Протокол за инактивацију корона вируса САРС-ЦоВ-2 уз помоћ ултразвука

Хиелсцхер ВиалТвеетер је јединствена ултразвучна јединица за припрему више узорака, која се користи за инактивацију коронавируса САРС-ЦОВ-2. ВиалТвеетер омогућава припрему до 10 бочица са узорцима истовремено и стога је идеална јединица за масовну обраду узорака.

Инактивација САРС-ЦоВ-2 Цоронавируса помоћу ВиалТвеетер-а

Након уклањања фиксатора, монослојеви су три пута испрани физиолошким раствором пуферованим фосфатом (ПБС) пре него што су ћелије састругане у 1 мЛ МЕМ/5% ФБС и обрађене соникацијом (3 × 10 секунди укључено, 10 секунди искључено при 100% снаге и амплитуде) користећи Хиелсцхер ултразвучни процесор УП200Ст са ВиалТвеетер-ом прилог. Супернатанти су бистрени центрифугирањем на 3000 × г током 10 минута. Овде прочитајте цео протокол за инактивацију коронавируса САРС-ЦоВ-2 од стране Велцх ет ал. (2020) испод:

Ћелије и вируси

Vero E6 cells (Vero C1008; ATCC CRL-1586) were cultured in modified Eagle’s minimum essential medium (MEM) supplemented with 10% (v/v) fetal calf serum (FCS). Virus used was SARS-CoV-2 strain hCOV-19/England/2/2020, isolated by PHE from the first patient cluster in the UK on 29/01/2020. This virus was obtained at passage 1 and used for inactivation studies at passage 2 or 3.
За реагенсе и хемикалије које се користе за инактивацију САРС-ЦоВ-2, као и за уклањање цитотоксичности реагенса, погледајте научни извештај Велцха ет ал. (2020).

Инактивација вируса детерџентима – Протокол за инактивацију САРС-ЦоВ-2 Цоронавируса Велцх ет ал. 2020

Инактивација САРС-ЦоВ-2

За комерцијалне производе, препарати вируса (течност културе ткива, титри у распону од 1 × 10⁶ до 1 × 10⁸ PFU/ml) were treated in triplicate with reagents at concentrations and for contact times recommended in the manufacturers’ instructions for use, where available, or for concentrations and times specifically requested by testing laboratories. Where a range of concentrations was given by the manufacturer, the lowest ratio of product to sample was tested (i.e. lowest recommended concentration of test product). Specimen transport tube reagents were tested using a ratio of one volume of tissue culture fluid to ten volumes of reagent, unless a volume ratio of sample fluid to reagent was specified by the manufacturer. Detergents, fixatives and solvents were tested at the indicated concentrations for the indicated times. All inactivation steps were performed at ambient room temperature (18 – 25°C). For testing of alternative sample types, virus was spiked into the indicated sample matrix at a ratio of 1:9, then treated with test reagents as above. All experiments included triplicate control mock-treated samples with an equivalent volume of PBS in place of test reagent. Immediately following the required contact time, 1mL of treated sample was processed using the appropriately selected filtration matrix. Reagent removal for inactivation testing was carried out in a larger spin column format using Pierce 4mL Detergent Removal Spin Columns (Thermo Fisher), or by filling empty Pierce 10mL capacity centrifuge columns (Thermo Fisher) with SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-400HR or Sephadex LH-20 to give 4mL packed beads/resin. For purification using Amicon filters, 2 × 500μl samples were purified using two centrifugal filters by the method previously described, then pooled together. For formaldehyde and formaldehyde with glutaraldehyde removal, one filter was used with 1× 500μl sample volume, resuspended after processing in 500μl PBS, and added to 400ul MEM/5% FBS. For inactivation of infected једнослојеви, 12,5 цм² бочице Веро Е6 ћелија (2,5 × 10⁶ ћелије/боца у 2,5 мЛ МЕМ/5% ФБС) су инфициране на МОИ 0,001 и инкубиране на 37°Ц/5% ЦО₂ за 24 сата. Супернатант је уклоњен, а ћелије су фиксиране коришћењем 5 мЛ формалдехида, или формалдехида и глутаралдехида на собној температури 15 или 60 минута. Фиксатив је уклоњен, а монослојеви су испрани три пута са ПБС пре него што су ћелије стругали у 1 мЛ МЕМ/5% ФБС и обрађени соникацијом (3 × 10 секунди укључено, 10 секунди искључено при 100% снаге и амплитуде) коришћењем УП200Ст са ВиалТвеетер наставком (Хиелсцхер Ултрасоунд Технологија). Супернатанти су бистрени центрифугирањем на 3000 × г током 10 минута.

Детаљи о реагенсу који се користи за инактивацију САРС-ЦоВ-2 коронавируса ултразвучним ВиалТвеетер-ом према протоколу Велцх ет ал. 2020

Комплетан протокол укључујући употребу Хиелсцхер ВиалТвеетер-а можете пронаћи овде:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Софистицирани ултразвучни дисмембратори и дисруптори ћелија

Ултразвучни апарат за више узорака ВиалТвеетер је само једно од многих ултразвучних решења за припрему узорака у биолошким, биохемијским и клиничким лабораторијама. Хиелсцхер Ултрасоницс нуди идеалан ултразвучни дисмембратор за вашу примену, нпр. лизу ћелија, екстракцију ћелија, хомогенизацију ткива, солубилизацију лизата, растварање, дегазацију узорака итд.
Обавестите нас колико узорака морате да обрадите по сату и дану, ако више волите директну или индиректну соникацију и шта је циљ третмана ултразвучног узорка. Препоручићемо вам најпогоднији ултразвучни уређај за вашу свакодневну радну рутину!
Hielscher Ultrasonics’ digital ultrasonic processors are equipped with smart software, automatic data recording, easy pre-setting options for temperature control, sonication duration, cycle/pulse mode as well as sample illumination and browser remote control. We strive to make our ultrasonic devices as smart as possible so that your research and work routine becomes as convenient and successful as possible.
Кликните овде, да пронађете више апликација укључујући протоколе ултразвучне припреме узорака са ВиалТвеетер-ом!