Maymun Çiçeği Virüsünde Ultrasonik Uygulamalar
Ultrasonikasyon, maymun çiçeği virüsünün (MPXV) analitik örneklerden, virüs DNA parçalanması için ve maymun çiçeği aşısı üretiminde izolasyonu için önemli bir işleme yöntemidir. Teşhis ve analiz öncesi numune hazırlama için (PCR, ELISA vb.) maymun çiçeği virüsünü hücre içinden salmak ve/veya DNA'yı parçalamak için hücreleri parçalamak için ultrasonikasyon kullanılır. Aşı üretiminde uygulamalar, virüs partikülü / DNA hazırlama, ilaç taşıyıcılarında kapsülleme ve aşılamanın formüle edilmesine kadar uzanmaktadır.
Aşağıda ultrasonik maymun çiçeği virüsü örnek hazırlama ve ultrasonik destekli MPXV aşı üretimi ile ilgili detaylı bilgileri bulabilirsiniz.
Bu sayfada neler bulacaksınız:
- Maymun Çiçeği Virüsü Ekstraksiyonu için Ultrasonik Lizis
- Maymun Çiçeği Virüsü DNA'sının Ultrasonik Parçalanması
- MPXV Aşı Üretiminde Ultrasonik Uygulamalar
Sürekli akış çalışması için 2x 1kW ultrasonicators bu sistem bir aşı üretim tesisinde kuruludur.
Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) Öncesi Ultrasonik Lizis ve DNA Parçalanması
Bir maymun çiçeği virüsü enfeksiyonu, benzersiz viral DNA dizilerinin tespiti için gerçek zamanlı veya geleneksel polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) kullanılarak nükleik asit amplifikasyon testi (NAAT) ile tespit edilir. Örnek (örneğin nazofaringeal swap veya deri biyopsilerinden) hücrelerde virüsü içerir.
Analiz için virüsün hücrelerden salınması ve viral DNA'nın PCR için parçalanması gerekir.
Ultrasonik Lizis:
Ultrasonik hücre bozulması / lizisi, virüsleri hücre örneklerinden izole etmek için güvenilir ve verimli bir yöntemdir ve bu nedenle lizozim, proteinaz K ve alternatif olarak hücre lizizini ve DNA'nın salınmasını sağlamak için kullanılan farklı deterjanlar gibi kimyasal ajanlara göre tercih edilen bir tekniktir.
Bununla birlikte, bu tür kimyasal reaktiflerin kullanımı, PCR reaksiyonunun inhibisyonunu önlemek için PCR analizinden önce birkaç adımda zaman alıcı numune hazırlığı gerektirir. PCR inhibitörleri amplifikasyonun etkinliğini etkilediğinden, çıkarılmayan inhibitör miktarındaki küçük değişiklikler PCR ürün amplifikasyonunda büyük değişikliklere yol açabilir (Diaco, 1995).
Lizis için ultrasonikasyonun avantajı, hücresel yapıların tamamen bozulması ve reaktiflerin parçalanmasına ve zaman alıcı numune hazırlanmasına ihtiyaç duymadan DNA'nın serbest bırakılmasının arzu edilmesidir. (bkz. Fykse ve diğerleri, 2003)
Ultrasonik DNA Parçalanması:
Ultrasonik DNA parçalanması, uzunlukta ayarlanabilir DNA parçaları (baz çiftleri, bp) ürettiği için basit ve güvenilirdir. Ultrason kullanılarak DNA, hedeflenen DNA uzunluğuna etkili bir şekilde parçalanabilir. Ultrasonik parametreler üzerinde hassas kontrol ve gelişmiş soğutma seçenekleri DNA bozulmasını önler.
Ultrasonik DNA parçalanması hakkında daha fazla bilgi edinin!
Maymun Çiçeği Virüsü Aşısında Ultrasonik Uygulamalar
Maymun çiçeği virüsüne karşı kullanılan aşılar şu anda canlı virüs aşılarıdır. Yeni geliştirilen aşılar, DNA bazlı gibi diğer platformları kullanabilir Şu anda zayıflatılmış, replikasyon yapmayan bir ortopoks virüsü olan modifiye edilmiş bir Vaccinia Ankara viurs içerir. Ayrıca Tris (tris-aminometan) ve sodyum klorür içerir. Aşı ayrıca, aşı virüsünü, benzonaz ve gentamisin ve siprofloksasin gibi antibiyotik bileşiklerini büyütmek için kullanılan Tavuk Embriyo Fibroblast hücrelerinden az miktarda DNA ve protein içerebilir.
Ultrasonik homojenizasyon, canlı zayıflatılmış virüs aşıları, DNA aşıları, çok değerlikli DNA kokteylleri, mRNA aşıları, rekombinant protein aşıları, virüs benzeri parçacık aşıları vb. üretiminde kullanılır.
- Virüs partiküllerinin ve ajanlarının dağılımı
- emülsifikasyon
- Virüslerin inaktivasyonu
- ilaç taşıyıcı formülasyonu (NLC, SLN)
- kapsülleme
- Ajanların Çözülmesi
- Adjuvanların hazırlanması
- Gaz Giderme / Hava Giderme
Gelişmiş aşı üretimi için ultrasonik uygulamalar hakkında daha derinlemesine bilgi bulabilirsiniz!
Maymun Çiçeği Virüsünün Ultrasonik İzolasyonu için Protokol
Stittelaar'ın (2005) araştırma ekibi, maymun çiçeği virüsünü büyüme konakçı hücre kültüründen ve enfekte primatlardan boğaz takasları yoluyla elde edilen hücrelerden serbest bırakmak için ultrasonik lizis kullandı.
Maymun Çiçeği Aşısı Hazırlığı:
Maymun çiçeği virüsleri, spesifik patojen içermeyen tavuk embriyosu fibroblast hücreleri üzerinde büyütüldü. 1 ila 2 gün boyunca inkübasyonun ardından, virüs hücresi süspansiyonu bir tur dondurarak çözdürme ile hasat edildi ve daha sonra santrifüjleme ile konsantre edildi. Pelet yeniden askıya alındı ve birkaç tur ultrasonik homojenizasyona tabi tutuldu.
Aşılanmış Makaklardan Maymun Çiçeği Virüsü İzolasyonu:
Numuneler üç kez dondurularak çözüldü ve ultrasonik bir CupHorn'da sonikleştirildi. Altı oyuklu plakalarda Vero hücre tek katmanlarını aşılamak için% 1 fetal sığır serumu ile takviye edilmiş taşıma ortamında iki seyreltme (1: 10 ve 1: 100) kullanıldı. 37 ° C'de 1 saat inkübasyondan sonra, inokül çıkarıldı ve% 1 fetal sığır serumu ile takviye edilmiş kültür ortamı ile değiştirildi. Tek tabakalar 37 ° C'de 5 gün boyunca kültürlendi ve kristal viyole bir çözelti ile boyandı.
(bkz. Stittelaar ve diğerleri, 2005)
Virüs Analizi ve Aşı Üretimi için Ultrasonikatörler
Hielscher Ultrasonik geniş ürün portföyü, endüstriyel aşı üretiminin yanı sıra araştırma ve analitik laboratuvarlar için ideal ultrasonicator'ı sunar.
Hielscher Ultrasonics, araştırma ve analitik laboratuvarlarda kullanım için yüksek performanslı ultrasonicators ve sono-biyoreaktörlerin tasarımı, üretimi ve dağıtımı ile endüstriyel aşı üretiminde uygulama için uzmanlaşmıştır (örn. aşılar, Apı 'leri).
Sonikasyon açık kaplara, kapalı sürekli karıştırılan reaktörlere ve sürekli akışlı reaktörlere uygulanabilir. Ultrasonik sistemlerin sıvı ortam ile temas eden tüm parçaları paslanmaz çelik, titanyum veya camdan yapılır. Otoklavlanabilir parçalar ve sıhhi tesisat armatürleri, ilaç sınıfı koşullar.
Otomatik Veri Kaydı: Akıllı yazılım, sonikasyon işleminin parametrelerini otomatik olarak entegre SD hafıza kartına kaydeder. Tüm proses parametrelerinin hassas kontrolü, Tekrarlanabilirlik, Üretimin standardizasyonuve farmasötik ürün güvenlik standartlarının yerine getirilmesini kolaylaştırır.
Hielscher Ultrasonics’ Ultrasonik işlemciler son derece güvenilirdir ve hassas bir şekilde kontrol edilebilir. Tüm endüstriyel ultrasonicators, düşük genliklerden çok yüksek genliklere kadar tam aralığı sunmak için ayarlanabilir. Hielscher'ın ultrasonik sistemlerinin sağlamlığı, ağır hizmet koşullarında ve zorlu ortamlarda 7/24 çalışmaya izin verir.
Aşağıdaki tablo size ultrasonicators'ımızın yaklaşık işleme kapasitesinin bir göstergesini verir:
| Numune Hacmi | Akış Oranı | Önerilen Cihaz |
|---|---|---|
| Çok kuyulu / mikrotitre plakaları | Yok | UIP400MTP |
| 1 - 500mL | 10 - 200mL/min | UP100H |
| 10 - 2000mL | 20 - 400mL/min | UP200Ht, UP400St |
| 0,1 - 20L | 0,2 - 4L/min | UIP2000hdT |
| 10 - 100L | 2 - 10L/min | UIP4000hdT |
| Yok | 10 - 100L/min | UIP16000 |
| Yok | daha büyük | grubu UIP16000 |
Bizimle İletişime Geçin! / Bize Sor!
Ultrasonik DNA Kesme
CC-BY-SA.03 altında Jkwchui'den uyarlanmıştır
Literatür / Referanslar
- Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
- Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
- J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
- Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
- Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.
Bilmeye Değer Gerçekler
maymun çiçeği virüsü
Maymun çiçeği (MPV, MPXV veya hMPXV), viral bir zoonotik hastalığa neden olan çift sarmallı bir DNA virüsü türüdür. Bu hastalık maymun çiçeği enfeksiyonu olarak bilinir ve insanlarda ve hayvanlarda ortaya çıkabilir. Poxviridae familyasındaki Orthopoxvirus cinsine aittir. Maymun çiçeği virüsü, variola (VARV), sığır çiçeği (CPX) ve vaccinia (VACV) virüsleri ile birlikte insan ortopoks virüslerinden biridir. Ortopoksvirüsler, yaklaşık 200.000 bp'lik çift sarmallı bir DNA genomu içeren büyük tuğla şeklindeki virüs parçacıkları ile karakterize edilir.
ELISA testi
ELISA, Enzime Bağlı İmmünoSorbent Testi anlamına gelir ve immünolojik testlerin altın standardı olarak kabul edilen etiketli bir immünolojik testtir. ELISA, antikorlar, antijenler, proteinler, glikoproteinler ve hormonlar dahil olmak üzere molekülleri tespit etmek ve ölçmek için kullanılan, yüksek tanısal duyarlılığı ile değer verilen immünolojik bir testtir. ELISA'nın prensibi bir antijen-antikor etkileşimine dayanmaktadır. Bu antijen-antikor etkileşimi ile spesifik antikorlar hedef antijene bağlanır. Sadece etkileşim gerçekleştiğinde, substrat enzime bağlanabilir ve daha sonra bir substrat dönüşümü gözlemlenebilir, bu da pozitif bir sonuç elde edildiği anlamına gelir.
Hielscher Ultrasonics, yüksek performanslı ultrasonik homojenizatörler üretmektedir. laboratuvar Hedef endüstriyel boyut.