Hielscher ultrazvučna tehnologija

Cell Lysis of BL21 Cells by Ultrasonication

BL21 ćelije su soj ešerihije koli koji se široko koristi u istraživačkim laboratorijama, biotehnologiji i industrijskoj proizvodnji zbog njihove sposobnosti da izraze proteine visoko efikasnim. Prekid ultrazvučnih ćelija, liza i vađenje proteina je uobičajena metoda za izolaciju i prikupljanje ciljanih proteina iz ćelijske unutrašnjosti ćelija BL21. Ultrazvuka u potpunosti remeti ćeliju i oslobađa sve ugušene proteine, čineći 100% proteina dostupnim.

BL21 Ćelije za proteinsko izražavanje

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsBL21 ćelija je hemijski kompetentan E. coli bakterijski soj pogodan za transformaciju i visoko nivo proteinskog izraza koristeći T7 RNK polimeraza-IPTG indukcioni sistem. BL21 ćelije omogućavaju proteinski izraz visoke efikasnosti bilo kog gena koji je pod kontrolom T7 promotera. E. coli soj BL21(DE3) je Soj proizvodnje proteina na bazi T7 RNK u kombinaciji sa vektorima izraza zasnovanim na T7 promoterima i široko se primenjuje u laboratorijama i industriji za proizvodnju rekombinantnog proteina. U BL21(DE3), izraz genskog kodiranja rekombinantnog proteina transkribuje hromozomski kodirani T7 RNK polimeraza (T7 RNKP), koji transkribuje osam puta brže od konvencionalnog E. coli RNKP. To čini soj BL21(DE3) visoko efikasnim i pretvara ga u jedan od najpoželjnijih proteinskih izraza ćelijskih sistema.

Protocol for Ultrasonic Lysis and Protein Extraction from BL21 Cells

Ćelijska liza BL21 ćelija se uglavnom izvodi korišćenjem ultrazvučnosti u kombinaciji sa natrijum lauroyl sarcosinate (poznat i kao sarkosyl) kao bafer za lizu. Prednosti ultrazvučnog poremećaja ćelija i vađenja proteina leže u pouzdanosti, reproduktivnosti kao i jednostavnom, bezbednom i brzom radu ultrazvučnih. Dole navedeni protokol daje korak po korak smer za ultrazvučnu BL21 ćelijsku lizu:

UP200St za Lyze

Ultrazvučni poremećaj ćelija УП200Ст sa mikro savetom S26d2 za vađenje lize i proteina

Захтев за информације




Obratite pažnju na naše Правила о приватности.


  • U cilju uklanjanja proteina pratilaca, BL21 bakterijske kuglice su ponovo zamenjene u 50 ml ledenog hladnog Natrijum Tris-EDTA (STE) bafera (koji se sastoji od 10 mM Tris-HCL, pH 8.0, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl dopunjen sa 100 mM PMSF).
  • Dodaje se 500 ul lizozima (10 mg/ml) i ćelije se inkubišu na ledu 15 min.
  • Nakon toga se dodaje 500 ul DTT-a i 7 ml sarkosila (10% (w/v) sačmištenog u STE baferu).
  • Od suštinskog je značaja da svi baferi za prečišćavanje ostanu ledeni i da sve vreme održavaju uzorke na ledu. Sve korake pročišćenja treba sprovesti u hladnoj sobi ako je moguće.
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • Za ultrazvučnu lizu i vađenje proteina, uzorci su sonični u VialTweeter MultiSample Ultrasonicator za 4 x 30 sec na 100% amplitude sa intervalom od 2 min između svakog sonicationa. Alternativno, ultrazvučni homogenizer tipa sonde sa mikro vrhom npr. УП200Хт sa S26d2 (3 x 30 sec, 2 min. pauza između ultrazvučnih ciklusa, 80% amplitude) može da se koristi.
  • Za dalje korake prečišćavanja, uzorci se moraju čuvati na ledu ili alternativno čuvati na -80°C do dalje obrade.

Ultrazvučna liza pod preciznom kontrolom temperature

Precizna i pouzdana kontrola temperature je ključna prilikom rukovanja biološkim uzorcima. Visoke temperature pokreću toplotno izazvanu degradaciju proteina u uzorcima.
Kao i sve tehnike pripreme mehaničkih uzoraka, sonication stvara toplotu. Međutim, temperatura uzoraka se može dobro kontrolisati prilikom korišćenja VialTweetera. Predstavljamo vam razne opcije za praćenje i kontrolu temperature vaših uzoraka dok ih pripremate sa VialTweeter i VialPress za analizu.

  1. Praćenje temperature uzorka: Ultrazvučni procesor UP200St, koji pokreće VialTweeter, opremljen je inteligentnim softverom i senzorom za dodatnu temperaturu. Priključite senzor temperature u UP200St i ubacite vrh senzora temperature u jednu od uzoraka cevi. Putem digitalno obojenog ekrana osetljivog na dodir, možete da postavite u meniju UP200St određeni temperaturni opseg za vaš uzorak sonication. Ultrazvučnik će se automatski zaustaviti kada se dostigne maksimalna temperatura i pauzirati dok se temperatura uzorka ne spusti na nižu vrednost postavljene temperaturne ∆. Onda se sonikacija ponovo automatski započinje. Ova pametna funkcija sprečava razgradnju izazvanu toplotom.
  2. VialTweeter blok se može unapred ohladiti. Stavite VialTweeter blok (samo sonotrode bez transduktora!) u frižider ili zamrzivač da se prehladi titanijumski blok pomaže da se odloži porast temperature u uzorku. Ako je moguće, i sam uzorak se može unapred ohladiti.
  3. Koristite suvi led da se ohladite tokom sonikacije. Koristite plitku tacnu ispunjenu suvim ledom i stavite VialTweeter na led kako bi se toplota brzo raspršila.

Kupci širom sveta koriste VialTweeter i VialPress za svakodnevni rad na pripremi uzoraka u biološkim, biohemijskim, medicinskim i kliničkim laboratorijama. Inteligentni softver i kontrola temperature UP200St procesora, temperatura je pouzdano kontrolisana i izbegnuta je degradacija uzoraka izazvanih toplotom. Ultrazvučni preparat uzorka sa VialTweeter i VialPress daje veoma pouzdane i reproduktivne rezultate!

Pronađite Optimal ultrazvučni disruptor za aplikaciju Lysis

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher Ultrasonics je dugogodišnji iskusni proizvođač ultrazvučnih ćelijskih poremećaja visokih performansi i homogenizatora za laboratorije, sisteme vrhunskih i industrijskih razmera. Veličina bakterijske kulture ćelija, vaš cilj istraživanja ili proizvodnje i obim ćelije za obradu po satu ili danu su osnovni faktori za pronalaženje pravog ultrazvučnog poremećaja ćelija za vašu primenu.
Hielscher Ultrasonics nudi razna rešenja za istovremenu sonikuaciju više uzoraka (do 10 bočica sa VialTweeterom) i masovne uzorke (mikrotiter ploče / ELISA ploče sa UIP400MTP), kao i klasični laboratorijski ultrazvučni tip sonde sa različitim nivoima energije od 50 do 400 vati do potpuno industrijskih ultrazvučnih procesora sa do 16.000vata po jedinici za poremećaj komercijalnih ćelija i vađenje proteina u velikoj proizvodnji. Svi Hielscher ultrazvučnici su napravljeni za 24/7/365 operaciju pod punim opterećenjem. Robustnost i pouzdanost su osnovne karakteristike naših ultrazvučnih uređaja.
Svi digitalni ultrazvučni homogenizatori opremljeni su pametnim softverom, obojenim ekranom osetljivim na dodir i automatskim protokolanjem podataka, što ultrazvučni uređaj pretvara u pogodan radni alat u laboratorijskim i proizvodnim pogonima.
Obavestite nas, kakve ćelije, koji volumen, sa kojom frekvencijom i sa kojim ciljem morate da obradite svoje biološke uzorke. Preporučićemo vam najpogodniji ultrazvučni poremećaj ćelija za vaše procesne zahteve.

Sledeća tabela vam daje pokazatelj približnog kapaciteta obrade naših ultrazvučnih sistema od kompaktnih ručnih homogenizatora i MultiSample ultrazvučnih procesora do industrijskih ultrazvučnih procesora za komercijalne aplikacije:

батцх tom Проток Препоручени уређаји
96-well / mikrotiter ploče Н.А. UIP400MTP
10 bočica à 0,5 do 1,5mL Н.А. Vialvajer na UP200St
0.01 do 250mL 5 do 100mL/min УП50Х
0.01 do 500mL 10 до 200мЛ / мин УП100Х
10 до 2000мЛ 20 до 400мЛ / мин УП200Хт, УП400Ст
0.1 до 20Л 0.2 до 4Л / мин УИП2000хдТ
10 до 100Л 2 до 10Л / мин UIP4000hdT
Н.А. 10 до 100Л / мин УИП16000
Н.А. веће кластер УИП16000

Контактирајте нас! / Питајте нас!

Traži više informacija

Koristite donji obrazac da biste zatražili dodatne informacije o Ultrason, procesorima, aplikacijama i ceni. Biće nam drago da razgovaramo o vašem procesu sa vama i da vam ponudimo ultrasonični sistem koji ispunjava vaše zahteve!









Molimo vas da zabeležite naše Правила о приватности.


Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

Ултрасоникатор УП200Хт sa mikrotipom od 2mm S26d2 za sonikaciju malih uzoraka

Literatura/reference



Чињенице вреди знати

Bakterija Ešerihija Koli

Ešerihija koli je tip bakterija, koji se ne formira spore, Gram-negativan je i odlikuje ga njegov oblik ravne šipke. Bakterije E.coli su prisutne u okruženju, hrani i crevima ljudi i životinja. E. koli je obično motivisan korišćenjem peritrihous flagele, ali postoje i nemotilni tipovi. E.coli su takozvani fakultativno anaerobni hemorganotrofni organizmi, što znači da su sposobni i za respiratorni i za fermentativni metabolizam. Većina vrsta ešerihije koli su dobroćudne i ispunjavaju korisne funkcije u organizmu, npr. suzbijaju rast štetnih bakterijskih vrsta, sintetišu vitamine i sl..
Bakterija Escherichia coli ćelije takozvanog tipa B su posebna kategorija sojeva E.coli, koji se uveliko koriste u istraživanjima za istraživanje mehanizama kao što su osetljivost na bakteriofage ili sistemi za modifikaciju ograničenja. Pored toga, bakterije E.coli se vrednuju kao pouzdani radni konj za proteinsko izražavanje u biotehnologiji i laboratorijama za nauku o životu. Na primer, E.coli se koristi za sintezu jedinjenja kao što su proteini i oligosaccharides na industrijskom nivou. Zbog specifičnih karakteristika kao što su nedostatak proteaze, niska proizvodnja acetata na visokom nivou glukoze i poboljšana promastabilnost, E. coli B ćelije su koje najčešće koristi ćelije domaćina za proizvodnju genetski modifikovanih proteina.

Rekombinantni proteini

Rekombinantni proteini (rProt) dobijaju na značaju u granama manifolda, uključujući hemijsku proizvodnju, farmaceutsku, kozmetičku, ljudsku i životinjsku medicinu, poljoprivredu, hranu, kao i industriju tretmana otpada.
Proizvodnja rekombinantnog proteina zahteva upotrebu sistema izraza. Kao izražavanje ćelijskih sistema za proizvodnju rekombinantne DNK, mogu se koristiti i prokariotičke i eukariotičke ćelije. Dok se bakterijske ćelije najšire koriste za proteinsko izražavanje zbog faktora kao što su niska cena, laka skalabilnost i jednostavni medijski uslovi, sisar, kvasac, alge, insekti i sistemi bez ćelija su uspostavljene alternative. Tip proteina, funkcionalna aktivnost, kao i zahtevani prinos izraženih proteina utiču na izbor ćelijskog sistema koji se koristi za proteinsko izražavanje.
Da bi se izrazio rekombinantni protein, određena ćelija mora biti transficirana DNK vektorom koji sadrži predložak rekombinovane DNK. Ćelije koje su zaražene predloškom se zatim kulturiraju. Kao posledica ćelijskog mehanizma, ćelije transkribuju i prevode protein interesovanja, čime se proizvodi ciljani protein.
Kako su izraženi proteini urezani u ćelijsku matricu, ćelija mora biti lisnata (poremećena i polomljena) da bi se oslobodili proteini. U koraku pročišćenja koji je usledio, protein se odvaja i pročišćaje.
Prvi rekombinantni protein koji je korišćen u lečenju bio je rekombinantni ljudski insulin 1982. Danas se širom sveta proizvodi više od 170 vrsta rekombinantnih proteina za medicinske tretmane. Najčešće korišćeni rekombinantni proteini koji se koriste u medicini su na primer rekombinantni hormoni, interferoni, interleukins, faktori rasta, faktori nekroze tumora, faktori zgrušavanja krvi, trombolitički lekovi i enzimi za lečenje velikih bolesti kao što su dijabetes, patuljak, infarkt miokarda, kongestivni srčani zastoj, cerebralna apopleksija, multiple skleroza, neutropenija, trombocitopenija, anemija, hepatitis, reumatoidni artritis, astma, (cf. Phuc V. Pham, in Omics Technologies and Bio-Engineering, 2018)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Ultrazvuk visokih performansi! Hielscher-jev proizvodni asortiman pokriva pun spektar od kompaktnog laboratorijskog ultrazvuka preko klupa-vrhunskih jedinica do full-industrijskih ultrazvučnih sistema.