VialTweeter Sonicator yordamida Alpha-Synuclein Fragmentation
a-sinuklein fibrillalari va lentalari kichikroq fibril parchalarini yoki hatto alohida oqsil molekulalarini hosil qilish uchun ilmiy tadqiqotlarda parchalanadi, ularni turli xil eksperimental usullar yordamida osonroq tahlil qilish mumkin. VialTweeter Sonicator samarali va ishonchli alfa-sinuklein parchalanishi uchun eng ko'p ishlatiladigan ultrasonikatorlardan biridir.
Tadqiqotda a-sinuklein
Alfa-sinuklein fibrillalari - bu Parkinson kasalligi va demansning ba'zi shakllari kabi neyrodegenerativ kasalliklar, shu jumladan Lyui jismlari bilan demans bilan kuchli bog'langan oqsil agregatlari. Alfa-sinuklein fibrillalariga qaratilgan tadqiqotlar kasallikning rivojlanishidagi rolini tushunishga va potentsial terapevtik aralashuvlarni ishlab chiqishga qaratilgan. Alfa-sinuklein fibrillalarini kichikroq bo'laklarga bo'lish orqali tadqiqotchilar ularning o'ziga xos strukturaviy xususiyatlarini o'rganishlari mumkin. Masalan, alfa-sinuklein fibrillalarini parchalash tadqiqotchilarga ularning oqsillar, lipidlar yoki kichik molekulalar kabi boshqa molekulalar bilan o'zaro ta'sirini o'rganishga imkon beradi. Kichikroq bo'laklarni ishlab chiqarish orqali ushbu o'zaro ta'sir qiluvchi sheriklar uchun bog'lanish joylari va yaqinliklari yanada samaraliroq tekshirilishi mumkin. Kichikroq a-Syn fribrillari va lentalari ham o'zgargan toksiklik va biokimyoviy ta'sirlarni ko'rsatishi mumkin. Shuning uchun tez va oddiy namunali ishlov berishda takrorlanadigan natijalarni beradigan ishonchli va samarali parchalanish texnikasi juda muhimdir.
Ultrasonik Alpha-Syn parchalanishi: VialTweeter sonikatori aniq bir xil sharoitlarda bir vaqtning o'zida 10 flakongacha sonikatsiya qiluvchi ultratovushli namuna tayyorlash tizimidir. Dasturlashtiriladigan sozlamalar bir xil tajribalarni oddiy va tez qayta bajarishga imkon beradi, bu esa alfa-sinuklein fibril parchalanishida yuqori ishonchli va takrorlanadigan natijalar beradi.
VialTweeter sonikatori bir vaqtning o'zida bir nechta alfa-sinuklein namunalarining ultratovushli parchalanishi uchun.
Sonikator yordamida a-sinuklein namunasini tayyorlash
Alfa-sinuklein fibrillalarini o'rganishga yondashuvlardan biri sonikatsiya kabi usullardan foydalangan holda ularning ekstraktsiyasi va parchalanishini o'z ichiga oladi. Sonication - bu oqsil agregatlarini buzish va parchalash uchun yuqori intensivlikdagi, past chastotali ultratovush to'lqinlaridan foydalanadigan jarayon bo'lib, kichik fibrillalar yoki alohida oqsil molekulalarining chiqishiga olib keladi. VialTweeter sonikatori bu maqsadda a-sinuklein bilan bog'liq tadqiqot ishlarida keng qo'llaniladigan qurilma.
Ko'pgina tadqiqot tadqiqotlari alfa-sinuklein fibrillalarini sonikatsiya qilishning aniq namunalarini tayyorlash protokollarini tasvirlaydi, ular Hielscher VialTweeter-dan samarali va ishonchli a-sinuklein fibril parchalanishi uchun foydalanadilar. Fibrillalarni ultratovush yordamida parchalash orqali tadqiqotchilar olingan mahsulotlarni tahlil qilishlari va ularning tuzilishini, toksikligini va boshqa molekulalar bilan o'zaro ta'sirini tekshirishlari mumkin. Ushbu tadqiqot neyrodejeneratsiyaning asosiy mexanizmlari haqida muhim tushunchalar beradi va yangi terapevtik maqsadlarni aniqlaydi. VialTweeter sonikatoridan foydalangan holda yaxshi o'rnatilgan a-sinuklein sonikatsiya protokollari ishonchli va takrorlanadigan natijalarga imkon beradi.
Yuqori tasvirlar: parchalanmagan alfa-sinuklein fibrillalari
Pastki tasvirlar: VialTweeter sonikatori bilan ultratovushli parchalangan alfa-sinuklein fibrillalari
(tadqiqot va tasvirlar: ©Dieriks va boshqalar, 2022)
a-sinuklein fibrillalarining ultratovushli parchalanishi – protokollar
Ko'pgina tadqiqotchilar VialTweeter sonikatoridan bir xil a-sinuklein fibril qismlarini ishlab chiqarish uchun afzal bo'lgan parchalanish usuli sifatida foydalanganligi sababli, o'rnatilgan protokollar osongina mavjud. Quyida siz bir nechta namunali parchalanish protokollarini topishingiz mumkin.
ClearTau urug'ini tayyorlash: ClearTau fibrillalari dH2O da 10 mkM gacha suyultirildi va VialTweeter bilan UP200St sonikatoridan foydalangan holda 1 s ON 1 s OFF tsikli bilan 50 soniya davomida 70% amplituda sonikatsiya qilindi. Urug'lar elektron mikroskop bilan tavsiflangan.
ThS floresansini o'lchash: ClearTau fibrillalari dH2O ichida 2,5 mkM gacha suyultirildi va VialTweeter bilan UP200St yordamida 1 s ON 1 s OFF tsikli bilan 50 s davomida 70% amplituda sonikatsiya qilindi. Tekshirish sifatida 2,5 mkM to'liq uzunlikdagi Tau 4R2N monomeri ishlatilgan. 100 mkl reaktsiyaga 100 mkl ThS (10 mkM) qo'shildi va yakuniy protein konsentratsiyasi 1,25 mkM bo'ldi. Bir martalik nuqta ThS floresansi FLUOstar Omega mikroplatasini o'quvchiga o'rnatilgan 96 ta quduqli shaffof pastki plitalar yordamida 445 nm da qo'zg'alish va 485 nm emissiya bilan o'lchandi.
(Qarang: Limorenko va boshqalar, 2023)
Sonikatsiya yordamida bir xil a-sinuklein uzunligi: a-sin fibrillalari va lentalarining uzunligi heterojenligi 75% amplituda, 0,5 s impulslarda o'rnatilgan VialTweeterda 2 ml Eppendorf naychalarida muzda 20 daqiqa davomida ultratovush yordamida kamaydi.
(qarang. Bousset va boshqalar, 2013)
Inson rekombinant monomerik WT yoki S129A a-Syn va ular hosil qiladigan fibrillar polimorflari hamda a-Syn 1-110 sifatini nazorat qilish amalga oshirildi. Keyinchalik, fibrillar polimorflari endositoz uchun mos bo'lgan o'rtacha o'lchami 42-52 nm bo'lgan fibrilyar zarrachalarni hosil qilish uchun VialTweeter ultratovush qurilmasidagi 2 ml Eppendorf naychalarida 20 daqiqa davomida sonikatsiya orqali bo'lingan.
(qarang. Shrivastava va boshqalar, 2020)
Beshta fibrillyar a-Syn polimorflarining xarakteristikasi. (A) VialTweeter (pastki chiziq) bilan parchalanishdan oldin (yuqori chiziq) va keyin manfiy bo'yalgan a-Syn fibrillar polimorflari fibrillalar, lentalar, fibrillalar-91, fibrillalar-65 va fibrillalar-110 ning transmissiya elektron mikrografiyalari ko'rsatilgan. (B) parchalangan fibrillar polimorflarning uzunlik taqsimoti ko'rsatilgan. Gistogrammalar olingan fibrillyar birikmalar soni (n) ko'rsatilgan.
(tadqiqot va tasvirlar: Shrivastava va boshqalar, 2020)
TEM tahlili bilan baholangan o'rtacha o'lchami 42-52 nm bo'lgan fibrillar zarralarini hosil qilish uchun a-Syn fibrillalari VialTweeter'da 2 ml Eppendorf naychalarida 20 daqiqa davomida sonikatsiya orqali bo'lingan.
(Qarang: Negrini va boshqalar, 2022)
Qayta to'xtatilgan fibrillalar91 (PBSda) hujayra madaniyatiga qo'shilishdan oldin Flakon Tweeter sonikatoridan foydalangan holda 2 ml Eppendorf naychalarida 20 daqiqa davomida sonikatsiya yo'li bilan bo'lingan, alikotlangan, suyuq azotda muzlatilgan va -80 ̊C da ishlatilgunga qadar saqlangan.
(qarang. Vajhoj va boshqalar, 2021)
Ko'p quduqli plitalarda alfa-sinuklein fibril parchalanishi uchun sonikator UIP400MTP.
a-Syn fragmentatsiyasi uchun VialTweeter va Lab Sonicators
Hielscher Ultrasonics butun dunyo bo'ylab ilg'or ultrasonikatorlarning etakchi ishlab chiqaruvchisi sifatida tan olingan. Dunyo bo'ylab yirik tadqiqot laboratoriyalarida ishonchli va o'rnatilgan ultratovush apparatlarimiz muhim tajribalaringiz uchun misli ko'rilmagan sifat va samaradorlikni taklif etadi.
Hielscher VialTweeter va boshqa har qanday Hielscher sonikatori yordamida siz misli ko'rilmagan foydalanuvchi qulayligini his qilasiz, chunki ular takrorlanadigan natijalar, foydalanish qulayligi va uzluksiz ishlash uchun puxta ishlab chiqilgan. Avtomatik ma'lumotlarni yozib olish xususiyatlari bilan siz tadqiqotingizga e'tiboringizni qaratishingiz mumkin, shu bilan birga ultratovush apparatlarimiz takrorlanuvchanlik va aniqlik uchun muhim ma'lumotlarni sinchkovlik bilan yozib oladi.
Ishonch bilan izchil va takrorlanadigan natijalarga erishing!
Bizning ultrasonikatorlarimiz Germaniyada ishlab chiqilgan va ishlab chiqarilgan. Har safar alfa-sinuklein fibril parchalanishini ishonchli va aniq namuna tayyorlashni ta'minlash uchun nemis aniqligi va eng yuqori muhandislik sifati. Noto'g'ri natijalar haqida tashvishlanmang - bizning ultratovush texnologiyamiz sizning tadqiqotingiz ilmiy taraqqiyotda birinchi o'rinda turishini ta'minlaydi.
Lekin bu hammasi emas! Bizning mukammallikka bo'lgan sadoqatimiz mahsulotlarimizdan tashqarida. Biz o'zimizning ajoyib mijozlarga xizmat ko'rsatishimiz bilan faxrlanamiz, sizda bo'lishi mumkin bo'lgan har qanday so'rov yoki tashvishlaringizni hal qilish uchun ekspert yordamini taqdim etamiz. Bizning maxsus jamoamiz tadqiqot safaringizning har bir bosqichida sizga yordam berish uchun shu yerda, bu sizning ultratovush apparatlarimizdan maksimal darajada foydalanishingizni ta'minlaydi.
Innovatsiya, ishonchlilik va ajoyib foydalanuvchi tajribasini tanlang - alfa-sinuklein fibril parchalanishi uchun VialTweeter kabi laboratoriya sonikatorlarimizni tanlang. O'rnatilgan protokollardan foydalaning va o'zlarining tanqidiy tadqiqotlari uchun texnologiyamizga ishonadigan etakchi tadqiqotchilar qatoriga qo'shiling. Tadqiqotingizni oshiring va bizning zamonaviy ultratovush apparatlarimiz bilan demans va neyrodegenerativ kasalliklarni o'rganish bo'yicha yangi chegaralarni o'rganing.
- yuqori samaradorlik
- eng zamonaviy texnologiya
- ishonchlilik & mustahkamlik
- takrorlanuvchanlik
- sozlanishi, aniq jarayon nazorati
- har qanday hajm uchun
- aqlli dasturiy ta'minot
- aqlli xususiyatlar (masalan, dasturlashtiriladigan, ma'lumotlarni protokollash, masofadan boshqarish)
- oson va xavfsiz ishlash
- past texnik xizmat ko'rsatish
- CIP (joyida toza)
Dizayn, ishlab chiqarish va konsalting – Germaniyada ishlab chiqarilgan sifat
Hielscher ultrasonikatorlari eng yuqori sifat va dizayn standartlari bilan mashhur. Mustahkamlik va qulay foydalanish ultratovush qurilmalarimizni sanoat ob'ektlariga silliq integratsiya qilish imkonini beradi. Qo'pol sharoitlar va talabchan muhit Hielscher ultrasonikatorlari tomonidan osonlik bilan hal qilinadi.
Hielscher Ultrasonics ISO sertifikatiga ega kompaniya bo'lib, eng zamonaviy texnologiya va foydalanuvchilarga qulaylik bilan ajralib turadigan yuqori samarali ultratovush apparatlariga alohida e'tibor beradi. Albatta, Hielscher sonikatorlari Idoralar talablariga javob beradi va UL, CSA va RoHs talablariga javob beradi.
Quyidagi jadvalda laboratoriya o'lchamidagi ultratovush apparatlarining taxminiy qayta ishlash quvvati ko'rsatilgan:
| Tavsiya etilgan qurilmalar | To'plam hajmi | Oqim darajasi |
|---|---|---|
| UIP400MTP | ko'p quduqli / mikrotitrli plitalar | na |
| Ultrasonik kubok | Flakonlar yoki stakan uchun CupHorn | na |
| GDmini2 | ultratovushli mikro-oqimli reaktor | na |
| VialTweeter | 0,5 dan 1,5 ml gacha | na |
| UP100H | 1 dan 500 ml gacha | 10 dan 200 ml / min |
| UP200Ht, UP400St | 10 dan 2000 ml gacha | 20 dan 400 ml / min |
Biz bilan bog'lanish! / Bizdan so'rang!
VialTweeter Odatda tahlildan oldingi namunani tayyorlash bosqichi sifatida alfa-sinuklein fibrillasini parchalash uchun ishlatiladi.
Adabiyot / Adabiyotlar
- Emil Dandanell Agerschou, Marie P. Schützmann, Nikolas Reppert, Michael M. Wördehoff, Hamed Shaykhalishahi, Alexander K. Buell, Wolfgang Hoyer (2021): β-Turn exchanges in the α-synuclein segment 44-TKEG-47 reveal high sequence fidelity requirements of amyloid fibril elongation. Biophysical Chemistry, Volume 269, 2021.
- Bousset, L., Pieri, L., Ruiz-Arlandis, G. et al. (2013): Structural and functional characterization of two alpha-synuclein strains. Nature Communications 4, 2575 (2013).
- Vajhøj, Charlott; Schmid, Benjamin; Alik, Ania; Melki, Ronald; Fog, Karina; Holst, Bjørn; Stummann, Tina (2021): Establishment of a human induced pluripotent stem cell neuronal model for identification of modulators of A53T α-synuclein levels and aggregation. PLOS ONE 16, 2021.
- Dieriks B.V.; Highet B.; Alik A.; Bellande T.; Stevenson T.J.; Low V.; Park T.I.; Correia J.; Schweder P.; Faull R.L.M.; Melki R.; Curtis M.A.; Dragunow M. (2022): Human pericytes degrade diverse α-synuclein aggregates. PLoS One, Nov 18;17(11), 2022.
- Amulya Nidhi Shrivastava, Luc Bousset, Marianne Renner, Virginie Redeker, Jimmy Savistchenko, Antoine Triller, Ronald Melki (2020): Differential Membrane Binding and Seeding of Distinct α-Synuclein Fibrillar Polymorphs. Biophysical Journal, Volume 118, Issue 6, 2020. 1301-1320.
- Negrini M, Tomasello G, Davidsson M, Fenyi A, Adant C, Hauser S, Espa E, Gubinelli F, Manfredsson FP, Melki R, Heuer A. (2022): Sequential or Simultaneous Injection of Preformed Fibrils and AAV Overexpression of Alpha-Synuclein Are Equipotent in Producing Relevant Pathology and Behavioral Deficits. Journal of Parkinsons Disease 12(4), 2022. 1133-1153.
- Limorenko G, Tatli M, Kolla R, Nazarov S, Weil MT, Schöndorf DC, Geist D, Reinhardt P, Ehrnhoefer DE, Stahlberg H, Gasparini L, Lashuel HA (2023): Fully co-factor-free ClearTau platform produces seeding-competent Tau fibrils for reconstructing pathological Tau aggregates. Nature Communications 4;14(1), July 2023.
tez-tez so'raladigan savollar
Alfa-sinuklein amiloidmi?
Ha, alfa-sinuklein amiloidga o'xshash fibrillalarni hosil qilishi mumkin. Bu Lyui organlarining asosiy komponenti, Parkinson kasalligi va boshqa sinukleinopatiyalarning patologik belgisidir. Uning agregatsiyasi klassik amiloidlarga o'xshash nukleatsiyaga bog'liq polimerizatsiya jarayonidan keyin sodir bo'ladi.
Amiloid-Beta va Alfa-Sinuklein o'rtasidagi farq nima?
Amiloid-beta (Ab) va alfa-sinuklein (a-sin) neyrodegenerativ kasalliklarda patologik agregatlar hosil qiluvchi alohida oqsillardir. Amiloid prekursor oqsilidan (APP) olingan Ab asosan Altsgeymer kasalligi bilan bog'liq va hujayradan tashqari plaklarni hosil qiladi. Bundan farqli o'laroq, a-sin - bu Parkinson kasalligi va shunga o'xshash kasalliklarda hujayra ichida to'planadigan presinaptik neyron oqsilidir. Ikkalasi ham b-varaqqa boy amiloid tuzilmalarini namoyon qilsa-da, ular ketma-ketligi, yig'ilish yo'llari va kasallikka xos patologiyasi bilan farqlanadi.
Amiloid qaysi turdagi protein?
Amiloid noto'g'ri katlanmış, fibrillyar oqsil bo'lib, u o'zaro b-varaqli tuzilmani qabul qiladi va erimaydigan fibrillalarga birlashadi. Bu oqsillar odatda o'z-o'zini yig'ish va cho'kmaga olib keladigan konformatsion o'zgarishlarga duchor bo'lgan, odatda eriydigan prekursorlardan olinadi. Amiloidlar turli xil neyrodegenerativ va tizimli kasalliklar bilan bog'liq bo'lib, ularning to'planishi hujayra toksikligiga va to'qimalarning shikastlanishiga yordam beradi. 96-quduqli plastinka sonikatori UIP400MTP tadqiqot maqsadlarida standartlashtirilgan amiloid fibrillalarni tezda shakllantirishga qanday yordam berishini bilib oling!
Amiloidlar qanday kasalliklarga olib keladi?
Amiloidlar ko'plab kasalliklarda ishtirok etadi, ular birgalikda amiloidozlar deb ataladi. Bularga quyidagilar kiradi:
- Neyrodegenerativ kasalliklar: Altsgeymer kasalligi (Ab), Parkinson kasalligi (a-sin), Xantington kasalligi (mutant xantingtin) va prion kasalliklari (PrPSc). (Yuqori mahsuldorlikdagi prionlarni aniqlashning sonikatsiya yordamida PMCA haqida ko'proq o'qing!)
- Tizimli amiloidozlar: Yengil zanjirli (AL) amiloidoz, transtiretin (ATTR) amiloidoz va ikkilamchi (AA) amiloidoz.
- Mahalliy amiloidozlar: 2-toifa diabetda orol amiloid polipeptid (IAPP).
Har bir amiloid bilan bog'liq kasallik oqsilning noto'g'ri qatlamlanishi, to'planishi va cho'kishi bilan tavsiflanadi, bu hujayra disfunktsiyasiga va toksiklikka olib keladi.
Hielscher Ultrasonics kompaniyasi yuqori samarali ultratovushli homogenizatorlarni ishlab chiqaradi laboratoriya uchun sanoat hajmi.