VialTweeter sonikatori yordamida alfa-sinukleinni fragmentlash
Ilmiy tadqiqotlarda α-sinuklein fibrillalari va tasmasimon tuzilmalari kichikroq fibrilla boʻlaklarini yoki hatto alohida oqsil molekulalarini hosil qilish uchun fragmentlanadi; ularni turli tajriba usullari yordamida osonroq tahlil qilish mumkin. VialTweeter sonikatori alfa-sinukleinni samarali va ishonchli fragmentlash uchun eng koʻp qoʻllaniladigan ultratovush qurilmalaridan biridir.
Tadqiqotlarda α-sinuklein
Alfa-sinuklein fibrillalari Parkinson kasalligi va demensiyaning ayrim shakllari, jumladan, Levi tanachali demensiya kabi neyrodegenerativ kasalliklar bilan kuchli bogʻliq boʻlgan oqsil agregatlaridir. Alfa-sinuklein fibrillalariga qaratilgan tadqiqotlar ularning kasallik rivojlanishidagi rolini tushunish va ehtimoliy davolash usullarini ishlab chiqishga yoʻnaltirilgan. Alfa-sinuklein fibrillalarini kichikroq fragmentlarga parchalash orqali tadqiqotchilar ularning oʻziga xos tuzilish xususiyatlarini oʻrganishlari mumkin. Masalan, alfa-sinuklein fibrillalarini fragmentlash tadqiqotchilarga ularning oqsillar, lipidlar yoki kichik molekulalar kabi boshqa molekulalar bilan oʻzaro taʼsirini oʻrganish imkonini beradi. Kichikroq fragmentlarni hosil qilish orqali bogʻlanish joylari va ushbu oʻzaro taʼsirlashuvchi molekulalarga nisbatan affinitetni samaraliroq oʻrganish mumkin. Kichikroq α-Syn fibrillalari va tasmasimon tuzilmalari ham oʻzgargan toksiklik va biokimyoviy taʼsirlarni namoyon qilishi mumkin. Shu sababli, namunaga tez va oddiy ishlov berishda takror hosil qilinadigan natijalarni taʼminlovchi ishonchli va samarali fragmentlash usuli juda muhimdir.
Alpha-Syn ni ultratovush bilan fragmentlash: VialTweeter sonikatori aynan bir xil sharoitlarda bir vaqtning oʻzida 10 tagacha flakonga ultratovush bilan ishlov beradigan, amaliyotda keng qoʻllaniladigan ultratovushli namuna tayyorlash tizimidir. Dasturlanadigan sozlamalar bir xil tajribalarni oddiy va tez qayta oʻtkazish imkonini beradi, bu esa alfa-sinuklein fibrillalarini fragmentlashda juda ishonchli va takror hosil qilinadigan natijalarni taʼminlaydi.
VialTweeter sonikatori bir nechta alfa-sinuklein namunasini bir vaqtning oʻzida ultratovush bilan fragmentlash uchun moʻljallangan.
Sonikator yordamida α-sinuklein namunalarini tayyorlash
Alfa-sinuklein fibrillalarini oʻrganish yondashuvlaridan biri ularni ultratovush bilan ishlov berish kabi usullar yordamida ajratib olish va fragmentlashni oʻz ichiga oladi. Ultratovush bilan ishlov berish – oqsil agregatlarini buzish va parchalash uchun yuqori intensivlikdagi, past chastotali ultratovush toʻlqinlaridan foydalanadigan jarayon boʻlib, natijada kichikroq fibrillalar yoki alohida oqsil molekulalari ajralib chiqadi. VialTweeter sonikatori α-sinuklein bilan bogʻliq tadqiqotlarda shu maqsadda keng qoʻllaniladigan qurilmadir.
Koʻplab tadqiqotlarda alfa-sinuklein fibrillalariga ultratovush bilan ishlov berish uchun namunalarni tayyorlashning aniq protokollari bayon etilgan; ularda α-sinuklein fibrillalarini samarali va ishonchli fragmentlash uchun Hielscher VialTweeter ishlatiladi. Fibrillalarni ultratovush bilan fragmentlash orqali tadqiqotchilar hosil boʻlgan mahsulotlarni tahlil qilib, ularning tuzilishi, toksikligi va boshqa molekulalar bilan oʻzaro taʼsirini oʻrganishlari mumkin. Ushbu tadqiqotlar neyrodegeneratsiya asosida yotuvchi mexanizmlar haqida muhim maʼlumot beradi va yangi terapevtik nishonlarni aniqlashi mumkin. VialTweeter sonikatori yordamida α-sinukleinga ultratovush bilan ishlov berishning amaliyotda yaxshi oʻzlashtirilgan protokollari ishonchli va takror hosil qilinadigan natijalarni olish imkonini beradi.
Yuqoridagi tasvirlar: fragmentlanmagan alfa-sinuklein fibrillalari
Pastdagi tasvirlar: VialTweeter sonikatori yordamida ultratovush bilan fragmentlangan alfa-sinuklein fibrillalari
(tadqiqot va tasvirlar: ©Dieriks et al., 2022)
α-sinuklein fibrillalarini ultratovush bilan fragmentlash – protokollar
Koʻplab tadqiqotchilar bir xil α-sinuklein fibrilla fragmentlarini hosil qilish uchun VialTweeter sonikatorini afzal koʻriladigan fragmentlash usuli sifatida qoʻllashlari sababli, amaliyotda oʻzlashtirilgan protokollarni osongina topish mumkin. Quyida fragmentlash protokollarining bir nechta namunasini topishingiz mumkin.
ClearTau agregatsiya yadrolarini tayyorlash: ClearTau fibrillalari dH2O da 10 μM gacha suyultirildi va ularga VialTweeter bilan jihozlangan UP200St sonikatori yordamida probirka ichida 70 % amplitudada 50 s davomida, 1 s yoqilgan va 1 s oʻchirilgan siklda ultratovush bilan ishlov berildi. Agregatsiya yadrolari elektron mikroskopiya yordamida tavsiflandi.
ThS fluoressensiyasini oʻlchash: ClearTau fibrillalari dH2O da 2,5 μM gacha suyultirildi va ularga VialTweeter bilan jihozlangan UP200St yordamida probirka ichida 70 % amplitudada 50 s davomida, 1 s yoqilgan va 1 s oʻchirilgan siklda ultratovush bilan ishlov berildi. Nazorat sifatida 2,5 μM toʻliq uzunlikdagi Tau 4R2N monomeri ishlatildi. 100 μl reaksiya aralashmasiga 100 μl ThS (10 μM) qoʻshildi, natijada oqsilning yakuniy konsentratsiyasi 1,25 μM boʻldi. ThS fluoressensiyasi bitta vaqt nuqtasida FLUOstar Omega mikroplastinka oʻquvchisiga oʻrnatilgan, tubi shaffof 96 uyachali plastinkalar yordamida oʻlchandi; qoʻzgʻatish 445 nm da amalga oshirildi va 485 nm dagi emissiya qayd etildi.
(qarang: Limorenko et al., 2023)
Ultratovush bilan ishlov berish yordamida α-sinuklein uzunligini bir xil qilish: α-syn fibrillalari va tasmasimon tuzilmalarining uzunlik boʻyicha bir jinsli emasligi 75% amplituda va 0,5 s impulslarga sozlangan VialTweeter qurilmasida, muz ustida joylashtirilgan 2-ml Eppendorf probirkalarida 20 min davomida ultratovush bilan ishlov berish orqali kamaytirildi.
(qarang: Bousset et al., 2013)
Insonning rekombinant monomerik WT yoki S129A a-Syn oqsili va ular hosil qiladigan fibrillyar polimorflar, shuningdek, a-Syn 1–110 sifat nazoratidan oʻtkazildi. Keyin fibrillyar polimorflar endotsitoz uchun mos boʻlgan, oʻrtacha oʻlchami 42–52 nm li fibrillyar zarrachalarni hosil qilish maqsadida VialTweeter ultratovush qurilmasida 2-mL Eppendorf probirkalarida 20 min davomida ultratovush bilan ishlov berish orqali fragmentlandi.
(qarang: Shrivastava et al., 2020)
Beshta fibrillyar α-Syn polimorfining tavsifi. (A) Manfiy boʻyalgan α-Syn fibrillyar polimorflari – fibrils, ribbons, fibrils-91, fibrils-65 va fibrils-110 ning VialTweeter yordamida fragmentlashdan oldingi (yuqori qator) va keyingi (pastki qator) transmission elektron mikrofotografiyalari koʻrsatilgan. (B) Fragmentlangan fibrillyar polimorflarning uzunlik boʻyicha taqsimoti koʻrsatilgan. Gistogrammalarni tuzishda foydalanilgan fibrillyar tuzilmalar soni (n) koʻrsatilgan.
(tadqiqot va tasvirlar: Shrivastava et al., 2020)
TEM tahlili bilan baholangan, oʻrtacha oʻlchami 42–52 nm li fibrillyar zarrachalarni hosil qilish uchun α-Syn fibrillalari VialTweeter qurilmasida 2 ml Eppendorf probirkalarida 20 min davomida ultratovush bilan ishlov berish orqali fragmentlandi.
(qarang: Negrini et al., 2022)
Qayta suspenziyalangan fibrils91 (PBS da) hujayra kulturalariga qoʻshilishidan oldin Vial Tweeter sonikatori yordamida 2 mL Eppendorf probirkalarida 20 min davomida ultratovush bilan ishlov berish orqali fragmentlandi, alikvotalarga boʻlindi, suyuq azotda tez muzlatildi va ishlatilguniga qadar -80 ̊C da saqlandi.
(qarang: Vajhøj et al., 2021)
Koʻp uyachali plastinkalarda alfa-sinuklein fibrillalarini fragmentlash uchun UIP400MTP sonikatori.
α-Syn ni fragmentlash uchun VialTweeter va laboratoriya sonikatorlari
Hielscher Ultrasonics ilgʻor ultratovush qurilmalarining yetakchi ishlab chiqaruvchisi sifatida butun dunyoda tan olingan. Dunyoning yirik tadqiqot laboratoriyalarida ishonch qozongan va keng qoʻllaniladigan ultratovush qurilmalarimiz muhim tajribalaringiz uchun tengsiz sifat va samaradorlikni taklif etadi.
Hielscher VialTweeter va boshqa har qanday Hielscher sonikatoridan foydalanganda tengsiz qulaylikni his qilasiz, chunki ular takror hosil qilinadigan natijalar, foydalanish qulayligi va uzluksiz ishlashni taʼminlash uchun puxta ishlab chiqilgan. Maʼlumotlarni avtomatik qayd etish funksiyalari tufayli siz tadqiqotingizga eʼtibor qaratishingiz mumkin, ultratovush qurilmalarimiz esa natijalarni takror hosil qilish va aniqlik uchun muhim maʼlumotlarni sinchkovlik bilan qayd etadi.
Barqaror va takror hosil qilinadigan natijalarga ishonch bilan erishing!
Ultratovush qurilmalarimiz Germaniyada loyihalanadi va ishlab chiqariladi. Nemis aniqligi va eng yuqori muhandislik sifati har safar alfa-sinuklein fibrillalarini fragmentlash kabi namuna tayyorlash ishlarining ishonchli va aniq bajarilishini taʼminlaydi. Natijalarning bir xil chiqmasligi haqida ortiq tashvishlanmang – ultratovush texnologiyamiz tadqiqotingiz ilmiy taraqqiyotning oldingi safida qolishini taʼminlaydi.
Ammo bu hali hammasi emas! Mukammallikka intilishimiz mahsulotlarimiz bilan cheklanmaydi. Sizda yuzaga kelishi mumkin boʻlgan har qanday savol yoki xavotirni hal qilish uchun mutaxassislar koʻmagini taqdim etuvchi ajoyib mijozlarga xizmat koʻrsatish tizimimiz bilan faxrlanamiz. Fidoyi jamoamiz tadqiqot yoʻlingizning har bir bosqichida sizga yordam berib, ultratovush qurilmalarimizdan eng yuqori darajada foydalanishingizni taʼminlaydi.
Innovatsiya, ishonchlilik va ajoyib foydalanish tajribasini tanlang – alfa-sinuklein fibrillalarini fragmentlash uchun VialTweeter kabi laboratoriya sonikatorlarimizni tanlang. Amaliyotda allaqachon oʻzlashtirilgan protokollardan foydalaning va muhim tadqiqotlari uchun texnologiyamizga ishonadigan yetakchi tadqiqotchilar safiga qoʻshiling. Eng zamonaviy ultratovush qurilmalarimiz yordamida tadqiqotingizni yuqori bosqichga olib chiqing va demensiya hamda neyrodegenerativ kasalliklar tadqiqotidagi yangi chegaralarni oʻrganing.
