Пуферски раствори припремљени ултразвучном обрадом

Пуфери за лизу могу се ефикасно и брзо припремити помоћу ултразвучних хомогенизатора ткива. Пошто су ултразвучни уређаји идеалан алат за мешање, растварање и дисперговање, омогућавају поуздану и једноставну припрему пуфера за лизу.

Ултразвучна припрема пуфера за лизу

Ултразвучни хомогенизатори ткива уобичајен су алат за разарање ћелија, лизу и екстракцију, па су доступни у већини лабораторија. Додатна примена ултразвучних уређаја са сондом јесте припрема пуфера за лизу.

Пуфер за лизу је раствор који се користи за разарање (лизу) ћелија и ослобађање њиховог садржаја за накнадну анализу. Конкретан састав пуфера за лизу може се разликовати у зависности од врсте ћелија које се лизирају и накнадне примене. Међутим, типичан пуфер за лизу садржи компоненте као што су детерџенти, соли и инхибитори протеаза. Пуферске соли (нпр. Tris-HCl) и јонске соли (нпр. NaCl) обично се користе за регулисање pH вредности и осмоларности лизата.
За припрему пуфера за лизу, компоненте се мешају у одговарајућим концентрацијама и при одговарајућој pH вредности. Смеша се обично меша мешалицом или протреса док се компоненте не растворе и раствор не постане хомоген.
Ултразвучна хомогенизација је метода која може помоћи у припреми доброг пуфера за лизу побољшањем мешања и растварања компоненти. У овој методи на смешу се примењују ултразвучни таласи – обично у опсегу од 20 до 30 kHz – чиме се стварају кавитациони мехурићи који колабирају и локално ослобађају интензивну енергију, што доводи до механичког смицања и мешања компоненти.
Процес ултразвучне хомогенизације може помоћи у разбијању свих грудвица или агрегата компоненти и обезбедити равномерно мешање раствора. Стога овако побољшан пуфер за лизу може довести до ефикаснијег разарања ћелија и већих приноса екстрахованог материјала. Поред тога, ултразвучна хомогенизација може скратити време потребно за припрему пуфера за лизу у поређењу са традиционалним методама мешања мешалицом или протресања.
У целини, ултразвучна хомогенизација је моћан алат за побољшање квалитета и ефикасности припреме пуфера за лизу.

Протокол за ултразвучну припрему пуфера за лизу

Ово је општи протокол за припрему пуфера за лизу помоћу ултразвучног уређаја са сондом:
 
Материјали:

• Детерџент(и) по избору (нпр. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Со(ли) по избору (нпр. NaCl, KCl)
• Инхибитори протеаза (нпр. PMSF, апротинин, леупептин)
• Ултразвучни уређај
• Мешалица
• Дејонизована вода
• pH метар или pH траке

 
 
Упутства корак по корак:

1. Одредите састав пуфера за лизу на основу ћелија или ткива које ћете лизирати и накнадних примена за које ћете користити лизат. Припремите основне растворе детерџената, соли и инхибитора протеаза у жељеним концентрацијама.
2. Додајте основне растворе детерџената, соли и инхибитора протеаза у лабораторијску чашу или тиквицу.
3. Додајте дејонизовану воду до жељене запремине пуфера.
4. Помешајте компоненте помоћу мешалице да бисте добили претходно измешан раствор.
5. Измерите pH вредност пуфера помоћу pH метра или pH трака и по потреби је подесите малим количинама киселине или базе.
6. Користите ултразвучни уређај са сондом за хомогенизацију претходно измешаног раствора како бисте добили веома хомоген раствор. У ту сврху, соницирајте раствор неколико секунди док се потпуно не измеша и све грудвице или агрегати не разбију. Трајање и снага соникације могу се оптимизовати према конкретном пуферу за лизу и коришћеном ултразвучном уређају.
7. Након ултразвучне обраде, поново измерите pH вредност пуфера и подесите је по потреби.
8. Филтрирајте пуфер кроз филтер од 0,2 микрона да бисте уклонили све остатке или агрегате који су можда настали током соникације.
9. Пуфер за лизу је сада спреман за употребу.

 
Напомена: Тачан састав и pH вредност пуфера за лизу могу се разликовати у зависности од ћелија или ткива које се лизира и накнадних примена. Наведени протокол представља општу смерницу и можда ће бити потребно оптимизовати га за специфичне примене.
 
Ултразвучни хомогенизатори се обично користе за разарање ћелија и екстракцију унутарћелијских молекула. Зато се у многим применама лизе соникација помоћу сонде користи не само за припрему пуфера за лизу већ и за механичко разарање ћелија и екстракцију.
То чини ултразвучне хомогенизаторе ткива свестраним алатом за лабораторије и објашњава широку употребу ултразвучних уређаја у микробиологији, биотехнологији и наукама о животу.

Ултразвучни лабораторијски хомогенизатори

Hielscher Ultrasonics производи и испоручује ултразвучне хомогенизаторе и сонде (сонотроде) различитих називних снага за различите запремине узорака. То нам омогућава да вам понудимо најпогоднији ултразвучни уређај за разарање ћелија за припрему ваших узорака. Усредсређени смо на највиши квалитет, изузетну удобност при коришћењу и поуздане резултате соникације. Сви дигитални ултразвучни уређаји имају паметан софтвер, могућност програмирања и претходног подешавања протокола соникације, даљинско управљање преко прегледача, контролу температуре, осветљење узорка, као и аутоматско бележење података на уграђену SD картицу.

Пројектовање, производња и саветовање – квалитет произведен у Немачкој

Ултразвучни уређаји Hielscher познати су по највишим стандардима квалитета и пројектовања. Робусност и једноставно руковање омогућавају несметану интеграцију наших ултразвучних уређаја у индустријска постројења. Ултразвучни уређаји Hielscher лако раде у тешким условима и захтевним окружењима.

Hielscher Ultrasonics је компанија са ISO сертификатом која посебан нагласак ставља на ултразвучне уређаје високих перформанси са најсавременијом технологијом и једноставним коришћењем. Наравно, ултразвучни уређаји Hielscher усаглашени су са CE захтевима и испуњавају захтеве UL, CSA и RoHs.

Табела у наставку даје преглед наших различитих лабораторијских ултразвучних уређаја: