Протокол за инактивацију корона вируса САРС-ЦоВ-2 уз помоћ ултразвука

Хиелсцхер ВиалТвеетер је јединствена ултразвучна јединица за припрему више узорака, која се користи за инактивацију коронавируса САРС-ЦОВ-2. ВиалТвеетер омогућава припрему до 10 бочица са узорцима истовремено и стога је идеална јединица за масовну обраду узорака.

Инактивација САРС-ЦоВ-2 Цоронавируса помоћу ВиалТвеетер-а

Након уклањања фиксатора, монослојеви су три пута испрани физиолошким раствором пуферованим фосфатом (ПБС) пре него што су ћелије састругане у 1 мЛ МЕМ/5% ФБС и обрађене соникацијом (3 × 10 секунди укључено, 10 секунди искључено при 100% снаге и амплитуде) користећи Хиелсцхер ултразвучни процесор УП200Ст са ВиалТвеетер-ом прилог. Супернатанти су бистрени центрифугирањем на 3000 × г током 10 минута. Овде прочитајте цео протокол за инактивацију коронавируса САРС-ЦоВ-2 од стране Велцх ет ал. (2020) испод:

Ћелије и вируси

Веро Е6 ћелије (Веро Ц1008; АТЦЦ ЦРЛ-1586) су култивисане у модификованом Еагле-овом минималном есенцијалном медијуму (МЕМ) са додатком 10% (в/в) феталног телећег серума (ФЦС). Коришћен је вирус САРС-ЦоВ-2 хЦОВ-19/Енглеска/2/2020, изолован ПХЕ из првог кластера пацијената у УК 29.1.2020. Овај вирус је добијен на пролазу 1 и коришћен за студије инактивације на пролазу 2 или 3.
За реагенсе и хемикалије које се користе за инактивацију САРС-ЦоВ-2, као и за уклањање цитотоксичности реагенса, погледајте научни извештај Велцха ет ал. (2020).

Инактивација вируса детерџентима – Протокол за инактивацију САРС-ЦоВ-2 Цоронавируса Велцх ет ал. 2020

Инактивација САРС-ЦоВ-2

За комерцијалне производе, препарати вируса (течност културе ткива, титри у распону од 1 × 10⁶ до 1 × 10⁸ ПФУ/мл) третирани су у три примерка са реагенсима у концентрацијама и за време контакта препоручено у упутствима произвођача за употребу, где је доступно, или за концентрације и времена које су посебно захтевале лабораторије за испитивање. Када је произвођач дао опсег концентрација, тестиран је најнижи однос производа према узорку (тј. најнижа препоручена концентрација испитиваног производа). Реагенси у епрувети за транспорт узорака су тестирани коришћењем односа једне запремине течности културе ткива према десет запремина реагенса, осим ако произвођач није одредио запремински однос течности узорка и реагенса. Детерџенти, фиксативи и растварачи су тестирани на назначеним концентрацијама за назначено време. Сви кораци инактивације су изведени на собној температури (18 – 25°Ц). За тестирање алтернативних типова узорака, вирус је убачен у назначену матрицу узорка у односу 1:9, а затим третиран тест реагенсима као што је горе наведено. Сви експерименти су укључивали три примерке контролних лажно третираних узорака са еквивалентном запремином ПБС уместо тест реагенса. Одмах након потребног времена контакта, 1 мЛ третираног узорка је обрађен коришћењем одговарајуће одабране филтрационе матрице. Уклањање реагенса за тестирање инактивације изведено је у већем формату центрифугиране колоне користећи Пиерце 4мЛ Детергент Ремовал Спин Цолумнс (Тхермо Фисхер) или пуњењем празних Пиерце 10мЛ центрифугалних колона (Тхермо Фисхер) са СМ2 Био-Беадс, Сепхацрил С-400ХР или Сепхадек ЛХ-20 за давање 4мЛ упакованих перли/смоле. За пречишћавање коришћењем Амицон филтера, узорци од 2 × 500 μл су пречишћени коришћењем два центрифугална филтера према претходно описаној методи, а затим спојени. За формалдехид и формалдехид са уклањањем глутаралдехида, коришћен је један филтер са запремином узорка од 1 × 500 μл, ресуспендован након обраде у 500 μл ПБС и додат у 400 ул МЕМ/5% ФБС. За инактивацију заражених једнослојеви, 12,5 цм² бочице Веро Е6 ћелија (2,5 × 10⁶ ћелије/боца у 2,5 мЛ МЕМ/5% ФБС) су инфициране на МОИ 0,001 и инкубиране на 37°Ц/5% ЦО₂ за 24 сата. Супернатант је уклоњен, а ћелије су фиксиране коришћењем 5 мЛ формалдехида, или формалдехида и глутаралдехида на собној температури 15 или 60 минута. Фиксатив је уклоњен, а монослојеви су испрани три пута са ПБС пре него што су ћелије стругали у 1 мЛ МЕМ/5% ФБС и обрађени соникацијом (3 × 10 секунди укључено, 10 секунди искључено при 100% снаге и амплитуде) коришћењем УП200Ст са ВиалТвеетер наставком (Хиелсцхер Ултрасоунд Технологија). Супернатанти су бистрени центрифугирањем на 3000 × г током 10 минута.

Детаљи о реагенсу који се користи за инактивацију САРС-ЦоВ-2 коронавируса ултразвучним ВиалТвеетер-ом према протоколу Велцх ет ал. 2020

Комплетан протокол укључујући употребу Хиелсцхер ВиалТвеетер-а можете пронаћи овде:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Софистицирани ултразвучни дисмембратори и дисруптори ћелија

Ултразвучни апарат за више узорака ВиалТвеетер је само једно од многих ултразвучних решења за припрему узорака у биолошким, биохемијским и клиничким лабораторијама. Хиелсцхер Ултрасоницс нуди идеалан ултразвучни дисмембратор за вашу примену, нпр. лизу ћелија, екстракцију ћелија, хомогенизацију ткива, солубилизацију лизата, растварање, дегазацију узорака итд.
Обавестите нас колико узорака морате да обрадите по сату и дану, ако више волите директну или индиректну соникацију и шта је циљ третмана ултразвучног узорка. Препоручићемо вам најпогоднији ултразвучни уређај за вашу свакодневну радну рутину!
Дигитални ултразвучни процесори компаније Хиелсцхер Ултрасоницс опремљени су паметним софтвером, аутоматским снимањем података, једноставним опцијама унапред подешавања за контролу температуре, трајање ултразвучне обраде, циклус/пулсни режим, као и осветљење узорка и даљинско управљање претраживачем. Трудимо се да наше ултразвучне уређаје учинимо што је могуће паметнијим како би ваша истраживачка и радна рутина постала што практичнија и успешнија.
Кликните овде, да пронађете више апликација укључујући протоколе ултразвучне припреме узорака са ВиалТвеетер-ом!