Ультразвуковий Лизис E. Coli

  • Бактерії E. coli є найбільш часто використовуваними бактеріями в мікробіології та біотехнології.
  • Ультразвукові розлади клітин забезпечують надійні та відтворювані результати для лізису E. coli.
  • Інтенсивні, але точно керовані сили кавітації та зсуву призводять до повного зриву та високої врожайності (наприклад, білків, ДНК).

Чому ультразвукове порушення клітин E. coli є кращим методом?

Ультразвукові гомогенізатори або ультразвукові апарати зондового типу пропонують ряд переваг для лізису E. coli, оскільки інтенсивний ультразвук ефективно руйнує клітинні стінки та мембрани. Ультразвукові апарати зондового типу широко використовуються для лізису E. coli з наступних причин:

  • Ефективне руйнування клітинних стінок: Кишкова паличка має напівжорстку клітинну стінку, що складається з пептидоглікану, який може бути важко зламати за допомогою традиційних методів лізису. Ультразвуковий пристрій зондового типу генерує інтенсивні ультразвукові хвилі, які створюють кавітаційні бульбашки в рідині, що оточує клітини. Коли ці бульбашки руйнуються, вони генерують високошвидкісні рідкі струмені та ударні хвилі, які призводять до механічного порушення клітинних стінок, ефективно вивільняючи клітинний вміст, такий як біомолекули.
  • Посилене проникнення: Ультразвукові хвилі, що генеруються зондом / сонотродом, можуть проникати глибоко в зразок, досягаючи більшої кількості клітин E. coli і обробляючи їх рівномірно. Це допомагає гарантувати, що лізис більш рівномірний по всьому зразку, що призводить до більш високої ефективності порушення клітин.
  • Скорочений час обробки: Енергія, що доставляється ультразвуковим апаратом зондового типу, є висококонцентрованою та локалізованою, що призводить до швидкого та ефективного лізису клітин. У порівнянні з іншими методами, такими як биття бісером або ферментативний лізис, ультразвукова обробка може досягти лізису кишкової палички протягом декількох хвилин або навіть секунд. Хоча багато альтернативних методів, таких як заморожування-розморожування, вимагають декількох раундів лікування, ультразвуковий лізис відкриває клітини на одному етапі процесу.
  • Контроль температури: Найсучасніші ультразвукові апарати оснащені датчиками температури та інтелектуальним програмним забезпеченням, що дозволяє встановити максимальну температуру процесу. Ультразвуковий пристрій автоматично призупиняється, коли досягається межа температури, і починає процес ультразвукової обробки, коли досягається встановлена температурна точка. Охолодження зразків на крижаній ванні - це простий метод підтримки низької температури зразка та запобігання деградації зразків, викликаних теплом.
  • Масштабованість: Ультразвукові апарати зондового типу доступні в різних розмірах, від портативних пристроїв до великомасштабних промислових моделей. Це робить їх придатними для обробки невеликих обсягів у лабораторії або масштабування для більших застосувань біообробки, наприклад, виробництва вакцин або біосинтезу молекул.
  • Універсальність: Ультразвукові апарати можуть бути використані для різних застосувань, крім лізису клітин, таких як зсув ДНК, екстракція білка, гомогенізація тканин, дисперсія наночастинок та емульгування. Тому інвестування в ультразвуковий пристрій зондового типу забезпечує універсальність у дослідницьких або промислових умовах.
  • Ультразвукові апарати зондового типу, такі як UP200St, є надійними гомогенізаторами тканин та клітинними дробарками, тому широко використовуються для підготовки зразків у генетиці, наприклад, для лізису E.coli

    Екстракція білка з клітин E.coli ефективно виконується за допомогою ультразвуковий зонд UP200St

    Ультразвуковий пристрій зондового типу пропонує багато переваг для лізису E. coli. Надійний і точний контроль над параметрами ультразвукового процесу дозволяє оптимізувати робочі параметри, такі як потужність, тривалість і обробка зразків для досягнення бажаних результатів.
     

    Запит інформації




    Зверніть увагу на наші Політика конфіденційності.


     

    Цей підручник пояснює, який тип ультразвукового апарату найкраще підходить для ваших завдань підготовки зразків, таких як лізис, порушення клітин, ізоляція білків, фрагментація ДНК та РНК у лабораторіях, аналіз та дослідження. Виберіть ідеальний тип ультразвукового апарату для вашої програми, обсягу зразка, номера зразка та пропускної здатності. Hielscher Ultrasonics має ідеальний ультразвуковий гомогенізатор для вас!

    Як знайти ідеальний ультразвуковий пристрій для порушення клітин та вилучення білка в науці та аналізі

    Мініатюра відео

    Ультразвукова фрагментація ДНК часто використовується як етап підготовки зразків у секвенуванні наступного покоління (NGS)

    Електрофоретичний аналіз геномної ДНК кишкової палички EDL933 підданий ультразвуковому дослідженню 0 - 15 хв. L вказує на сходи ДНК.
    (дослідження та зображення: ©Basselet et al. 2008)

    Порушення клітин за допомогою ультразвукової кавітації

    Ультразвукові гомогенізатори зондового типу працюють приблизно з 20 000 циклів в секунду (при 20 кГц) і викликають кавітацію в рідинах або суспензіях. Акустична кавітація, мікроскопічні ділянки вакуумного тиску і високих температур, які розривають клітини на частини. Хоча температура може досягати декількох тисяч градусів за Цельсієм, обсяги кавітації настільки малі, що не нагрівають процес значно. Ультразвук генерує акустичну кавітацію і сили зсуву перфорують або розривають клітинну мембрану бактеріальних клітин, таких як E.coli. Ультразвукові апарати Hielscher дозволяють точно контролювати параметри процесу, такі як інтенсивність ультразвуку, амплітуда, введення енергії та температура. Таким чином, процес ультразвукового лізису може бути оптимально налаштований відповідно до типу клітин, культури клітин та мети процесу.
     

    Переваги ультразвукового лізису

    • точний контроль лізису (інтенсивність, амплітуда, температура)
    • надійні, відтворювані результати
    • оптимальна адаптація до конкретних зразків
    • контроль температури
    • для дуже малих або дуже великих зразків (μL до літрів)
    • Чисто механічна обробка
    • зручна, безпечна експлуатація
    • лінійне збільшення від лабораторії до виробництва
    Ультразвуковий пристрій VialTweeter дозволяє одночасно приготувати зразок до 10 ампул у тих же умовах процесу. (Натисніть, щоб збільшити!)

    VialTweeter для ультразвукового лізису

    Запит інформації




    Зверніть увагу на наші Політика конфіденційності.


    Ультразвуковий гомогенізатор проти інших методів лізису

    Хоча хімічний і ферментативний лізис може бути проблематичним – оскільки хімічний лізис може змінити білкові структури та вводити проблеми очищення, і ферментативний лізис вимагає тривалого часу інкубації і не відтворюється – ультразвуковий зрив - це складний, швидкий спосіб розриву клітин.
    Ультразвуковий лізис базується лише на механічних силах. Хімічні речовини не додаються, ультразвукова обробка розбиває клітинну стінку силами зсуву. Хімічний лізис може змінити структуру білка і викликати проблеми очищення. Ферментативне порушення вимагає тривалого часу інкубації і не відтворюється. Ультразвукове порушення клітин клітин бактерій E.coli є швидким, простим, надійним і відтворюваним. Ось чому ультразвукові апарати Hielscher використовуються в біологічних та біохімічних лабораторіях по всьому світу для підготовки зразків, попереднього аналізу, діагонстики in vitro та різноманітних аналізів.

    Загальні рекомендації по ультразвуковому лізису

    Захворювання є найпопулярнішою технікою для лізингу дуже малих, середніх і великих кількостей клітинних суспензій – від піко-літрів до 100л / год (за допомогою ультразвукової проточної комірки). Клітини лізували рідким зсувом та кавітацією. ДНК також знімається під час обробки ультразвуком, тому не слід додавати DNase до клітинної суспензії.
     

    Контроль температури під час ультразвукового лізису E.coli
    Ультразвуковий руйнівник клітин UP100H (100W) для порушення клітин та вилучення рослинних сполук.Заздалегідь охолоджуючи зразок та зберігаючи зразок під час ультразвукової обробки на льоді, можна легко запобігти пробковому термічному розкладі зразка.
    В ідеалі зразки повинні зберігатися крижаними під час лізису, але для більшості зразків достатньо, якщо температура не піднімається вище температури культури або джерела тканин. Тому рекомендується, тримати суспензію на льоду і ультразвукову обробку декількома короткими ультразвуковими імпульсами 5-10 сек і паузами 10-30 сек. Під час пауз тепло може розсіюватися, щоб знову встановити низьку температуру. Для великих зразків клітин доступні різні реактори проточних клітин з охолоджувальними сорочками.
    Читайте тут докладні поради та рекомендації для успішного проведення ультразвукового лізису!

    Протоколи ультразвукової підготовки лізатів E. Coli

    Дослідники використовують ультразвукові гомогенізатори Hielscher для порушення клітин E.coli. Нижче ви можете знайти різні перевірені та перевірені протоколи лізису E.coli за допомогою ультразвукових гомогенізаторів Hielscher для різних застосувань, пов'язаних з кишковою паличкою.
     

    Цей відеокліп показує ультразвуковий гомогенізатор Hielscher UP100H, ультразвуковий пристрій, який широко використовується для підготовки зразків у лабораторіях.

    Ультразвуковий гомогенізатор UP100H

    Мініатюра відео

    Ріст клітин, зшивання та підготовка клітинних екстрактів E. coli за допомогою ультразвуку

    Для SeqA та РНК-полімерази ChIP-Chip E. coli MG1655 або MG1655 ΔseqA вирощували при 37 ° С до ОД600 приблизно 0,15 в 50 мл LB (+ 0,2% глюкози) до додавання 27мкл формальдегіду (37%) на 1 мл середовища (кінцева концентрація 1%). Зшивання проводили при повільному перемішуванні (100 об / хв) при кімнатній температурі протягом 20 хв., Після чого гартували 10 мл 2,5 М гліцину (остаточна концентрація 0,5 М). Для експериментів з теплового шоку E. coli MG1655 вирощували в 65 мл середовища LB при температурі 30 ° С до ОД600 приблизно 0,3. Згодом 30 мл культури переводили в попередньо підігріту колбу при температурі 43 °C, а решту зберігали при 30 °C. Зшивання та загартування були такими, як описано вище, за винятком того, що клітини зберігали при температурі 30 або 43 °C протягом 5 хв перед подальшим повільним струшуванням при кімнатній температурі. Клітини збирали методом центрифугування і двічі промивали холодним туберкульозом (рН7,5). Після рессуспензії в 1 мл лізисного буфера (10 мМ Трис (рН 8,0), 20% сахарози, 50 мМ NaCl, 10 мМ ЕДТА, 10 мг/мл лізоциму) та інкубації при 37 ° C протягом 30 хв з подальшим додаванням 4 мл IP-буфера, клітини обробляли ультразвуком на льоду з перервами 12 разів 30 сек і 30 сек за допомогою ультразвукового процесора Hielscher UP400St при 100% потужності. Після центрифугування протягом 10 хв при 9000 г 800 мкл аліцитат супернатанту зберігали при -20°С. (Waldminghaus 2010)
     

    Перевиробництво та очищення ферментів ультразвуковим зондом

    Ультразвуковий пристрій UP100H є лабораторним гомогенізатором, який часто використовується для підготовки зразків пластинок культури клітин.Для надпродукції білків, позначених декагістидином (His10), E. coli BL21(DE3) трансформувався за допомогою конструкцій pET19b. Попередню культуру за ніч збирали шляхом центрифугування, а 1% використовували для інокуляції культури експресії. Клітини, що несуть pET19mgtB, вирощували при 22 ° C до оптичної щільності при 600 нм (OD600) 0,7. Культуру перевели до 17°C та індукували 100 мкМ IPTG. Через 16 годин культуру збирали методом центрифугування при температурі 7 500 × г при 4°C. Клітини були ресуспендовані в 50 мМ фосфатно-буферного фізіологічного розчину (PBS) з 0,3 M NaCl при рН 7,4 і порушені ультразвуком за допомогою сонотрода мікронаконечника S2 на ультразвуковому апараті Hielscher UP200St при циклі 0,5 і амплітуді 75%.
    Перевиробництво GtfC, позначеного декахистидином, індукували при 37 ° С при ОД600 0,6 з 100 мкМ IPTG. Клітини потім інкубували протягом 4 годин, збирали і лізисували, як зазначено вище, для MgtB.
    Сирі клітинні екстракти центрифугували при температурі 15 000 × г і 4 ° C для осадження клітинного сміття. Уточнені виписки завантажувалися на колонки HisTrap FF Crude об'ємом 1 мл за допомогою системи ÄKTAprime Plus. Ферменти були очищені відповідно до протоколу виробника для градієнтної елюції білків, позначених His. Розбавлені білкові розчини діалізували двічі проти 1000 об'ємів 50 мМ PBS, рН 7,4, з 0,3 М NaCl при 4 °C. Очищення було проаналізовано 12% SDS-PAGE. Концентрацію білка визначали методом Бредфорда з використанням Роті-Кванта. (Rabausch et al. 2013)
     

    Ультразвукова екстракція білка з бактерій E. coli
    Зацікавлений протеїн (у цьому випадку, MTV1 з Arabidopsis thaliana) зливається з емблемою GST і виражається в клітинах BL21 Escherichia coli (E. coli).

    1. Візьміть по одній гранулі GST-MTV1 та GST (що відповідає бактеріальній культурі 50 мл) і підвісьте кожну в 2,5 мл буфера холодного віджиму льоду.
    2. Використовуйте ультразвуковий пристрій UP100H (оснащений мікротип-сонотродом MS3 для невеликих обсягів приблизно 2-5 мл), щоб порушити бактеріальні клітини, поки вони не будуть лізовані, про що свідчить знижена непрозорість і підвищена в'язкість. Це потрібно проводити на льоду, і рекомендується ультразвукову обробку через проміжки часу (наприклад, ультразвукова обробка 10 секунд, а потім пауза 10 секунд на льоду тощо). Слід бути обережним, щоб не ультразвукову обробку з занадто високою інтенсивністю. Якщо виявлено піноутворення або утворення білого осаду, інтенсивність потрібно знизити.
    3. Перенесіть розчин лізованих бактерій у пробірки для мікроцентрифуги об'ємом 1,5 мл та центрифугу при 4 °C, 16 000 x г протягом 20 хв.

     

    Ультразвукові зонди використовують сили акустичної кавітації, щоб порушити клітину і витягти молекули і ДНК з E.coli.

    Ультразвукові апарати зондового типу, такі як UP400St використовувати принцип роботи акустичної кавітації для ефективного лізису E.coli.

    Експресійний аналіз та очищення рекомбінантного білка за допомогою ультразвукової обробки

    Гранула E. coli була ультразвуковою обробкою за допомогою ультразвукового апарату Hielscher UP100H. Для цього клітинні гранули ресуспендували в охолодженому лізисному буфері (50 мМ Tris-HCl pH = 7,5, 100 мМ NaCl, 5 мМ DTT, 1 мМ PMSF) і охолоджували на льоду протягом 10 хв. Потім клітинну суспензію обробляли ультразвуком з 10 короткими сплесками по 10 с, а потім інтервалом 30 с для охолодження. Нарешті, клітинне сміття видалялося ультрацентрифугуванням при 4 ° C протягом 15 хв при 14000 об / хв. Для підтвердження експресії rPR супернатант був запущений на 12% поліакриламідному гелі та проаналізований SDS-PAGE та вестерн-блотінгом. Очищення rPR проводилося за допомогою смоли Ni2+-NTA (Invitrogen, США) згідно з інструкцією виробника. На цьому етапі використовувався нативний метод очищення. Чистоту очищеного білка оцінювали за допомогою електрофорезу на 12% поліакриламідному гелі і подальшого фарбування Coomassie blue. Очищену концентрацію білка вимірювали за допомогою набору для аналізу білка Micro BCA (PIERCE, США). (Azarnezhad et al. 2016)
     

    На цьому відео показаний ультразвуковий капхорн потужністю 200 Вт для диспергування, гомогенізації, вилучення або дегазації лабораторних зразків.

    Ультразвуковий купхорн (200 Вт)

    Мініатюра відео

    Ультразвукові гомогенізатори для лізису кишкової палички

    Hielscher Ultrasonics розробляє, виробляє та постачає високопродуктивні ультразвукові гомогенізатори для надійного та ефективного лізису бактерій E. coli та інших типів клітин, тканин та клітинних культур.
    Широкий портфель ультразвукових зондів, а також непрямих ультразвукових систем дозволяє нам запропонувати вам ідеальний гомогенізатор ультразвукової тканини для порушення та вилучення клітин.

    Дизайн, виробництво та консалтинг – Якість виробництва Німеччини

    Ультразвукові апарати Hielscher можна дистанційно керувати за допомогою управління браузером. Параметри ультразвукової обробки можна контролювати і підлаштовувати саме під вимоги процесу.Ультразвукові апарати Hielscher добре відомі своїми найвищими стандартами якості та дизайну. Розумне програмне забезпечення, інтуїтивно зрозуміле меню, програмовані налаштування та автоматичний протокол даних - це лише деякі особливості ультразвукових апаратів Hielscher. Надійність та простота експлуатації дозволяють плавно інтегрувати наші ультразвукові апарати в дослідницькі та біотехнологічні установи. Навіть важкі умови та вимогливі середовища легко обробляються ультразвуковими апаратами Hielscher.

    Hielscher Ultrasonics є сертифікованою ISO компанією і робить особливий акцент на високопродуктивних ультразвукових апаратах, що відрізняються найсучаснішими технологіями та зручністю для користувачів. Звичайно, ультразвукові апарати Hielscher сумісні з CE і відповідають вимогам UL, CSA та RoHs.

    У таблиці нижче наведено приблизну потужність обробки наших ультразвукових пристроїв:

    пакетний Обсяг швидкість потоку Рекомендовані пристрої
    мульти-колодязні / мікротитерні пластини застосовується (УІП400МТП)
    CupHorn для флаконів або мензурки застосовується Ультразвукова чаша
    Ультразвуковий мікропотоковий реактор застосовується GDmini2
    до 10 флаконів об'ємом від 0,5 до 1,5 мл застосовується VialTweeter
    0.5 до 1.5мл застосовується VialTweeter
    Від 1 до 500мл Від 10 до 200мл / хв UP100H
    Від 10 до 2000мл Від 20 до 400мл / хв UP200Ht, UP400St
    0.1 до 20 л 0.2 до 4л / хв UIP2000hdT
    Від 10 до 100 л Від 2 до 10 л / хв UIP4000
    застосовується Від 10 до 100 л / хв UIP16000
    застосовується більший кластер UIP16000

    Зв'яжіться з нами! / Запитати нас!

    Запитайте більше інформації

    Будь ласка, використовуйте форму нижче, щоб отримати додаткову інформацію про гомогенізатори ультразвукових тканин та клітинні дробарки, програми лізису та ціни. Ми будемо раді обговорити з вами ваш процес і запропонувати вам ультразвуковий гомогенізатор, що відповідає вашим вимогам!









    Будь ласка, зверніть увагу на наші Політика конфіденційності.


    На відео показана ультразвукова система підготовки зразків UIP400MTP, яка дозволяє забезпечити надійну підготовку зразків будь-яких стандартних багатопрофільної пластини з використанням ультразвуку високої інтенсивності. Типові застосування UIP400MTP включають клітинний лізик, ДНК, РНК та зсув хроматину, а також екстракцію білка.

    Ультраакукатор UIP400MTP для багато свердловинної ультразвукової обробки плит

    Мініатюра відео

    Додаткові протоколи для ультразвукового лізису E. coli

    Алліцин-модифіковані білки в кишковій паличці за допомогою ультразвукового VialTweeter

    VialTweeter на ультразвуковому процесорі UP200STВизначення вмісту сульфгідрилу методом 5,5'-Дітіобіс (2-нітробензойної кислоти) (DTNB)
    Культура E. coli MG1655 протягом ночі була використана для інокуляції мінімального середовища MOPS (1:100). Культура вирощувалася аеробно до досягнення A600 0,4. Культуру розділили на три культури по 15 мл для лікування стресу. Необроблена культура служила негативним контролем. 0,79 мМ алліцину (128 мкг мл-1) або 1 мМ діаміду було додано до однієї з двох інших культур кожна. Культури інкубували протягом 15 хв. Кожну культуру збирали методом центрифугування по 5 мл (8 525 × г, 4 °С, 10 хв). Камери двічі промивали 1 мл ПБС (137 мМ NaCl, 2,7 мМ KCl, 10 мМ Na2HPO4, 2 мМ KH2PO4, рН 7,4, перед застосуванням зберігали анаеробно) і центрифугували (13 000 × г, 4 °C, 10 хв). Клітини були ресуспендовані в лізисному буфері (PBS з 6 мМ гуанідинію HCl, рН 7,4) до порушення при 4 ° C ультразвуком (VialTweeter ультразвуковий апарат, Hielscher GmbH, Німеччина) (3 × 1 хв). Клітинне сміття гранулювалося центрифугуванням (13 000 × г, 4 °C, 15 хв). Супернатант перевели в 3,5-мл QS-макрокювету (10 мм) з магнітним перемішуванням і змішали з 1 мл лізисного буфера. Вимирання зразків контролювалося при 412 нм за допомогою спектрофотометра Jasco V-650, оснащеного тримачем комірки з контрольованою температурою PSC-718 при кімнатній температурі. Було додано 100 мкл розчину 3 мМ дітіобісу (2-нітробензойної кислоти). За вимиранням стежили до тих пір, поки воно не досягне насичення. Розрахунок концентрації тіолу проводився з використанням коефіцієнта згасання ε412 = 13 700 м-1 см-1 для тіо-2-нітробензойної кислоти (ТНБ). Клітинна концентрація тіолу розраховувалася на основі вмісту клітин E. coli 6,7 × 10-15 літра і щільність клітин А600 = 0,5 (еквівалентно 1 × 108 клітини мл-1 культура) (Müller et al., 2016)
     

    Визначення глутатіону in vivo за допомогою ультразвукової клітинної дробарки

    E.coli MG1655 вирощувався в мінімальному середовищі MOPS в загальному обсязі 200 мл до досягнення A600 0,5. Культуру розщепили на культури по 50 мл для лікування стресу. Після 15 хв інкубації 0,79 мМ алліцину, 1 мМ діаміду або диметилсульфоксиду (контроль) клітини збирали при 4000 г при 4 °C протягом 10 хв. Комірки двічі промивали буфером КПЕ перед повторною суспензією гранул у 700мкл буфера КПЕ. Для депротеїнізації 300л 10% (мас. / об) сульфосаліцилової кислоти були додані до порушення клітин ультразвуком (3 х 1 хв; VialTweeter ультразвуковий пристрій) Супернатанти збирали після центрифугування (30 хв, 13000 г, 4 ° С). Концентрації сульфосаліцилової кислоти були знижені до 1% шляхом додавання 3 об'ємів буферу KPE. Вимірювання загального глютатіону та GSSG проводили, як описано вище. Концентрації клітинного глутатіону розраховували, виходячи з обсягу клітин E. coli у 6,7×10-15 літра і щільність клітин А600 0,5 (еквівалентно 1×108 клітини мл-1 культура) Концентрації GSH були розраховані шляхом віднімання 2 [GSSG] від загального глютатіона. (Müller et al., 2016)

    Експресія людського mAspAT в кишковій паличці за допомогою ультразвукового гомогенізатора

    Ультразвукова розрядник UP400St (400 Вт) для екстракції внутрішньоклітинної речовини (наприклад, білків, органел, ДНК, РНК та ін.)Єдина колонія E. coli BL21 (DE3) містить експресійний вектор в 30 мл середовища Лурія-Бертані (LB), що містить 100мкг / мл ампіциліну, а потім культивують при 37 ° С, поки оптична густина (ОД600) досягла 0,6. Клітини збирали шляхом центрифугування при 4000 × г протягом 10 хв та ресуспендували у 3 л свіжого середовища LB, що містить 100 мкг / мл ампіциліну.
    Згодом експресію білка індукували за допомогою 1 мМ ізопропілового β-ᴅ-1-тіогалактопіранозиду (IPTG) протягом 20 год при 16ºC. Клітини збирали центрифугуванням при 8000 × г протягом 15 хв і промивали буфером А (20 мМ NaH2PO4, 0,5 М NaCl, рН 7,4). Апроксимовані клітини 45g (сира вага) були отримані з культури об'ємом 3 л. Після центрифугування клітинні гранули були повторно підвішені в 40 мл (для 1 л культури) буфер екстракції льоду А та лізовані ультразвуком при крижаній температурі за допомогою ультразвукової клітинної дробарки Hielscher UP400St. Лізис клітин центрифугували при 12 000 об / хв протягом 15 хв для розділення розчинних (супернатантів) і осаджених (гранул) фракцій. (Цзян та ін., 2015)
     



    Факти варті знати

    Е. coli

    Escherichia coli (E. coli) - це грамнегативна, факультативно анаеробна, стовбурна форма, бактерія кишкової палички роду Escherichia, яка зазвичай зустрічається в нижній кишці теплокровних організмів (ендотерми). Є велика кількість штамів E. coli (або підтипів) з різними характеристиками. Більшість штамів E. coli є нешкідливими для людини, наприклад, штамів B та K-12, які широко використовуються для досліджень у лабораторіях. Однак деякі штами є шкідливими і можуть викликати серйозні захворювання.
    E. coli відіграє важливу роль у сучасній біологічній інженерії та промисловій мікробіології, оскільки бактерії легко маніпулювати. Загальні лабораторні програми, які часто включають вживання E. coli, наприклад, для створення рекомбінантної дезоксирибонуклеїнової кислоти (ДНК) або як модельного організму.
    E. coli є дуже універсальним господарством для виробництва гетерологічних білків, і для виготовлення рекомбінантних білків у E.coli доступні різноманітні системи експресії білка. Використовуючи плазміди, що дозволяють експресію білка високого рівня, гени можуть бути введені в бактерії, що дозволяє виробляти такі білки у великих кількостях в процесах промислового бродіння.
    E.coli використовуються як клітинні фабрики для виробництва інсуліну. Подальше застосування включає використання модифікованих клітин E. coli для розробки та виробництва вакцин та іммобілізованих ферментів, для виробництва біопалива, а також для біоремедіації.
    Штам К-12 є мутантною формою E. coli, яка надмірно експресує фермент лужної фосфатази (ALP). Ця мутація відбувається через дефект гена, який постійно кодує фермент. Якщо ген продукує продукт без будь-якого гальмування, це відоме як конститутивна активність. Ця специфічна мутантна форма використовується для виділення і очищення ферменту ALP.
    Бактерії E. coli також широко використовуються як клітинні фабрики. Інженерні мікроби (наприклад, бактерії) і рослинні клітини можуть бути використані в якості так званих клітинних заводів. Ці генетично модифіковані клітини виробляють молекули, хімічні речовини, полімери, білки та інші речовини, які використовуються, наприклад, у фармацевтичній, харчовій та хімічній промисловості. Для того, щоб вивільнити молекули, що утворюються в інтер'єрі таких біоінженерних клітин, ультразвуковий лізис є поширеним методом порушення клітинних стінок і передачі цільових речовин в навколишню рідину. Дізнайтеся більше про лізи біоінженерних клітин!

    Ультразвукова ДНК Shearing

    Ультразвукові сили зсуву є широко використовуваним методом для вивільнення молекул, органел і білків з внутрішньої частини клітини, а також для розбиття ланцюгів ДНК на шматки. Акустична кавітація руйнує клітинні стінки і мембрани, витягуючи ДНК з клітин і генеруючи фрагменти близько 600 – Довжина 800 б.п., що ідеально підходить для аналізу.
    Натисніть тут, щоб дізнатись більше про ультразвукові гомогенізатори для фрагментації ДНК!

    Література/довідники


    Високопродуктивний ультразвук! Асортимент продукції Hielscher охоплює весь спектр від компактного лабораторного ультраакулятора над лавками до повнопромислових ультразвукових систем.

    Hielscher Ультразвук виробляє високоемоціивні ультразвукові гомогенізатори з Лабораторія до промислових розмірів.


    Ми будемо раді обговорити ваш процес.

    Давайте зв'яжемося.