- yuqori samaradorlik
- eng zamonaviy texnologiya
- ishonchlilik va mustahkamlik
- natijalarni takror hosil qilish imkoniyati
- sozlanadigan, aniq jarayon nazorati
- har qanday hajm uchun
- aqlli dasturiy taʼminot
- aqlli funksiyalar (masalan, dasturlash imkoniyati, maʼlumotlarni qayd etish, masofadan boshqarish)
- ishlatish oson va xavfsiz
- kam texnik xizmat talab qiladi
- CIP (joyida tozalash)
Loyihalash, ishlab chiqarish va maslahat berish – Germaniyada yaratilgan sifat
Hielscher ultratovush qurilmalari eng yuqori sifat va loyihalash standartlari bilan mashhur. Mustahkamlik va ishlatish qulayligi ultratovush qurilmalarimizni sanoat obyektlariga muammosiz integratsiya qilish imkonini beradi. Hielscher ultratovush qurilmalari ogʻir sharoitlar va yuqori talablar qoʻyiladigan muhitlarda osonlik bilan ishlaydi.
Hielscher Ultrasonics ISO sertifikatiga ega kompaniya boʻlib, eng zamonaviy texnologiya va foydalanish qulayligini oʻzida mujassam etgan yuqori samarali ultratovush qurilmalariga alohida eʼtibor qaratadi. Albatta, Hielscher sonikatorlari CE talablariga muvofiq va UL, CSA hamda RoHs talablariga javob beradi.
Quyidagi jadval laboratoriya oʻlchamidagi ultratovush qurilmalarimizning taxminiy ishlov berish quvvati haqida tasavvur beradi:
| Tavsiya etiladigan qurilmalar | Partiya hajmi | Hajmiy oqim tezligi |
|---|---|---|
| UIP400MTP | koʻp uyachali / mikrotitr plastinkalari | n.a. |
| Ultratovushli CupHorn | Flakonlar yoki kimyoviy stakan uchun CupHorn | n.a. |
| GDmini2 | ultratovushli mikrooqim reaktori | n.a. |
| VialTweeter | 0,5 dan 1,5mL gacha | n.a. |
| UP100H | 1 dan 500mL gacha | 10 dan 200mL/min gacha |
| UP200Ht, UP400St | 10 dan 2000mL gacha | 20 dan 400mL/min gacha |
Biz bilan bogʻlaning! / Bizdan soʻrang!
VialTweeter tahlildan oldingi namuna tayyorlash bosqichida alfa-sinuklein fibrillasini fragmentlash uchun keng qoʻllaniladi
Adabiyotlar / Manbalar
- Emil Dandanell Agerschou, Marie P. Schützmann, Nikolas Reppert, Michael M. Wördehoff, Hamed Shaykhalishahi, Alexander K. Buell, Wolfgang Hoyer (2021): β-Turn exchanges in the α-synuclein segment 44-TKEG-47 reveal high sequence fidelity requirements of amyloid fibril elongation. Biophysical Chemistry, Volume 269, 2021.
- Bousset, L., Pieri, L., Ruiz-Arlandis, G. et al. (2013): Structural and functional characterization of two alpha-synuclein strains. Nature Communications 4, 2575 (2013).
- Vajhøj, Charlott; Schmid, Benjamin; Alik, Ania; Melki, Ronald; Fog, Karina; Holst, Bjørn; Stummann, Tina (2021): Establishment of a human induced pluripotent stem cell neuronal model for identification of modulators of A53T α-synuclein levels and aggregation. PLOS ONE 16, 2021.
- Dieriks B.V.; Highet B.; Alik A.; Bellande T.; Stevenson T.J.; Low V.; Park T.I.; Correia J.; Schweder P.; Faull R.L.M.; Melki R.; Curtis M.A.; Dragunow M. (2022): Human pericytes degrade diverse α-synuclein aggregates. PLoS One, Nov 18;17(11), 2022.
- Amulya Nidhi Shrivastava, Luc Bousset, Marianne Renner, Virginie Redeker, Jimmy Savistchenko, Antoine Triller, Ronald Melki (2020): Differential Membrane Binding and Seeding of Distinct α-Synuclein Fibrillar Polymorphs. Biophysical Journal, Volume 118, Issue 6, 2020. 1301-1320.
- Negrini M, Tomasello G, Davidsson M, Fenyi A, Adant C, Hauser S, Espa E, Gubinelli F, Manfredsson FP, Melki R, Heuer A. (2022): Sequential or Simultaneous Injection of Preformed Fibrils and AAV Overexpression of Alpha-Synuclein Are Equipotent in Producing Relevant Pathology and Behavioral Deficits. Journal of Parkinsons Disease 12(4), 2022. 1133-1153.
- Limorenko G, Tatli M, Kolla R, Nazarov S, Weil MT, Schöndorf DC, Geist D, Reinhardt P, Ehrnhoefer DE, Stahlberg H, Gasparini L, Lashuel HA (2023): Fully co-factor-free ClearTau platform produces seeding-competent Tau fibrils for reconstructing pathological Tau aggregates. Nature Communications 4;14(1), July 2023.
Koʻp soʻraladigan savollar
Alfa-sinuklein amiloidmi?
Ha, alfa-sinuklein amiloidga oʻxshash fibrillalarni hosil qilishi mumkin. U Parkinson kasalligi va boshqa sinukleinopatiyalarning patologik belgisi boʻlgan Levi tanachalarining asosiy tarkibiy qismidir. Uning agregatsiyasi klassik amiloidlarga oʻxshash, yadrolanishga bogʻliq polimerlanish jarayoni orqali kechadi.
Amiloid-beta va alfa-sinuklein oʻrtasidagi farq nima?
Amiloid-beta (Aβ) va alfa-sinuklein (α-syn) neyrodegenerativ kasalliklarda patologik agregatlar hosil qiluvchi turli oqsillardir. Amiloid prekursor oqsilidan (APP) hosil boʻladigan Aβ asosan Altsgeymer kasalligi bilan bogʻliq boʻlib, hujayradan tashqarida pilakchalar hosil qiladi. α-syn esa Parkinson kasalligi va unga bogʻliq kasalliklarda hujayra ichida agregatlanadigan presinaptik neyron oqsilidir. Har ikkalasi ham β-qatlamlarga boy amiloid tuzilmalarni namoyon qilsa-da, ular aminokislota ketma-ketliklari, agregatsiya yoʻllari va kasallikka xos patologiyasi bilan farqlanadi.
Amiloid qanday turdagi oqsil?
Amiloid – notoʻgʻri buklangan, koʻndalang β-qatlam tuzilishini qabul qiladigan va erimaydigan fibrillalarga agregatlanadigan fibrillyar oqsil. Ushbu oqsillar odatda normal holatda eruvchan boʻlgan prekursorlardan hosil boʻladi; bu prekursorlar konformatsion oʻzgarishlarga uchrab, oʻz-oʻzidan yigʻilish va toʻplanishga olib keladi. Amiloidlar turli neyrodegenerativ va tizimli kasalliklar bilan bogʻliq boʻlib, ularda amiloidlarning agregatsiyasi hujayralarga toksik taʼsir va toʻqimalarning shikastlanishiga hissa qoʻshadi. 96 uyachali plastinkalar uchun UIP400MTP sonikatori tadqiqot maqsadlarida standartlashtirilgan amiloid fibrillalarini tez hosil qilishga qanday yordam berishini bilib oling!
Amiloidlar qanday kasalliklarni keltirib chiqaradi?
Amiloidlar umumiy nom bilan amiloidozlar deb ataladigan koʻplab kasalliklarda ishtirok etadi. Ularga quyidagilar kiradi:
- Neyrodegenerativ kasalliklar: Altsgeymer kasalligi (Aβ), Parkinson kasalligi (α-syn), Hantington kasalligi (mutant hantingtin) va prion kasalliklari (PrPSc). (Namunalarni yuqori unumdorlikda qayta ishlash orqali prionlarni aniqlash uchun ultratovush bilan ishlov berish yordamidagi PMCA haqida batafsil oʻqing!)
- Tizimli amiloidozlar: Yengil zanjirli (AL) amiloidoz, transtiretin (ATTR) amiloidozi va ikkilamchi (AA) amiloidoz.
- Mahalliy amiloidozlar: 2-tur qandli diabetdagi orolcha amiloid polipeptidi (IAPP).
Amiloid bilan bogʻliq har bir kasallik oqsilning notoʻgʻri buklanishi, agregatsiyasi va toʻplanishi bilan tavsiflanadi; bu esa hujayra faoliyatining buzilishi va toksiklikka olib keladi.
Hielscher Ultrasonics yuqori samarali ultratovushli gomogenizatorlarni laboratoriya oʻlchamidan tortib sanoat oʻlchamigacha ishlab chiqaradi.