Аналізи, такі як ІФА, широко використовуються для діагностики in-vitro, виявлення білка, пов'язаного з хворобами, та контролю якості (наприклад, моніторингу харчових алергенів). Ультразвукова підготовка зразків є швидкою, надійною і відтворюваною технікою для лизати клітини і ізолювати внутрішньоклітинні білки, ДНК, РНК і органели. Hielscher Ultrasonics пропонує різні ультразвукові рішення для зручного приготування одиночних зразків, декількох флаконів, а також для пластин мікротикерів і 96-колодязних пластин.

Elisa – Імуноферментний аналіз

ІФА розшифровується як імуноферментний аналіз і є широко використовуваною методикою біохімічного аналізу категорії аналізів ліганд-зв'язування. В ІФА рідкий зразок додають на стаціонарну тверду фазу зі спеціальними властивостями зв'язування. Як правило, стаціонарна тверда фаза наноситься як покриття на пластину колодязя або ІФА-пластину. Потім різні рідкі реагенти послідовно додаються, інкубуються і миються, так що, нарешті, оптична зміна (наприклад, розвиток кольору продуктом загадкової реакції) відбувається в кінцевій рідині в колодязі. Оптична зміна дозволяє виміряти кількість аналітика за допомогою так званого кількісного “читання». Для кількісного читання для виявлення та вимірювання інтенсивності переданого світла використовується спектрофотометр, флюорометр або люмінометр. На чутливість виявлення впливає посилення сигналу під час аналітичних реакцій. Оскільки ферментні реакції добре досліджені і надійні процеси посилення, ферменти використовуються для створення сигналу. Ферменти пов'язані з реагентами виявлення в фіксованих пропорціях, щоб дозволити точне кількісне визначення, що пояснює також назву "фермент-пов'язаний" імуносорбентний аналіз.
Оскільки аналіз ІФА проводиться в пластинах мікротітерів / 96-колодязних пластинах, він відомий як технологія аналізу на основі пластин і використовується, наприклад, в клінічній діагностиці in-vitro, дослідженнях, розробці ліків і т.д. для виявлення і кількісного визначення антитіл, пептидів, білків і гормонів.
Методика ІФА часто використовується як діагностичний інструмент в медицині, біотехнології, патології рослин, а також є важливим вимірюванням контролю якості в декількох галузях промисловості.

Ультразвукова преп вибірка перед ІФА

Перед тим, як іФА-аналіз може бути виконаний, зразки вимагають кроків підготовки такого клітинного лізису і вилучення внутрішньоклітинних білків, ДНК, РНК і т.д. Перевагою ультразвукового лізису клітин і ізоляції білка є його висока ефективність, надійність і відтворюваність. Всі ці фактори важливі для отримання якісної діагностики та результатів досліджень

Протокол для ультразвукового лізису ультразвукової клітини

• Для клітинних культур: Перед ультразвуковим лізисом клітини центрифугують клітини протягом 5 хв при 270 г в мікроцентрифузі. Видаліть надприродний шляхом аспірації та повторного стиспенду клітин у 30 – 100 мкл буфера RIPA. Потім інкубують клітинні гранули на льоду 30 хв.
• Тепер зразок клітини готовий до ультразвукового лізису:
  Використовуйте ультразвуковий апарат типу зонда (наприклад, UP200Ht з S26d2 зондом) або ультразвуковим багатокористувацьким пристроєм (наприклад, VialTweeter для одночасної ультразвукової ультразвукової ультразвукової заливки до 10 флаконів або UIP400MPT для пластин мікротаймерів / 96-колодязних пластин) в залежності від кількості зразків, які потрібно підготувати.
  Для зондування типу sonication одного зразка помістіть клітини в 1,5 мл мікроцентрифугових труб.
• Попередньо встановіть ультразвукову тривалість, загальний вхід енергії, режим циклу та / або температурні обмеження в цифровому меню ультразвукового пристрою. Це забезпечує високу надійність звуження і повторюваність.
• Включіть сонотрод і ввімкніть ультразвуковий пристрій. Акуратно перемістіть мікро-кінчик ультразвукового зонда через зразок, щоб рівномірно зізвукувати зразок.
  Для більшості клітин ультразвуковий лізис буде завершено після 2 -4 циклів ультразвукової ультразвукової лізису 10 сек.
• Після про sonication видаліть соноторд зі зразка. Зразки потрібно інкубувати на льоду 5 хв. Потім центрифуга при 10000 х г протягом 20 хв, щоб пелети сміття. Перенесіть надприродні речовини на нову мікроцентрифугну трубку. Позначте анальїти і зберігайте при -20°C.
• Ультразвуковий соноторд можна чистити, витираючи його належним чином спиртом або ультразвуком в дзьобі, наповненому алкоголем, наприклад, 70% етанолу. Всі ультразвукові зонди, виготовлені з титану, є автоклавними.

• Ретельно промийте тканину холодним льодом PBS (0.01M, pH=7.4), щоб ретельно видалити надлишок кровообігу.
• Зважте тканину (нирку, серце, легені, селезінку і т.д.) і матерат її на невеликі шматочки, які гомогенізовані в PBS. Необхідний об'єм ПБС пов'язаний з вагою тканини. Як правило, 1 г тканини вимагає близько 9мл PBS. Рекомендується додати деякі інгібітори протеази до PBS. (Також можна використовувати RIPA або гіпотонічний лізис буфер, що містить коктейль протеази та фосфатази).
• Залежно від розміру тканини, коротке лікування вихором (близько 1-2 хв. в 15 сек. імпульси) може бути корисним для попередньої обробки тканини.
• Встановіть мікро-наконечник, наприклад S26d2, на ультразвук. Помістіть зразок трубки з тканиною в крижану ванну.
• Sonicate зразок з ультразвуком, наприклад UP200St (80% амплітуда) протягом 1 хв в імпульсному режимі (15sec on, 15sec пауза). Тримайте зразок в крижаній ванні.
• Потім гомогенати центрифугують для отримання конкретних басейнів (цитозолічних, ядерних, мітохондріальних або лізосомальних) з метою збагачення білка для аналізу. Центрифугуючи зразок протягом 5 хвилин при 5000×g, надприродний отримується.

Надійний контроль температури під час sonication

Температура є вирішальним фактором, що впливає на процес, який особливо важливий для лікування біологічних зразків, наприклад, для запобігання термічної деградації білків. Як і всі методи механічної підготовки зразків, sonication створює тепло. Тим не менш, температура зразків може бути добре контрольована при використанні пристроїв Hielscher Ultrasonics. Ми представляємо вам різні варіанти моніторингу та контролю температури ваших зразків, готуючи їх за допомогою ультразвукового пристрою типу зонда або попередньо аналітичного центру VialTweeter.

1. Моніторинг температури зразка: Всі цифрові ультразвукові процесори Hielscher оснащені інтелектуальним програмним забезпеченням і підключеним датчиком температури. Підключіть датчик температури до ультразвукового пристрою (наприклад, UP200Ht, UP200St, VialTweeter, UIP400MTP) і вставте кінчик датчика температури в одну з зразків трубки. За допомогою цифрового кольорового сенсорного дисплея ви можете встановити в меню ультразвукового процесора певний діапазон температур для вашої зразка ультразвукової ультразвукової. Ультразвук автоматично зупиниться, коли буде досягнута максимальна температура, і призупиниться, доки температура вибірки не опуститься до меншого значення встановленого температурного ∆. Потім sonication починається автоматично знову. Ця розумна функція запобігає деградації, викликаної теплом.
2. Що стосується ультразвукового багатопробивного блоку VialTweeter, то титановий блок, який тримає зразки труб, можна попередньо охолодити. Покладіть блок VialTweeter (тільки сонотрод без датчика!) в холодильник або морозильну камеру, щоб попередньо охолодити титановий блок, що допомагає відкласти підвищення температури в зразку. Якщо можливо, сам зразок також можна попередньо охолодити.
3. Використовуйте крижану ванну або сухий лід, щоб охолонути під час просочення. Помістіть зразок трубки (ів) під час sonication в крижану ванну. Для VialTweeter використовуйте неглибокий лоток, наповнений сухим льодом, і помістіть VialTweeter на сухий лід, щоб тепло могли швидко розсіюватися.

Клієнти по всьому світу використовують зонд-ультразвукові апарати Hielscher, а також багатопробивні блоки ультразвукової обробки VialTweeter і UIP400MTP для щоденної роботи з підготовки зразків в біологічних, біохімічних, медичних і клінічних лабораторіях. Інтелектуальне програмне забезпечення та контроль температури процесорів Hielscher, температура надійно контролюється і уникнути деградації зразків, викликаних теплом. Ультразвукова підготовка зразків за допомогою ультразвукових рішень Hielscher забезпечує дуже надійні та відтворювані результати!