Hielscher Ultrasonics
Биће нам драго да разговарамо о вашем процесу.
Позовите нас: +49 3328 437-420
Пошаљите нам е-пошту: info@hielscher.com

Лиза ћелија БЛ21 ћелија ултразвуком

БЛ21 ћелије су сој Е. цоли који се широко користи у истраживачким лабораторијама, биотехнологији и индустријској производњи због своје способности да високо ефикасно експримирају протеине. Ултразвучно уништавање ћелија, лиза и екстракција протеина је уобичајена метода за изоловање и прикупљање циљаних протеина из ћелијске унутрашњости БЛ21 ћелија. Ултразвучна обрада потпуно омета ћелију и ослобађа све заробљене протеине, чинећи 100% протеина доступним.

БЛ21 ћелије за експресију протеина

Е. цоли бактерије као што су БЛ21 ћелије се обично лизирају ултразвуком како би се ослободили експримирани протеини, као што су рекомбинантни протеиниБЛ21 ћелија је хемијски компетентан сој бактерије Е. цоли погодан за трансформацију и експресију протеина високог нивоа коришћењем система за индукцију Т7 РНК полимеразе-ИПТГ. БЛ21 ћелије омогућавају високоефикасну експресију протеина било ког гена који је под контролом Т7 промотера. Сој Е. цоли БЛ21(ДЕ3) је сој за производњу протеина заснован на Т7 РНК полимерази у комбинацији са експресионим векторима заснованим на Т7 промотеру и широко се примењује у лабораторијама и индустрији за производњу рекомбинантних протеина. У БЛ21(ДЕ3), експресија гена који кодира рекомбинантни протеин се транскрибује хромозомски кодираном Т7 РНК полимеразом (Т7 РНАП), која се транскрибује осам пута брже од конвенционалног Е. цоли РНАП. Ово чини сој БЛ21(ДЕ3) високо ефикасним и претвара га у један од најпожељнијих ћелијских система за експресију протеина.

Протокол за ултразвучну лизу и екстракцију протеина из БЛ21 ћелија

Ћелијска лиза БЛ21 ћелија се углавном изводи помоћу ултразвучне обраде у комбинацији са натријум лауроил саркозинатом (такође познатим као саркозил) као пуфером за лизу. Предности ултразвучног прекидања ћелија и екстракције протеина леже у поузданости, поновљивости, као и једноставном, безбедном и брзом раду ултразвучних апарата. Протокол у наставку даје корак по корак упутства за ултразвучну лизу БЛ21 ћелија:

  • Да би се уклонили протеини шаперона, БЛ21 бактеријске пелете су ресуспендоване у 50 мл ледено хладног Натријум Трис-ЕДТА (СТЕ) пуфера (који се састоји од 10 мМ Трис-ХЦЛ, пХ 8,0, 1 мМ ЕДТА, 150 мМ НаЦл 0 додатог 10 мМ НаЦл ПМСФ).
  • Додато је 500 ул лизозима (10 мг/мл) и ћелије су инкубиране на леду 15 мин.
  • Затим је додато 500 ул ДТТ-а и 7 мл саркозила (10% (теж./запр.) сачињеног у СТЕ пуферу).
  • Неопходно је држати све пуфере за пречишћавање ледено хладним и да узорке одржавате на леду све време. Све кораке пречишћавања треба спровести у хладној просторији ако је могуће.
  • ВиалТвеетер на ултразвучном процесору УП200СТ

  • За ултразвучну лизу и екстракцију протеина, узорци се соникирају у ВиалТвеетер МултиСампле Ултрасоницатор у трајању од 4 к 30 секунди при 100% амплитуди са интервалом од 2 минута између сваке обраде ултразвуком. Алтернативно, ултразвучни хомогенизатор типа сонде са микро врхом, нпр. УП200Хт са С26д2 (3 к 30 секунди, 2 мин. паузе између ултразвучних циклуса, 80% амплитуда) може се користити.
  • За даље кораке пречишћавања, узорци се морају држати на леду или алтернативно чувати на -80°Ц до даље обраде.
Инсонифиер типа сонде УП200Ст за лизу

Ултразвучни дисруптор ћелија УП200Ст са микро врхом С26д2 за лизу и екстракцију протеина

Захтев за информацијама




Обратите пажњу на наше правила о приватности.




Ултразвучна лиза под прецизном контролом температуре

Прецизна и поуздана контрола температуре је кључна при руковању биолошким узорцима. Високе температуре иницирају термички индуковану деградацију протеина у узорцима.
Као и све технике механичке припреме узорака, соникација ствара топлоту. Међутим, температура узорака се може добро контролисати када се користи ВиалТвеетер. Представљамо вам различите опције за праћење и контролу температуре ваших узорака док их припремате помоћу ВиалТвеетер-а и ВиалПресс-а за анализу.

  1. Праћење температуре узорка: Ултразвучни процесор УП200Ст, који покреће ВиалТвеетер, опремљен је интелигентним софтвером и сензором температуре који се може прикључити. Укључите сензор температуре у УП200Ст и уметните врх сензора температуре у једну од епрувета за узорке. Преко дигиталног обојеног екрана осетљивог на додир, можете подесити у менију УП200Ст одређени температурни опсег за ваш узорак ултразвучне обраде. Ултрасоникатор ће се аутоматски зауставити када се достигне максимална температура и паузирати док температура узорка не падне на нижу вредност подешене температуре ∆. Тада ултразвук почиње аутоматски поново. Ова паметна функција спречава деградацију изазвану топлотом.
  2. ВиалТвеетер блок се може претходно охладити. Ставите ВиалТвеетер блок (само сонотроду без сонде!) у фрижидер или замрзивач да бисте претходно охладили блок од титанијума, што помаже да се одложи пораст температуре у узорку. Ако је могуће, сам узорак се такође може претходно охладити.
  3. Користите суви лед за хлађење током ултразвучне обраде. Користите плитку тацну напуњену сувим ледом и поставите ВиалТвеетер на лед тако да се топлота брзо распрши.

Купци широм света користе ВиалТвеетер и ВиалПрес за свој свакодневни рад на припреми узорака у биолошким, биохемијским, медицинским и клиничким лабораторијама. Интелигентни софтвер и контрола температуре УП200Ст процесора, температура се поуздано контролише и избегава се деградација узорка изазвана топлотом. Ултразвучна припрема узорка са ВиалТвеетер-ом и ВиалПресс-ом даје високо поуздане и поновљиве резултате!
 

Овај водич објашњава који тип соникатора је најбољи за ваше задатке припреме узорка као што су лиза, поремећај ћелија, изолација протеина, фрагментација ДНК и РНК у лабораторијама, анализа и истраживања. Одаберите идеалан тип соникатора за вашу апликацију, запремину узорка, број узорка и пропусност. Хиелсцхер Ултрасоницс има идеалан ултразвучни хомогенизатор за вас!

Како пронаћи савршен соникатор за поремећај ћелија и екстракцију протеина у науци и анализи

Видео Тхумбнаил

 

Пронађите оптимални ултразвучни дисруптор за вашу апликацију за лизу

Хиелсцхер ултрасоницатори се могу даљински контролисати преко контроле претраживача. Параметри соникације се могу пратити и прецизно прилагодити захтевима процеса.Хиелсцхер Ултрасоницс је дугогодишњи искусан произвођач ултразвучних дисруптора ћелија високих перформанси и хомогенизатора за лабораторије, столне и индустријске системе. Величина ваше бактеријске ћелијске културе, ваш истраживачки или производни циљ и запремина ћелије за обраду по сату или дану су суштински фактори за проналажење правог ултразвучног дисруптора ћелија за вашу примену.
Хиелсцхер Ултрасоницс нуди различита решења за истовремену соникацију више узорака (до 10 бочица са ВиалТвеетер-ом) и масовних узорака (тј. микротитарске плоче / ЕЛИСА плоче са УИП400МТП), као и класични лабораторијски ултразвучни апарат типа сонде са различитим нивои снаге од 50 до 400 вати до потпуно индустријских ултразвучних процесора са до 16.000 вати по јединици за комерцијално уништавање ћелија и екстракцију протеина у великој производњи. Сви Хиелсцхер ултрасоникатори су направљени за рад 24/7/365 под пуним оптерећењем. Робусност и поузданост су основне карактеристике наших ултразвучних уређаја.
Сви дигитални ултразвучни хомогенизатори опремљени су паметним софтвером, екраном на додир у боји и аутоматским протоколом података, што ултразвучни уређај чини практичним радним алатом у лабораторијама и производним објектима.
Јавите нам какве ћелије, коју запремину, којом фреквенцијом и са којим циљем морате да обрађујете своје биолошке узорке. Препоручићемо вам најпогоднији ултразвучни дисруптор ћелија за ваше захтеве процеса.

Табела у наставку вам даје индикацију приближног капацитета обраде наших ултразвучних система од компактних ручних хомогенизатора и МултиСампле ултрасоникатора до индустријских ултразвучних процесора за комерцијалне примене:

Батцх Волуме Проток Препоручени уређаји
Плоче са 96 јажица/микротитар на УИП400МТП
10 бочица од 0,5 до 1,5 мл на ВиалТвеетер на УП200Ст
0.01 до 250 мл 5 до 100 мл/мин УП50Х
0.01 до 500 мл 10 до 200 мл/мин УП100Х
10 до 2000 мл 20 до 400 мл/мин УП200Хт, УП400Ст
0.1 до 20Л 0.2 до 4Л/мин УИП2000хдТ
10 до 100 л 2 до 10 л/мин УИП4000хдТ
на 10 до 100 л/мин УИП16000
на већи кластер оф УИП16000

Контактирајте нас! / Питајте нас!

Питајте за више информација

Молимо користите образац испод да затражите додатне информације о ултразвучним процесорима, апликацијама и цени. Биће нам драго да разговарамо о вашем процесу са вама и да вам понудимо ултразвучни систем који задовољава ваше захтеве!









Обратите пажњу на наше правила о приватности.




Ултразвучна фрагментација ДНК је поуздана и ефикасна техника која се обично користи за протеине који уништавају ћелије, изолацију и фрагментацију ДНК у секвенцирању следеће генерације (НГС)

УИП400МТП соникатор плоча за разбијање ћелија велике пропусности у плочама са 96 бунарчића

 
 

Ултрасоникатор УП200Хт са микроврхом С26д2 за ултразвучну лизу биолошких узорака

ултрасоницатор УП200Хт са микроврхом од 2 мм С26д2 за соникацију малих узорака

 
Прочитајте више о томе како можете да користите свој ултразвучни хомогенизатор ткива за ефикасну и поуздану припрему пуферских раствора!
 



Чињенице које вреди знати

Бактерије Есцхерицхиа Цоли

Есцхерицхиа цоли је врста бактерије, која не формира споре, грам-негативна и карактерише је облик правог штапића. Бактерије Е.цоли присутне су у животној средини, храни и цревима људи и животиња. Е. цоли је обично покретна коришћењем перитрихалних флагела, али постоје и непомични типови. Е.цоли су такозвани факултативно анаеробни хемоорганотрофни организми, што значи да су способни и за респираторни и за ферментативни метаболизам. Већина типова Е.цоли су бенигне и испуњавају корисне функције у телу, нпр. потискују раст штетних бактеријских врста, синтетишу витамине итд.
Ћелије бактерије Есцхерицхиа цоли такозваног Б типа су посебна категорија сојева Е.цоли, који се широко користе у истраживањима за испитивање механизама као што су осетљивост бактериофага или системи рестрикцијске модификације. Штавише, бактерије Е.цоли су цењене као поуздан радни коњ за експресију протеина у биотехнолошким и научним лабораторијама о животу. На пример, Е.цоли се користи за синтезу једињења као што су протеини и олигосахариди у индустријском обиму. Због специфичних карактеристика као што су недостатак протеазе, ниска производња ацетата при високом нивоу глукозе и повећана пермеабилност, Е. цоли Б ћелије су најчешће коришћене ћелије домаћина за производњу генетски модификованих протеина.

Рекомбинантни протеин

Рекомбинантни протеини (рПрот) добијају значајан значај у разним гранама, укључујући хемијску производњу, фармацеутску, козметичку, хуману и животињску медицину, пољопривреду, прехрамбену индустрију као и индустрију третмана отпада.
Производња рекомбинантног протеина захтева употребу експресионог система. Као експресиони ћелијски системи за производњу рекомбинантне ДНК, могу се користити и прокариотске и еукариотске ћелије. Док се бактеријске ћелије најчешће користе за експресију протеина због фактора као што су ниска цена, лака скалабилност и једноставни услови медија, системи сисара, квасаца, алги, инсеката и без ћелија су успостављене алтернативе. Тип протеина, функционална активност, као и потребан принос експресованог протеина утичу на избор ћелијског система који се користи за експресију протеина.
Да би се експримирао рекомбинантни протеин, одређена ћелија мора бити трансфектована са ДНК вектором који садржи шаблон рекомбинантне ДНК. Ћелије трансфициране шаблоном се затим култивишу. Као последица ћелијског механизма, ћелије транскрибују и преводе протеин од интереса, чиме производе циљани протеин.
Пошто су експримирани протеини заробљени у ћелијском матриксу, ћелија мора бити лизирана (поремећена и разбијена) да би се протеини ослободили. У следећем кораку пречишћавања, протеин се одваја и пречишћава.
Први рекомбинантни протеин коришћен у лечењу био је рекомбинантни хумани инсулин 1982. Данас се широм света производи више од 170 типова рекомбинантног протеина за медицинске третмане. Обично коришћени рекомбинантни протеини који се користе у медицини су на пример рекомбинантни хормони, интерферони, интерлеукини, фактори раста, фактори туморске некрозе, фактори згрушавања крви, тромболитици и ензими за лечење главних болести као што су дијабетес, патуљастост, инфаркт миокарда, конгестивна срчана инсуфицијенција, церебрална апоплексија, мултипла склероза, неутропенија, тромбоцитопенија, анемија, хепатитис, реуматоидни артритис, астма, Кронова болест и терапије рака. (уп. Пхуц В. Пхам, у Омицс Тецхнологиес анд Био-Инжењеринг, 2018)


Литература / Референце

ВиалТвеетер на ултразвучном процесору УП200СТ

ВиалТвеетер соницатор за симултану соникацију 10 узорака, нпр. за поремећење БЛ21 ћелија


Хиелсцхер Ултрасоницс снабдева ултразвучне хомогенизаторе високих перформанси од лабораторијске до индустријске величине.

Ултразвук високих перформанси! Хиелсцхеров асортиман производа покрива читав спектар од компактног лабораторијског ултразвучног апарата преко стоних уређаја до потпуно индустријских ултразвучних система.

Биће нам драго да разговарамо о вашем процесу.

Let's get in contact.