Буферні розчини, приготовані за допомогою ультразвуку

Буфери лізису можна ефективно і швидко приготувати за допомогою ультразвукових тканинних гомогенізаторів. Оскільки ультразвукові апарати є омріяним інструментом для змішування, розчинення та диспергування, вони дозволяють надійно та зручно готувати буфери лізису.

Ультразвукове приготування лізисних буферів

Ультразвукові тканинні гомогенізатори є поширеним інструментом для руйнування, лізису та екстракції клітин, тому доступні в більшості лабораторій. Другорядним застосуванням ультразвукових апаратів зондового типу є приготування лізисних буферів.

Лізис-буфер — це розчин, який використовується для розбиття (лізи) клітин і вивільнення їх вмісту для подальшого аналізу. Специфічний склад лізисного буфера може варіюватися в залежності від типу клітин, що лізуються, і подальшого застосування. Однак типовий буфер лізису містить такі компоненти, як детергенти, солі та інгібітори протеази. Буферні солі (наприклад, Tris-HCl) та іонні солі (наприклад, NaCl) зазвичай використовуються для регулювання рН та осмолярності лізату.
Щоб зробити буфер лізису, компоненти змішують між собою у відповідних концентраціях і рН. Суміш зазвичай перемішують або збовтують до тих пір, поки компоненти не розчиняться, а розчин не стане однорідним.
Ультразвукова гомогенізація - це метод, який може бути використаний для створення хорошого буфера лізису шляхом покращення змішування та розчинення компонентів. При цьому методі використовуються ультразвукові хвилі – зазвичай в діапазоні від 20 до 30 кГц – наносяться на суміш, що створює кавітаційні бульбашки, які руйнуються і генерують інтенсивну місцеву енергію, що призводить до механічного зсуву і змішування компонентів.
Процес ультразвукової гомогенізації може допомогти розбити будь-які грудки або агрегати компонентів і забезпечити рівномірне перемішування розчину. Отже, такий покращений буфер лізису може призвести до більш ефективного руйнування клітин і вищого виходу вилученого матеріалу. Крім того, ультразвукова гомогенізація може скоротити час, необхідний для створення буфера лізису, порівняно з традиційними методами перемішування або струшування.
В цілому, ультразвукова гомогенізація є потужним інструментом для підвищення якості та ефективності приготування лізисного буфера.

Протокол приготування ультразвукового буфера лізису

Це загальний протокол виготовлення лізисного буфера за допомогою ультразвукового апарату зондового типу:
 
Матеріали:

• Миючий засіб (миючі засоби) на вибір (наприклад, Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Сіль на вибір (наприклад, NaCl, KCl)
• Інгібітори протеази (наприклад, ПМСФ, апредтинін, леупептин)
• Ультразвуковий апарат
• Мішалкою
• Деіонізована вода
• pH-метр або pH-смужки

 
 
Покрокова інструкція:

1. Визначте склад буфера лізису на основі клітин або тканини, яку ви будете лізувати, і подальших застосувань, для яких ви будете використовувати лізат. Приготуйте вихідні розчини детергентів, солей та інгібіторів протеаз у потрібних концентраціях.
2. Додайте в мензурку або колбу вихідні розчини детергентів, солей та інгібіторів протеази.
3. Додайте деіонізовану воду, щоб довести об'єм до бажаної кількості буфера.
4. Змішайте компоненти за допомогою мішалки для того, щоб отримати розчин для попереднього замішування.
5. Виміряйте pH буфера за допомогою pH-метра або pH-смужок і за потреби відрегулюйте pH за допомогою невеликої кількості кислоти або лугу.
6. Використовуйте зондовий ультразвуковий пристрій для гомогенізації попередньо змішаного розчину, щоб отримати високооднорідний розчин. Тому обробляйте розчин ультразвуком протягом декількох секунд, поки розчин не буде ретельно перемішаний і будь-які згустки або агрегати не будуть розбиті. Тривалість і потужність ультразвукової обробки можуть бути оптимізовані на основі конкретного буфера для лізису та використовуваного ультразвукового апарату.
7. Після ультразвукового дослідження повторно виміряйте рН буфера та за потреби відрегулюйте.
8. Профільтруйте буфер через фільтр 0,2 мікрона, щоб видалити будь-яке сміття або заповнювачі, які могли утворитися під час ультразвуку.
9. Тепер буфер лізису готовий до використання.

 
Примітка: Точний склад і рН лізисного буфера можуть варіюватися залежно від клітин або тканини, що лізуються, і подальших застосувань. Наведений вище протокол є загальною інструкцією і, можливо, потребуватиме оптимізації для конкретних програм.
 
Ультразвукові гомогенізатори зазвичай використовуються для руйнування клітин і екстракції внутрішньоклітинних молекул. Тому багато застосувань лізису використовують ультразвукову діагностику зондового типу не тільки для приготування буфера лізису, але й для механічного руйнування клітини та екстракції.
Це робить ультразвукові гомогенізатори тканин універсальним інструментом для лабораторій і пояснює широке використання ультразвукових апаратів в мікробіології, біотехнології та науках про життя.

Ультразвукові лабораторні гомогенізатори

Hielscher Ultrasonics виробляє та постачає ультразвукові гомогенізатори та зонди (сонотроди) з різними номінальною потужністю та об'ємами зразків. Це дозволяє нам запропонувати вам найбільш підходящий ультразвуковий руйнівник для підготовки зразків. Ми орієнтуємося на найвищу якість, винятковий комфорт користувача та надійні результати ультразвуку. Всі цифрові ультразвукові апарати оснащені інтелектуальним програмним забезпеченням, програмуванням і попереднім налаштуванням протоколів ультразвуку, дистанційним керуванням браузера, контролем температури, освітленням зразків, а також автоматичним записом даних на вбудовану SD-карту.

Проектування, виробництво та консалтинг – Якість зроблено в Німеччині

Ультразвукові апарати Hielscher добре відомі своїми найвищими стандартами якості та дизайну. Надійність і простота експлуатації дозволяють плавно інтегрувати наші ультразвукові апарати в промислові об'єкти. З важкими умовами та вимогливими умовами легко справляються ультразвукові апарати Hielscher.

Hielscher Ultrasonics є сертифікованою компанією ISO і приділяє особливу увагу високопродуктивним ультразвуковим апаратам, які відрізняються найсучаснішими технологіями та зручністю для використання. Звичайно, ультразвукові апарати Hielscher відповідають вимогам CE та відповідають вимогам UL, CSA та RoHs.

У таблиці нижче наведено огляд наших різноманітних лабораторних ультразвукових апаратів: