Hielscher ultrazvučna tehnologija

Ултразвучна екстракција протеина из култура ткива и ћелија

  • Ekstrakcija proteina je suštinski preparat za pripremu u proteomici.
  • Proteini se mogu izdvojiti iz biljnih i životinjskih tkiva, obala i mikroorganizama.
  • Soniranost je pouzdan, efikasan metod ekstrakcije proteina i daje visok rast proteina u kratkom vremenskom periodu.

 

Proteini iz tkiva i ćelija

Proteini iz tkiva i Kultivisana ćelija je suštinski probni preparat koji se izvodi tokom brojnih biohemijskih i analitičkih tehnika kao što je ELISA, strana Zapadna bloza, masovni spektrometrija ili čišćenje proteina. Ultrazvučna poremećenost ćelija, tekstovi i vađenje je precizno moguće kontrolisati da se obezbedi visok prinosi proteina.

Proteini iz životinjskih tkiva

Za pripremu cijelog tkiva (npr. bubreg, srce, pluća, mišića itd.), tkivo treba da se raspadne u veoma male figure sa čistim alatima, na ledu, a što je pre moguće da bi se sprečilo degradacija proteaze (npr. bafer za litis, kao što je RIPA ili hidpotonski bafer koji sadrži protezu i izlizanje inhibitorskog koktela. Nakon što se raspadne, uzorak se pretvara u tečni azotan za zamrzavanje. Uzorak može da se uskladišti na-80 ° c za kasniju upotrebu ili da bude na ledu za neposrednu homogenizaciju. Neposredno pre ultrazvučne ekstrakcije, sladoledni limfni međuspremnik (sa protezom i inhibaze DTT, leupeptin i aprotinin) se brzo dodaje u probnu cev (po ~ 10 mg od tkiva u kojima je otprilike. ~ 600 μL bafera se preporučuje). Oko 20-60mg tkiva se preporučuje po probnoj cevi.
Ultrasonični Homogenizacija, limfna i ekstrakcija vrši se sa ultrasonnim homogenatorom kao što je УП200Хт или УП200Стopremljenu od mikro-tipskih sonotona. Trajanje soniranost je 60-90 sec. u ultrasonnom režimu od 15 sec. sonacija i 10 sec. vreme odmora. Uzorak bi trebalo da se stalno čuva na ledu.
Nakon ultrasonove homogenizacije, lysate je na oko 27, 000g za oko 20 min. nakon prikupljanja supernatenta, tako da koncentracija proteina može da se odredi od strane proteina, kao što je Pirs protein asinhron.

"Sonacija proteina" je važan metod pripreme uzorka

Ultrasonični proteini iz ćelija sa УП200Ст

Захтев за информације




Obratite pažnju na naše Правила о приватности.


Proteini iz krvne serum

Za homogeniju mešavinu serum i bafera fosfata, uzorak je prvo prvi put pre ultrazvučne ultrasonirane ćelije. Za ultrasonovu lyzu, uzorak je sonan sa ultrasonični homogenizer, kao što je УП100Х za 8 ciklusa na 20%, za cikluse svakih 5 sekundi i 15 sekundi. Sonocation vrši sonicationg u ciklusima i postavljanjem uzorka na led tako da se izbegne pregrejavanje i termička degradacija uzorka. Pošto serum sadrži veliku količinu visoko molekularne težine belančevina (kao što su Albumin, α1-antimripsin, transferrin, haptoglobulin, imunoglobulin G i imunoglobulin a), koji se meša u odvajanje low-molekularnih masa proteina tokom IEF, Preporučuje se da ih iscrpi iz serum koristeći kolonu sa pletionom.

Vađenje proteina iz biljnih tkiva

Sveže, meke biljne tkivo, npr. mahovina, lako se može poremećati jednostavnim postavljanjem iseckanog uzorka materijala u bafer za soniranost. Gruba, ligoznih biljnih tkiva, kao što su Seme, jela i Dr. Neki tvrde, Woody biljni materijali moraju biti zamrznuti i prizemljiti u tečnim azikima pre nego što ih je vadila. Za suspenzije biljnih kultura, ultrasonični tretman između 30 i 150 sekunde u baferu lysis je uglavnom dovoljan. Stroži materijal, kao što je seme bundeve, zahteva intenzivniju sonaciju kao što je opisano ispod.

Protokol za ultrasonovo vađenje albumona iz semena bundeva

Ultrasonični homogenizer UP400St sa S24d40-za vađenje proteina iz biljnih i životinjskih tkiva (kliknite da biste povećali!)Za ultrasonovu ekstrakciju albumina iz fino-mlevenog semena bundeva, 10 g "mlevenog semena bundeva" i 100 mL od deformovane vode kao Solvent dodaju se u staklu od 250mL. Ekstrakcija proteina se sastoji u dva koraka: prvo, uzorak je u sontu sa ultrasonicatorom tipa sa istragom UP400St (400W, 24kHz) sa postavljenim sonotjahom S24d7. Staklena peraker smeštena je u smrznuku vodu tokom ultrasonne homogenizacije. Postavka ultrasonicatora УП400Ст pomoću senzora temperature koja se može osigurati da se probna temperatura uvek čuva ispod 30 ° c. Po preciznoj kontroli temperature tokom sonacija izbegnuta je poricanje albumina. Drugo, izdvajanje je izvršeno sa miksera u 200 RPM brzine i na 30 ° c. Nakon toga se pčelar pretvara u termostatik. Globulin se uklanja preko dijalize sa destilom vodom. Nakon što se globulina ukloni, izvod proteina može biti namenjen za određivanje belančevina profila i naknadno se podešava na pI = 3.0 koristeći 0,1 M HCL za belančevina koagulaciju. Čvrsta faza je odvojena od strane centrifugalizacije 5000g, 20 ° c i ponovo se rešenog u dejonizovanom vodu. Belančevina koagulacija se vrši dva puta da bi se povećao odnos proteina u belančevina koncentraciji.

Ultrazvučni ekstrakti proteina za pripremu proteina koncentrat iz Bran pokazuje da ultrasonični tretman rezultira višim protezom u znatno kraćim vremenskim vremenom – u poređenju sa konvencionalnim metodama izdvajanja.

Ultrasonični Vibalvajer za vađenje proteina od uzoraka tkiva (kliknite da biste povećali!)

ВиалТвеетер za indirektne sonsikaciju.

Prednosti

  • Brzo
  • Visoki prinosi
  • Vrlo efikasno
  • Precizna kontrola parametara
  • Ponovno produktivljiv rezultati
  • Линеарна скалабилност

Probni protokol za funkcionalno iNOS enme

Da biste dobili potpuno funkcionalan iNOS enme (npr. za prikazivanje droge), preporučuje se sledeći protokol: suspenzija ćelije treba staviti na led i na Sonu УП100Х od 10μm pojačanja u ciklični režim 5 sec. sonacija i 25 sec. odmori se na ledu. Procedura treba da se ponovi oko tri puta. Vreme odmora u periodu između sonsikacija smanjuje temperaturno povećanje i samim tim umanjuje rizik od denatanja.

Ultrazvučna Solsonizacija

Soniranost mogu ubrzati proces solubilizacije proteina, koji obično zahteva nekoliko sati. Da ne biste pregoreli uzorak i sprečili degradaciju proteina i modifikacije u rešenjima koja sadrže Urea, ultrasonični burni ne traju duže od nekoliko sekundi.

Opšta uputstva

Kontrola temperature: Da bi se obezbedila visoka proteina bez termo-denatacije, temperature se moraju kontrolisati tokom izdvajanja. Hielscher, najmoderniji ultrasonični homogeneri – Takođe se zove ultrasonični Disintegrator ili sonifikator – su precizno kontrolisano. Dolaze sa senzorskim senzorima. U opcijama za postavljanje ultrasonne homogenera može se postaviti maksimalna temperatura. Kada se dostigne ova temperatura, ultrasonator se automatski zaustavlja dok se uzorak ne ohladi.
Bafer: Korišćenje odgovarajućeg bafera i pravog obima bafera varira od tkiva do tkiva i mora biti odjavljan putem ispitivanja probne i greške.
Izolacija/pročišćavanja: Proteini mogu da sadrže višak biomolekula, kao što su DNK ili ugljenih hidrata, koji mogu biti uklonjeni od strane proteina (deokykolata-trihloroaktička kiselina) ili razmene bafera.

"Chittapalo" i Noomhorm (2009) su izvestili da je prinos proteina povećan uz korišćenje sonacija i da proces ultrasonove tkiva i limfne obrade može značajno da poboljša postojeće procese izdvajanja – Omogućavanje novih poslovnih prilika za izdvajanje.

Zaštita od zvuka kod Hielscher-a je UP200St-L i ultrasonični uređaj. (Kliknite da biste uvećali!)

Ultrasonični homogenizer tkiva УП200Ст za efikasno vađenje proteina

Precizna kontrola ultrasonovog tretmana (klikni za uvećanje!)

Kontrola pregledača za preciznu operaciju i praćenje procesa soniranost

Ultrazvučna oprema za vađenje proteina

Hielscher Ultrasonics nudi širok spektar ultrasonovih homogeničara za dezificorove ćelija, tkiva, bakterije, mikroorganize, kvasca i spore.
Hielscher lab ultrasonicator je moćan i lak za rad. Stvoren za 24/7 operacije, dizajnirani su kao robusne i efikasne laboratorije i vrhunski uređaji. Za sve uređaje, proizvodnja energije i pojačanje može precizno da se kontroliše. Širok spektar Прибор otvara dodatne opcije instalacije. Digitalni uređaji kao što su ВиалТвеетер, УП200Хт, УП200Ст, и УП400Ст Imate integrisanu kontrolu temperature i ugrađenu SD karticu za automatsko zapisivanje podataka.
Za indirektno, unakrsno Kontaminiranje i simultano soniranje više uzoraka, nudimo vam ВиалТвеетер ili u Ultrasonični CupHorn.
U zavisnosti od aplikacije, materijala i uzorka volumena, preporučujemo vam najprikladnije Podešavanje za vaš probni avans. Kontaktirajte nas danas!

Контактирајте нас! / Питајте нас!

Молимо вас да користите образац испод, ако желите да затражите додатне информације о ултразвучној хомогенизацији. Биће нам драго да вам понудимо ултразвучни систем који одговара вашим захтевима.









Molimo vas da zabeležite naše Правила о приватности.


Литература / Референце

  • "Chittapalo T", Noomhorm A (2009): Ultrasonpomagao sulfidno vađenje proteina od prenetih Bran i imovine proteina smjese. INT J food sci tehnol 44:1843 – 1849.
  • Simões, André E. S:; Pereira, Diane M.; Amaral, Joana D.; Nunes, Ana F. Gomes, Sofija E.; Rodrigrez, Pedro. Lo, Adrian C.; D ' Hodž, Rudi; Pod, Kliford J.; Thibodoravan, Stiven N.; Borralho, Pedro M.; Rodrigrez, Cecília M.P. (2013): efikasan oporavak proteina iz više izvornih uzoraka nakon trizola ili trizol-a i dugoročnog skladišnog prostora. BMC Genomics 2013, 14:181.


Чињенице вреди знати

Proteomici

Proteomika je istraživački teren koji istražuje proteine i proteoma. Proteini imaju veliki niz vitalnih funkcija u organizama. Proteoma je celokupan skup proteina koje su u određenom trenutku izražavali genoma, ćelija, tkivo ili organizam. Proteoma varira u odnosu na vreme i posebne zahteve, ili naglašava da ćelija ili organizam prolazi. Preciznije, to je skup izraženu proteina u datom tipu ćelije ili organizma, u datom trenutku, pod definisanim uslovima. Pojam je mešavina proteina i genoma. Proteomika je studija proteoma.

Proteina

Proteini su veliki biomolekuli, takozvani makromolekuli – koje se sastoje od jednog ili više dugih lanaca amino kiseline. Belančevine su prisutne u svim organizama vegetalnog i životinjskog porekla i od presudnog su značaja za većinu bioloških funkcija. S obzirom da proteini sadrže mnogo bioloških informacija, oni su izdvojeni u analitičke svrhe, npr. Najvažnija funkcija koju izvode proteini uključuju i katalakaciju METABOLIČKIH reakcija, DNK replikaciju, odgovor na štulove i transport molekula sa jedne lokacije na drugu. Proteini se razlikuju od drugih prvenstveno u svojoj sekvenci amino kiselina, koje diktiraju nukleotide iz svog gena, a to obično rezultira protekotinama u specifičnoj trodimenzionalnom strukturi koja određuje njegovu delatnost. Proteine su – Osim pepticida – jedna od ključnih komponenti hrane. Prema tome, proteomika je moćna alatka za prehrambene nauke kako bi se optimizovali procesi, sigurnost hrane i prehrambena procena.

Gel Elektroforesis

Gel elektrofosis je glavni metod odvajanja i analize makromolekula kao što su DNK, RNA i proteina, kao i njihove fragmente, na osnovu njihove veličine i naplate. Koristi se u kliničkoj hemiji za odvajanje belančevina po naplati i/ili veličini (IEF agrose, u suštini nezavisno) i u biohemiji, molekularnu biologiju i proteomiku da razdvoji mešoviti broj DNK i RNA fragmenata po dužini, da proceni veličinu Od DNA i RNA fragmenata ili da razdvajaju proteine naplaćivanjem.

Ćelijskih kultura

Ćelijska kultura je rastući proces u kojem se sve ćelije kultivise pod kontrolisanim uslovima. Uslovi kulture ćelije se razlikuju za svaki tip ćelije. Generalno gledano, okolina ćelijskih kultura se sastoji od prikladnog broda (npr. Petri jelo) sa substrima ili srednjim koji snabdeva suštinske hranljive (amino kiseline, ugljenih hidrata, vitamina, minerala), faktore rasta, hormona i gasova (CO2O2) i regulišu fizio-hemijski ambijent (pH, osmotski pritisak, temperatura). Većini ćelija potrebna je površina ili veštačko substrate, dok druge ćelije kulture mogu da se slobodno plutaju u kulturnom mediju (u kulturi, vešanje ćelije).
Masovne kulture životinjskih linija koriste se u industrijskoj proizvodnji virusnih vakcina i drugih biotatronički izvedenih proizvoda. Ljudske matične ćelije su Kultivisana da bi proširili broj ćelija i razlikacijom ćelija u različitim tipovima ćelija somatskih u svrhe transplantacije.

Uzorci tkiva

Pojam tkiva opisuje celularni srednji nivo, gde se materijal ćelije nalazi na organizacionom nivou između ćelija i kompletnog organa. U tkivu, slične ćelije, iz istog porijekla koje zajedno obavljaju specifičnu funkciju. Funkcionalnim grupisanjem višestruke tkiva formirane su složene strukture organa.
Tkivo je samostručno za istraživanje u biologiji, histologiji/histopatologiji, parazitologiji, biohemija, imunohistohemija, kao i za negovivanje i izdvajanje DNK. Može se razlikovati od životinja (subdivizije: sismal tkiva) i biljnih tkiva. Životinjski tkivo se grupišu u četiri osnovne vrste vezivnog, mišićnog, nervnog i kožnog tkiva. Biljnih tkiva je podijeljena u sledeće tri sisteme tkiva: epidermis, kopneni tkivo i vaskularni tkivo.
Uzorci tkiva se mogu pripremiti od životinjskih delova, poput kosti, mišića, lišća itd.

Tjelesne tečnosti

Krv, serum, plazma, cerebralna tečnost, pljuvačka i sirnovijalna tečnost su telesna tečnost koja nudi veliki izvor dijagnostički relevantnih informacija. Zato je bitna sofisticirana priprema uzoraka tela za analizu. Prvi problem je povezan sa širokom dinamičnom spektrom komponenti koji su prisutni u telesnim tečnosti.

Utvrđivanje koncentracije proteina

Bredford askaze, Lowry askaze i bicinchoninić kiselina (BCA) askaže da su uobičajeni askaze da utvrde koncentraciju proteina. Spongiformna serum belančevina (BSA) je jedan od najčešće korišćenih standarda proteina.

Bafer za lysis

Bafer za lysis se mora izbiti u skladu sa sirovim materijalom ili Tkom (kultura tkiva, biljka, bakterije, gljivice, itd.), kao i da li su ćelije u strukturi i tipu strukture. Širok raspon limne bafera za vađenje proteina, membova i organama formulisani su sa jednim ili više deterdženata. Deterdžent je obično odabran pomoću testova za suđenje i greške ili – Ako je dostupna – Prema postojećem protokolu za izdvajanje proteina. Deterdžent mora biti kompatibilan sa izvorom tkiva i belančevina. Generalno gledano, u cilju održavanja maksimalne funkcionalnosti ekstrakta, bira se i najpoznatiji deterdžent koji radi za određeno tkivo/proteine. Pored toga, u slučaju ekstrakta membova i organelola, blago deterdžent je netaknut. Često korišćeni deterdženti u Limu baferi su uglavnom nejonski ili zwitterionički, npr. momci, deoxykolat, Triton™ X-100, NP40 i Tween 20.
Na primer, tkivo kao što su mozak, jetra, creva, bubreg, slezen i Dr. mogu se jednostavno umirati sa RIPA – Međutim, potrebno je uključiti inhibaze i DTT (npr. za gel elektrofosresis).
Bafer za limfnu maramicu (ledeno hladno): 20 mM Tris (pH 7,8), 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 1 mM MgCl2, 1% Triton X-100, 10% (w/v) glicol, 1 mM EDTA, 1 mM dijthio3 itol dopunjen sa proteaze i fosfatom inhibitorom koktel
Tabela uobičajenih bafera i njihovih pH asortimana. Uopšteno, ovi baferi se obično koriste u koncentracijama od 20-50 mM.

Bafer pH
Limunsku kiselinu – NaOH 2,2 – 6,5
Natrijum – Limunsku kiselinu 3,0 – 6,2
Natrijum – aketička kiselina 3,6 – 5,6
Cacodylic kiselina natrijum-so – Hcl 5,0 – 7,4
PRIJATELJI – NaOH 5,6 – 6,8
Natrijum-dihidrogen fosfata – dezodium hidrogen fosfata 5,8 – 8,0
Imidazole – Hcl 6,2 – 7,8
Krpa – Koh 6,6 – 7,8
Trietanolamin hidrohlorid – NaOH 6,8 – 8,8
Vežba – Hcl 7,0 – 9,0
ZAVESE – NaOH 7,2 – 8,2
Troseći – NaOH 7,6 – 8,6
Natrijum – borična kiselina 7,6 – 9,2
Bicine – NaOH 7,7 – 8,9
Glycine – NaOH 8,6 – 10,6

Većina bafera pokazuje pH-zavisnost sa temperaturi. Ovo je posebno istinito za Tris bafere. PKa se menja sa 8,06 na 25 ° c na 8,85 na 0 ° c.
(pH i pKa bafera: pH Meri koncentraciju hidrogena u izlučnom rešenju. pKa (= konstanta kiseline) je povezana, ali više specifičnije, u tome pomaže da se predvidi kako će molekul delovati na određenu pH vrednost.)

TRIzol

TRIzol je hemijsko rešenje koje se koristi za izdvajanje RNA/DNK/proteina tokom guanidinium thiocanos-fenol-hloroform ekstrakcija. Korišćenje ultrasonično upotrebnog za ekstrakciju TRIzol-a u visokom DNK, RNA i proteini iz istih uzorka i uzbuđuju i na druge načine izdvajanja.