Фрагментација алфа-синуклеина помоћу ВиалТвеетер Соницатор-а

α-синуклеинске фибриле и траке се фрагментирају у научним истраживањима како би се генерисали мањи фрагменти фибрила или чак појединачни протеински молекули, који се могу лакше анализирати коришћењем различитих експерименталних техника. ВиалТвеетер Соницатор је један од најчешће коришћених ултразвучних апарата за ефикасну и поуздану фрагментацију алфа-синуклеина.

α-синуклеин у истраживању

Алфа-синуклеинска фибрила су протеински агрегати који су снажно повезани са неуродегенеративним поремећајима као што је Паркинсонова болест и одређени облици деменције, укључујући деменцију са Левијевим телима. Истраживања фокусирана на алфа-синуклеинске фибриле имају за циљ да разумеју њихову улогу у прогресији болести и развију потенцијалне терапијске интервенције. Разбијањем алфа-синуклеинских фибрила на мање фрагменте, истраживачи могу да истраже њихове специфичне структурне карактеристике. На пример, фрагментација алфа-синуклеинских фибрила омогућава истраживачима да истраже њихове интеракције са другим молекулима, као што су протеини, липиди или мали молекули. Производњом мањих фрагмената, места везивања и афинитет за ове партнере у интеракцији могу се ефикасније испитати. Мањи α-Син фрибрили и траке такође могу показати измењену токсичност и биохемијске ефекте. Стога је поуздана и ефикасна техника фрагментације, која даје поновљиве резултате у брзом и једноставном третману узорка, кључна.
Ултразвучна Алпха-Син фрагментација: ВиалТвеетер соникатор је успостављени ултразвучни систем за припрему узорака који ултразвучно обрађује до 10 бочица истовремено под потпуно истим условима. Програмабилна подешавања омогућавају једноставно и брзо поновно извођење истих експеримената, што даје високо поуздане и поновљиве резултате у фрагментацији алфа-синуклеинских фибрила.

Припрема узорка α-Синуцлеина са соникатором

Један приступ проучавању алфа-синуклеинских фибрила укључује њихову екстракцију и фрагментацију коришћењем техника као што је соникација. Соникација је процес који користи ултразвучне таласе високог интензитета, ниске фреквенције да поремети и разбије протеинске агрегате, што доводи до ослобађања мањих фибрила или појединачних протеинских молекула. Соникатор ВиалТвеетер је уређај који се обично користи у истраживачким студијама везаним за α-синуклеин за ову сврху.

Бројне истраживачке студије описују прецизне протоколе за припрему узорака ултразвучне обраде алфа-синуклеинских фибрила, који користе Хиелсцхер ВиалТвеетер за ефикасну и поуздану фрагментацију α-синуклеинских фибрила. Ултразвучним фрагментацијом фибрила, истраживачи могу анализирати добијене производе и испитати њихову структуру, токсичност и интеракције са другим молекулима. Ово истраживање пружа важан увид у механизме који леже у основи неуродегенерације и потенцијално идентификују нове терапијске циљеве. Добро успостављени протоколи соникације α-синуклеином који користе ВиалТвеетер соникатор омогућавају поуздане и поновљиве резултате.

Горње слике: нефрагментиране алфа-синуклеинске фибриле
Доње слике: Ултразвучно фрагментоване алфа-синуклеинске фибриле са ВиалТвеетер соникатором
(студија и слике: ©Диерикс ет ал., 2022)

Ултразвучна фрагментација α-синуклеинских фибрила – Протоколи

Пошто бројни истраживачи користе ВиалТвеетер соникатор као пожељну технику фрагментације за производњу уједначених фрагмената α-синуклеинских фибрила, успостављени протоколи су лако доступни. Испод можете пронаћи неколико примерних протокола за фрагментацију.
 

 
ЦлеарТау припрема семена: ЦлеарТау фибриле су разблажене до 10 μМ у дХ2О и соникиране са амплитудом од 70% током 50 с са циклусом од 1 с ОН 1 с ОФФ у епрувети користећи соникатор УП200Ст са ВиалТвеетер-ом. Семе је окарактерисано електронском микроскопом.
Мерење ТхС флуоресценције: ЦлеарТау фибриле су разблажене до 2,5 μМ у дХ2О и соникиране при 70% амплитуде током 50 с са 1 с ОН 1 с ОФФ циклусом у епрувети користећи УП200Ст са ВиалТвеетер-ом. 2,5 μМ Тау 4Р2Н мономер пуне дужине коришћен је као контрола. У реакцију од 100 μл, додато је 100 μл ТхС (10 μМ), дајући коначне концентрације протеина од 1,25 μМ. ТхС флуоресценција у једној тачки мерена је коришћењем плоча са чистим дном са 96 бунара постављених у ФЛУОстар Омега читач микроплоча са ексцитацијом на 445 нм и емисијом на 485 нм.
(уп. Лиморенко ет ал., 2023)
 
Уједначена дужина α-синуклеина коришћењем соникације: Хетерогеност дужине α-син фибрила и трака је смањена ултразвучном обрадом у трајању од 20 минута на леду у Еппендорф епруветама од 2 мл у ВиалТвеетер-у постављеном на 75% амплитуде, импулса од 0,5 с.
(уп. Боуссет ет ал., 2013)
 
Спроведена је контрола квалитета хуманог рекомбинантног мономерног ВТ или С129А а-Син и фибриларних полиморфа које они генеришу, као и а-Син 1–110. Након тога, фибриларни полиморфи су фрагментирани ултразвучном обрадом у трајању од 20 минута у Еппендорф епруветама од 2 мЛ у ВиалТвеетер ултрасоникатору да би се створиле фибриларне честице просечне величине 42–52 нм које су погодне за ендоцитозу.
(уп. Шривастава ет ал., 2020)
 

Карактеризација пет фибриларних α-Син полиморфа. (А) Приказане су трансмисионе електронске микрографије негативно обојених α-Син фибриларних полиморфа фибрила, трака, фибрила-91, фибрила-65 и фибрила-110 пре (горња трака) и после фрагментације са ВиалТвеетер-ом (доња трака). (Б) Приказана је дистрибуција по дужини фрагментованих фибриларних полиморфа. Наведен је број (н) фибриларних склопова из којих су изведени хистограми.
(студија и слике: Шривастава и др., 2020)

 
α-Син фибриле су фрагментоване ултразвуком током 20 минута у Еппендорф епруветама од 2 мл у ВиалТвеетер-у да би се генерисале фибриларне честице просечне величине 42–52 нм како је процењено ТЕМ анализом.
(уп. Негрини ет ал., 2022)
 
Ресуспендоване фибриле91 (у ПБС) су фрагментоване пре додавања ћелијским културама ултразвуком у трајању од 20 минута у епруветама од 2 мЛ Еппендорф користећи соникатор Виал Твеетер, аликвоте, брзо замрзнуте у течном азоту и чуване до употребе на -80 Ц.
(уп. Вајхøј ет ал., 2021)
 

ВиалТвеетер и лабораторијски соникатори за α-Син фрагментацију

Хиелсцхер Ултрасоницс је светски признат као водећи произвођач најсавременијих ултрасоникатора. Поуздани и успостављени у великим истраживачким лабораторијама широм света, наши ултрасоникатори нуде неупоредив квалитет и перформансе за ваше критичне експерименте.
Са Хиелсцхер ВиалТвеетер-ом и било којим другим Хиелсцхер соникатором, доживећете неупоредиву удобност корисника, јер су пажљиво пројектовани за поновљиве резултате, лакоћу употребе и беспрекоран рад. Са функцијама аутоматског снимања података, можете се усредсредити на своје истраживање док наши ултрасоникатори пажљиво снимају кључне податке за поновљивост и прецизност.
Остварите доследне и поновљиве резултате са самопоуздањем!
Наши ултрасоникатори су пројектовани и произведени у Немачкој. Немачка прецизност и највиши инжењерски квалитет како би се обезбедила поуздана и тачна припрема узорка, као што је фрагментација алфа-синуклеинских фибрила сваки пут. Нема више бриге о недоследним резултатима – наша ултразвучна технологија обезбеђује да ваше истраживање остане на челу научног напретка.
Али то није све! Наша посвећеност изврсности превазилази наше производе. Поносимо се својом изузетном услугом за кориснике, пружајући стручну подршку да одговоримо на сва питања или недоумице које имате. Наш посвећени тим је ту да вам помогне на сваком кораку вашег истраживачког пута, осигуравајући да извучете максимум из наших ултразвучних апарата.
Изаберите иновацију, поузданост и изузетно корисничко искуство – изаберите наше лабораторијске соникаторе као што је ВиалТвеетер за фрагментацију алфа-синуклеинских фибрила. Искористите предности већ успостављених протокола и придружите се редовима водећих истраживача који верују нашој технологији за своје критичке студије. Подигните своје истраживање и истражите нове границе у истраживању деменције и неуродегенеративних болести помоћу наших најсавременијих ултразвучних апарата.

Дизајн, производња и консалтинг – Квалитет Маде ин Германи

Хиелсцхер ултрасоникатори су познати по свом највишем квалитету и стандардима дизајна. Робусност и једноставан рад омогућавају несметану интеграцију наших ултразвучних апарата у индустријске објекте. Хиелсцхер ултрасоникатори се лако носе са тешким условима и захтевним окружењима.

Хиелсцхер Ултрасоницс је ИСО сертификована компанија и ставља посебан нагласак на ултрасоникаторе високих перформанси са најсавременијом технологијом и лакоћом за коришћење. Наравно, Хиелсцхер соникатори су усаглашени са ЦЕ и испуњавају захтеве УЛ, ЦСА и РоХ.
 
Табела у наставку даје вам индикацију приближног капацитета обраде наших ултразвучних апарата величине лабораторије: