Priprema uzorka sa VialTveeter Sonicator

Priprema uzorka pre analize može zahtevati različite predanalitičke procese kao što su homogenizacija tkiva, liza, ekstrakcija proteina, DNK, RNK, organela i drugih intracelularnih supstanci, rastvaranje i otplinjavanje. VialTveeter je jedinstveni sonikator koji priprema više epruveta za uzorke istovremeno pod potpuno istim uslovima. Zbog indirektne ultrazvučne obrade zatvorenih epruveta, izbegavaju se unakrsna kontaminacija i gubitak uzorka.

ултразвучна припрема узорка

Ултразвук је уобичајена техника обраде узорка како би се узорак припремио за анализе као што су ланчана реакција полимера (ПЦР), Вестерн блотс, тестови, молекуларно секвенционирање, хроматографија итд. Ултразвук је техника која се широко користи у лабораторијама за обраду узорака пре- аналитички. Главна предност ултразвука је да се принцип рада ултразвука заснива на чисто механичким силама. Ултразвучна лиза и деструкција ћелија се постижу сономеханичким силама смицања, што ултразвучном раду даје предност да се растварачи који се користе за екстракцију протеина могу користити и током лизе. Ултразвучни дисруптори ћелија као што је ВиалТвеетер разбијају ћелијске зидове / мембране и промовишу пренос масе између унутрашњости ћелије и растварача. На тај начин се аналит (нпр. ДНК, РНК, протеини, органеле итд.) ефикасно преносе из ћелијског матрикса у растварач. То значи да се кораци гашења и екстракције преклапају са процесом ултразвучног прекидања ћелија, што ултразвучну лизу чини веома ефикасном. Штавише, ултразвучна припрема узорака не захтева детерџенте и друге реагенсе за лизу, који би могли да измене и деструктују структуру лизата и познати су по каснијим проблемима са пречишћавањем. Још један метод лизе, ензимски поремећај захтева дуго време инкубације и даје често непоновљиве резултате. Ултразвучна припрема узорака превазилази уобичајене проблеме у припреми узорака као што су хомогенизација ткива, разбијање ћелија, лиза, екстракција протеина и солубилизација лизата. Пошто се интензитет ултразвучног третмана може тачно контролисати и прилагодити биолошком узорку, избегава се деградација и губитак узорка. Аутоматски надгледана и контролисана температура узорка, пулсни режим и трајање соникације обезбеђују оптималне резултате.
 

ВиалТвеетер је посебно погодан за лабораторијске радове који захтевају истовремену припрему више узорака под истим условима. ВиалТвеетер је ултразвучна блок сонотрода која може да држи до 10 бочица (нпр. Еппендорф, центрифуга, НУНЦ епрувете, крио-бочице) и интензивно их ултразвучно обрађује под прецизно контролисаним условима. Пошто је ултразвучна енергија спојена кроз зидове бочица у медијум узорка, бочице остају затворене током третмана. На тај начин се у потпуности избегава губитак узорка и унакрсна контаминација.

Бочице и епрувете које одговарају ВиалТвеетер-у

ВиалТвеетер је погодан за држање 10 уобичајених конусних или округлих епрувета као што су Еппендорф, центрифуге, крио-бочице и различити типови НУНЦ бочица, али рупе се могу прилагодити другим величинама бочица и епрувета на захтев. Обавестите нас коју врсту епрувета желите да користите како бисмо могли да модификујемо ваш ВиалТвеетер у складу са тим. За веће епрувете као што су Фалцон епрувете и друге посуде за испитивање, чаше и посуде, ВиалПресс је погодно решење.
Прочитајте више о ВиалТвеетер моделу ВТ26дкк прилагођеном вашој специфичној величини епрувете, нпр. Фалцон епрувете!

ВиалТвеетер са ВиалПресс-ом

Док је сам ВиалТвеетер са својих 10 отвора за цеви већ јединствен и веома функционалан ултразвучни уређај, ВиалПресс додатак чини ВиалТвеетер још разноврснијим и флексибилнијим за рад. ВиалПресс је додатак за ВиалТвеетер који се састоји од шипке за причвршћивање која омогућава фиксирање већих епрувета за узорке као што су Фалцон епрувете или друге мале до средње чаше за испитивање на предњу страну ВиалТвеетер-а. Слика са леве стране приказује ВиалТвеетер који држи 10 Еппендорф бочица у блоку, док ВиалПресс фиксира једну већу епрувету напред за соникацију. ВиалПресс може да држи до 5 већих епрувета за интензивну соникацију.

ВиалТвеетер протоколи за припрему узорака

ВиалТвеетер се широко користи за соницирање биолошких узорака. Пре анализе, узорци се морају припремити за биохемијске или биофизичке анализе и тестове, нпр. лизом, хомогенизацијом ткива, екстракцијом протеина, смицањем ДНК/РНА, дегасирањем итд. ВиалТвеетер поуздано испуњава ове ултразвучне процесе и даје поновљиве резултате. Уобичајена примена ВиалТвеетер-а је лиза/разбијање ћелија ткива сисара (људских и животињских), као и ћелија бактерија и вирусних честица. Биолошки узорци који су успешно третирани ВиалТвеетер-ом обухватају епителне ћелије плућа човека, матичне ћелије хематопоезе, ћелије мијелоичне леукемије, Есцхерицхиа цоли, Бациллус субтилис, Бациллус антхрацис, Франциселла туларенсис, Иерсиниа пестис, Стрептоцоццус пиогенес, Цаулобацтер цресцентус, Мицопласма пнеумониае, mikobakterije, kompleks Micobacterium tuberculosis (MTBC) i mnoge druge bakterijske, botaničke i mikrobne ćelije.
Испод можете пронаћи неколико одабраних протокола који садрже ВиалТвеетер.

Лиза Е.Цоли са ВиалТвеетер-ом за ин-виво одређивање глутатиона

Бактерије Есцхерицхиа цоли соја МГ1655 су узгајане у МОПС минималном медијуму у укупној запремини од 200 мл док се не постигне А600 од 0,5. Култура је подељена на културе од 50 мл за третман стреса. После 15 минута инкубације са 0,79 мМ алицина, 1 мМ диамида или диметил сулфоксида (контрола), ћелије су сакупљене на 4000 г на 4 ° Ц током 10 минута. Ћелије су испране два пута са КПЕ пуфером пре ресуспендовања пелета у 700 ул КПЕ пуфера. За депротеинизацију, 300 µл 10% (в/в) сулфосалицилне киселине је додато пре разарања ћелија ултразвучном обрадом (3 к 1 мин; ВиалТвеетер ултрасоникатор). Супернатанти су сакупљени након центрифугирања (30 мин, 13,000 г, 4°Ц). Концентрације сулфосалицилне киселине су смањене на 1% додавањем 3 запремине КПЕ пуфера. Мерења укупног глутатиона и ГССГ су обављена као што је горе описано. Концентрације ћелијског глутатиона су израчунате на основу запремине ћелија Е. цоли од 6,7×10-15 литара и густине ћелија од А600 0,5 (еквивалентно 1×108 ћелија мл-1 културе). Концентрације ГСХ су израчунате одузимањем 2[ГССГ] од укупног глутатиона. (Муллер ет ал. 2016)

Фрагментација алфа-синуклеинских фибрила са ВиалТвеетер-ом

ВиалТвеетер соникатор се широко користи за поуздану и ефикасну фрагментацију алфа-синуклеинских фибрила и трака. Кликните овде да бисте пронашли детаљне описе, протоколе и референце за фрагментацију алфа-синуклеина са ВиалТвеетер-ом!

Лиза ћелија са ВиалТвеетер-ом пре атомске апсорпционе спектрометрије у графитној пећи

Бациллус субтилис 168 (трпЦ2) је изложен 15 мин антибиотском стресу, затим су ћелије сакупљене на 3,320 кг, испране пет пута са 100 мМ Трис/1 мМ ЕДТА, пХ 7,5, ресуспендоване у 10 мМ Триссон и дисрупција пХ 7. 5. у инструменту Хиелсцхер ВиалТвеетер. (Вензел ет ал. 2014)

Припрема узорка ВиалТвеетер пре масене спектрометрије

Лиофилизоване ћелијске пелете хуманих ЦД34  матичних/прогениторских ћелија хематопоезе су ресуспендоване у 10 µϏл (200 µл за расути препарат ХЕК293 за серију разблаживања пептида) 8 М урее у 100 мМ раствореног у амонијум карбонату и хидроген карбониду са амонијум-карбонатом. при амплитуди од 60%, циклусу од 60% и трајању од 20с за три пута са средњим хлађењем на леду. (Амон ет ал. 2019)

Протоколи за припрему узорака користећи ВиалПресс

Свежа зелена салата (Лацтуца сатива) је хомогенизована у 0,5 М ХЕПЕС пуферу (пХ 8, КОХ прилагођен) у односу од 1 г биљке (свежа тежина) према 200, 100, 50 или 20 мЛ пуферског раствора. Однос биљне масе и запремине пуферског раствора варирао је да би се одржала укупна запремина хомогената између 3,5 и 12 мЛ. Однос биљне масе и запремине пуферског раствора је вариран да би се одржала укупна запремина хомогената између 3,5 и 12 мЛ, омогућавајући хомогенизацију сондом. Хомогенати су затим подвргнути индиректној ултразвучној обради помоћу УП200Ст са ВиалТвеетер-ом опремљеним 200кт ВиалПресс-ом (Хиелсцхер Ултрасоницс ГмбХ, Немачка) током 3 минута (80% пулса и 100% снаге). Коришћењем овог уређаја избегава се контаминација. (Лаугхтон ет ал. 2019)

Поуздана контрола температуре током соникације са ВиалТвеетер-ом

Температура је кључни фактор који утиче на процес, а посебно је важан за третман биолошких узорака. Као и све технике механичке припреме узорака, соникација ствара топлоту. Међутим, температура узорака се може добро контролисати када се користи ВиалТвеетер. Представљамо вам различите опције за праћење и контролу температуре ваших узорака док их припремате помоћу ВиалТвеетер-а и ВиалПресс-а за анализу.

1. Праћење температуре узорка: Ултразвучни процесор УП200Ст, који покреће ВиалТвеетер, опремљен је интелигентним софтвером и сензором температуре који се може прикључити. Укључите сензор температуре у УП200Ст и уметните врх сензора температуре у једну од епрувета за узорке. Преко дигиталног обојеног екрана осетљивог на додир, можете подесити у менију УП200Ст одређени температурни опсег за ваш узорак ултразвучне обраде. Ултрасоникатор ће се аутоматски зауставити када се достигне максимална температура и паузирати док температура узорка не падне на нижу вредност подешене температуре ∆. Тада ултразвук почиње аутоматски поново. Ова паметна функција спречава деградацију изазвану топлотом.
2. ВиалТвеетер блок се може претходно охладити. Ставите ВиалТвеетер блок (само сонотроду без сонде!) у фрижидер или замрзивач да бисте претходно охладили блок од титанијума, што помаже да се одложи пораст температуре у узорку. Ако је могуће, сам узорак се такође може претходно охладити.
3. Користите суви лед за хлађење током ултразвучне обраде. Користите плитку тацну напуњену сувим ледом и поставите ВиалТвеетер на суви лед тако да се топлота брзо распрши.

Купци широм света користе ВиалТвеетер и ВиалПрес за свој свакодневни рад на припреми узорака у биолошким, биохемијским, медицинским и клиничким лабораторијама. Интелигентни софтвер и контрола температуре УП200Ст процесора, температура се поуздано контролише и избегава се деградација узорка изазвана топлотом. Ултразвучна припрема узорка са ВиалТвеетер-ом и ВиалПресс-ом даје високо поуздане и поновљиве резултате!

Технички детаљи ВиалТвеетера

ВиалТвеетер је блок сонотрода направљена од титанијума која може да држи до 10 бочица у рупама унутар блока. Додатно, до 5 већих епрувета може да се причврсти на предњи део ВиалТвеетера помоћу ВиалПресс-а. ВиалТвеетер је тако дизајниран да се енергија ултразвучне обраде равномерно распоређује у сваку уметнуту бочицу како би се обезбедили поуздани и уједначени резултати соникације. Мали стожер подешава сонотроду ВиалТвеетер на неравно тло и поравнава епрувете вертикално.

Предности ВиалТвеетер-а на први поглед

• Интензивна соникација до 10 бочица истовремено
• Индиректна соникација високог ултразвучног интензитета кроз зид посуде у узорак
• Индиректна соникација избегава унакрсну контаминацију и губитак узорка
• Поновљиви резултати захваљујући подесивој и контролисаној амплитуди соникације
• ВиалПресс вам омогућава да соникирате веће цеви
• Подесива амплитуда од 20 до 100%
• Подесиви пулсни режим од 0 до 100%
• Аутоклав

ВиалТвеетер покреће УП200Ст, моћни ултразвучни процесор од 200 вати. УП200Ст је опремљен интелигентним софтвером који омогућава прецизну контролу над свим важним параметрима ултразвучног процеса као што су амплитуда, време ултразвучне обраде, пулсирање и температура. Ово чини ВиалТвеетер поузданим алатом за успешне поновљиве резултате процеса у биолошким и биохемијским лабораторијама.
Amplituda se može podesiti između 20 i 100% i omogućava na taj način da se prilagodi ultrazvučni intenzitet vašem uzorku. Na primer, smicanje i fragmentacija DNK i RNK zahteva blažu amplitudu kako bi se sprečila proizvodnja premalih fragmenata DNK, homogenizacija tkiva mozga miša treba ultrazvuk visokog intenziteta. Izaberite idealnu amplitudu, intenzitet i trajanje ultrazvuka preko pametnog i intuitivnog menija na UP200St procesoru. Meni i podešavanja mogu se lako pristupiti i upravljati preko obojenog ekrana osetljivog na dodir. U podešavanjima možete unapred podesiti parametre ultrazvuka kao što su amplituda, pulsiranje, režim ciklusa, trajanje ultrazvuka, ukupan unos energije, i temperaturne granice. U istraživanju i proizvodnji, ponovljivost ispitivanja i rezultata testova je od ključnog značaja. To znači da je precizno snimanje uslova procesa i protokola za ultrazvuk izuzetno važno. Automatsko protokoliranje podataka zapisuje sve podatke o ultrazvuku u CSV datoteku na integrisanoj SD kartici, tako da možete lako proveriti i uporediti različite ultrazvučne snimke. Svi ultrazvučni podaci procesa mogu se lako pristupiti i deliti kao CSV datoteka.
Хиелсцхер Ултрасоницс настоји да вам пружи напредну технологију да олакша и побољша ваш истраживачки рад!