Protokols SARS-CoV-2 koronavīrusa inaktivācijai ar ultraskaņu

Hielscher VialTweeter ir unikāla ultraskaņas vairāku paraugu sagatavošanas vienība, ko izmanto, lai inaktivētu koronavīrusu SARS-COV-2. VialTweeter ļauj vienlaicīgi sagatavot līdz 10 paraugu flakoniem un tādējādi ir ideāla vienība masas paraugu apstrādei.

SARS-CoV-2 koronavīrusa inaktivācija ar VialTweeter

Pēc fiksatora noņemšanas monoslāņi trīs reizes tika mazgāti ar fosfātu buferšķīdumu (PBS) pirms šūnu nokasīšanas 1 ml MEM? 5% FBS un apstrādāti ar ultraskaņu (3 × 10 sekundes ieslēgtas, 10 sekundes izslēgtas ar 100% jaudu un amplitūdu), izmantojot Hielscher ultraskaņas procesoru UP200St ar VialTweeter Pielikumu. Supernatantus dzidrināja, centrifugējot ar 3000 × g 10 min. 

Lasiet pilnu protokolu par SARS-CoV-2 koronavīrusa inaktivāciju, ko veica Welch et al. (2020) zemāk:

Šūnas un vīruss

Vero E6 cells (Vero C1008; ATCC CRL-1586) were cultured in modified Eagle’s minimum essential medium (MEM) supplemented with 10% (v/v) fetal calf serum (FCS). Virus used was SARS-CoV-2 strain hCOV-19/England/2/2020, isolated by PHE from the first patient cluster in the UK on 29/01/2020. This virus was obtained at passage 1 and used for inactivation studies at passage 2 or 3.
Attiecībā uz reaģentiem un ķīmiskajām vielām, ko izmanto SARS-CoV-2 inaktivācijai, kā arī reaģenta citotoksicitātes likvidēšanai, lūdzu, skatīt Welch et al. (2020) zinātnisko ziņojumu.

Vīrusu inaktivācija ar mazgāšanas līdzekļiem – SARS-CoV-2 koronavīrusa inaktivācijas protokols by Welch et al. 2020

SARS-CoV-2 inaktivācija

Komercproduktiem, vīrusu preparātiem (audu kultūru šķidrums, titri no 1 × 10⁶ līdz 1 × 10⁸ PFU/ml) were treated in triplicate with reagents at concentrations and for contact times recommended in the manufacturers’ instructions for use, where available, or for concentrations and times specifically requested by testing laboratories. Where a range of concentrations was given by the manufacturer, the lowest ratio of product to sample was tested (i.e. lowest recommended concentration of test product). Specimen transport tube reagents were tested using a ratio of one volume of tissue culture fluid to ten volumes of reagent, unless a volume ratio of sample fluid to reagent was specified by the manufacturer. Detergents, fixatives and solvents were tested at the indicated concentrations for the indicated times. All inactivation steps were performed at ambient room temperature (18 – 25°C). For testing of alternative sample types, virus was spiked into the indicated sample matrix at a ratio of 1:9, then treated with test reagents as above. All experiments included triplicate control mock-treated samples with an equivalent volume of PBS in place of test reagent. Immediately following the required contact time, 1mL of treated sample was processed using the appropriately selected filtration matrix. Reagent removal for inactivation testing was carried out in a larger spin column format using Pierce 4mL Detergent Removal Spin Columns (Thermo Fisher), or by filling empty Pierce 10mL capacity centrifuge columns (Thermo Fisher) with SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-400HR or Sephadex LH-20 to give 4mL packed beads/resin. For purification using Amicon filters, 2 × 500μl samples were purified using two centrifugal filters by the method previously described, then pooled together. For formaldehyde and formaldehyde with glutaraldehyde removal, one filter was used with 1× 500μl sample volume, resuspended after processing in 500μl PBS, and added to 400ul MEM/5% FBS. For inactivation of infected monoslāņi, 12,5 cm² Vero E6 šūnu kolbas (2.5. × 10⁶ šūnas/kolba 2,5 ml MEM/5% FBS) tika inficētas ar MOI 0,001 un inkubētas 37 °C/5% CO temperatūrā₂ 24 stundas. Supernatants tika noņemts, un šūnas tika fiksētas, izmantojot 5 ml formaldehīda vai formaldehīda un glutaraldehīda istabas temperatūrā 15 vai 60 minūtes. Fiksators tika noņemts, un monoslāņi trīs reizes mazgāti ar PBS pirms šūnu nokasīšanas 1 ml MEM? 5% FBS un apstrādāti ar ultraskaņu (3 × 10 sekundes ieslēgtas, 10 sekundes izslēgtas pie 100% jaudas un amplitūdas), izmantojot UP200St ar VialTweeter pielikumu (Hielscher ultraskaņas tehnoloģija). Supernatantus dzidrināja, centrifugējot ar 3000 × g 10 min.

Sīkāka informācija par reaģentu, ko izmanto SARS-CoV-2 koronavīrusa inaktivācijai ar ultraskaņas VialTweeter saskaņā ar Welch et al. 2020 protokolu

Pilns protokols, ieskaitot Hielscher VialTweeter izmantošanu, ir atrodams šeit:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Izsmalcināti ultraskaņas dismembrators un šūnu traucētāji

Vairāku paraugu ultrasonicator VialTweeter ir tikai viens no daudziem ultraskaņas risinājumiem paraugu sagatavošanai bioloģiskajās, bioķīmiskajās un klīniskajās laboratorijās. Hielscher Ultrasonics piedāvā ideālu ultraskaņas dismembratoru jūsu lietojumam, piemēram, šūnu līze, šūnu ekstrakcija, audu homogenizācija, lizāta šķīdināšana, izšķīdināšana, paraugu degazēšana utt.
Paziņojiet mums, cik daudz paraugu jums ir jāapstrādā stundā un dienā, ja vēlaties tiešu vai netiešu ultraskaņu un kāds ir ultraskaņas paraugu apstrādes mērķis. Mēs jums ieteiksim vispiemērotāko ultraskaņas ierīci jūsu ikdienas darba rutīnai!
Hielscher Ultrasonics’ digital ultrasonic processors are equipped with smart software, automatic data recording, easy pre-setting options for temperature control, sonication duration, cycle/pulse mode as well as sample illumination and browser remote control. We strive to make our ultrasonic devices as smart as possible so that your research and work routine becomes as convenient and successful as possible.
Noklikšķiniet šeit, lai atrastu vairāk lietojumprogrammu, tostarp ultraskaņas paraugu sagatavošanas protokolus ar VialTweeter!