Пуферски раствори припремљени уз помоћ ултразвука

Пуфери за лизу могу се ефикасно и брзо припремити коришћењем ултразвучних хомогенизатора ткива. Пошто су ултрасоникатори алат из снова за мешање, растварање и дисперговање, они омогућавају поуздану и лаку припрему пуфера за лизу.

Ултразвучна припрема пуфера за лизу

Ултразвучни хомогенизатори ткива су уобичајено средство за разбијање ћелија, лизу и екстракцију, стога су доступни у већини лабораторија. Секундарна примена за ултрасоникаторе типа сонде је припрема пуфера за лизу.

Пуфер за лизу је раствор који се користи за разбијање (лизу) ћелија и ослобађање њиховог садржаја за низводну анализу. Специфични састав пуфера за лизу може да варира у зависности од типа ћелија које се лизирају и даље примене. Међутим, типичан пуфер за лизу садржи компоненте као што су детерџенти, соли и инхибитори протеазе. Пуферске соли (нпр. Трис-ХЦл) и јонске соли (нпр. НаЦл) се обично користе за регулисање пХ и осмоларности лизата.
Да би се направио пуфер за лизу, компоненте се мешају заједно у одговарајућим концентрацијама и пХ. Смеша се обично меша или мућка док се компоненте не растворе и раствор не постане хомоген.
Ултразвучна хомогенизација је метода која се може користити за стварање доброг пуфера за лизу побољшањем мешања и растварања компоненти. У овој методи, ултразвучни таласи – нормално у опсегу од 20 до 30 кХз – се наносе на смешу, што ствара кавитационе мехуриће који колабирају и стварају интензивну локалну енергију, што доводи до механичког смицања и мешања компоненти.
Процес ултразвучне хомогенизације може помоћи да се разбију било какве грудвице или агрегати компоненти и да се обезбеди да је раствор уједначено помешан. Сходно томе, такав побољшани пуфер за лизу може довести до ефикаснијег прекида ћелија и већег приноса екстрахованог материјала. Поред тога, ултразвучна хомогенизација може смањити време потребно за прављење пуфера за лизу у поређењу са традиционалним методама мешања или мућкања.
Све у свему, ултразвучна хомогенизација је моћно средство за побољшање квалитета и ефикасности припреме пуфера за лизу.

Протокол за припрему пуфера за ултразвучну лизу

Ово је општи протокол за прављење пуфера за лизу помоћу ултразвучног апарата типа сонде:
 
Материјали:

• Детерџент(и) по избору (нпр. Тритон Кс-100, СДС, ЦХАПС)
• Со по избору (нпр. НаЦл, КЦл)
• Инхибитори протеазе (нпр. ПМСФ, апротинин, леупептин)
• ултрасоницатор
• Мешалица
• Дејонизована вода
• пХ метар или пХ траке

 
 
Корак по корак упутства:

1. Одредите састав пуфера за лизу на основу ћелија или ткива које ћете лизирати и низводних апликација за које ћете користити лизат. Припремите основне растворе детерџената, соли и инхибитора протеазе у жељеним концентрацијама.
2. Додајте основне растворе детерџената, соли и инхибитора протеазе у чашу или балон.
3. Додајте дејонизовану воду да доведете запремину до жељене количине пуфера.
4. Мешајте компоненте помоћу мешалице да бисте добили раствор претходног мешања.
5. Измерите пХ пуфера помоћу пХ метра или пХ трака и прилагодите пХ по потреби малим количинама киселине или базе.
6. Користите ултрасоникатор типа сонде да хомогенизујете раствор претходног мешања тако да се добије високо хомоген раствор. Због тога, соникирајте раствор неколико секунди док се раствор темељно не измеша и све грудвице или агрегати се не разбију. Трајање и снага ултразвучне обраде могу се оптимизовати на основу специфичног пуфера за лизу и ултрасоникатора који се користи.
7. Након ултразвучне обраде, поново измерите пХ пуфера и прилагодите га по потреби.
8. Филтрирајте пуфер кроз филтер од 0,2 микрона да бисте уклонили све остатке или агрегате који су се могли формирати током ултразвучне обраде.
9. Пуфер за лизу је сада спреман за употребу.

 
Напомена: Тачан састав и пХ пуфера за лизу могу да варирају у зависности од ћелија или ткива које се лизирају и од примене низводно. Горњи протокол је опште упутство и можда ће бити потребно да буде оптимизован за специфичне апликације.
 
Ултразвучни хомогенизатори се обично користе за разбијање ћелија и екстракцију интрацелуларних молекула. Због тога многе апликације за лизу користе соникацију типа сонде не само за припрему пуфера за лизу, већ и за механичко уништавање и екстракцију ћелија.
Ово чини ултразвучне хомогенизаторе ткива свестраним алатом за лабораторије и објашњава широку употребу ултразвучних апарата у микробиологији, биотехнологији и науци о животу.

Ултразвучни лабораторијски хомогенизатори

Хиелсцхер Ултрасоницс производи и испоручује ултразвучне хомогенизаторе и сонде (сонотроде) са различитим оценама снаге и запреминама узорака. Ово нам омогућава да вам понудимо најпогоднији ултразвучни дисруптор за припрему узорка. Фокусирамо се на највиши квалитет, изванредну удобност корисника и поуздане резултате соникације. Сви дигитални ултрасоникатори поседују паметни софтвер, програмирање и претходно подешавање протокола соникације, даљинско управљање претраживачем, контролу температуре, осветљење узорка као и аутоматско снимање података на уграђену СД картицу.

Дизајн, производња и консалтинг – Квалитет Маде ин Германи

Хиелсцхер ултрасоникатори су познати по свом највишем квалитету и стандардима дизајна. Робусност и једноставан рад омогућавају несметану интеграцију наших ултразвучних апарата у индустријске објекте. Хиелсцхер ултрасоникатори се лако носе са тешким условима и захтевним окружењима.

Хиелсцхер Ултрасоницс је ИСО сертификована компанија и ставља посебан нагласак на ултрасоникаторе високих перформанси са најсавременијом технологијом и једноставношћу за коришћење. Наравно, Хиелсцхер ултрасоникатори су усаглашени са ЦЕ и испуњавају захтеве УЛ, ЦСА и РоХ.

Табела у наставку вам даје преглед наших различитих лабораторијских ултразвучних апарата: