MonkeyPox Virüsünde Ultrasonik Uygulamalar
Ultrasonikasyon, maymun çiçeği virüsünün (MPXV) analitik örneklerden, virüs DNA parçalanmasından ve maymun çiçeği aşısı üretiminden izole edilmesi için önemli bir işleme yöntemidir. Teşhis ve analiz öncesi numune hazırlama için (PCR, ELISA vb.) ultrasonikasyon hücre iç ve / veya DNA parçalamak için maymun çiçeği virüsü serbest bırakmak için hücreleri lize etmek için kullanılır. Aşı üretiminde, uygulamalar virüs partikülü / DNA hazırlama, ilaç taşıyıcılarında kapsülleme ve inokülanın formüle edilmesinden oluşmaktadır.
Aşağıda ultrasonik maymun çiçeği virüsü örnek hazırlama ve ultrasonik destekli MPXV aşı üretimi hakkında ayrıntılı bilgi bulabilirsiniz.
Bu sayfada neler bulacaksınız:
- Monkeypox Virüs Ekstraksiyonu için Ultrasonik Lizis
- Monkeypox Virüs DNA Ultrasonik Parçalanma
- MPXV Aşı Üretiminde Ultrasonik Uygulamalar
Sürekli akış çalışması için 2x 1kW ultrasonicators bu sistem bir aşı üretim tesisinde kuruludur.
Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) Öncesi Ultrasonik Lizis ve DNA Parçalanması
Bir maymun çiçeği virüsü enfeksiyonu, viral DNA'nın benzersiz dizilerinin tespiti için gerçek zamanlı veya geleneksel polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) kullanılarak nükleik asit amplifikasyon testi (NAAT) ile tespit edilir. Numune (örneğin nazofaringeal takas veya cilt biyopsilerinden) virüsü hücrelerde içerir.
Analiz için, virüs hücrelerden salınmalı ve viral DNA PCR için parçalanmalıdır.
Ultrasonik Lizis:
Ultrasonik hücre bozulması / lizisi, virüsleri hücre örneklerinden izole etmek için güvenilir ve etkili bir yöntemdir ve bu nedenle lizozim, proteinaz K ve alternatif olarak hücre lizisini ve DNA'nın salınımını sağlamak için kullanılan farklı deterjanlar gibi kimyasal ajanlar üzerinde tercih edilen bir tekniktir.
Bununla birlikte, bu tür kimyasal reaktiflerin kullanımı, PCR reaksiyonunun inhibisyonunu önlemek için PCR analizinden önce birkaç adımda zaman alıcı numune hazırlama gerektirir. PCR inhibitörleri amplifikasyonun etkinliğini etkilediğinden, çıkarılmayan inhibitör miktarının küçük varyasyonları PCR ürün amplifikasyonunda büyük değişikliklere yol açabilir (Diaco, 1995).
Lizis için ultrasonikasyonun avantajı, hücresel yapıların tamamen bozulması ve lize reaktiflerine ve zaman alıcı numune hazırlamaya gerek kalmadan DNA'nın salınmasının arzu edilmesidir. (Bkz. Fykse ve ark., 2003)
Ultrasonik DNA Parçalanması:
Ultrasonik DNA parçalanması, uzunlukta ayarlanabilir DNA fragmanları (baz çiftleri, bp) ürettiği için basit ve güvenilirdir. Ultrason kullanılarak, DNA hedeflenen DNA uzunluğuna etkili bir şekilde parçalanabilir. Ultrasonik parametreler üzerinde hassas kontrol ve sofistike soğutma seçenekleri DNA bozulmasını önler.
Ultrasonik DNA parçalanması hakkında daha fazla bilgi edinin!
Monkeypox Virüs Aşısında Ultrasonik Uygulamalar
Maymun çiçeği virüsüne karşı kullanılan aşılar şu anda canlı virüs aşılarıdır. Yeni geliştirilen aşılar, DNA tabanlı gibi diğer platformları kullanabilir Şu anda zayıflatılmış, çoğalmayan bir ortopoks virüsü olan modifiye edilmiş bir Vaccinia Ankara viurs içeriyor. Ayrıca Tris (tris-aminometan) ve sodyum klorür içerir. Aşı ayrıca, aşı virüsünü, benzonaz ve gentamisin ve siprofloksasin gibi antibiyotik bileşiklerini büyütmek için kullanılan Tavuk Embriyosu Fibroblast hücrelerinden az miktarda DNA ve protein içerebilir.
Ultrasonik homojenizasyon, canlı-zayıflatılmış virüs aşıları, DNA aşıları, çok değerli DNA kokteylleri, mRNA aşıları, rekombinant protein aşıları, virüs benzeri parçacık aşıları, vb. Üretiminde kullanılır.
- virüs parçacıklarının ve ajanlarının dağılımı
- emülsifikasyon
- virüslerin inaktivasyonu
- ilaç taşıyıcı formülasyonu (NLC, SLN)
- kapsülleme
- ajanların çözülmesi
- adjuvanların hazırlanması
- Gaz giderme / Havalandırma
Gelişmiş aşı üretimi için ultrasonik uygulamalar hakkında daha derinlemesine bilgi bulabilirsiniz!
Monkeypox Virüsünün Ultrasonik İzolasyonu için Protokol
Stittelaar'ın (2005) araştırma ekibi, maymun çiçeği virüsünü büyüme konakçısı hücre kültüründen ve enfekte olmuş primatlardan boğaz takasları yoluyla elde edilen hücrelerden serbest bırakmak için ultrasonik lizis kullandı.
Maymun Çiçeği Aşısı Hazırlama:
Maymun çiçeği virüsleri, spesifik patojen içermeyen tavuk embriyosu fibroblast hücrelerinde yetiştirildi. 1 ila 2 gün boyunca inkübasyonun ardından, virüs hücresi süspansiyonu bir tur donma-çözülme ile hasat edildi ve daha sonra santrifüjleme ile konsantre edildi. Pelet yeniden askıya alındı ve birkaç tur ultrasonik homojenizasyona tabi tutuldu.
Aşılanmış Makaklardan Maymun Çiçeği Virüsü İzolasyonu:
Örnekler üç kez dondurularak çözüldü ve ultrasonik bir CupHorn'da sonikleştirildi. Vero hücre monokatmanlarını altı kuyucuklu plakalarda aşılamak için% 1 fetal sığır serumu ile desteklenmiş taşıma ortamında iki seyreltme (1:10 ve 1:100) kullanıldı. 37 ° C'de 1 saatlik inkübasyondan sonra, inoküla çıkarıldı ve% 1 fetal sığır serumu ile desteklenmiş kültür ortamı ile değiştirildi. Tek katmanlar 37 ° C'de 5 gün boyunca kültürlendi ve kristal mor bir çözelti ile boyandı.
(Bkz. Stittelaar ve ark., 2005)
Virüs Analizi ve Aşı Üretimi için Ultrasonikatörler
Hielscher Ultrasonics geniş ürün portföyü araştırma ve analitik laboratuvarlar yanı sıra endüstriyel aşı üretimi için ideal ultrasonicator sunuyor.
Hielscher Ultrasonics, araştırma ve analitik laboratuvarlarda ve endüstriyel aşı üretiminde uygulama için (örn. aşılar, Apı 'leri).
Sonikasyon açık kaplara, kapalı sürekli karıştırılmış reaktörlere ve sürekli akış reaktörlerine uygulanabilir. Ultrasonik sistemlerin sıvı ortamla temas eden tüm parçaları paslanmaz çelik, titanyum veya camdan yapılmıştır. Otoklavlanabilir parçalar ve sıhhi tesisat bağlantı parçaları, ilaç sınıfı koşullar.
Otomatik Veri Kaydı: Akıllı yazılım otomatik olarak entegre SD bellek kartında sonication sürecinin parametrelerini kaydeder. Tüm proses parametrelerinin hassas kontrolü, Tekrarlanabilirlik, üretim standardizasyonve farmasötik ürün güvenliği standartlarının yerine getirilmesini kolaylaştırır.
Hielscher Ultrasonics’ ultrasonik işlemciler son derece güvenilir ve hassas bir şekilde kontrol edilebilir. Tüm endüstriyel ultrasonicators düşükten çok yüksek genliklere kadar tam aralığı teslim etmek için ayarlanabilir. Hielscher'ın ultrasonik sistemlerinin sağlamlığı, ağır hizmet altında ve zorlu ortamlarda 7/24 çalışmaya izin verir.
Aşağıdaki tablo size bizim ultrasonicators yaklaşık işleme kapasitesinin bir göstergesidir:
| Numune Hacmi | Akış Oranı | Önerilen Cihaz |
|---|---|---|
| çok kuyulu / mikrotitre plakaları | Yok | UIP400MTP |
| 1 - 500mL | 10 - 200mL/min | UP100H |
| 10 - 2000mL | 20 - 400mL/min | UP200Ht, UP400St |
| 0,1 - 20L | 0,2 - 4L/min | UIP2000hdT |
| 10 - 100L | 2 - 10L/min | Uıp4000hdt |
| Yok | 10 - 100L/min | UIP16000 |
| Yok | daha büyük | grubu UIP16000 |
Bizimle iletişime geçin! / Bize sor!
Ultrasonik DNA Kesme
CC-BY-SA.03 kapsamında Jkwchui'den uyarlandı
Edebiyat / Referanslar
- Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
- Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
- J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
- Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
- Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.
Bilinmesi Gereken Gerçekler
Maymun Çiçeği Virüsü
Maymun çiçeği (MPV, MPXV veya hMPXV), viral zoonotik bir hastalığa neden olan çift sarmallı bir DNA virüsü türüdür. Bu hastalık maymun çiçeği enfeksiyonu olarak bilinir ve insanlarda ve hayvanlarda ortaya çıkabilir. Poxviridae familyasındaki Orthopoxvirus cinsine aittir. Maymun çiçeği virüsü, variola (VARV), çiçeği (CPX) ve vaccinia (VACV) virüsleri ile birlikte insan ortopoksvirüslerinden biridir. Ortopoksvirüsler, yaklaşık 200.000 bp'lik çift sarmallı bir DNA genomu içeren büyük tuğla şeklindeki virüs parçacıkları ile karakterize edilir.
ELISA Testi
ELISA, Enzime Bağlı İmmünoSorbent Testi anlamına gelir ve immünoassayların altın standardı olarak kabul edilen etiketli bir immünoassaydır. ELISA, yüksek tanısal duyarlılığı nedeniyle değerli olan immünolojik bir testtir, antikorlar, antijenler, proteinler, glikoproteinler ve hormonlar dahil olmak üzere molekülleri tespit etmek ve ölçmek için kullanılır. ELISA prensibi bir antijen-antikor etkileşimine dayanır. Bu antijen-antikor etkileşimi ile, spesifik antikorlar hedef antijenine bağlanır. Sadece etkileşim gerçekleştiğinde, substrat enzime bağlanabilir ve daha sonra bir substrat dönüşümü gözlenebilir, bu da pozitif bir sonuç elde edildiği anlamına gelir.
Hielscher Ultrasonics yüksek performanslı ultrasonik homojenizatörler üretir laboratuvar için endüstriyel boyut.