flakonlari yoki shunga o'xshash probirkalardan ultratovush namunasini tayyorlash uchun idealdir. Shuning uchun VialTweeter tadqiqot va hayot haqidagi fanlar uchun biologik va biokimyoviy laboratoriyalarda tez-tez ishlatiladi. Quyida VialTweeter ultratovush protsessorini o'z ichiga olgan ilmiy maqolalar to'plamini topishingiz mumkin. Maqolalar ultratovushli namunani gomogenlashtirish, hujayraning buzilishi va lizis, DNKni kesish va parchalanish, oqsillar va bioaktiv birikmalarni ekstraksiya qilish, shuningdek, SARS-CoV-2 koronavirusini inaktivatsiya qilish kabi turli xil ilovalarni qamrab oladi. Agar siz aniq dastur va tegishli ilmiy ma'lumotnomalarni qidirsangiz, biz bilan bog'laning.
- FactSheet VialTweeter VT26dxx – Customized VialTweeter Sonicator for Single Test Tubes or Vials
- FactSheet VialTweeter – Sonicator for Simultaneous Sample Preparation
- Gajek, Ryszard; Barley, Frank; She, Jianwen (2013): Determination of essential and toxic metals in blood by ICP-MS with calibration in synthetic matrix. Analytical Methods 5, 2013. 2193-2202.
https://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2013/ay/c3ay26036d - Nordenfelt P, Waldemarson S, Linder A, Mörgelin M, Karlsson C, Malmström J, Björck L. (2012): Antibody orientation at bacterial surfaces is related to invasive infection. Journal of Experimental Medicine 17;209(13), 2012. 2367-81.
- Wenzel, M., A. I. Chiriac, A. Otto, D. Zweytick, C. May, C. Schumacher, R. Gust, et al. (2014): Small Cationic Antimicrobial Peptides Delocalize Peripheral Membrane Proteins. Proceedings of the National Academy of Sciences 111, No. 14, 2014. E1409–E1418.
- Lindemann, C., Lupilova, N., Müller, A., Warscheid, B., Meyer, H. E., Kuhlmann, K., Eisenacher, M., Leichert, L. I. (2013): Redox proteomics uncovers peroxynitrite-sensitive proteins that help Escherichia coli to overcome nitrosative stress. The Journal of biological chemistry, 288(27), 2013. 19698–19714.
- Wenzel, M., Patra, M., Albrecht, D., Chen, D. Y., Nicolaou, K. C., Metzler-Nolte, N., Bandow, J. E. (2011): Proteomic signature of fatty acid biosynthesis inhibition available for in vivo mechanism-of-action studies. Antimicrobial agents and chemotherapy, 55(6), 2011. 2590–2596.
- Laughton, S., Laycock, A., von der Kammer, F. et al. (2019): Persistence of copper-based nanoparticle-containing foliar sprays in Lactuca sativa (lettuce) characterized by spICP-MS. Journal of Nanoparticle Research 21, 174 (2019).
- Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.
- Müller A., Eller J., Albrecht F., Prochnow P., Kuhlmann K., Bandow J. E., Slusarenko A. J., Leichert L.I.O. (2016): Allicin Induces Thiol Stress in Bacteria through S-Allylmercapto Modification of Protein Cysteines. Journal of Biological Chemistry, Vol. 291, No. 22, 2016. 11477-11490.
- Tim Krischuns; Franziska Günl; Lea Henschel; Marco Binder; Joschka Willemsen; Sebastian Schloer; Ursula Rescher; Vanessa Gerlt; Gert Zimmer; Carolin Nordhoff; Stephan Ludwig; Linda Brunotte (2018): Phosphorylation of TRIM28 Enhances the Expression of IFN-β and Proinflammatory Cytokines During HPAIV Infection of Human Lung Epithelial Cells. Frontiers in immunology Vol. 9, September 2018.
- Sabine Amon, Fabienne Meier-Abt, Ludovic C. Gillet, Slavica Dimitrieva, Alexandre P. A. Theocharides, Markus G. Manz, Ruedi Aebersold (2019): Sensitive Quantitative Proteomics of Human Hematopoietic Stem and Progenitor Cells by Data-independent Acquisition Mass Spectrometry. Molecular & Cellular Proteomics 18, 2019. 1454–1467.
Ultrasonik ishlov berish: Hielscher sizga fizibilite va optimallashtirishdan tijorat ishlab chiqarishgacha yordam beradi!