Ekstrakcja alkaloidów za pomocą sondy ultradźwiękowej
Alkaloidy są związkami bioaktywnymi, które można skutecznie ekstrahować z roślin za pomocą ultradźwięków. Alkaloidy wykazują szeroki wachlarz efektów biologicznych i dlatego są stosowane jako środki farmaceutyczne i terapeutyczne. Ekstrakcja ultradźwiękowa jest preferowaną techniką produkcji wysokiej jakości ekstraktów alkaloidowych z materiału roślinnego. Ekstrakcja ultradźwiękowa skutkuje bardzo wysoką wydajnością alkaloidów, podczas gdy czas ekstrakcji jest krótki, a sprzęt ultradźwiękowy jest bezpieczny i łatwy w obsłudze.
Wysokowydajna ekstrakcja alkaloidów przy użyciu ultradźwięków
W jaki sposób ekstrakcja ultradźwiękowa sprzyja izolacji alkaloidów?
Ekstrakcja ultradźwiękowa wykorzystuje fale ultradźwiękowe o niskiej częstotliwości (np. częstotliwość 20-26 kHz) i efekt kawitacji akustycznej ultradźwięków. Fale ultradźwiękowe o wysokiej intensywności tworzą pęcherzyki kawitacyjne, które zapadają się, generując lokalnie gęste energetycznie różnice ciśnień i temperatur, a także potężne siły ścinające, które perforują i rozbijają ściany komórek roślinnych i tkanki roślinne. Strumień cieczy generowany przez kawitację sprzyja przenoszeniu masy między macierzą wewnątrzkomórkową a otaczającym rozpuszczalnikiem, dzięki czemu alkaloidy są skutecznie uwalniane. W przypadku ultradźwiękowej ekstrakcji alkaloidów materiał roślinny (np. zmielone suszone liście) umieszcza się w rozpuszczalniku, który jest zwykle mieszaniną wody i rozpuszczalnika organicznego, takiego jak wodny etanol. Stwierdzono, że rozpuszczalniki polarne, takie jak metanol i etanol, są najbardziej skuteczne w przypadku wysokiej wydajności alkaloidów. Po krótkiej obróbce ultradźwiękowej zawiesiny – składający się z materiału roślinnego i rozpuszczalnika – alkaloidy są uwalniane z komórek roślinnych i są obecne w rozpuszczalniku, z którego można je wyizolować i oczyścić (np. za pomocą rotora-parownika).

Ultrasonicator UP400St do ekstrakcji alkaloidów z materiału roślinnego.
Główne zalety ultradźwiękowej ekstrakcji alkaloidów
Ekstrakcja ultradźwiękowa jest uważana za doskonałą technikę ekstrakcji do izolacji alkaloidów z materiałów roślinnych, ponieważ oferuje kilka zalet, w tym:
- Zwiększona wydajność wydobycia: Ekstrakcja ultradźwiękowa może zwiększyć wydajność alkaloidów o ponad 200% w porównaniu z tradycyjnymi metodami ekstrakcji.
- Skrócony czas ekstrakcji: Ekstrakcja ultradźwiękowa może znacznie skrócić czas ekstrakcji, umożliwiając szybsze i bardziej wydajne przetwarzanie dużych ilości materiału roślinnego.
- Niższe zużycie rozpuszczalnika: Ekstrakcja ultradźwiękowa może zmniejszyć ilość rozpuszczalnika wymaganego do ekstrakcji, co skutkuje zmniejszonym zużyciem rozpuszczalnika i mniejszym wpływem na środowisko.
- Selektywna ekstrakcja: Ekstrakcja ultradźwiękowa może być stosowana do selektywnej ekstrakcji niektórych alkaloidów poprzez wybór odpowiedniego rozpuszczalnika, parametrów procesu i temperatury ekstrakcji. Ponieważ niepożądane związki pozostają w tyle, czystość produktu końcowego ulega poprawie.
- Łatwość skalowania: Ekstrakcja ultradźwiękowa może być łatwo skalowana w celu obsługi większych ilości materiału roślinnego, dzięki czemu nadaje się do produkcji komercyjnej. Procesy ultradźwiękowe mogą być skalowane liniowo, co ułatwia ich wdrożenie na skalę przemysłową.
Ogólnie rzecz biorąc, ekstrakcja ultradźwiękowa oferuje szybsze, bardziej wydajne i bardziej przyjazne dla środowiska podejście do izolowania alkaloidów z materiałów roślinnych.
Ultradźwiękowa ekstrakcja alkaloidów z liści drzewa Soursop
Nolasco-González et al. (2022) zbadali skuteczność i wydajność ultradźwiękowej ekstrakcji związków bioaktywnych, w tym związków fenolowych, alkaloidów, acetogenin (wszystkie o wysokiej zdolności antyoksydacyjnej) z liści gatunku rośliny Annona muricata (drzewo soursop). Do ekstrakcji ultradźwiękowej zastosowano ultrasonograf sondowy UP400S w następujących warunkach: 80% amplitudy, cykl impulsów 0,7 s, przez 4,54 min. Całkowite rozpuszczalne fenole (TSP) ekstrahowano przy użyciu 0,5 g suszonych liści w proszku i 20 ml acetonu: wody (80:20 v/v). Ekstrakt wytwarzany ultradźwiękowo zawierał 178,48 mg/100 mL rozpuszczalnych fenoli, 20,18 mg/100 mL flawonoidów ogółem, 27,81 mg/100 mL hydrolizowalnych polifenoli, 167,07 mg/100 mL skondensowanych garbników, 30,44 mg/100 mL alkaloidów ogółem i 14,62 mg/100 mL acetogenin ogółem. Ekstrakt wyizolowany za pomocą ultrasonografu z sondą U400S (patrz zdjęcie po lewej) wykazywał wysoką zdolność przeciwutleniającą i wyższą zawartość związków bioaktywnych od ~6 do ~927 razy niż wywar lub napar, w zależności od rodzaju związku. W próbkach zidentyfikowano dwadzieścia cztery różne związki fenolowe, a ekstrakt wyizolowany ultradźwiękowo wytworzył najwyższe stężenie.
[por. Nolasco-González i in., 2022].

Zdolność przeciwutleniająca ekstraktów uzyskanych w optymalnych warunkach ekstrakcji wspomaganej ultradźwiękami (UAE), wywaru i naparu. Ekstrakty ultradźwiękowe konsekwentnie wykazują znacznie wyższą zdolność antyoksydacyjną.
(Badanie i grafika: ©Nolasco-González et al., 2022)

Chromatogram HPLC związków fenolowych z ultradźwiękowo izolowanego ekstraktu z liści Annona muricata przy użyciu ultrasonografu UP400S.
(1) kwas szikimowy, (2) kwas galusowy, (3) kwas protokatechowy, (4) kwas neochlorogenowy,
(5) kwas 3,4-dihydroksyfenylooctowy, (6) kwas 4-hydroksybenzoesowy, (7) kwas chlorogenowy, (8) kwas 4-hydroksyfenylooctowy, (9) kwas wanilinowy, (10) kwas syringowy, (11) kwas 3-hydroksybenzoesowy, (12) kwas kawowy, (13) aldehyd 4-hydroksybenzoesowy, (14) kwas homowanilinowy, (15) kwas 3-(4-hydroksyfenylowy), (16) kwas p-kumarowy, (17) kwas trans-ferulowy, (18) kwas trans-cynamonowy, (19) galokatechina, (20) epigalokatechina, (21) katechina, (22) epikatechina, (23) rutyna, (24) kwas elagowy.
(Badanie i grafika: ©Nolasco-González et al., 2022)
Lee et al. (2021) mieli podobne potwierdzone wyniki, ponieważ zgłosili 2,3-krotnie więcej alkaloidów z liści A. muricata ekstrahowanych pod ultradźwiękami (340 W, 56◦C, 30 min) w porównaniu do ekstrakcji Soxhleta (7 h, 80◦C).

Ekstraktor ultradźwiękowy UIP1000hdT z mieszadłem do ekstrakcji alkaloidów w trybie wsadowym.
Ekstrakcja alkaloidów indolowych z kory korzenia mimozy i ayahuasca za pomocą ultrasonografu
Kora korzenia mimozy oraz liście ayahuaski zawierają alkaloid N,N-dimetylotryptaminę (DMT). Dimetylotryptamina (DMT) jest obecnie badana w badaniach klinicznych pod kątem jej działania halucynogennego, a zatem jako potencjalny lek do leczenia depresji i zaburzeń stresu pourazowego (PTSD). Ultradźwięki skutecznie promują uwalnianie i izolację alkaloidu z korzeni Mimosa hostilis i liści Psychotria viridis (ayahuasca). Ultradźwiękowa ekstrakcja DMT zapewnia wysoką wydajność w bardzo krótkim czasie. Kompatybilne z prawie każdym rozpuszczalnikiem, ultradźwięki typu sondowego firmy Hielscher są wykorzystywane do produkcji bioaktywnych związków klasy farmaceutycznej do stosowania w warunkach badawczych i medycznych, a także do przygotowania próbek przed analitycznym badaniem jakości i siły działania. Dlatego ultrasonografy Hielscher mogą na wiele sposobów ułatwiać medyczne badania DMT i botaniczne.
Najczęstsze źródło indolowego akaloidu N,N-dimetylotryptaminy (DMT) w drzewie jurema, pochodzi z korzeni Mimosa hostilis (powszechnie znanej jako jurema preta). Ayahuasca to tradycyjna nazwa innego gatunku rośliny, w której liście krzewu Psychotria viridis są bogate w DMT.
Zarówno kora korzenia mimozy (również mimosa tenuiflora, Mimosa Hostilis Root Bark; skrót MHRB), jak i liście ayahuasca zawierają różne związki bioaktywne, które są obecnie badane w badaniach klinicznych pod kątem ich potencjału jako leku terapeutycznego. Kora korzenia mimozy zawiera garbniki, saponiny, tryptaminy, alkaloidy, lipidy, fitoindole, ksylozę, fitosterole, glukozydy, ramnozę, arabinozę, metoksychalkony, lupeol i kukulkaniny. Te bioaktywne związki mogą być skutecznie ekstrahowane z kory korzenia za pomocą ultrasonografów typu sondowego. Ekstrakcja ultradźwiękowa jest doskonałą techniką izolowania substancji docelowych, takich jak alkaloidy z materiałów botanicznych, takich jak kora korzenia mimozy i liście ayahuasca. Sonikacja wyróżnia się wysoką wydajnością w bardzo krótkim czasie ekstrakcji. Łagodne warunki procesu zapewniają najwyższą jakość ekstraktu, zapobiegając niepożądanej degradacji aktywnych cząsteczek.

Konfiguracja ekstrakcji do izolacji botanicznej: Ultradźwiękowiec z sondą UP400ST, filtr próżniowy Büchi i rotor-parownik do ekstrakcji fitochemikaliów, takich jak alkaloidy i fenole.

Ekstraktor ultradźwiękowy UIP2000hdT z wsadem ze stali nierdzewnej klasy farmaceutycznej do przemysłowej produkcji ekstraktów alkaloidowych.
Ultradźwięki Hielscher do skutecznej ekstrakcji alkaloidów
Hielscher Ultrasonics projektuje, produkuje i dystrybuuje wysokowydajne ekstraktory ultradźwiękowe, które są wykorzystywane do badań naukowych, a także do produkcji ekstraktów farmaceutycznych.
Najwyższa wydajność ekstrakcjiEkstrakcja wspomagana ultradźwiękami jest naukowo udowodnioną techniką o wyjątkowo wysokiej skuteczności w zakresie ekstrakcji związków bioaktywnych z roślin. Podczas gdy tradycyjne metody często zajmują dużo czasu (od kilku godzin do dni), ultradźwiękowa ekstrakcja botaniczna zajmuje tylko kilka minut.
Wysoka wydajność ekstrakcji i doskonała jakość ekstraktu dzięki ultradźwiękom firmy Hielscher
Ekstrakcja ultradźwiękowa pozwala na całkowite uwolnienie związków bioaktywnych z materiału roślinnego. Kawitacja ultradźwiękowa rozbija macierz komórkową i skutecznie uwalnia bioaktywne cząsteczki do otaczającego rozpuszczalnika. Badania porównawcze wykazały, że sonikacja daje wyższą wydajność ekstraktu niż inne techniki ekstrakcji (np. Soxhlet, maceracja, wywar, infuzja). Ekstrakcja ultradźwiękowa jest kompatybilna z dowolnym rozpuszczalnikiem i pozwala tym samym na stosowanie bardzo łagodnego rozpuszczalnika, takiego jak woda lub wodny etanol. W odniesieniu do konkretnych wymagań dotyczących ekstrakcji, można wybrać rozpuszczalniki polarne i niepolarne, a przełączanie między rozpuszczalnikami nie stanowi problemu. Precyzyjna kontrola parametrów procesu (np. amplitudy), stosowanie łagodnych rozpuszczalników i dokładna kontrola temperatury zapobiegają degradacji i zanieczyszczeniu związków bioaktywnych (np. alkaloidów, polifenoli, flawonoidów, kannabinoidów itp.) podczas ekstrakcji ultradźwiękowej.
Wszechstronne zastosowanie ultrasonografów firmy Hielscher
Podczas gdy alternatywne techniki ekstrakcji (np. nadkrytyczny CO2, ekstrakcja rozpuszczalnikowa, perkolacja itp.) często mają zastosowanie tylko do ekstrakcji określonych cząsteczek w zależności od masy cząsteczkowej, rozpuszczalności i wrażliwości na ciepło, ekstrakcja za pomocą wysokowydajnych ultrasonografów firmy Hielscher pozwala na wszechstronną ekstrakcję dowolnego związku botanicznego. Ekstrakcja wspomagana ultradźwiękami może być niezawodnie stosowana do ekstrakcji ekstraktów o szerokim spektrum działania zawierających związki bioaktywne, takie jak polifenole, alkaloidy, antrachinony, flawonoidy, glikozydy, lipidy, pektyny i polisacharydy.
Doskonała wydajność energetyczna i przyjazność dla środowiska
Zużycie energii w ekstrakcji wspomaganej ultradźwiękami jest zdecydowanie mniejsze niż w przypadku tradycyjnych metod ekstrakcji związków leczniczych z roślin.
Niezawodność dzięki standaryzacji procesów z Hielscher Ultrasonics
Ultradźwięki Hielscher pozwalają na precyzyjną kontrolę wszystkich parametrów procesu ultradźwiękowego, takich jak amplituda, intensywność, czas trwania i temperatura. Parametry procesu można łatwo kontrolować i są one stale monitorowane. Dodatkowo wszystkie parametry procesu są automatycznie protokołowane jako plik CSV na wbudowanej karcie SD. Umożliwia to operatorowi rewizję przebiegów sonikacji, optymalizację procesu ekstrakcji i zapewnienie stałej jakości ekstraktu. Ultradźwięki Hielscher umożliwiają producentom wytwarzanie ekstraktów botanicznych o najwyższej jakości i ułatwiają spełnienie wymagań Dobrej Praktyki Wytwarzania (GMP).
Poniższa tabela przedstawia przybliżoną wydajność przetwarzania naszych ultradźwiękowców:
Wielkość partii | natężenie przepływu | Polecane urządzenia |
---|---|---|
1 do 500mL | 10-200mL/min | UP100H |
10 do 2000mL | 20-400mL/min | UP200Ht, UP400St |
0.1 do 20L | 0.2 do 4L/min | UIP2000hdT |
10-100L | 2 do 10L/min | UIP4000hdT |
15 do 150 l | 3 do 15 l/min | UIP6000hdT |
b.d. | 10-100L/min | UIP16000 |
b.d. | większe | klaster UIP16000 |
Skontaktuj się z nami! / Zapytaj nas!
Literatura / Referencje
- Nolasco-González, Y.; Chacón-López, M.A.; Ortiz-Basurto, R.I.; Aguilera-Aguirre, S.; González-Aguilar, G.A.; Rodríguez-Aguayo, C.; Navarro-Cortez, M.C.; García-Galindo, H.S.; García-Magaña, M.d.L.; Meza-Espinoza, L.; Montalvo-González, E. (2022): Annona muricata Leaves as a Source of Bioactive Compounds: Extraction and Quantification Using Ultrasound. Horticulturae 2022, 8, 560.
- Aguilar-Hernandez, G., Zepeda-Vallejo, L. G., Lourdes Garcia-Magana, M. D., de los Angeles Vivar-Vera, M., Perez-Larios, A., Giron-Perez, M. I., Coria-Tellez, A. V., Rodriguez-Aguayo, C., Montalvo-Gonzalez, E. (2020): Extraction of Alkaloids Using Ultrasound from Pulp and By-Products of Soursop Fruit (Annona muricata L.). Applied Sciences, Vol. 10, No. 14, 15 July 2020.
- Chia Hau Lee, Ting Hun Lee, Pei Ying Ong, Syie Luing Wong, Norfadilah Hamdan, Amal A.M. Elgharbawy, Nurul Alia Azmi (2021): Integrated ultrasound-mechanical stirrer technique for extraction of total alkaloid content from Annona muricata. Process Biochemistry, Volume 109, 2021. 104-116.
- Petigny L., Périno-Issartier S., Wajsman J., Chemat F. (2013): Batch and Continuous Ultrasound Assisted Extraction of Boldo Leaves (Peumus boldus Mol.). International Journal of Molecular Science 14, 2013. 5750-5764.
Fakty, które warto znać
Czym są alkaloidy?
Alkaloidy tworzą klasę naturalnie występujących związków azotowych o niskiej masie cząsteczkowej, które często występują jako metabolity wtórne w królestwie roślin. Alkaloid zawiera co najmniej jeden atom azotu. Alkaloidy są biochemicznie syntetyzowane z jednego z następujących trzech powszechnych aminokwasów – lizyna, tyrozyna i tryptofan.
W roślinach alkaloidy zazwyczaj występują jako sole kwasów organicznych, takich jak kwas octowy, jabłkowy, mlekowy, cytrynowy, szczawiowy, winowy, garbnikowy i inne. Niektóre słabo zasadowe alkaloidy (takie jak nikotyna) występują swobodnie w przyrodzie. Kilka alkaloidów występuje również jako glikozydy cukrów, takich jak glukoza, ramnoza i galaktoza, na przykład alkaloidy z grupy solanum (solanina), jako amidy (piperyna) i jako estry (atropina, kokaina) kwasów organicznych (por. Ramawat i in., 2009).
Wiele alkaloidów to związki bioaktywne, które wykazują działanie lecznicze lub terapeutyczne. Na przykład, określone rodzaje alkaloidów są stosowane w leczeniu różnych chorób, w tym malarii, cukrzycy, określonych typów raka, zaburzeń czynności serca, depresji itp.
Ponieważ wiele alkaloidów wykazuje silne właściwości bioaktywne, ich zastosowanie jako farmaceutyków, narkotyków, stymulantów i trucizn zostało przyjęte lub jest przedmiotem badań naukowych. Morfina, dobrze znany alkaloid z maku Papaver somniferum, jest stosowana jako lek farmaceutyczny w dzisiejszej medycynie. Chinina i kodeina to dwa inne alkaloidy stosowane w celach medycznych. Pod nadzorem lekarza i w zalecanych dawkach, alkaloidy są farmakologicznie użyteczne. Jednak przy niewłaściwym stosowaniu niektóre alkaloidy mogą być toksyczne w dużych dawkach. Alkaloid strychnina jest na przykład stosowany jako wysoce skuteczna toksyna używana jako pestycyd przeciwko małym kręgom.
Przykłady niektórych alkaloidów w roślinach
Compounds
Plant Source
Effects and Applications
Morphine
Papaver somniferum
Analgesic
Camptothecin
Camptotheca acuminata
Anticancer
Atropine
Hyoscyamus niger
Treatment of intestinal spasms, antidote to other poisons
Vinblastine
Catharanthus roseus
Anticancer
Codeine
Papaver somniferum
Analgesic, antitusive
Caffeine
Coffea arabica
Stimulant, natural pesticide
Nicotine
Nicotiana tabacum
Stimulant, tranquillizer
Cocaine
Erythroxylon coca
Stimulant of the central nervous system, local anesthetic
N,N-dimethyltryptamine
Mimosa hostilis, Psychotria viridis
Hallucinogenic, entheogenic
Mitragynine
Mitragyna speciosa
Analgesic, psychoactive

Hielscher Ultrasonics produkuje wysokowydajne homogenizatory ultradźwiękowe od laboratorium do rozmiar przemysłowy.