Lizisni baferi se mogu efikasno i brzo pripremiti pomoću homogenizatora ultrazvučnog tkiva. S obzirom na to da su ultrazvučni sredstva iz snova za mešanje, rastvaranje i raspršivanje, omogućavaju pouzdanu i korisnički prihvatljivu pripremu bafera od lize.

Ultrazvučna priprema Lysis Bafera

Homogenizeri ultrazvučnog tkiva su uobičajeno sredstvo za poremećaj ćelija, lizu i vađenje, stoga su dostupni u većini laboratorija. Sekundarna aplikacija za ultrazvučne tip sonde je priprema bafera za lizu.

Bafer lize je rešenje koje se koristi za razbijanje otvorenih (lisnih) ćelija i oslobađanje njihovog sadržaja za nizvodnu analizu. Specifičan sastav bafera za lizu može da se razlikuje u zavisnosti od tipa ćelija koje se lise i aplikacije nizvodno. Međutim, tipičan bafer za lizu sadrži komponente kao što su deterdženti, soli i inhibitori proteasa. Bafering soli (npr. Tris-HCl) i ionic soli (npr. NaCl) se obično koriste za regulisanje pH i osmolarnosti lisata.
Da bi se napravio bafer od lize, komponente se mešaju u odgovarajuće koncentracije i pH. Smesa se obično meša ili trese dok se komponente ne rastvore i rastvor ne bude homogen.
Ultrazvučna homogenizacija je metoda koja se može koristiti za pravljenje dobrog bafera od lize poboljšanjem mešanja i razgradnje komponenti. Ovom metodom ultrazvučni talasi – normalno u rasponu od 20 do 30 kHz – primenjuju se na mešavinu, što stvara mehuriće kavitacije koji urušavaju i generišu intenzivnu lokalnu energiju, što dovodi do mehaničkog šmeka i mešanja komponenti.
Proces ultrazvučne homogenizacije može pomoći da se razdvoje sve grudvice ili agregati komponenti, kao i da se osigura ravnomerno pomešano rešenje. Shodno tome, tako unapređeni bafer za lizu može dovesti do efikasnijeg poremećaja ćelija i većih prinosa izdvojenog materijala. Pored toga, ultrazvučna homogenizacija može da skrati vreme potrebno za pravljenje bafera od lize u poređenju sa tradicionalnim metodama komešanja ili drhtanja.
Sve u svemu, ultrazvučna homogenizacija je moćno sredstvo za poboljšanje kvaliteta i efikasnosti pripreme lisis bafera.

Protokol za pripremu ultrazvučnog Lysis Bafera

Ovo je opšti protokol za pravljenje bafera za lizu pomoću ultrazvučnog tipa sonde:
 
Materijala:

• Deterdžent po izboru (npr. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• So po izboru (npr. NaCl, KCl)
• Inhibitori protease (npr. PMSF, aprotinin, leupeptin)
• Ултрасоникатор
• stirrer
• Deionizovana voda
• pH metar ili pH trake

 
 
Uputstva "korak po korak":

1. Odredite sastav bafera za lizu na osnovu ćelija ili tkiva koje ćete lizati, kao i nizvodne aplikacije za koje ćete koristiti lisnato. Pripremite berzanske rastojače deterdženata, soli i inhibitora proteza na željene koncentracije.
2. Dodajte berzanske rastojače deterdženta, soli i inhibitora proteasa u dak ili pljosku.
3. Dodajte deionizovanu vodu da biste zapreminu sveli na željenu količinu bafera.
4. Pomešajte komponente koristeći mešalicu da biste dobili pred-miks rastvor.
5. Izmerite pH bafera koristeći pH metar ili pH trake, a pH podesite po potrebi sa malim količinama kiseline ili baze.
6. Koristite ultrazvučni tip sonde da homogenizujete pred-mix rastvor tako da se dobije visoko homogeno rešenje. Stoga, sonicirajte rešenje na nekoliko sekundi dok se rešenje temeljno ne pomeša i dok se sve grudvice ili agregati ne razbiju. Trajanje i moć sonikacije mogu se optimizovati na osnovu specifičnog bafera lize i ultrazvučnog koji se koristi.
7. Nakon ultrazvukanja, ponovo izmerite pH bafera i prilagodite po potrebi.
8. Filtrirajte bafer kroz filter od 0,2 mikrona da biste uklonili sve krhotine ili agregate koji su možda nastali tokom sonication.
9. Bafer za lizu je sada spreman za upotrebu.

 
Napomena: Tačan sastav i pH bafera za lizu mogu da se razlikuju u zavisnosti od ćelija ili tkiva koje se lizira i nizvodne primene. Gorenavedeni protokol je opšte uputstvo i možda će biti potrebno da bude optimizovan za određene aplikacije.
 
Ultrazvučni homogenizatori se obično koriste za prekid ćelija i vađenje intracelularnih molekula. Zbog toga mnoge aplikacije za lizu koriste soniciju tipa sonication ne samo za pripremu bafera za lizu, već i za mehanički poremećaj ćelija und extraction.
To ultrazvučno tkivo homogenizera čini svestranim sredstvom za laboratorije i objašnjava široku upotrebu ultrazvučnih u mikrobiologiji, biotehnologiji i životnoj nauci.

ultrasonični homogenizeri

Hielscher Ultrasonics proizvodi i snabdeva ultrazvučne homogenizatore i sonotrode (sonotrode) na različitim ocenama napajanja i volumenima uzoraka. Ovo nam omogućava da vam ponudimo najpogodniji ultrazvučni disruptor za vašu pripremu uzorka. Fokusiramo se na najkvalitetnije, izvanredne rezultate korisničke udobnosti i pouzdane sonikacije. Svi digitalni ultrazvučnici sadrže pametni softver, programiranje i pred-podešavanje protokola sonication, daljinski upravljač pregledača, kontrolu temperature, osvetljenje uzorka kao i automatsko snimanje podataka na ugrađenoj SD kartici.

Dizajn, proizvodnja i konsalting – Kvalitet napravljen u Nemačkoj

Hielscher ultrazvučni su dobro poznati po najvišim standardima kvaliteta i dizajna. Robustnost i lak rad omogućavaju nesmetanu integraciju naših ultrazvučnika u industrijske objekte. Grubim uslovima i zahtevnim okruženjima lako rukohvate Hielscher ultrazvučnici.

Hielscher Ultrasonics je ISO sertifikovana kompanija i poseban akcenat stavlja na ultrazvučnike visokih performansi koji sadrže vrhunsku tehnologiju i user-friendliness. Naravno, Hielscher ultrazvučni su CE usaglašeni i ispunjavaju zahteve UL, CSA i RoHs.

The table below gives you an overview of our various lab ultrasonicators: