Parauga sagatavošana ar ultraskaņas VialTweeter

Paraugu sagatavošanai pirms analīzes var būt nepieciešami dažādi pirmsanalīzes procesi, piemēram, audu homogenizācija, līze, proteīnu, DNS, RNS, organellu un citu intracelulāro vielu ekstrakcija, izšķīdināšana un degazēšana. VialTweeter ir unikāla ultraskaņas ierīce, kas vienlaikus sagatavo vairākas paraugu caurules tieši tādos pašos apstākļos. Slēgtu mēģeņu netiešās ultraskaņas dēļ tiek novērsta savstarpēja piesārņošana un parauga zudums.

Ultraskaņas paraugu sagatavošana

Ultrasonication ir izplatīta paraugu apstrādes metode, lai paraugu sagatavotu analīzēm, piemēram, polimēru ķēdes reakcijai (PCR), Western Blots, testiem, molekulārajai sekvencēšanai, hromatogrāfijai utt. Ultrasonication ir metode, ko plaši izmanto laboratorijās, lai iepriekš analītiski apstrādātu paraugus. Galvenā ultraskaņas priekšrocība ir tā, ka ultraskaņas darba princips ir balstīts uz tīri mehāniskiem spēkiem. Ultraskaņas līze un šūnu darbības traucējumi tiek panākti ar sonomehāniskiem bīdes spēkiem, kas dod ultrasonikācijai priekšrocību, ka olbaltumvielu ekstrakcijai izmantotos šķīdinātājus var izmantot arī līzes laikā. Ultraskaņas šūnu traucētāji, piemēram, VialTweeter, izjauc šūnu sienas / membrānas un veicina masas pārnesi starp šūnu iekšpusi un šķīdinātāju. Tādējādi analizējamā viela (piemēram, DNS, RNS, olbaltumvielas, organellas utt.) no šūnu matricas tiek efektīvi pārnesta uz šķīdinātāju. Tas nozīmē, ka dzesēšanas un ekstrakcijas soļi pārklājas ar ultraskaņas šūnu darbības traucējumu procesu, kas padara ultraskaņas līzi ļoti efektīvu. Turklāt ultraskaņas paraugu sagatavošanai nav nepieciešami mazgāšanas līdzekļi un citi līzes reaģenti, kas varētu mainīt un iznīcināt lizāta struktūru un ir pazīstams ar turpmākajām problēmām ar attīrīšanu. Vēl viena līzes metode, fermentatīvie traucējumi prasa ilgu inkubācijas laiku un sniedz bieži vien neatkārtojamus rezultātus. Ultraskaņas paraugu sagatavošana pārvar bieži sastopamas problēmas paraugu sagatavošanā, piemēram, audu homogenizāciju, šūnu darbības traucējumus, līzi, olbaltumvielu ekstrakciju un lizāta šķīdību. Tā kā ultraskaņas apstrādes intensitāti var precīzi kontrolēt un pielāgot bioloģiskajam paraugam, tiek novērsta degradācija un parauga zudums. Automātiski uzraudzīta un kontrolēta parauga temperatūra, impulsa režīms un ultraskaņas apstrādes ilgums nodrošina optimālus rezultātus.
 

VialTweeter ir īpaši ērts laboratorijas darbiem, kas prasa vienlaicīgu vairāku paraugu sagatavošanu vienādos apstākļos. VialTweeter ir ultraskaņas bloks sonotrode, kas var turēt līdz 10 flakoniem (piemēram, Eppendorf, centrifūga, NUNC caurules, krio-flakoni) un intensīvi apstrādā tos precīzi kontrolētos apstākļos. Tā kā ultraskaņas enerģija caur flakonu sienām tiek savienota parauga vidē, ārstēšanas laikā flakoni paliek aizvērti. Tādējādi tiek pilnībā novērsti paraugu zudumi un savstarpēja piesārņošana.

Flakoni un tūbiņas, kas aprīko VialTweeter

VialTweeter ir piemērots, lai turētu 10 parastās koniskās vai apaļās apakšdaļas caurules, piemēram, Eppendorf, centrifūgu, krio-flakonus un dažādu veidu NUNC flakonus, taču caurumus pēc pieprasījuma var pielāgot citiem flakonu un mēģeņu izmēriem. Lūdzu, dariet mums zināmu, kāda veida mēģenes vēlaties izmantot, lai mēs varētu attiecīgi modificēt jūsu VialTweeter. Lielākām mēģenēm, piemēram, Falcon mēģenēm un citiem testa traukiem, vārglāzēm un traukiem, VialPress ir ērts risinājums.
Uzziniet vairāk par VialTweeter modeli VT26dxx, kas pielāgots jūsu konkrētajam mēģenes izmēram, piemēram, Falcon caurules!

VialTweeter ar VialPress

Lai gan pats VialTweeter ar saviem 10 cauruļu caurumiem jau ir unikāla un ļoti funkcionāla ultraskaņas ierīce, VialPress papildinājums padara VialTweeter vēl daudzpusīgāku un elastīgāku darbībai. VialPress ir VialTweeter piederums, kas sastāv no iespīlētas joslas, kas ļauj piestiprināt lielākas paraugu mēģenes, piemēram, Falcon caurules vai citas mazas vai vidēja izmēra testa vārglāzes VialTweeter priekšpusē. Attēlā pa kreisi redzams VialTweeter, kas blokā tur 10 Eppendorf flakonus, savukārt VialPress fiksē vienu lielāku mēģeni priekšpusē ultraskaņas apstrādei. VialPress spēj turēt līdz 5 lielākām mēģenēm intensīvai ultraskaņas apstrādei.

VialTweeter paraugu sagatavošanas protokoli

VialTweeter tiek plaši izmantots bioloģisko paraugu apstrādei ar ultraskaņu. Pirms analīzes jāsagatavo paraugi bioķīmiskām vai biofizikālām analīzēm un pārbaudēm, piemēram, ar līzi, audu homogenizāciju, olbaltumvielu ekstrakciju, DNS/RNS nobīdi, degazēšanu utt. VialTweeter droši izpilda šos ultraskaņas procesus un nodrošina reproducējamus rezultātus. Bieži lietots VialTweeter ir zīdītāju (cilvēku un dzīvnieku) audu, kā arī baktēriju šūnu un vīrusu daļiņu līze/šūnu darbības traucējumi. Veiksmīgi ar VialTweeter apstrādātie bioloģiskie paraugi ietver cilvēka plaušu epitēlija šūnas, hematopoētiskās cilmes šūnas, mieloīdās leikēmijas šūnas, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus anthracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptococcus pyogenes, Caulobacter pusmēness, Mycoplasma pneumoniae, mikobaktērijas / Mycobacterium tuberculosis komplekss (MTBC) un daudzas citas baktēriju, botāniskās un mikrobu šūnas.
Zemāk jūs varat atrast dažus atlasītus protokolus ar VialTweeter.

E.Coli līze ar VialTweeter glutationa noteikšanai in vivo

MG1655 celma Escherichia coli baktērijas tika audzētas MOPS minimālā barotnē ar kopējo tilpumu 200ml, līdz tika sasniegts A600 0,5. Kultūra tika sadalīta 50 ml kultūrās stresa ārstēšanai. Pēc 15 min inkubācijas ar 0,79 mM allicīnu, 1 mM diamīdu vai dimetilsulfoksīdu (kontrole) šūnas tika novāktas 4,000 g 4 ° C temperatūrā 10 minūtes. Šūnas divas reizes tika mazgātas ar KPE buferšķīdumu, pirms granulu atkārtotas saskalošanas 700 μl KPE buferšķīduma. Deproteinācijai pirms šūnu darbības pārtraukšanas ar ultrasonikāciju tika pievienoti 300 μl 10% (m/V) sulfosalicilskābes (3 x 1 min; VialTweeter ultrasonicator). Superfugātus savāca pēc centrifugēšanas (30 min, 13 000 g, 4°C). Sulfosalicilskābes koncentrācija tika samazināta līdz 1%, pievienojot 3 tilpumus KPE buferšķīduma. Kopējā glutationa un GSSG mērījumi tika veikti, kā aprakstīts iepriekš. Šūnu glutationa koncentrācija tika aprēķināta, pamatojoties uz E. coli šūnu tilpumu 6,7×10-15 litru un šūnu blīvumu A600 0,5 (atbilst 1×108 šūnām ml-1 kultūrai). GSH koncentrācijas tika aprēķinātas, no kopējā glutationa atņemot 2[GSSG]. (Müller et al. 2016)

Alpha-Synuclein Fibril fragmentācija ar VialTweeter

VialTweeter sonikators tiek plaši izmantots alfa-sinukleīna fibrilu un lentu uzticamai un efektīvai sadrumstalotībai. Noklikšķiniet šeit, lai atrastu detalizētus aprakstus, protokolus un atsauces par alfa-sinukleīna sadrumstalotību ar VialTweeter!

Šūnu līze ar VialTweeter pirms grafīta krāsns atomu absorbcijas spektrometrijas

Bacillus subtilis 168 (trpC2) tika pakļauts 15 minūšu antibiotiku stresam, pēc tam šūnas tika novāktas 3,320 x g, piecas reizes mazgātas ar 100 mM Tris/1 mM EDTA, pH 7,5, atkārtoti suspendētas 10 mM Tris, pH 7,5 un izjauktas ar ultrasonikāciju Hielscher VialTweeter instrumentā. (Wenzel et al. 2014)

VialTweeter parauga sagatavošana pirms masspektrometrijas

Cilvēka CD34 asinsrades cilmes / cilmes šūnu / priekšteču šūnu liofilizētās šūnu granulas tika atkārtoti suspendētas 10μ0000 °�l (200 μl nefasētam HEK293 preparātam peptīdu atšķaidīšanas sērijai) 8 M urīnvielas 100 mM amonija hidrogēnkarbonāta un lizētas, izmantojot ultraskaņu ar Hielscher VialTweeter ar amplitūdu 60%, ciklu 60% un ilgumu 20s trīs reizes ar starpposma dzesēšanu uz ledus. (Amon et al. 2019)

Paraugu sagatavošanas protokoli, izmantojot VialPress

Svaigi salāti (Lactuca sativa) tika homogenizēti 0,5 M HEPES buferšķīdumā (pH 8, KOH koriģēts) ar attiecību 1 g auga (svaigs svars) un 200, 100, 50 vai 20 ml buferšķīduma. Augu masas attiecība pret buferšķīduma tilpumu mainījās, lai kopējais homogenāta tilpums būtu robežās no 3,5 līdz 12 ml. Augu masas attiecība pret buferšķīduma tilpumu tika mainīta, lai kopējais homogenāta tilpums būtu no 3,5 līdz 12 ml, ļaujot homogenizēt ar zondi. Pēc tam homogenātiem tika veikta netieša ultrasonikācija, izmantojot UP200St ar VialTwiter, kas aprīkots ar 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Vācija) 3 minūtes (80% impulss un 100% jauda). Izmantojot šo ierīci, tika novērsts piesārņojums. (Smiļģis un citi, 2019)

Uzticama temperatūras kontrole ultraskaņas apstrādes laikā ar VialTweeter

Temperatūra ir būtisks procesu ietekmējošs faktors, kas ir īpaši svarīgs bioloģisko paraugu apstrādei. Tāpat kā visas mehāniskās paraugu sagatavošanas metodes, ultraskaņas apstrāde rada siltumu. Tomēr, lietojot VialTweeter, paraugu temperatūru var labi kontrolēt. Mēs piedāvājam jums dažādas iespējas, kā uzraudzīt un kontrolēt jūsu paraugu temperatūru, vienlaikus sagatavojot tos ar VialTweeter un VialPress analīzei.

1. Parauga temperatūras uzraudzība: Ultraskaņas procesors UP200St, kas vada VialTweeter, ir aprīkots ar inteliģentu programmatūru un pievienojamu temperatūras sensoru. Pievienojiet temperatūras sensoru UP200St un ievietojiet temperatūras sensora galu vienā no parauga mēģenēm. Izmantojot digitālo krāsaino skārienekrānu, UP200St izvēlnē varat iestatīt noteiktu temperatūras diapazonu ultraskaņas paraugam. Ultrasonicator automātiski apstāsies, kad tiks sasniegta maksimālā temperatūra, un pauze, līdz parauga temperatūra ir pazemināta līdz iestatītās temperatūras zemākajai vērtībai ∆. Tad ultraskaņas apstrāde atkal sākas automātiski. Šī viedā funkcija novērš siltuma izraisītu degradāciju.
2. VialTweeter bloku var iepriekš atdzesēt. Ievietojiet VialTweeter bloku (tikai sonotrode bez devēja!) ledusskapī vai saldētavā, lai iepriekš atdzesētu titāna bloku, kas palīdz atlikt temperatūras paaugstināšanos paraugā. Ja iespējams, arī pašu paraugu var iepriekš atdzesēt.
3. Izmantojiet sausu ledu, lai atdzesētu ultraskaņas apstrādes laikā. Izmantojiet seklu paplāti, kas piepildīta ar sausu ledu, un novietojiet VialTweeter uz sausā ledus, lai siltums varētu ātri izkliedēties.

Klienti visā pasaulē izmanto VialTweeter un VialPress ikdienas paraugu sagatavošanas darbam bioloģiskajās, bioķīmiskajās, medicīniskajās un klīniskajās laboratorijās. UP200St procesora inteliģentā programmatūra un temperatūras kontrole, temperatūra tiek droši kontrolēta un tiek novērsta siltuma izraisīta paraugu degradācija. Ultraskaņas paraugu sagatavošana ar VialTweeter un VialPress nodrošina ļoti ticamus un reproducējamus rezultātus!

VialTweeter tehniskā informācija

VialTweeter ir bloks sonotrode, kas izgatavots no titāna, kas bloka caurumos var turēt līdz 10 flakoniem. Turklāt, izmantojot VialPress, VialTweeter priekšpusē var piestiprināt līdz 5 lielākām mēģenēm. VialTweeter ir veidots tā, ka ultrasonikācijas enerģija tiek vienmērīgi sadalīta katrā ievietotajā flakonā, lai nodrošinātu ticamus un vienmērīgus ultraskaņas rezultātus. Neliels šarnīrs pielāgo VialTweeter sonotrode uz nelīdzenas zemes un izlīdzina mēģenes vertikāli.

VialTweeter priekšrocības īsumā

• Intensīva ultraskaņas apstrāde līdz 10 flakoniem vienlaicīgi
• Netieša ultraskaņas apstrāde ar augstu ultraskaņas intensitāti caur kuģa sienu paraugā
• Netieša ultraskaņas apstrāde novērš savstarpēju piesārņojumu un paraugu zudumu
• Reproducējami rezultāti, pateicoties regulējamai un kontrolējamai ultraskaņas amplitūdai
• VialPress ļauj apstrādāt lielākas caurules ar ultraskaņu
• Regulējama amplitūda no 20 līdz 100%
• Regulējams impulsa režīms no 0 līdz 100%
• Autoklāvējams

VialTweeter darbina UP200St, 200 vatu jaudīgs ultraskaņas procesors. UP200St ir aprīkots ar inteliģentu programmatūru, kas ļauj precīzi kontrolēt visus svarīgos ultraskaņas procesa parametrus, piemēram, amplitūdu, ultraskaņas apstrādes laiku, pulsāciju un temperatūru. Tas padara VialTweeter par uzticamu rīku veiksmīgiem reproducējamiem procesa rezultātiem bioloģiskajās un bioķīmiskajās laboratorijās.
Amplitūdu var regulēt no 20 līdz 100% un ļauj tādējādi pielāgot ultraskaņas intensitāti jūsu paraugam. Piemēram, DNS un RNS nobīdei un sadrumstalotībai nepieciešama maigāka amplitūda, lai novērstu pārāk mazu DNS fragmentu veidošanos, peles smadzeņu audu homogenizācijai ir nepieciešama augstas intensitātes ultraskaņas apstrāde. Izvēlieties ideālo amplitūdu, ultraskaņas intensitāti un ilgumu, izmantojot viedo un intuitīvo izvēlni UP200St procesorā. Izvēlnei un iestatījumiem var viegli piekļūt un tos var darbināt, izmantojot krāsainu skārienekrānu. Iestatījumos varat iepriekš iestatīt ultraskaņas apstrādes parametrus, piemēram, amplitūdu, pulsācijas / cikla režīmu, ultraskaņas apstrādes ilgumu, kopējo enerģijas ievadi un temperatūras ierobežojumus. Pētniecībā un ražošanā izšķiroša nozīme ir izmēģinājumu un testu rezultātu atkārtojamībai. Tas nozīmē, ka precīza procesa apstākļu un ultraskaņas protokolu reģistrēšana ir ārkārtīgi svarīga. Automātiskā datu protokolēšana ieraksta visus ultraskaņas datus CSV failā integrētā SD kartē, lai jūs varētu viegli pārbaudīt un salīdzināt dažādus ultraskaņas braucienus. Visiem ultraskaņas procesa datiem var viegli piekļūt un koplietot kā CSV failu.
Hielscher Ultrasonics cenšas nodrošināt jūs ar progresīvām tehnoloģijām, lai atvieglotu un uzlabotu jūsu pētniecības darbu!