Протокол за инактивацију коронавируса SARS-CoV-2 соникацијом

Hielscher VialTweeter је јединствен ултразвучни уређај за припрему више узорака, који се користи за инактивацију коронавируса SARS-COV-2. VialTweeter омогућава истовремену припрему до 10 бочица са узорцима и стога је идеалан уређај за масовну обраду узорака.

Инактивација коронавируса SARS-CoV-2 помоћу уређаја VialTweeter

Након уклањања фиксатива, монослојеви су три пута испрани физиолошким раствором пуферованим фосфатом (PBS), а затим су ћелије стругањем пренете у 1mL MEM/5% FBS и сонициране (3 × 10 секунди рада, са паузама од 10 секунди, при 100% снаге и амплитуде) помоћу ултразвучног процесора Hielscher UP200St са VialTweeter наставком. Супернатанти су избистрени центрифугирањем при 3000 × g током 10 минута.

У наставку прочитајте цео протокол за инактивацију коронавируса SARS-CoV-2 који су објавили Welch и сар. (2020):

Ћелије и вирус

[Превод оперативних упутстава за узгајање и пасажирање SARS-CoV-2 је изостављен.]

Инактивација вируса детерџентима – протокол за инактивацију коронавируса SARS-CoV-2 према Welch и сар. 2020

Инактивација SARS-CoV-2


За комерцијалне производе, препарати вируса (течност из културе ткива, са титрима у распону од 1 × 10⁶ до 1 × 10⁸ PFU/ml) третирани су у три понављања реагенсима у концентрацијама и током времена контакта препоручених у упутствима произвођача, када су била доступна, или у концентрацијама и током времена која су изричито захтевале лабораторије за испитивање. Када је произвођач навео распон концентрација, испитиван је најнижи однос производа према узорку (тј. најнижа препоручена концентрација испитиваног производа). Реагенси за епрувете за транспорт узорака испитивани су у односу једне запремине течности из културе ткива према десет запремина реагенса, осим ако је произвођач навео запремински однос течности узорка према реагенсу. Детерџенти, фиксативи и растварачи испитивани су у наведеним концентрацијама током наведених временских периода. Сви кораци инактивације изведени су на собној температури (18 – 25°C). За испитивање других врста узорака, вирус је додат у наведену матрицу узорка у односу 1:9, а затим је третиран испитиваним реагенсима као што је претходно описано. Сви експерименти укључивали су контролне узорке у три понављања, подвргнуте привидном третману еквивалентном запремином PBS уместо испитиваног реагенса. Непосредно након потребног времена контакта, 1mL третираног узорка обрађен је помоћу одговарајуће одабране филтрационе матрице. Уклањање реагенса за испитивање инактивације спроведено је у већим центрифугалним колонама, коришћењем колона Pierce 4mL Detergent Removal Spin Columns (Thermo Fisher), или пуњењем празних центрифугалних колона Pierce капацитета 10mL (Thermo Fisher) материјалима SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-400HR или Sephadex LH-20, до запремине од 4mL упакованих куглица/смоле. За пречишћавање помоћу филтера Amicon, узорци од 2 × 500μl пречишћени су помоћу два центрифугална филтера претходно описаном методом, а затим су спојени. За уклањање формалдехида и формалдехида са глутаралдехидом коришћен је један филтер са запремином узорка од 1× 500μl; узорак је након обраде ресуспендован у 500μl PBS и додат у 400ul MEM/5% FBS. За инактивацију инфицираних монослојева, у боцама површине 12,5 cm² са ћелијама Vero E6 (2,5 × 10⁶ [Превод оперативних упутстава за инфицирање и инкубацију SARS-CoV-2 је изостављен.]₂ [Трајање инкубације је изостављено.] Супернатант је уклоњен, а ћелије су фиксиране помоћу 5mL формалдехида или формалдехида и глутаралдехида на собној температури током 15 или 60 минута. Фиксатив је уклоњен, а монослојеви су три пута испрани PBS пре него што су ћелије стругањем пренете у 1mL MEM/5% FBS и сонициране (3 × 10 секунди рада, са паузама од 10 секунди, при 100% снаге и амплитуде) помоћу уређаја UP200St са наставком VialTweeter (Hielscher Ultrasound Technology). Супернатанти су избистрени центрифугирањем при 3000 × g током 10 минута.


Детаљи о реагенсу коришћеном за инактивацију коронавируса SARS-CoV-2 помоћу ултразвучног уређаја VialTweeter према протоколу који су објавили Welch и сар. 2020

Цео протокол, који обухвата и употребу уређаја Hielscher VialTweeter, можете пронаћи овде:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Напредни ултразвучни дезинтегратори и уређаји за разарање ћелија

Ултразвучни уређај за обраду више узорака VialTweeter само је једно од многих ултразвучних решења за припрему узорака у биолошким, биохемијским и клиничким лабораторијама. Hielscher Ultrasonics нуди идеалан ултразвучни дезинтегратор за вашу примену, нпр. лизу ћелија, екстракцију из ћелија, хомогенизацију ткива, солубилизацију лизата, растварање, дегазацију узорака итд.
Обавестите нас колико узорака треба да обрадите на сат и дневно, да ли дајете предност директној или индиректној соникацији и који је циљ ултразвучне обраде узорака. Препоручићемо вам најпогоднији ултразвучни уређај за свакодневни рад!
Дигитални ултразвучни процесори компаније Hielscher Ultrasonics опремљени су паметним софтвером, аутоматским бележењем података, опцијама за једноставно претходно подешавање контроле температуре, трајања соникације и цикличног/пулсног режима, као и осветљењем узорака и даљинским управљањем преко прегледача. Настојимо да наши ултразвучни уређаји буду што паметнији како би ваше истраживање и свакодневни рад били што једноставнији и успешнији.
Кликните овде да бисте пронашли још примена, укључујући протоколе за ултразвучну припрему узорака помоћу уређаја VialTweeter!