Yuqori o'tkazuvchan sonikatsiya yordamida sonikatsiya orqali antikorlarni tozalash

Affinite xromatografiyasi oqsillarni tozalashning kuchli usuli bo'lib, u ultratovush yordamida maxsus bo'lmagan elutsiyani talab qiladi - yaqinlik xromatografiyasidan antikorlarni olish uchun ishonchli namuna tayyorlash usuli. Afinite matritsalari bilan bog'langan maqsadli antikorlarning samarali va takrorlanadigan elyusiyasi sonikatsiya orqali sezilarli darajada yaxshilanadi. UIP400MTP yuqori o'tkazuvchanlik plastinka-sonikatori 96-quduqli, mikrotitrli va ko'p quduqli plitalardagi yuqori namunalar sonini elute qilish uchun eng mos keladi va yaqinlik xromatografiyasida antikorlarni tiklashni osonlashtiradi.

Sonication Elyusiyani qanday osonlashtiradi?

Laboratoriya xodimlari va olimlar ultratovushli intensivlashtirilgan o'ziga xos bo'lmagan elutsiyadan foydalangan holda, yaqinlik xromatografiyasi ustunlaridan tozalangan antikorlarni samarali tarzda tiklashlari mumkin. Ushbu tozalangan antikorlar immunologiya, biotexnologiya va tibbiy diagnostika kabi turli sohalarda quyi oqim dasturlari orqali boshqariladi.

Elutsiya - bu yaqinlik xromatografiyasi uchun keng qo'llaniladigan namuna tayyorlash bosqichi: Yaqinlik xromatografiyasi maqsadli molekula (masalan, antikor) va xromatografiya matritsasida immobilizatsiyalangan ligand o'rtasidagi yuqori o'ziga xos o'zaro ta'sirlardan foydalanadi. Bu molekulalarning, masalan, antikorlarning o'ziga xos bog'lanish yaqinligidan foydalangan holda, maqsadli molekulani murakkab aralashmadan tanlab tozalash imkonini beradi.
Antikorlarning maxsus bog'lanishi: Antikorlar ko'pincha yaqinlik xromatografiyasi yordamida tozalanadi, bu erda ular xromatografiya qatronida immobilizatsiyalangan ligand bilan tanlab bog'lanadi. Bu antijen, A/G oqsili yoki qiziqish antikori bilan maxsus ta'sir o'tkazadigan boshqa har qanday molekula bo'lishi mumkin.
Elutsiya: Maqsadli antikorni matritsaga bog'lagandan so'ng, keyingi qadam bog'langan antikorni qatrondan tozalashni (yoki yuvishni) o'z ichiga oladi. Ushbu elutsiya bosqichi odatda antikor va ligand o'rtasidagi o'ziga xos bog'lanishni buzishni o'z ichiga oladi. Bu qadam sonikatsiya yordamida osonlashtirilishi mumkin.
Ultrasonik probi UP50H laboratoriya gomogenizatori bo'lib, ko'pincha laboratoriyalarda hujayralarni buzuvchi, disperser va emulsifikator sifatida ishlatiladi.Ultratovush yordamida o'ziga xos bo'lmagan tozalash: Faqat antikor-ligand o'zaro ta'sirini buzadigan o'ziga xos elutsiya usullaridan farqli o'laroq, o'ziga xos bo'lmagan elyusiya usullari qatronlardagi barcha o'zaro ta'sirlarni, shu jumladan nonspesifiklarini ham buzadi. Bu tozalash jarayoniga xalaqit berishi mumkin bo'lgan kuchli bog'langan ifloslantiruvchi moddalar bilan ishlashda foydali bo'lishi mumkin. Mana sonikatsiya o'ynaydi! Ultrasonik to'lqinlar elutsiya tamponida kavitatsiya pufakchalarini yaratish uchun ishlatiladi. Ushbu pufakchalar qatronlar matritsasi yaqinida qulab tushganda, ular kuchli mahalliy kesish kuchlarini va mikro oqimlarni hosil qiladi. Ushbu mexanik buzilish antikor va ligand o'rtasidagi o'ziga xos bo'lmagan o'zaro ta'sirlarni buzishga yordam beradi, bog'langan antikorning matritsadan elutsiyasini osonlashtiradi.

96 quduqli plitalar va boshqa ko'p teshikli plitalar UIP400MTP sonikatori yordamida eng yaxshi ishlov beriladi. Ushbu ultratovushli tizim lizis, DNK parchalanishi va yuqori o'tkazuvchanlikdagi namunalarni hujayra eruvchanligini qayta ishlash uchun idealdir.

Yuqori o'tkazuvchan sonikator UIP400MTP antikorlar va oqsillarni elutsiyasini osonlashtiradi

Ma'lumot so'rovini




Bizning e'tibor bering Maxfiylik siyosati.


 

Ushbu qo'llanmada laboratoriyalarda liziz, hujayra buzilishi, oqsil izolyatsiyasi, DNK va RNK parchalanishi, tahlil va tadqiqotlar kabi namuna tayyorlash vazifalaringiz uchun qaysi turdagi sonikator eng yaxshi ekanligini tushuntiradi. Ilovangiz, namuna hajmi, namuna raqami va o'tkazish qobiliyati uchun ideal sonikator turini tanlang. Hielscher Ultrasonics siz uchun ideal ultratovushli homogenizatorga ega!

Fan va tahlilda hujayra buzilishi va oqsil olish uchun mukammal sonikatorni qanday topish mumkin

Video eskizi

 

Sonication yordamida ultratovushli elutsiyaning afzalliklari

Ultrasonik elyusiya, xususan, yaqinlik xromatografiyasi kabi oqsillarni tozalash texnikasi kontekstida bir qancha afzalliklarni taqdim etadi.
Masalan, sonikatsiya oqsilning yaxlitligi, tiklanishi, tozaligi, ko'p qirraliligi va samaradorligi nuqtai nazaridan muqobil usullardan ustundir. Ushbu afzalliklar ultratovushli elutsiyani oqsillarni tozalash jarayonlari uchun afzal tanlovga aylantiradi, ayniqsa oqsil tuzilishi va faolligini saqlab qolish zarur bo'lgan ilovalarda. Bundan tashqari, ultratovushli elutsiya soddaligi, samaradorligi, ko'p qirraliligi va oqsillar va yaqinlik matritsalarining keng doirasi bilan mosligi bilan ajralib turadi. Protein-matritsaning o'zaro ta'sirini buzish uchun ultratovush to'lqinlarini qo'llash, ultratovushli elyusiya oqsillarni tozalashning yumshoq va tezkor usulini taklif qiladi, yuqori tiklanish tezligini ta'minlaydi va quyi oqim ilovalari uchun oqsil yaxlitligini saqlaydi.

Protein tuzilishi bo'yicha yumshoqroq: Past pHli elyusiya maqsadli oqsil (masalan, antikorlar) va yaqinlik matritsasi o'rtasidagi bog'lanishni buzish uchun kislotali tamponlardan foydalanishni o'z ichiga oladi. Biroq, past pH ta'siri oqsillarni denatüratsiya qilishi mumkin, bu ularning tuzilishi va biologik faolligini buzishi mumkin. Bundan farqli o'laroq, ultratovushli elutsiya birinchi navbatda kimyoviy denatürasyondan ko'ra mexanik buzilishlarga tayanadi, bu esa uni oqsil tuzilishiga yumshoqroq qiladi. Bu, ayniqsa, pH o'zgarishlariga sezgir bo'lgan nozik oqsillarni yoki antikorlarni tozalashda foydalidir.

  • Birikish xavfining kamayishi: Past pH li elyusiya oqsilning ochilishi va hidrofobik hududlarning ta'siri tufayli oqsillarni yig'ish xavfini oshirishi mumkin. Aggregatsiya oqsil faolligining yo'qolishiga va quyi oqimda ishlov berishda qiyinchiliklarga olib kelishi mumkin. Taqqoslash uchun ultratovushli elutsiya, oqsilning tabiiy konformatsiyasini sezilarli darajada o'zgartirmasdan, oqsil va yaqinlik matritsasi o'rtasidagi o'zaro ta'sirni buzish uchun mexanik kuchlarni qo'llash orqali agregatsiya xavfini kamaytiradi.
  • Yaxshilangan tiklanish va tozalik: Ultrasonik elutsiya muqobil elutsiya usullariga nisbatan yuqori tiklanish tezligi va tozalik darajalariga erishishi mumkin. Ultrasonikatsiya bilan ta'minlangan mexanik buzilish o'ziga xos bo'lmagan o'zaro ta'sirlarni kamaytirish bilan bog'langan oqsillarni yaqinlik matritsasidan samarali ravishda chiqaradi. Bu o'ziga xos bo'lmagan molekulalardan kontaminatsiyani kamaytirish bilan maqsadli oqsilning yaxshi tiklanishiga olib keladi, bu esa elutsiya qilingan fraktsiyaning yuqori tozaligiga yordam beradi.
  • Yuqori mahsuldorlikka ega ishlov berish: Hielscher Ultrasonics ultratovush yordamida oqsillarni tozalash, elüsyon va biopanning uchun turli sonikatorlarni taklif qiladi. Mikrotitrli plastinka-sonikator UIP400MTP 96-quduqli va boshqa ko'p quduqli plitalardagi namunalarni ommaviy qayta ishlash imkonini beradi. VialTweeter bir xil sharoitlarda Eppendorf flakonlari kabi 10 tagacha naychalarni bir vaqtning o'zida muammosiz sonikatsiya qilish uchun idealdir. CupHorn ko'p qirrali sonikator bo'lib, bir nechta naychalar, kichik stakan va boshqa idishlar uchun ideal. Va, albatta, mikrotipli klassik zond tipidagi sonikatorlar namunalarni tayyorlash uchun yaxshi tasdiqlangan laboratoriya vositasidir. Hielscher Ultrasonics mahsulot assortimentida tajriba o'rnatishingiz va namuna o'lchamingiz uchun ideal sonikator mavjud.
  • Ko'p qirralilik va moslik: Ultrasonik elutsiya keng ko'lamli oqsillar va yaqinlik matritsalari bilan mos keladi va tozalash dasturlarida ko'p qirralilikni ta'minlaydi. Bundan farqli o'laroq, past pH li elyusiya kislotali sharoitlarga sezgir bo'lgan ba'zi oqsillar uchun yoki past pH da parchalanish yoki yuvishga moyil bo'lgan yaqinlik matritsalari uchun mos kelmasligi mumkin. Ultrasonik elyusiya oqsil yaxlitligi yoki matritsa barqarorligiga putur etkazmasdan maxsus tozalash ehtiyojlariga moslashtirilishi mumkin bo'lgan yumshoq va universal qo'llaniladigan alternativani taqdim etadi.
  • Vaqt va samaradorlik: Ultrasonik elutsiya odatda boshqa elutsiya usullariga nisbatan qisqaroq elutsiya vaqtini talab qiladi. Ultrasonikatsiya yordamida bog'langan oqsillarning tez va samarali chiqarilishi ishlov berish vaqtini qisqartiradi va umumiy tozalash samaradorligini oshiradi, bu uni yuqori o'tkazuvchanlik ilovalari uchun jozibador variantga aylantiradi yoki vaqtga sezgir natijalar talab qilinganda.
Hujayra parchalanishi, DNK ekstraktsiyasi, DNK parchalanishi, hujayra eruvchanligi va oqsillarni tozalash uchun 96-quduqli plastinka sonikatori UIP400MTP.

96-quduqli plastinka sonikatori UIP400MTP multiwell plitalari, PCR va Elishay plitalarining sonication uchun

 

UP200ST ultratovush protsessorida VialTweeter

10 ta namunani bir vaqtning o'zida sonikatsiya qilish uchun VialTweeter sonikatori, masalan, hujayralarni buzish va oqsillarni ajratib olish uchun

Ultratovush yordamida biopanning

Biopanning antikorlarni tozalashning muhim usuli hisoblanadi, ayniqsa tadqiqot yoki tibbiy diagnostika uchun yuqori o'ziga xos antikorlarni olish kerak bo'lganda. Biopanning - bu antikorlarning antikorlar aralashmasidan, ya'ni antikorlar kutubxonasidan ajratib olinadigan jarayon.

Ultrasonik biopanning qanday ishlaydi?

Bu antikorlar kutubxonasi, turli antikorlar aralashmasi bilan boshlanadi. Har bir antikor o'ziga xos shakli va o'ziga xosligi bilan ajralib turadi. Tahlil va terapevtika uchun virus yoki saraton xujayrasi kabi ma'lum bir maqsadni taniydigan maxsus antikorlar ajratilishi kerak. Biopanning yordamida ushbu maxsus antikorlarni ajratish mumkin. Ultrasonikatsiya biopanning jarayonini osonlashtirishga yordam beradi, bu esa antikorlarni tozalashni yanada samarali qiladi.

Antikorlar kutubxonasidan boshlab, antikorlar odatda bakteriofag, xamirturush xujayrasi yoki boshqa displey tizimining yuzasida ko'rsatiladi. Bu kutubxona turli xil antikorlarni ifodalaydi.
Birinchi bosqichda ushbu kutubxona sizning maqsadli molekulangizga ta'sir qiladi. Maqsadga bog'langan antikorlar yopishadi, qolganlari esa yuviladi. Bog'lanmagan antikorlarni olib tashlash uchun namunalar bufer eritmasi bilan bir necha marta yuviladi.

Endi bizda faqat bog'langan antikorlarni o'z ichiga olgan namunalar mavjud. Biroq, bu antikorlar hali ham ularning displey tizimiga biriktirilganligini anglatadi. Ularni ozod qilish uchun antikor-ligand o'zaro ta'sirini buzish kerak. Ushbu bosqich elutsiya deb nomlanadi. Namunalar bog'lanishni buzadigan eritma yordamida, masalan, ma'lum bir elüsyon buferi, xaotrop, pH qiymatini pasaytirish, issiqlikni qo'llash va hokazolar yordamida elutsiya qilinishi mumkin. Bu elutsiya usullari antikor-ligand bog'lanishini yo'q qiladi, lekin antikorlarning o'zini ham yomonlashtirishi mumkin. Shuning uchun sonikatsiya antikorlarni o'z maqsadlaridan muloyimlik bilan olib tashlash uchun muqobil usul sifatida ishlatiladi.

Elyusiya bosqichini tugatgandan so'ng, biz tadqiqot, diagnostika yoki terapiyada foydalanishga tayyor bo'lgan tozalangan antikorlarni olamiz.

Biopanning antikorlarni tozalashning kuchli usuli bo'lib, ultratovushli elutsiya samaradorlikni osonlashtiradi va kuchaytiradi. – natijada yuqori darajada tozalangan, buzilmagan antikorlar paydo bo'ladi. Ultrasonik biopanning olimlarga murakkab namunalardan yuqori o'ziga xos antikorlarni ajratib olish imkonini beradi va keng ko'lamli ilovalar uchun eshiklarni ochadi.

Antikorlarni tozalash uchun sonikatorlar

Hielscher sonikatorlari butun dunyo bo'ylab eng yaxshi tadqiqot muassasalarida qo'llaniladigan yaxshi o'rnatilgan vositalardir. Eng zamonaviy dizayni va yuqori ishlashi uchun qadrlanadigan Hielscher sonikatorlari biotexnologiya va molekulyar biologiya sohalarida ajralmas laboratoriya asboblari hisoblanadi. Hielscher Ultrasonics bitta namuna uchun sonikatorlarni, shuningdek, antikorlarni samarali tozalash va maqsadli bog'langan molekulalarni tozalashni osonlashtiradigan va o'ziga xos antikorlarni aniqlik va tezlik bilan ajratish uchun samarali biopanning imkonini beruvchi yuqori samarali namuna tayyorlashni taklif qiladi.
Antikorlarni tozalash kontekstida Hielscher sonikatorlari maqsadli bog'langan komplekslarning yaxlitligini saqlab, bog'lanmagan antikorlarni samarali ravishda olib tashlash orqali yuvish va elutsiya bosqichlarini osonlashtiradi. Ularning aniq nazorati va miqyosi moslashtirilgan ishlov berish sharoitlarini yaratishga imkon beradi, bu esa namunaviy hajmlar va murakkabliklarning keng diapazonida optimal tozalash natijalarini ta'minlaydi.
Hielscher sonikatorlari ultratovushli ishlov berishdagi texnologik innovatsiyani ifodalaydi, antikorlarni tozalash, elutsiya va biopanning uchun misli ko'rilmagan imkoniyatlarni taklif qiladi. Aniqligi, ishonchliligi va ishlash qulayligi bilan turli xil ultratovushli tizimlar biofarmatsevtik tadqiqotlar, diagnostika va terapiya uchun optimal samaradorlik va ko'p qirralilikni taklif etadi.
Antikorlarni tozalash, tozalash va biopanning uchun Hielscher sonikatorlari haqida ko'proq bilish uchun hozir biz bilan bog'laning! Bizning tajribali texnik xodimlarimiz sizning antikor bilan bog'liq arizangizni muhokama qilishdan mamnun!

Nima uchun Hielscher Ultrasonik?

  • yuqori mahsuldorlik
  • Zamonaviy texnologiyalar
  • ishonchliligi & chidamlilik
  • sozlanishi, aniq jarayon nazorati
  • partiyasi & mos ravishda
  • har qanday hajm uchun
  • aqlli dastur
  • aqlli xususiyatlar (masalan, dasturlashtiriladigan, ma'lumotlarni protokollash, masofadan boshqarish)
  • Foydalanish oson va xavfsiz
  • past texnik xizmat
  • CIP (joyida toza)

Dizayn, ishlab chiqarish va konsalting – Germaniyada ishlab chiqarilgan sifat

Hielscher ultrasonikatorlari eng yuqori sifat va dizayn standartlari bilan mashhur. Mustahkamlik va qulay foydalanish ultratovush qurilmalarimizni sanoat ob'ektlariga silliq integratsiya qilish imkonini beradi. Qo'pol sharoitlar va talabchan muhit Hielscher ultrasonikatorlari tomonidan osonlik bilan hal qilinadi.

Hielscher Ultrasonics ISO sertifikatiga ega kompaniya bo'lib, eng zamonaviy texnologiya va foydalanuvchilarga qulaylik bilan ajralib turadigan yuqori samarali ultratovush apparatlariga alohida e'tibor beradi. Albatta, Hielscher ultrasonikatorlari Idoralar talablariga javob beradi va UL, CSA va RoHs talablariga javob beradi.

Biz bilan bog'lanish! Bizdan so'rang!

Qo'shimcha ma'lumotni so'rang

Ultrasonik protsessorlar, ilovalar va narx haqida qo'shimcha ma'lumot so'rash uchun quyidagi shakldan foydalaning. Biz sizning jarayoningizni siz bilan muhokama qilishdan va sizning talablaringizni qondiradigan ultratovush tizimini taklif qilishdan mamnun bo'lamiz!









Iltimos, bizning e'tibor bering Maxfiylik siyosati.


Videoda UIP400MTP ultratovush namunalarini tayyorlash tizimi ko'rsatilgan, bu yuqori intensivlikdagi ultratovush yordamida har qanday standart ko'p quduqli plitalarning ishonchli namunalarini tayyorlash imkonini beradi. UIP400MTP ning odatiy ilovalari hujayra lizisini, DNK, RNK va xromatinni kesish, shuningdek, oqsillarni ajratib olishni o'z ichiga oladi.

Ultrasonikator UIP400MTP ko'p quduqli plastinka sonikatsiyasi uchun

Video eskizi

Ultrasonik tozalash va an'anaviy tozalash usullarini taqqoslash

  1. Gradient elusiyasi: Gradientli elyusiyada maqsadli oqsil va yaqinlik matritsasi o'rtasidagi bog'lanish kuchi elyusiya tamponining tarkibini o'zgartirish orqali asta-sekin kamayadi. Bu pH, tuz konsentratsiyasi yoki raqobatdosh ligandlarning kontsentratsiyasi kabi omillarni o'zgartirishni o'z ichiga olishi mumkin. Gradientli elyusiya o'ziga xos bo'lmagan bog'lanishni minimallashtirish bilan birga maqsadli oqsilni tanlab chiqarish uchun elyusiya sharoitlarini nozik sozlash imkonini beradi.
    Ultrasonik elutsiyaning afzalliklari: Ultrasonik elyusiya gradient elyusiyaga nisbatan bog'langan oqsillarni tezroq va bir xilda chiqarishni ta'minlaydi. Gradientli elutsiya elutsiya sharoitlarini diqqat bilan optimallashtirish va monitoringini talab qilsa-da, ultratovushli elyusiya oqsilni qayta tiklash uchun oddiyroq va samaraliroq usulni ta'minlaydi.
  2. Raqobatli elutsiya: Raqobatli elyusiyada maqsadli oqsil va yaqinlik matritsasi o'rtasidagi bog'lanishni buzish uchun elyusiya tamponiga raqobatdosh ligandning yuqori konsentratsiyasi kiritiladi. Raqobatchi ligand matritsadagi bog'lanish joylari uchun maqsadli oqsil bilan raqobatlashadi va shu bilan oqsilni siqib chiqaradi va uni eluatga chiqaradi.
    Ultrasonik elutsiyaning afzalliklari: Ultrasonik elyusiya raqobatbardosh elyusiyaga yumshoqroq va ko'p qirrali alternativani taklif etadi. Raqobatli elyusiya yuqori konsentratsiyali xaotrop moddalarni (ya'ni, suv molekulalari orasidagi vodorod bog'lanish tarmog'ini buzadigan va gidrofobik ta'sirni susaytirish orqali oqsillarning tabiiy holatining barqarorligini kamaytiradigan) yoki kuchli kimyoviy moddalardan foydalanishni talab qilishi mumkin. oqsil barqarorligi va faolligi. Bundan farqli o'laroq, ultratovushli elutsiya qo'shimcha kimyoviy vositalarga ehtiyoj sezmasdan mexanik buzilishlarni ta'minlaydi, oqsil yaxlitligini saqlaydi va yuqori tiklanish tezligini ta'minlaydi.
  3. Haroratdan kelib chiqqan elutsiya: Harorat bilan induktsiyalangan elyusiya maqsadli oqsil va yaqinlik matritsasi o'rtasidagi bog'lanishni buzish uchun elutsiya tamponining haroratini o'zgartirishni o'z ichiga oladi. Bunga maxsus oqsil-matritsaning o'zaro ta'siriga qarab haroratni oshirish yoki kamaytirish orqali erishish mumkin.
    Ultrasonik elutsiyaning afzalliklari: Ultrasonik elutsiya harorat ta'siri ostida bo'lgan usullarga qaraganda oqsillarni tozalash uchun tezroq va boshqariladigan usulni taklif qiladi. Harorat bilan induktsiyalangan elutsiya harorat gradyanlarini va uzoqroq muvozanat vaqtlarini aniq nazorat qilishni talab qilishi mumkin bo'lsa-da, ultratovushli elutsiya zudlik bilan mexanik buzilishlarni ta'minlaydi, bu esa elutsiya vaqtini qisqartiradi va samaradorlikni oshiradi.
  4. Enzimatik elutsiya: Enzimatik elyusiya maqsadli oqsil va yaqinlik matritsasi o'rtasidagi bog'lanishlarni ajratuvchi maxsus fermentlardan foydalanadi va oqsilni elyuatga chiqaradi. Bu usul, ayniqsa, matritsaga qattiq bog'langan oqsillar uchun yoki elutsiya sharoitlarini aniq nazorat qilishni talab qiladigan ilovalar uchun foydalidir.
    Ultrasonik elutsiyaning afzalliklari: Ultrasonik elutsiya fermentativ bo'lmagan va kimyoviy moddalarsiz fermentativ elutsiyani taklif qiladi. Enzimatik elutsiya ferment kontsentratsiyasini, inkubatsiya vaqtini va pH sharoitlarini optimallashtirishni talab qilishi mumkin bo'lsa-da, ultratovushli elutsiya qo'shimcha reagentlar yoki maxsus jihozlarsiz oqsillarni qayta tiklash uchun oddiy va universal usulni ta'minlaydi.
Yuqori samarali namuna tayyorlash uchun sonikator! UIP400MTP plastinka sonikatori 96-quduqli plitalardagi biologik namunalarning lizis, oqsillarni ajratib olish, DNK parchalanishi va hujayra eruvchanligini osonlashtiradi.

Har qanday 96-quduqli plitalar, mikrotitr plitalari va ko'p quduqli plitalar uchun plastinali sonikator UIP400MTP.



Adabiyotlar / Adabiyotlar


Yuqori samarali ultratovush! Hielscher mahsulot assortimenti ixcham laboratoriya ultratovush qurilmasidan to'liq sanoat ultratovush tizimlarigacha bo'lgan to'liq spektrni qamrab oladi.

Hielscher Ultrasonics kompaniyasi yuqori samarali ultratovushli homogenizatorlarni ishlab chiqaradi laboratoriya uchun sanoat hajmi.


Jarayoningizni muhokama qilishdan mamnun bo'lamiz.

Keling, aloqaga chiqamiz.