Ультразвук є важливим методом обробки для виділення вірусу віспи мавп (MPXV) з аналітичних зразків, для фрагментації ДНК вірусу, а також у виробництві вакцин проти віспи мавп. Для підготовки зразків перед діагностикою та аналізом (ПЛР, ІФА тощо) ультразвук використовується для лізису клітин з метою вивільнення вірусу мавпячої віспи зсередини клітини та / або фрагмента ДНК. У виробництві вакцин застосування варіюється від підготовки вірусних частинок / ДНК, інкапсуляції в носіях ліків та формулювання інокули.
Нижче ви можете знайти детальну інформацію про ультразвукову підготовку зразків вірусу віспи мавп, а також виробництво ультразвукової вакцини MPXV.

Що ви знайдете на цій сторінці:

• Ультразвуковий лізис для видалення вірусу віспи мавп
• Ультразвукова фрагментація ДНК вірусу віспи мавп
• Ультразвукові застосування у виробництві вакцин MPXV

Ультразвуковий лізис і фрагментація ДНК перед полімеразною ланцюговою реакцією (ПЛР)

Інфекція вірусу віспи мавп виявляється за допомогою ампліфікаційного тестування нуклеїнових кислот (NAAT), за допомогою плр-терапії в режимі реального часу або звичайної полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) для виявлення унікальних послідовностей вірусної ДНК. Зразок (наприклад, з обміну носоглоткою або біопсії шкіри) містить вірус у клітинах.
Для аналізу вірус повинен бути вивільнений з клітин, а вірусна ДНК повинна бути фрагментована для ПЛР.

Ультразвуковий лізис:

Ультразвукове порушення / лізис клітин є надійним та ефективним методом виділення вірусів із зразків клітин і тим самим кращою технікою перед хімічними агентами, такими як лізоцим, протеїназа К та різні миючі засоби, які альтернативно використовуються для досягнення лізису клітин та вивільнення ДНК.
Однак використання таких хімічних реагентів вимагає трудомісткої пробопідготовки в кілька етапів перед аналізом ПЛР, щоб запобігти гальмуванню реакції ПЛР. Оскільки інгібітори ПЛР впливають на ефективність ампліфікації, невеликі варіації кількості інгібіторів, які не видаляються, можуть призвести до великих варіацій ампліфікації продуктів ПЛР (Diaco, 1995).
Перевага ультразвуку для лізису полягає в тому, що бажане повне порушення клітинних структур і вивільнення ДНК без необхідності лізингових реагентів і трудомістка підготовка зразків. (пор. Фиксе та ін., 2003)

Ультразвукова фрагментація ДНК:

Ультразвукова фрагментація ДНК проста і надійна, оскільки виробляє фрагменти ДНК, що не мають довжини (базовіпари, bp). За допомогою ультразвуку ДНК можна ефективно фрагментувати до цільової довжини ДНК. Точний контроль ультразвукових параметрів і складні варіанти охолодження запобігають деградації ДНК.
Дізнайтеся більше про ультразвукову фрагментацію ДНК!

Ультразвукові застосування вакцини проти вірусу віспи мавп

Вакцини, які використовуються проти вірусу віспи мавп, в даний час є живими вірусними вакцинами. Нещодавно розроблені вакцини можуть використовувати інші платформи, такі як на основі ДНК В даний час містить модифіковану Vaccinia Ankara viurs, ослаблений ортопоксвірус, що не копіює. Також в ньому містяться Тріс (трис-амінометан) і хлорид натрію. Вакцина також може містити невелику кількість ДНК і білка з клітин фібробластів курячого ембріона, які використовуються для вирощування вакцинного вірусу, бензонази і антибіотичних сполук, таких як гентаміцин і ципрофлоксацин.

Ультразвукова гомогенізація використовується у виробництві живих атенуйованих вірусних вакцин, ДНК-вакцин, багатовалентних ДНК-коктейлів, мРНК-вакцин, рекомбінантних білкових вакцин, вірусоподібних частинок вакцин тощо.

Ви можете знайти більш детальну інформацію про ультразвукові програми для покращення виробництва вакцин!

Протокол ультразвукової ізоляції вірусу віспи мавп

Дослідницька група Stittelaar (2005) використовувала ультразвуковий лізис для вивільнення вірусу віспи мавпи з культури клітин-хазяїна росту, а також з клітин, отриманих через обмін горлом від інфікованих приматів.

Препарат вакцини проти віспи мавп:

Віруси віспи мавп вирощувалися на клітинах фібробластів курячих ембріонів без специфічних патогенів. Після інкубації протягом 1-2 днів вірусно-клітинна суспензія була зібрана одним раундом заморожування-розморожування, а потім зосереджена шляхом центрифугування. Гранула була реуспендована і піддана декільком раундам ультразвукової гомогенізації.

Ізоляція вірусу віспи мавп від вакцинованих макак:

Зразки тричі заморожували-розморожували і ультразвукову обробку в ультразвуковому CupHorn. Два розведення (1:10 і 1:100) в транспортному середовищі, доповнені 1% фетальної бичачої сироваткою, використовувалися для інокуляції моношарів клітин Vero в шестиствольних пластинах. Після 1 год інкубації при температурі 37°С інокулу видалили і замінили на культуральне середовище, доповнене 1% фетальною бичачою сироваткою. Моношари культивували протягом 5 днів при температурі 37°С і фарбували кристалічно-фіолетовим розчином.
(пор. Стітелаар та ін., 2005)

Ультразвукові прилади для аналізу вірусів та виробництва вакцин

Hielscher Ultrasonics широкий портфель продуктів пропонує ідеальний ультразвуковий пристрій для дослідницьких та аналітичних лабораторій, а також для промислового виробництва вакцин.
Hielscher Ultrasonics спеціалізується на розробці, виробництві та розповсюдженні високопродуктивних ультразвукових апаратів та соно-біореакторів для використання в дослідницьких та аналітичних лабораторіях, а також для впровадження в промислове виробництво вакцин (наприклад, вакцини, Api)
Ультразвукова обробка може бути застосована до відкритих посудин, закритих реакторів безперервного перемішування та безперервних проточних реакторів. Всі частини ультразвукових систем, які контактують з рідким середовищем, виготовляються з нержавіючої сталі, титану або скла. Автоклавні деталі та сантехнічна арматура забезпечують виробництво під умови фармацевтичного класу.
Автоматичний запис даних: Інтелектуальне програмне забезпечення записує параметри процесу сокації автоматично на інтегровану карту пам'яті SD. Точний контроль за всіма параметрами процесу забезпечує Відтворюваність, Стандартизація виробництва, а також сприяє виконанню стандартів безпеки фармацевтичних продуктів.
Hielscher Ультразвук’ ультразвукові процесори високонадійні і можуть точно керуватися. Всі промислові ультразвукові пристрої можуть регулюватися, щоб забезпечити повний діапазон від нижчих до дуже високих амплітуд. Надійність ультразвукових систем Hielscher дозволяє працювати 24/7 у важких умовах та у вимогливих середовищах.

У таблиці нижче наведено приблизну потужність обробки наших ультразвукових пристроїв: