Буферні розчини, приготовані за допомогою ультразвукової обробки

Лізисні буфери можна ефективно та швидко приготувати, використовуючи ультразвукові гомогенізатори тканин. Оскільки ультразвукові гомогенізатори є ідеальним інструментом для змішування, розчинення та диспергування, вони забезпечують надійне та зручне для користувача приготування лізисних буферів.

Ультразвукове приготування лізисних буферів

Ультразвукові гомогенізатори тканин є поширеним інструментом для руйнування клітин, лізису та екстракції, тому вони доступні в більшості лабораторій. Другорядним застосуванням ультразвукових гомогенізаторів зондового типу є приготування лізисних буферів.

Лізисний буфер – це розчин, який використовується для розкриття (лізису) клітин та вивільнення їхнього вмісту для подальшого аналізу. Конкретний склад лізисного буфера може варіюватися залежно від типу клітин, що піддаються лізису, та подальшого застосування. Однак типовий лізисний буфер містить такі компоненти, як детергенти, солі та інгібітори протеаз. Буферні солі (наприклад, Tris-HCl) та іонні солі (наприклад, NaCl) зазвичай використовуються для регулювання pH та осмолярності лізату.
Для приготування лізисного буфера компоненти змішують разом у відповідних концентраціях та pH. Суміш зазвичай перемішують або струшують, доки компоненти не розчиняться і розчин не стане гомогенним.
Ультразвукова гомогенізація – це метод, який можна використовувати для покращення приготування якісного лізисного буфера шляхом покращення змішування та розчинення компонентів. У цьому методі на суміш діють ультразвукові хвилі – зазвичай у діапазоні від 20 до 30 kHz – що створює кавітаційні бульбашки, які колапсують і генерують інтенсивну локальну енергію, що призводить до механічного зсуву та змішування компонентів.
Процес ультразвукової гомогенізації може допомогти розбити будь-які грудки або агрегати компонентів і забезпечити рівномірне змішування розчину. Отже, такий покращений лізисний буфер може призвести до більш ефективного руйнування клітин та вищих виходів екстрагованого матеріалу. Крім того, ультразвукова гомогенізація може скоротити час, необхідний для приготування лізисного буфера, порівняно з традиційними методами перемішування або струшування.
Загалом ультразвукова гомогенізація є потужним інструментом для покращення якості та ефективності приготування лізисного буфера.

Протокол ультразвукового приготування лізисного буфера

Це загальний протокол для приготування лізисного буфера за допомогою ультразвукового гомогенізатора зондового типу:
 
Матеріали:

• Детергент(и) на вибір (наприклад, Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Солі на вибір (наприклад, NaCl, KCl)
• Інгібітори протеаз (наприклад, PMSF, апротинін, лейпепптин)
• Ультразвуковий гомогенізатор
• Мішалка
• Деіонізована вода
• pH-метр або pH-смужки

 
 
Покрокові інструкції:

1. Визначте склад лізисного буфера на основі клітин або тканин, які ви будете піддавати лізису, та подальших застосувань, для яких ви будете використовувати лізат. Приготуйте маточні розчини детергентів, солей та інгібіторів протеаз у бажаних концентраціях.
2. Додайте маточні розчини детергентів, солей та інгібіторів протеаз у хімічну склянку або колбу.
3. Додайте деіонізовану воду, щоб довести об’єм до бажаної кількості буфера.
4. Перемішайте компоненти за допомогою мішалки, щоб отримати попередньо змішаний розчин.
5. Виміряйте pH буфера за допомогою pH-метра або pH-смужок і за необхідності скоригуйте pH невеликими кількостями кислоти або основи.
6. Використовуйте ультразвуковий гомогенізатор зондового типу для гомогенізації попередньо змішаного розчину, щоб отримати високо гомогенний розчин. Для цього проводьте ультразвукову обробку розчину протягом кількох секунд, доки розчин не буде ретельно перемішаний, а будь-які грудки або агрегати не будуть розбиті. Тривалість та потужність ультразвукової обробки можна оптимізувати на основі конкретного лізисного буфера та використаного ультразвукового гомогенізатора.
7. Після ультразвукової обробки повторно виміряйте pH буфера та за необхідності скоригуйте його.
8. Профільтруйте буфер через фільтр 0,2 мікрон, щоб видалити будь-які уламки або агрегати, які могли утворитися під час ультразвукової обробки.
9. Лізисний буфер тепер готовий до використання.

 
Примітка: Точний склад та pH лізисного буфера можуть варіюватися залежно від клітин або тканин, що піддаються лізису, та подальших застосувань. Наведений вище протокол є загальним керівництвом і може потребувати оптимізації для конкретних застосувань.
 
Ультразвукові гомогенізатори зазвичай використовуються для руйнування клітин та екстракції внутрішньоклітинних молекул. Тому багато застосувань лізису використовують ультразвукову обробку зондового типу не лише для приготування лізисного буфера, а й для механічного руйнування клітин та екстракції.
Це робить ультразвукові гомогенізатори тканин універсальним інструментом для лабораторій і пояснює широке використання ультразвукових гомогенізаторів у мікробіології, біотехнології та науках про життя.

Ультразвукові лабораторні гомогенізатори

Hielscher Ultrasonics виробляє та постачає ультразвукові гомогенізатори та зонди (сонотроди) з різною потужністю та об’ємами зразків. Це дозволяє нам запропонувати вам найбільш підходящий ультразвуковий руйнівник для підготовки ваших зразків. Ми зосереджуємося на найвищій якості, винятковому комфорті для користувача та надійних результатах ультразвукової обробки. Усі цифрові ультразвукові гомогенізатори мають розумне програмне забезпечення, програмування та попереднє налаштування протоколів ультразвукової обробки, дистанційне керування через браузер, контроль температури, освітлення зразка, а також автоматичний запис даних на вбудовану SD-картку.

Дизайн, виробництво та консалтинг – якість, зроблена в Німеччині

Ультразвукові гомогенізатори Hielscher відомі своєю найвищою якістю та стандартами дизайну. Надійність та простота експлуатації дозволяють легко інтегрувати наші ультразвукові гомогенізатори в промислові об’єкти. Жорсткі умови та складні середовища легко витримуються ультразвуковими гомогенізаторами Hielscher.

Hielscher Ultrasonics – це компанія, сертифікована за ISO, яка приділяє особливу увагу високоефективним ультразвуковим гомогенізаторам, що мають передові технології та зручність у використанні. Звісно, ультразвукові гомогенізатори Hielscher відповідають вимогам CE та вимогам UL, CSA та RoHs.

Нижче наведена таблиця дає огляд наших різних лабораторних ультразвукових гомогенізаторів: