Hielscher ultraskaņas tehnoloģija

Protokols SARS-CoV-2 Coronavirus Inactivācija ar ultraskaņu

Hielscher VialTweeter ir unikāla ultraskaņas vairāku paraugu sagatavošanas vienība, ko izmanto, lai inaktivētu koronavīrusu SARS-COV-2. VialTweeter ļauj vienlaicīgi sagatavot līdz 10 paraugu flakoniem, un tādējādi tā ir ideāla vienība masveida paraugu apstrādei.

SARS-CoV-2 koronavīrusa inaktivācija ar VialTweeter

Pēc fiksācijas noņemšanas monoslānis trīs reizes tika mazgāts ar fosfātbuferētu fizioloģisko šķīdumu (PBS) pirms šūnu nokasīšanas 1 ml MEM/5% FBS un ar ultraskaņu (3 × 10 sekundes, 10 sekundes pie 100% jaudas un amplitūdas), izmantojot Hielscher ultraskaņas procesoru UP200St ar VialTweeter Pielikumu. Centrifugējot ar 3000 × g 10 minūtes. 

Lasīt pilnu protokolu šeit SARS-CoV-2 coronavirus inaktivāciju Welch et al. (2020) zemāk:

Šūnas un vīruss

Vero E6 šūnas (Vero C1008; ATCC CRL- 1586) kultivēja modificētā Eagle minimālajā pamat barotnā (MEM), ko papildināja 10% (v/v) augļa teļu serums (FCS). Izmantotais vīruss bija SARS-CoV-2 celms hCOV-19/England/2/2020, ko PHE izolē no pirmā pacientu grupas Apvienotajā Karalistē 29.01.2020. Šis vīruss tika iegūts 1. pārejas punktā un izmantots inaktivācijas pētījumos 2. vai 3. punktā.
Attiecībā uz reaģentiem un ķīmiskajām vielām, ko izmanto SARS-CoV-2 inaktivācijai, kā arī reaģenta citotoksicitātes noņemšanai, lūdzu, skatiet Welch et al. zinātnisko ziņojumu (2020).

The ultrasonic sample preparation unit VialTweeter is used for the inactivation of SARS-CoV-2 coronavirus

Mazgāšanas līdzekļu inaktivācija pret vīrusiem – SARS-CoV-2 Coronavirus Inaktivation protocol by Welch et al. 2020 SARS-CoV-2 Coronavirus Inaktivation protocol by Welch et al. 2020

SARS-CoV-2 inaktivācija

Komerciāliem produktiem vīrusu preparāti (audu kultūras šķidrums, titri no 1 × 106 līdz 1 × 108 PFU/ml) tika apstrādāti trīs eksemplāros ar reaģentiem koncentrācijās un kontakta laiku, kas ieteikts ražotāja lietošanas pamācībā, ja iespējams, vai koncentrācijām un laikiem, ko īpaši pieprasa testēšanas laboratorijas. Ja ražotājs ir devis koncentrāciju diapazonu, tika pārbaudīta mazākā produkta un parauga attiecība (t. i., mazākā ieteicamā testējamā produkta koncentrācija). Transporta caurules reaģentu paraugus testēja, izmantojot attiecību no viena tilpuma audu kultūras šķidruma līdz desmit reaģenta tilpumam, ja vien ražotājs nav norādījis parauga šķidruma un reaģenta tilpuma attiecību. Mazgāšanas līdzekļi, fiksācijas līdzekļi un šķīdinātāji norādītajākoncentrācijā tika pārbaudīti norādītajās koncentrācijās norādītajā laikā. Visi inaktivācijas posmi tika veikti istabas temperatūrā (18 – 25°C). Alternatīvu paraugu tipu testēšanai vīruss tika piesātināts norādītajā parauga matricā ar attiecību 1:9, pēc tam apstrādāts ar iepriekš minētajiem testa reaģentiem. Visos eksperimentos bija iekļauti triplicate control mock-apstrādāti paraugi ar līdzvērtīgu PBS tilpumu testa reaģenta vietā. Tūlīt pēc nepieciešamā saskares laika apstrādātā parauga 1 ml tika apstrādāts, izmantojot atbilstoši izvēlēto filtrēšanas matricu. Reaģenta noņemšana inaktivācijas testēšanai tika veikta lielākā spin kolonnas formātā, izmantojot Pierce 4mL mazgāšanas līdzekļu noņemšanas spin kolonnas (Thermo Fisher), vai aizpildot tukšas Pierce 10ml ietilpības centrifūgas kolonnas (Thermo Fisher) ar SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-400HR vai Sephadex LH-20 dot 4ml iepakotas lodītes / sveķus. Attīrīšanai, izmantojot Amicon filtrus, 2 × 500 μl paraugi tika attīrīti, izmantojot divus centrbēdzes filtrus ar iepriekš aprakstīto metodi, pēc tam apvienoti kopā. Formaldehīdam un formaldehīdam ar glutaraldehīda atdalīšanu tika izmantots viens filtrs ar 1× 500 μl parauga tilpuma, pēc apstrādes atkārtoti uzpildīts 500 μl PBS un pievienots 400ul MEM/5% FBS. Inaktivācijai inficēto VialTweeter at the ultrasonic processor UP200STvienslāņa slānī, 12,5 cm2 Vero E6 šūnu kolbas (2,5 × 106 šūnas/kolba 2,5 ml MEM/5% FBS) bija inficētas ar MOI 0,001 un inkubē 37°C/5% CO2 24 stundas. Supernatants tika noņemts, un šūnas, kas fiksētas, izmantojot 5 ml formaldehīda, vai formaldehīda un glutaraldehīda istabas temperatūrā 15 vai 60 minūtes. Fiksācijas tika noņemts, un monoslāni tika mazgāti trīs reizes ar PBS pirms nokasot šūnas 1mL MEM/5% FBS un sonicated (3 × 10 sekunžu, 10 sekundes off ar 100% jaudu un amplitūdu), izmantojot UP200St ar VialTweeter arestu (Hielscher Ultrasound Technology). Centrifugējot ar 3000 × g 10 minūtes.

VialTweeter intensīvi ultraskaņas ar slēgtiem flakoniem

VialTweeter par intensīvu slēgtu flakonu ultraskaņu

Informācijas pieprasījums




Ņemiet vērā, ka mūsu Privātuma politika.


Various reagents have been tested for the inactivation of the SARS-CoV-2 coronavirus using the ultrasonic sample prep unit VialTweeter.

Sīkāka informācija par reaģentu, ko izmanto SARS-CoV-2 koronavīrusa inaktivācijai ar ultraskaņas VialTweeter saskaņā ar Welch et al. 2020 protokolu

Pilns protokols, ieskaitot Hielscher VialTweeter lietošanu, ir atrodams šeit:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

The multi-sample ultrasonicator VialTweeter allows for simultaneous sample preparation of up to 10 vials under same process conditions. The VialTweeter is an established ultrasonic device used for the inactivation of corona virus SARS-CoV-2 (Click to enlarge!)

VialTweeter ultraskaņas vīrusu inaktivācijai

VialTweeter priekšrocības īsumā

  • Vienlaicīgi veikta līdz 10 flakonu apstrāde ar ultraskaņu
  • Bez savstarpējas inficēšanās
  • Nav parauga zuduma
  • Automātiska datu ierakstīšana
  • Viegli un droši darboties
VialTweeter lieto arī

  • Šūnu līze
  • Vīrusu daļiņu darbības traucējumi
  • Nukleīnskābju ekstrakcija: DNS/RNS izolēšana
  • DNS/RNS sadrumstalotība
  • Lizāta šķīdība
  • Izsmalcināti ultraskaņas dismembratori un šūnu traucētāji

    Vairāku paraugu ultrasonators VialTweeter ir tikai viens no daudziem ultraskaņas šķīdumiem paraugu sagatavošanai bioloģiskajās, bioķīmiskajās un klīniskajās laboratorijās. Hielscher Ultrasonics piedāvā ideālu ultraskaņas dismembratoru jūsu pieteikumam, piemēram, šūnu līze, šūnu ekstrakcija, audu homogenizācija, lizāta šķīdība, šķīdināšana, parauga degazēšana utt.
    Ļaujiet mums uzzināt, cik daudz paraugu jums ir jāapstrādā stundā un dienā, ja vēlaties tiešu vai netiešu ultraskaņu un kāds ir ultraskaņas paraugu apstrādes mērķis. Mēs ieteiks jums vispiemērotāko ultraskaņas vienību jūsu ikdienas darba rutīnai!
    Hielscher Ultrasonics digitālie ultraskaņas procesori ir aprīkoti ar viedo programmatūru, automātisko datu reģistrēšanu, viegliem temperatūras kontroles, ultraskaņas apstrādes, ultraskaņas apstrādes ilguma, cikla/pulsa režīma, kā arī parauga apgaismojuma un pārlūkprogrammas tālvadības pults izmantošanas iespējām. Mēs cenšamies padarīt mūsu ultraskaņas ierīces pēc iespējas gudrākas, lai jūsu pētījumi un darba rutīna kļūtu pēc iespējas ērtāki un veiksmīgāki.
    Uzklikšķināt šeit, lai atrastu vairāk pieteikumus, tostarp ultraskaņas paraugu sagatavošanas protokolus ar VialTweeter!

    Sazinies ar mums! / Uzdot mums!

    Lūgt vairāk informācijas

    Lūdzu, izmantojiet zemāk esošo formu, lai pieprasītu papildu informāciju par ultraskaņas procesoriem, lietojumprogrammām un cenu. Mēs labprāt apspriedīsim jūsu procesu ar jums un piedāvāsim jums ultraskaņas sistēmu, kas atbilst jūsu prasībām!









    Lūdzu, ņemiet vērā mūsu Privātuma politika.


    Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

    Hielscher Ultrasonics ražo augstas veiktspējas ultraskaņas homogenizatorus lietojumprogrammu sajaukšanai, dispersijai, emuulģēšanai un ekstrakcijai laboratorijā, pilotā un rūpnieciskajā mērogā.

    Literatūra/atsauces



    Fakti ir vērts zināt

    Kas ir Vero Cells?

    Vero E6, pazīstams arī kā Vero C1008 (ATCC Nr. CRL- 1586) ir klons šūnu līnija no Vero 76 un tiek izmantots pētījumos SARS-CoV un SARS-CoV-2 coronaviruses. Vero šūnas ir šūnu, ko izmanto šūnu kultūrās, izcelšana. "Vero’ izdalīta no nieru epitēlija šūnām, kas ekstrahētas no Āfrikas zaļā pērtiķa (Chlorocebus sp.).
    Vero E6 šūnas uzrāda kādu kontakta inhibīciju, tāpēc ir piemēroti vīrusu izplatīšanai, kas replicējas lēni. Vero E6 šūnu līnijas parasti izmanto, lai izpētītu koronvīrusu SARS- CoV un SARS- CoV- 2 citpatoloģiju kā Vero šūnām (Āfrikas zaļajiem pērtiķu nieru šūnām) piemīt bagātīga angiotenzīnu konvertējošā enzīma 2 (AKE2) receptoru ekspresija. ACE2 receptori ir galvenais docking vietā SARS-CoV-2 coronavirus.
    Piemēram, Ogando et al. (2020) konstatēja, ka SARS-CoV-2 – salīdzinājumā ar SARS-CoV – intracelulārās vīrusu RNS līmenis, bet pārsteidzoši aptuveni 50 reizes mazāk infekciozo vīrusu pēcnācēju tika atgūts no barotnes. Turklāt tās konstatēja, ka abu vīrusu jutība pret trim pierādītiem coronavīrusu replikācijas inhibitoriem (Remdesivir, Alisporivir un hlorhinīns) ir ļoti līdzīga, bet SARS- CoV- 2 infekcija ir būtiski jutīgāka pret šūnu iepriekšēju ārstēšanu ar pegilētu alfa interferonu. Svarīga atšķirība starp abiem vīrusiem ir fakts, ka – pēc paslaidi Vero E6 šūnās – SARS-CoV-2 acīmredzot ir zem spēcīga atlases spiediena, lai iegūtu adaptīvās mutācijas savā smaile olbaltumvielu gēnu. Šīs mutācijas mainīt vai dzēst iedomāts "furin līdzīgu šķelšanās vietā" reģionā, kas savieno S1 un S2 jomās un rezultātā ļoti ievērojamas fenotipiskās izmaiņas plāksne testi.