Ультразвукові програми при вірусі мавпячої віспи

Ультразвук є важливим методом обробки для виділення вірусу віспи мавп (MPXV) з аналітичних зразків, для фрагментації ДНК вірусу, а також при виробництві вакцин проти віспи мавп. Для пробопідготовки перед діагностикою та аналізом (ПЛР, ІФА тощо) використовується ультразвуковий звук для лізування клітин з метою вивільнення вірусу мавпячої віспи з внутрішньої частини клітини та/або фрагментації ДНК. У виробництві вакцин застосування варіюється від препарату вірусних частинок/ДНК, інкапсуляції в носіях ліків та формулювання інокуляту.
Нижче ви можете знайти детальну інформацію про підготовку зразків вірусу мавпячої віспи ультразвуком, а також виробництво вакцини MPXV за допомогою ультразвуку.

Що ви знайдете на цій сторінці:

• Ультразвуковий лізис для екстракції вірусу мавпячої віспи
• Ультразвукова фрагментація ДНК вірусу мавпячої віспи
• Застосування ультразвуку у виробництві вакцин MPXV

Ультразвуковий лізис і фрагментація ДНК перед полімеразною ланцюговою реакцією (ПЛР)

Інфекцію вірусу мавпячої віспи виявляють за допомогою тестування ампліфікації нуклеїнових кислот (NAAT) з використанням звичайної полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) у реальному часі для виявлення унікальних послідовностей вірусної ДНК. Зразок (наприклад, з носоглотки або біопсії шкіри) містить вірус у клітинах.
Для аналізу вірус повинен бути випущений з клітин, а вірусна ДНК повинна бути фрагментована для ПЛР.

Ультразвуковий лізис:

Ультразвуковий розрив? лізис клітин є надійним і ефективним методом виділення вірусів зі зразків клітин і, тим самим, кращим методом перед хімічними агентами, такими як лізоцим, протеїназа К і різні детергенти, які в альтернативному порядку використовуються для досягнення лізису клітин і вивільнення ДНК.
Однак використання таких хімічних реактивів вимагає трудомісткої підготовки зразків в кілька етапів перед ПЛР-аналізом для запобігання гальмуванню реакції ПЛР. Оскільки інгібітори ПЛР впливають на ефективність ампліфікації, невеликі варіації кількості інгібіторів, які не видаляються, можуть призвести до великих варіацій ампліфікації продукту ПЛР (Diaco, 1995).
Перевага ультразвуку для лізису полягає в тому, що бажане повне порушення клітинних структур і вивільнення ДНК без необхідності використання лізуючих реагентів і трудомісткої підготовки зразків. (пор. Fykse та ін., 2003)

Ультразвукова фрагментація ДНК:

Ультразвукова фрагментація ДНК проста і надійна, так як при цьому утворюються фрагменти ДНК, що налаштовуються по довжині (пари основ, пп). За допомогою ультразвуку ДНК можна ефективно фрагментувати до цільової довжини ДНК. Точний контроль за ультразвуковими параметрами та складні можливості охолодження запобігають деградації ДНК.
Дізнайтеся більше про ультразвукову фрагментацію ДНК!

Ультразвукові застосування у вакцині проти вірусу віспи мавп

Вакцини, які використовуються проти вірусу мавпячої віспи, наразі є живими вірусними вакцинами. Нещодавно розроблені вакцини можуть використовувати інші платформи, такі як на основі ДНК Наразі вони містять модифікований вірус Vaccinia Ankara viurs, атенуйований, що не розмножується. Він також містить Tris (трис-амінометан) і хлорид натрію. Вакцина також може містити невелику кількість ДНК і білка з клітин фібробластів курячого ембріона, які використовуються для вирощування вакцинного вірусу, бензонази та антибіотичних сполук, таких як гентаміцин і ципрофлоксацин.

Ультразвукова гомогенізація використовується у виробництві живих атенуйованих вірусних вакцин, ДНК-вакцин, багатовалентних ДНК-коктейлів, мРНК-вакцин, рекомбінантних білкових вакцин, вірусоподібних вакцин тощо.

Ви можете знайти більш детальну інформацію про застосування ультразвуку для вдосконалення виробництва вакцин!

Протокол ультразвукової ізоляції вірусу мавпячої віспи

Дослідницька група Stittelaar (2005) використовувала ультразвуковий лізис для вивільнення вірусу мавпячої віспи з культури ростових клітин господаря, а також з клітин, отриманих шляхом заміни горла від інфікованих приматів.

Препарат вакцини проти мавпячої віспи:

Віруси мавпячої віспи вирощували на клітинах фібробластів курячого ембріона, вільних від специфічних патогенів. Після інкубації протягом 1-2 днів суспензію вірус-клітин збирали шляхом одного раунду заморожування-розморожування, а потім концентрували шляхом центрифугування. Гранулу ресуспендували і піддали декільком раундам ультразвукової гомогенізації.

Виділення вірусу мавпячої віспи з вакцинованих макак:

Зразки тричі розморожували і проводили ультразвукове дослідження в ультразвуковому апараті CupHorn. Два розведення (1:10 і 1:100) у транспортному середовищі, доповнені 1% сироваткою великої рогатої худоби, були використані для інокуляції моношарів клітин Vero в шестилункових пластинах. Після 1 год інкубації при 37 °С інокулянти видаляли і замінювали живильним середовищем, доповненим 1% сироваткою плодової худоби. Моношари культивували протягом 5 днів при температурі 37 °C і фарбували розчином кристалічного фіалки.
(пор. Stittelaar et al., 2005)

Ультразвукові апарати для аналізу вірусів та виробництва вакцин

Широкий асортимент продукції Hielscher Ultrasonics пропонує ідеальний ультразвуковий апарат для дослідницьких та аналітичних лабораторій, а також для промислового виробництва вакцин.
Hielscher Ultrasonics спеціалізується на розробці, виробництві та розповсюдженні високоефективних ультразвукових апаратів та соно-біореакторів для використання в дослідницьких та аналітичних лабораторіях, а також для впровадження у промислове виробництво вакцин (наприклад, Вакцини, API).
Ультразвуковий звук може застосовуватися до відкритих посудин, закритих реакторів з безперервним перемішуванням і реакторів безперервного проточного руху. Всі деталі ультразвукових систем, які контактують з рідким середовищем, виготовляються з нержавіючої сталі, титану або скла. Автоклавні деталі та сантехнічна арматура забезпечують виробництво під Умови фармацевтичного класу.
Автоматичний запис даних: Інтелектуальне програмне забезпечення автоматично записує параметри процесу ультразвуку на вбудовану карту пам'яті SD. Точний контроль всіх параметрів процесу забезпечує Відтворюваність, стандартизація виробництвата сприяє виконанню стандартів безпеки фармацевтичної продукції.
Hielscher Ultrasonics’ ultrasonic processors are highly reliable and can be precisely controlled. All industrial ultrasonicators can adjusted to deliver the full range from lower to very high amplitudes. The robustness of Hielscher’s ultrasonic systems allows for 24/7 operation under heavy duty and in demanding environments.

Наведена нижче таблиця дає уявлення про приблизну потужність обробки наших ультразвукових апаратів: