Priprema uzorka pre analize može zahtevati razne pre-analitičke procese kao što su homogenizacija tkiva, liza, vađenje proteina, DNK, RNK, organela i drugih intracelularnih supstanci, rastvaranje i degaziranje. VialTweeter je jedinstveni ultrazvučni uređaj koji priprema više uzoraka cevi istovremeno pod potpuno istim uslovima. Zbog indirektne sonicije zatvorenih epruveta, izbegava se unakrsna kontaminacija i gubitak uzoraka.

Ultrazvučna probna Priprema uzorka

Ultrazvučnost je uobičajena tehnika tretmana uzoraka kako bi se uzorak pripremio za analize kao što su polimerska lančana reakcija (PCR), Zapadni Blots, asays, molekularno sekvenciranje, hromatografija itd. Ultrazvučnost je tehnika koja se široko koristi u laboratorijama za tretiranje uzoraka pre-analitički. Velika prednost sonikacije je što se radni princip ultrazvuka zasniva na čisto mehaničkim silama. Ultrazvučnu lizu i poremećaj ćelija postižu sonomehaničke sile, što ultrazvučnosti daje prednost što rastvarači koji se koriste za vađenje proteina mogu da se koriste i tokom lize. Ultrazvučni poremećaji ćelija kao što je VialTweeter razbijaju ćelijske zidove / membrane i promovišu masovni prenos između unutrašnjosti ćelija i rastvarača. Time se analit (npr. DNK, RNK, proteini, organelles i sl.) efikasno prenosi iz matrice ćelija u rastvarač. To znači da se koraci za ugušenje i vađenje preklapaju sa procesom prekida ultrazvučnih ćelija, što ultrazvučnu lizu čini veoma efikasnom. Osim toga, ultrazvučni preparat uzorka ne zahteva deterdžente i druge reagense lize, koji bi mogli da izmene i destrukciju strukture lisata i poznati su po naknadnim problemima sa pročišćavanjem. Druga metoda lize, enzimski poremećaj zahteva duga vremena inkubacije i daje često neproduktivne rezultate. Ultrazvučni preparat uzorka prevazilazi uobičajene probleme u pripremi uzoraka kao što su homogenizacija tkiva, poremećaj ćelija, liza, vađenje proteina i solubilizacija lisata. S obzirom na to da se intenzitet ultrazvučnog tretmana može tačno kontrolisati i prilagoditi biološkom uzorku, izbegava se razgradnja i gubitak uzorka. Automatski nadgledana i kontrolisana temperatura uzorka, pulsni režim i trajanje sonication osiguravaju optimalne ishode.

VialTweeter je posebno pogodan za laboratorijski rad koji zahteva istovremenu pripremu više uzoraka pod istim uslovima. VialTweeter je ultrazvučni blok sonotrode koji može da drži do 10 bočica (npr. Eppendorf, centriguge, NUNC cevi, krio-bočice) i intenzivno ih sonicira pod precizno kontrolisanim uslovima. Pošto je ultrazvučna energija u paru kroz zidove bočica u uzorak medijuma, bočice se održavaju zatvorene tokom tretmana. Time se gubitak uzoraka i unakrsna kontaminacija u potpunosti izbegavaju.

Bočice i cevi odgovaraju VialTweeter-u

VialTweeter je pogodan za držanje 10 uobičajenih konusnih ili okruglih cevi kao što su Eppendorf, centrifuga, krio-bočice i razni TIPOVI NUNC bočica, ali se rupe mogu prilagoditi drugim veličinama bočica i cevi na zahtev. Molimo vas da nas obavestite koju vrstu epruveta želite da koristite kako bismo u skladu sa tim modifikovali vaš VialTweeter. Za veće epruvete kao što su Falcon cevi i drugi probni kontejneri, kljunovi i posude, VialPress je zgodno rešenje.

The VialTweeter with VialPress

Dok je sam VialTweeter sa svojih 10 rupa u cevima već jedinstven i visoko funkcionalan ultrazvučni uređaj, VialPress dodatak čini VialTweeter još raznovrsnijim i fleksibilnijim za rad. VialPress je saučesnik za VialTweeter koji se sastoji u štipaljkastoj traci koja omogućava fiksiranje većih uzoraka cevi kao što su Falcon cevi ili drugi mali do srednje veličine test kljunovi na VialTweeter front. Na slici sa leve strane se vidi kako VialTweeter drži 10 Eppendorf bočica u bloku, dok VialPress fiksira jednu veću epruvetu napred za sonication. VialPress je sposoban da drži do 5 većih epruveta za intenzivnu soniaciju.

Protokoli pripreme uzorka vialTweetera

VialTweeter se uveliko koristi za sonicanje bioloških uzoraka. Pre analize, uzorci moraju biti pripremljeni za biohemijske ili biofizičke analize i asaje, npr. od strane lize, homogenizaciju tkiva, vađenje proteina, DNK / RNK šering, degazaciju itd. VialTweeter pouzdano ispunjava ove ultrazvučne procese i daje reproduktivne rezultate. Uobičajena primena VialTweeter-a je liza/ćelijsko ometanje sisarskog (ljudskog i životinjskog) tkiva kao i ćelija bakterija i virusnih čestica. Uspešno biološki uzorci tretirani vialTweeter-om uključuju ćelije epitela ljudskih pluća, hematopoetičke matične ćelije, mijeloidne ćelije leukemije, Escherichia coli, Bacilus subtilis, Bacillus antracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptococcus pyogenes, Caulobacter crescentus, Mikoplasma upala pluća, mycobacteria / Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) i mnoge druge bakterijske, botaničke i mikrobiološke ćelije.
U nastavku možete pronaći nekoliko izabranih protokola sa vialTweeter-om.

E.Coli Lysis With VialTweeter for In-Vivo Glutathione Determination

Bakterija Ešerihija koli soja MG1655 uzgajana je u MOPS minimalnom medijumu u ukupnom obimu od 200ml dok nije postignut A600 od 0,5. Kultura je podeljena na 50-ml kultura za lečenje stresa. Nakon 15 min inkubacije sa 0,79 mM allicin, 1 mM diamide, ili dimetil sulfoksid (kontrola), ćelije su požnjevene na 4.000g na 4°C za 10 min. Ćelije su dva puta oprane KPE baferom pre ponovne resuspenzije kuglica u 700μl KPE bafera. Za deproteinacije dodato je 300μl od 10% (w/v) sulfosalicilne kiseline pre prekidanja ćelija ultrazvučnošću (3 x 1 min; VialTweeter ultrazvučni). Supernatanti su prikupljeni posle centrifugacije (30 min, 13.000g, 4°C). Koncentracija sulfosalilicne kiseline smanjena je na 1% sa dodatkom 3 volumena KPE bafera. Izvršena su merenja totalnog glutationa i GSSG-a kao što je gore opisano. Koncentracije ćelijskih glutiona izračunate su na osnovu zapremine ešerihije koli ćelije od 6,7×10-15 litara i gustine ćelija A600 0,5 (ekvivalentno 1×108 ćelija ml-1 kulturi). Koncentracije GSH izračunate su oduzimanjem 2[GSSG] od ukupnog glutathiona. (Müller et al. 2016)

Cell Lysis with VialTweeter before Graphite Furnace Atomic Absorption Spectrometry

Bacillus subtilis 168 (trpC2) je bio izložen 15 min antibiotskog stresa, zatim su ćelije požnjevene na 3.320 x g, oprane pet puta sa 100 mM Tris/1 mM EDTA, pH 7,5, ponovo su se zamenile u 10 mM Tris, pH 7.5 i poremećene ultrazvučnovanjem u Hielscher VialTweeter instrumentu. (Wenzel et al. 2014)

Priprema uzorka vialTweetera pre masovne spektrometrije

Liofilizovane ćelijske kuglice ljudskog CD34􏰀 hematopoetičke matične/progenitorne ćelije su ponovo zamenjene u 10μ􏰇l (200μl za masovni HEK293 preparat za peptidnu dilution seriju) od 8 M urea in 100 mM amonium hydrogen carbonate and lysed aided by sonication with the Hielscher VialTweeter at amplitude of 60%, a cycle of 60% and a duration of 20s for three times with intermediate cooling on ice. (Amon et al. 2019)

Protokoli za pripremu uzoraka pomoću VialPress-a

Sveža zelena salata (Lactuca sativa) je homogenizovana u 0,5 M HEPES baferu (pH 8, KOH prilagođenom) u odnosu 1 g biljke (sveža težina) do 200, 100, 50 ili 20 mL tampon rastvora. Odnos biljne mase prema zapremini tampon rešenja bio je raznovrstan da bi se ukupna zapremina homogenata zadržala između 3,5 i 12 mL. Odnos biljne mase prema zapremini tampon rešenja bio je raznovrstan da bi se ukupna zapremina homogenata zadržala između 3,5 i 12 mL, što je omogućilo homogenizaciju sondom. Homogenates je potom podvrgnut indirektnoj ultrazvuci koristeći UP200St sa VialTweeter opremljenim 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Nemačka) za 3 min (80% puls i 100% snage). Korišćenjem ovog uređaja izbegnuta je kontaminacija. (Laughton et al. 2019)

Pouzdana kontrola temperature tokom sonikacije sa VialTweeter-om

Temperatura je ključni faktor koji utiče na proces koji je posebno važan za lečenje bioloških uzoraka. Kao i sve tehnike pripreme mehaničkih uzoraka, sonication stvara toplotu. Međutim, temperatura uzoraka se može dobro kontrolisati prilikom korišćenja VialTweetera. Predstavljamo vam razne opcije za praćenje i kontrolu temperature vaših uzoraka dok ih pripremate sa VialTweeter i VialPress za analizu.

1. Praćenje temperature uzorka: Ultrazvučni procesor UP200St, koji pokreće VialTweeter, opremljen je inteligentnim softverom i senzorom za dodatnu temperaturu. Priključite senzor temperature u UP200St i ubacite vrh senzora temperature u jednu od uzoraka cevi. Putem digitalno obojenog ekrana osetljivog na dodir, možete da postavite u meniju UP200St određeni temperaturni opseg za vaš uzorak sonication. Ultrazvučnik će se automatski zaustaviti kada se dostigne maksimalna temperatura i pauzirati dok se temperatura uzorka ne spusti na nižu vrednost postavljene temperaturne ∆. Onda se sonikacija ponovo automatski započinje. Ova pametna funkcija sprečava razgradnju izazvanu toplotom.
2. VialTweeter blok se može unapred ohladiti. Stavite VialTweeter blok (samo sonotrode bez transduktora!) u frižider ili zamrzivač da se prehladi titanijumski blok pomaže da se odloži porast temperature u uzorku. Ako je moguće, i sam uzorak se može unapred ohladiti.
3. Koristite suvi led da se ohladite tokom sonikacije. Koristite plitku tacnu ispunjenu suvim ledom i stavite VialTweeter na suvi led kako bi se toplota brzo raspršila.

Kupci širom sveta koriste VialTweeter i VialPress za svakodnevni rad na pripremi uzoraka u biološkim, biohemijskim, medicinskim i kliničkim laboratorijama. Inteligentni softver i kontrola temperature UP200St procesora, temperatura je pouzdano kontrolisana i izbegnuta je degradacija uzoraka izazvanih toplotom. Ultrazvučni preparat uzorka sa VialTweeter i VialPress daje veoma pouzdane i reproduktivne rezultate!

Tehnički detalji VialTweetera

VialTweeter je blok sonotrod napravljen od titanijuma koji može da drži do 10 bočica u rupama unutar bloka. Pored toga, do 5 većih epruveta može da se stegne na Front VialTweeter pomoću VialPress-a. VialTweeter je toliko dizajniran da se ultrazvučna energija ravnomerno raspoložuje u svaku ubačenu bočiku kako bi se osigurali pouzdani i ujednačeni rezultati sonication. Mali pivot podešava VialTweeter sonotrode na neravnomerno tlo i poravnava epruvete vertikalno.

Prednosti Vialtveter na prvi pogled

• Intenzivna sonacija do 10 viala istovremeno
• Indirektna sonacija na visokom ultrasonnom intenzitetu kroz zidni zid u uzorku
• Indirektni sonovi izbegava unakrsno kontaminaciju i uzorak gubitka
• Ponovno produktivan rezultat zbog prilagodljivih i kontrolabilnih sonacija
• Vialpres vam omogućava da se na njemu nalaze veće cevi
• Podesiva amplitude od 20 do 100%
• Podesivi režim puls od 0 do 100%
• Automatsko klonanje

VialTweeter se napaja pomoću УП200Ст, 200 vati moćnog ultrazvučnog procesora. UP200St je opremljen inteligentnim softverom koji omogućava preciznu kontrolu svih važnih parametara ultrazvučnog procesa kao što su amplitude, vreme sonikacije, pulsacija i temperatura. To čini VialTweeter pouzdanim sredstvom za uspešne reproduktivne rezultate procesa u biološkim i biohemijskim laboratorijama.
Amplitude se može podesiti između 20 i 100% i omogućava da se ultrazvučni intenzitet prilagodi vašem uzorku. Na primer, zašišavanje i fragmentacija DNK i RNK zahteva blažu amplitude kako bi se sprečila proizvodnja premalih DNK delova, homogenizaciji tkiva mozga miša potrebna je sindikacija visokog intenziteta. Odaberite idealnu amplitude, intenzitet sonication i trajanje putem pametnog i intuitivnog menija na UP200St procesoru. Meniju i postavkama se može lako pristupiti i raditi preko obojenog ekrana osetljivog na dodir. U podešavanjima možete unapred podesiti parametre sonication kao što su amplitude, pulsation / cycle mode, trajanje sonication, ukupan unos energije i ograničenje temperature. U istraživanju i proizvodnji, ponovljenost iskušenja i rezultata testova je od presudnog značaja. To znači da je precizno snimanje procesnih uslova i protokola sonication krajnje važno. Automatsko protokoliranje podataka upisuje sve podatke o sonikaciji u CSV datoteku na integrisanoj SD-kartici tako da možete lako da proverite i uporedite različite sonication runs. Svim ultrazvučnim procesnim podacima se može lako pristupiti i deliti kao CSV datoteka.
Hielscher Ultrasonics nastoji da vam obezbedi naprednu tehnologiju koja će vam olakšati i unaprediti vaš istraživački rad!