Hielscher ультразвукова технологія

Клітинний лізис клітин BL21 за допомогою ультразвукової терапії

BL21 клітини є штамом E. coli, який широко використовується в дослідницьких лабораторіях, біотехнології та промисловому виробництві завдяки їх здатності виражати білки високоефективними. Порушення ультразвукових клітин, лізис і видалення білка є поширеним методом для виділення і збору цільових білків з клітинного інтер'єру клітин BL21. Ультразвук повністю порушує клітину і випускає всі обтиглі білки, роблячи 100% білка доступним.

BL21 клітини для експресії білка

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsКлітина BL21 є хімічно компетентним бактеріальним штамом E. coli, придатним для трансформації та експресії білка високого рівня за допомогою індукційної системи Т7 РНК-ІПТГ. Клітини BL21 дозволяють високоефективну експресію білка будь-якого гена, який знаходиться під контролем промоутера T7. Штам E. coli BL21(DE3) - це штам виробництва білка на основі РНК T7 в поєднанні з векторами експресії на основі промоутерів T7 і широко застосовується в лабораторіях і промисловості для виробництва рекомбінантних білків. У BL21 (DE3) експресія генного кодування рекомбінантного білка транскрибується хромосомно закодованою РНК-полімеразою T7 (T7 RNAP), яка транскларує у вісім разів швидше, ніж звичайний РНК E. coli. Це робить штам BL21 (DE3) високоефективним і перетворює його в одну з найбільш бажаних клітинних систем експресії білка.

Протокол ультразвукового лізису та екстракції білка з BL21 клітин

Клітинний лізис клітин BL21 в основному виконується за допомогою ультразвукової терапії в поєднанні з натрієвим лауройим саркозинатом (також відомим як саркосил) як буфер лізису. Переваги порушення ультразвукових клітин і екстракції білка полягають в надійності, відтворюваності, а також простій, безпечній і швидкій роботі ультразвукових апаратів. Наведений нижче протокол дає покроковий напрямок для ультразвукового лізису клітин BL21:

Зондовий тип ізоніфікатора UP200St для лізису

Ультразвуковий руйнівник клітин UP200St з мікро-наконечником S26d2 для лізису та екстракції білка

Запит інформації




Зверніть увагу на наші Політика конфіденційності.


  • З метою видалення білків чаперону бактеріальні пелети BL21 були повторно заправленими в 50 мл холодного буфера натрію Tris-EDTA (STE) (що складається з 10 мМ Tris-HCL, pH 8.0, 1 мМ EDTA, 150 мМ NaCl доповнено 100 мМ ПМСД).
  • Додаються 500 мл лизозиму (10 мг/мл), а клітини інкубуються на льоду протягом 15 хв.
  • Після цього додається 500 ul DTT і 7 мл саркосилу (10% (ж / в), що складаються в буфері STE).
  • Важливо тримати всі буфери очищення льоду холодними і підтримувати зразки на льоду весь час. Всі кроки очищення повинні проводитися в холодному приміщенні, якщо це можливо.
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • Для ультразвукового лізису та екстракції білка зразки ультразвукові Ультразвуковий апарат VialTweeter протягом 4 х 30 сек при 100% амплітуди з інтервалом 2 хв між кожною променевою допомогою. Крім того, ультразвуковий гомогенізатор зондового типу з мікро-наконечником, наприклад, UP200Ht з S26d2 (3 х 30 сек, 2 хв. пауза між ультразвуковими циклами, 80% амплітуда) може бути використана.
  • Для подальших кроків очищення зразки повинні зберігатися на льоду або альтернативно зберігатися при -80°C до подальшої обробки.

Ультразвуковий лізис під контролем температури прессизу

Точний і надійний контроль температури має вирішальне значення при поводженні з біологічними зразками. Високі температури ініціюють термічна деградація білка в зразках.
Як і всі методи механічної підготовки зразків, sonication створює тепло. Однак температуру зразків можна добре контролювати при використанні VialTweeter. Ми представляємо вам різні варіанти моніторингу та контролю температури ваших зразків, готуючи їх за допомогою VialTweeter та VialPress для аналізу.

  1. Моніторинг температури зразка: ультразвуковий процесор UP200St, який керує VialTweeter, оснащений інтелектуальним програмним забезпеченням і підключеним датчиком температури. Підключіть датчик температури до UP200St і вставте кінчик датчика температури в одну з зразків трубки. За допомогою цифрового кольорового сенсорного дисплея ви можете встановити в меню UP200St певний діапазон температур для вашої зразка sonication. Ультразвук автоматично зупиниться, коли буде досягнута максимальна температура, і призупиниться, доки температура вибірки не опуститься до меншого значення встановленого температурного ∆. Потім sonication починається автоматично знову. Ця розумна функція запобігає деградації, викликаної теплом.
  2. Блок VialTweeter можна попередньо охолодити. Покладіть блок VialTweeter (тільки сонотрод без датчика!) в холодильник або морозильну камеру, щоб попередньо охолодити титановий блок, що допомагає відкласти підвищення температури в зразку. Якщо можливо, сам зразок також можна попередньо охолодити.
  3. Використовуйте сухий лід для охолодження під час звуження. Використовуйте неглибокий лоток, наповнений сухим льодом, і помістіть VialTweeter на лід, щоб тепло могли швидко розсіятися.

Клієнти по всьому світу використовують VialTweeter і VialPress для щоденної роботи з підготовки зразків в біологічних, біохімічних, медичних і клінічних лабораторіях. Інтелектуальне програмне забезпечення та контроль температури процесора UP200St, температура надійно контролюється і деградації вибірки, викликаної теплом, уникнути. Ультразвукова підготовка зразків з VialTweeter і VialPress забезпечує дуже надійні і відтворювані результати!

Знайдіть оптимальний ультразвуковий руйнівник для вашого застосування Lysis

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher Ultrasonics є давнім досвідченим виробником високоестійких ультразвукових клітинних руйнівників і гомогенізаторів для лабораторій, систем лавкового та промислового масштабу. Ваш розмір бактерійної клітинної культури, ваша мета дослідження або виробництва і обсяг клітин для обробки на годину або день є важливими факторами, щоб знайти правильний ультразвуковий клітинний руйнівник для вашого застосування.
Hielscher Ultrasonics пропонує різні рішення для одночасної ультразвукової ультразвукової матеріали (до 10 флаконів з VialTweeter) і масових зразків (тобто мікропітерні пластини / ІФА пластини з UIP400MTP), а також класичний зонд-тип лабораторії ультразвуковий з різним рівнем потужності від 50 до 400 Вт до повністю промислових ультразвукових процесорів з до 16000 ватт на одиницю для комерційного порушення клітин і вилучення білка у великому виробництві. Всі ультразвукові апарати Hielscher побудовані для роботи 24/7/365 під повним навантаженням. Надійність і надійність є основними особливостями наших ультразвукових пристроїв.
Всі цифрові ультразвукові гомогенізатори оснащені розумним програмним забезпеченням, кольоровим сенсорним дисплеєм і автоматичним протоколом передачі даних, що робить ультразвуковий пристрій зручним інструментом роботи в лабораторії та виробничих потужностях.
Дайте нам знати, які клітини, який обсяг, з якою частотою і з якою метою ви повинні обробляти свої біологічні зразки. Ми будемо рекомендувати вам найбільш підходящий ультразвуковий руйнівник клітин для ваших вимог процесу.

Наведена нижче таблиця дає вам вказівку на приблизну потужність обробки наших ультразвукових систем від компактних ручних гомогенізаторів та ультразвукових процесорів MultiSample до промислових ультразвукових процесорів для комерційних застосувань:

пакетний Обсяг швидкість потоку Рекомендовані пристрої
96-колодязні / мікротестерні пластини застосовується (УІП400МТП)
10 флаконів від 0,5 до 1,5 мл застосовується VialTweeter на UP200St
0.01 до 250mL від 5 до 100мл/хв UP50H
0.01 до 500mL Від 10 до 200мл / хв UP100H
Від 10 до 2000мл Від 20 до 400мл / хв UP200Ht, UP400St
0.1 до 20 л 0.2 до 4л / хв UIP2000hdT
Від 10 до 100 л Від 2 до 10 л / хв UIP4000hdT
застосовується Від 10 до 100 л / хв UIP16000
застосовується більший кластер UIP16000

Зв'яжіться з нами! / Запитати нас!

Запитайте більше інформації

Будь ласка, використовуйте форму нижче, щоб запросити додаткову інформацію про ультразвукові процесори, програми та ціни. Ми будемо раді обговорити ваш процес з вами і запропонувати вам ультразвукову систему, що відповідає вашим вимогам!









Будь ласка, зверніть увагу на наші Політика конфіденційності.


Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

Ультразвуковий пристрій UP200Ht з 2мм мікротипом S26d2 для променевої з невеликих зразків

Література/довідники



Факти варті знати

Бактерії Escherichia Coli

Escherichia coli є типом бактерій, тобто не спороутворюючим, грамнегативний і характеризується його формою прямого стрижня. Бактерії E.coli присутні в навколишньому середовищі, продуктах харчування та кишечнику людей і тварин. E. coli, як правило, мотильний за допомогою перитричної джгутики, але існують і немотильні типи. E.coli є так званими факуративно анаеробними хіміоорганотрофними організмами, що означає, що вони здатні як до дихального, так і до ферментативного обміну речовин. Більшість типів E.coli доброякісні і виконують корисні функції в організмі, наприклад, пригнічують ріст шкідливих бактеріальних видів, синтезують вітаміни і т.д.
Клітина бактерій Escherichia coli так званого типу B є особливою категорією штамів E.coli, які широко використовуються в дослідженнях для дослідження таких механізмів, як чутливість бактеріофагів або системи модифікації обмежень. Крім того, бактерії E.coli цінують як надійну робочу конячку для експресії білка в біотехнологіях і лабораторіях науки про життя. Наприклад, E.coli використовуються для синтезу сполук, таких як білки і олігосахариди в промислових масштабах. Через специфічні особливості, такі як дефіцит протеази, низький рівень вироблення ацетату на високому рівні глюкози, і підвищена проникність, E. coli B клітини він найчастіше використовується приймаючі клітини для виробництва генно-інженерних білків.

Рекомбінантний білок

Рекомбінантні білки (rProt) набувають значного значення в колекторних гілках, в тому числі в хімічній виробництві, фармацевтичній, косметичній, медицині людини і тварин, сільському господарстві, харчовій промисловості, а також галузях переробки відходів.
Виробництво рекомбінантного білка вимагає використання системи експресії. Як експресія клітинних систем для виробництва рекомбінантної ДНК, можуть бути використані як прокаріотичні, так і еукаріотичні клітини. Хоча бактеріальні клітини найбільш широко використовуються для експресії білка через такі фактори, як низька вартість, легка масштабованість і прості умови змі, ссавці, дріжджі, водорості, комахи і без клітин системи встановлені альтернативи. Тип білка, функціональна активність, а також необхідний вихід вираженого білка впливають на вибір клітинної системи, що використовується для експресії білка.
Для того, щоб висловити рекомбінантний білок, певна клітина повинна бути трансфікована вектором ДНК, що містить шаблон рекомбінантної ДНК. Клітини, трансфіковані шаблоном, потім культурні. Як наслідок клітинного механізму клітини транскларують і перекладають білок інтересу, тим самим виробляючи цільовий білок.
Оскільки виражені білки закріпилися в клітинній матриці, клітина повинна бути линяла (порушена і зламана), щоб звільнити білки. На наступному кроці очищення білок відокремлюється і очищається.
Першим рекомбінантним білком, який використовувався в лікуванні, був рекомбінантний інсулін людини в 1982 році. Сьогодні в усьому світі виробляється понад 170 видів рекомбінантного білка для медичних процедур. Часто використовувані рекомбінантні білки, які використовуються в медицині, наприклад, рекомбінантні гормони, інтерферони, інтерлейкіни, фактори росту, фактори некрозу пухлини, фактори згортання крові, тромболітичні препарати та ферменти для лікування основних захворювань, таких як діабет, карликовість, інфаркт міокарда, застійна серцева недостатність, церебральна апоплексія, розсіяний склероз, нейтропенія, тромбоцитопенія, анемія, гепатит, ревматоїдний артрит, астма, хвороба Крона та рак. (пор. Фук В. Фам, в Omics Technologies and Bio-Engineering, 2018)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Висока продуктивність ультразвуку! Асортимент продукції Hielscher охоплює повний спектр від компактного лабораторного ультразвукового над лавковими агрегатами до повноіндативних ультразвукових систем.