Hielscher ultraskaņas tehnoloģija

BL21 šūnu šūnu sabrukšana ar ultrasonikāciju

BL21 šūnas ir celms E. coli, ko plaši izmanto pētniecības laboratorijās, biotehnoloģijā un rūpnieciskajā ražošanā, jo tās spēj izteikt olbaltumvielas ļoti efektīva. Ultraskaņas šūnu traucējumi, līze un olbaltumvielu ekstrakcija ir kopīga metode, lai izolētu un savāktu mērķa olbaltumvielas no BL21 šūnu šūnu iekšējās iekšpuses. Ultrasonication pilnībā pārtrauc šūnu un atbrīvo visas iesprūst olbaltumvielas, padarot 100% no olbaltumvielām pieejamus.

BL21 Šūnas olbaltumvielu ekspresijas

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsBL21 šūna ir ķīmiski kompetenta E. coli baktēriju celms, kas piemērots transformācijai un augsta līmeņa olbaltumvielu ekspresijai, izmantojot T7 RNS polimerāzes-IPTG indukcijas sistēmu. BL21 šūnas ļauj augstas efektivitātes olbaltumvielu ekspresiju jebkura gēna, kas atrodas kontrolē T7 veicinātājs. E. coli celms BL21 (DE3) ir T7 RNS polimerāzes proteīna ražošanas celms apvienojumā ar uz T7 prodatorizatora bāzes veidotiem ekspresijas vektoriem, un to plaši izmanto laboratorijās un rūpniecībā, lai ražotu rekombinantos proteīnus. BL21(DE3) gēna ekspresiju, kas kodē rekombinanto proteīnu, transkribē hromosomāli kodēta T7 RNS polimerāze (T7 RNP), kas pārtvaiko astoņas reizes ātrāk nekā parastā E. coli RNAP. Tas padara celmu BL21 (DE3) ļoti efektīvu un pārvērš to par vienu no vēlamākajām olbaltumvielu ekspresijas šūnu sistēmām.

Protokols ultraskaņas sabrukšanas un olbaltumvielu ekstrakcijai no BL21 šūnām

BL21 šūnu līze galvenokārt tiek veikta, izmantojot ultrasonikāciju kombinācijā ar nātrija laurilsazinonātu (pazīstams arī kā sarkosyl) kā līzes buferšķīdumu. Ultraskaņas šūnu traucējumu un proteīna ekstrakcijas priekšrocības slēpjas uzticamības, reproducējamības, kā arī vienkāršas, drošas un ātras ultraskaņasatoru darbībā. Zemāk redzamais protokols sniedz pakāpenisku ultraskaņas BL21 šūnu līzes virzienu:

Zondes tipa insonifier UP200St līzes

Ultraskaņas šūnu traucētājs UP200St ar mikrogalu S26d2 līzei un olbaltumvielu ekstrakcijai

Informācijas pieprasījums




Ņemiet vērā, ka mūsu Privātuma politika.


  • Lai likvidētu chaperone proteīnus, BL21 baktēriju granulas tika atkārtoti iesaisti 50 ml ledus auksta nātrija Tris-EDTA (STE) buferšķīduma (kas sastāv no 10 mM Tris-HCL, pH 8,0, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl, kas papildināts ar 100 mM PMSF).
  • Pievieno 500 ul lysozyme (10 mg/ ml) un šūnas inkubē uz ledus 15 minūtes.
  • Pēc tam pievieno 500 ul DTT un 7 ml sarkosyl (10% (m/V), kas izveidots STE buferšķīdumā).
  • Ir svarīgi, lai visi attīrīšanas buferi būtu auksti un visu laiku saglabātu paraugus uz ledus. Visi attīrīšanas pasākumi jāveic saldētavā, ja iespējams.
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • Ultraskaņas līzei un olbaltumvielu ekstrakcijai paraugus apstrādā ar ultraskaņu VialTweeter MultiSample Ultrasonicator 4 x 30 sek. Alternatīvi, zondes tipa ultraskaņas homogenizators ar mikro-tip, piemēram, UP200Ht ar S26d2 (3 x 30 sek., 2 min. pauzi starp ultraskaņas cikliem, 80% amplitūdu).
  • Tālākiem attīrīšanas posmiem paraugi jāglabā uz ledus vai līdz turpmākai apstrādei jāuzglabā -80 °C temperatūrā.

Ultraskaņas līze zem prezcise temperatūras kontroles

Precīza un uzticama temperatūras kontrole ir būtiska, apstrādājot bioloģiskos paraugus. Augsta temperatūra iniciē termiski izraisītu olbaltumvielu noārdīšanos paraugos.
Tā kā visas mehāniskās paraugu sagatavošanas metodes, ultraskaņas apstrāde rada siltumu. Tomēr, izmantojot VialTweeter, paraugu temperatūru var labi kontrolēt. Mēs piedāvājam jums dažādas iespējas, lai uzraudzītu un kontrolētu temperatūru jūsu paraugus, vienlaikus sagatavojot tos ar VialTweeter un VialPress analīzei.

  1. Parauga temperatūras uzraudzība: Ultraskaņas procesors UP200St, kas vada VialTweeter, ir aprīkots ar inteliģentu programmatūru un iespraudējamu temperatūras sensoru. Iespraudiet temperatūras sensoru UP200St un ievietojiet temperatūras sensora galu vienā no paraugu caurulēm. Izmantojot digitālu skārienatstāvu, UP200St izvēlnē varat iestatīt īpašu temperatūras diapazonu jūsu parauga ultraskaņas apstrādei. Ultrasonicator automātiski apstāsies, kad maksimālā temperatūra ir sasniegta, un pauze, līdz parauga temperatūra ir uz leju līdz iestatītās temperatūras zemāko vērtību, kas ∆. Tad ultraskaņas apstrāde atkal sākas automātiski. Šī viedā funkcija novērš karstuma izraisītu noārdīšanos.
  2. VialTweeter bloku var iepriekš atdzesēt. Ievietojiet VialTweeter bloku (tikai sonotrodu bez zondi!) ledusskapī vai saldētavā, lai iepriekš atdzesētu titāna bloku, palīdz atlikt temperatūras paaugstināšanos paraugā. Ja iespējams, paraugu var iepriekš atdzesēt too.
  3. Izmanto sausu ledu, lai atdzesētu ultraskaņas apstrādes laikā. Izmantojiet seklu paplāti, kas piepildīta ar sausu ledu, un novietojiet VialTweeter uz ledus, lai karstums varētu ātri izkliedēties.

Klienti visā pasaulē izmanto VialTweeter un VialPress ikdienas paraugu sagatavošanas darbu bioloģiskajās, bioķīmiskajās, medicīniskajās un klīniskajās laboratorijās. UP200St procesora inteliģentā programmatūra un temperatūras kontrole, temperatūra tiek droši kontrolēta un izvairīties no karstuma izraisītas paraugu degradācijas. Ultraskaņas paraugu sagatavošana ar VialTweeter un VialPress nodrošina ļoti uzticamus un reproducējamus rezultātus!

Atrodiet optimālo ultraskaņas traucētāju jūsu līzes lietojumprogrammai

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher Ultrasonics ir sen pieredzējis augstas veiktspējas ultraskaņas šūnu traucētāju un homogenizatoru ražotājs laboratorijām, galda un rūpnieciskās mēroga sistēmām. Jūsu baktēriju šūnu kultūras lielums, jūsu pētniecības vai ražošanas mērķis un šūnas apjoms, kas jāapstrādā stundā vai dienā, ir būtiski faktori, lai atrastu pareizo ultraskaņas šūnu traucētāju jūsu pieteikumam.
Hielscher Ultrasonics piedāvā dažādus risinājumus vienlaicīgai daudzo paraugu (līdz 10 flakoniem ar VialTweeter) un masas paraugu (t.i., mikrotitrēšanas plates / ELISA plates ar UIP400MTP), kā arī klasiskais zondes tipa laboratorijas ultrasonikators ar dažādiem jaudas līmeņiem no 50 līdz 400 vatiem līdz pilnīgi rūpnieciskiem ultraskaņas procesoriem ar līdz pat 16 000 vatiem uz vienību komercšūnu darbības pārtraukšanai un olbaltumvielu ekstrakcijai lielā ražošanā. Visi Hielscher ultrasonicators ir būvēti 24/7/365 darbībai pilnā slodzē. Robustums un uzticamība ir mūsu ultraskaņas ierīču galvenās iezīmes.
Visi digitālie ultraskaņas homogenizatori ir aprīkoti ar viedo programmatūru, krāsainu skārienjutīgu displeju un automātisko datu fiksēšanu, kas padara ultraskaņas ierīci par ērtu darba rīku laboratorijā un ražošanas iekārtās.
Ļaujiet mums zināt, kāda veida šūnas, kādā tilpumā, ar kādu frekvenci un ar kādu mērķi jums ir apstrādāt jūsu bioloģisko paraugus. Mēs iesakām jums vispiemērotāko ultraskaņas šūnu traucētāju jūsu procesa prasībām.

Zemāk esošajā tabulā ir sniegta norāde par mūsu ultraskaņas sistēmu aptuveno apstrādes jaudu no kompaktajiem rokas homogenizatoriem un MultiSample Ultrasonicators līdz rūpnieciskiem ultraskaņas procesoriem komerciāliem lietojumiem:

partijas apjoms Plūsmas ātrums Ieteicamie ierīces
96-aukli / mikrotitrēšanas plates nav | UIP400MTP UIP400MTP
10 flakoni ā 0,5 līdz 1,5ml nav | VialTweeter UP200St
0.01 līdz 250ml 5 līdz 100ml/min UP50H
0.01 līdz 500ml 10 līdz 200 ml / min UP100H
10 līdz 2000mL 20 līdz 400 ml / min UP200Ht, UP400St
0.1 līdz 20L 0.2 līdz 4 l / min UIP2000hdT
10 līdz 100 l 2 līdz 10 l / min UIP4000hdT
nav | 10 līdz 100 l / min UIP16000
nav | lielāks klasteris UIP16000

Sazinies ar mums! / Uzdot mums!

Lūgt vairāk informācijas

Lūdzu, izmantojiet zemāk esošo formu, lai pieprasītu papildu informāciju par ultraskaņas procesoriem, lietojumprogrammām un cenu. Mēs labprāt apspriedīsim jūsu procesu ar jums un piedāvāsim jums ultraskaņas sistēmu, kas atbilst jūsu prasībām!









Lūdzu, ņemiet vērā mūsu Privātuma politika.


Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

Ultraskaņotājs UP200Ht ar 2mm mikrotipu S26d2 mazu paraugu apstrādei ar ultraskaņu

Literatūra/atsauces



Fakti ir vērts zināt

Escherichia Coli Baktērijas

Escherichia coli ir baktēriju tips, kas nav sporu veidošanās, Gram-negatīvs un raksturo tās forma taisnu stieni. E.coli baktērijas atrodas vidē, pārtikā un zarnās cilvēkiem un dzīvniekiem. E. coli parasti ir motile, izmantojot peritrichous flagella, bet ir nonmotile veidi, too. E.coli ir tā sauktie fakultatīvi anaerobā chemoorganotroph organismi, kas nozīmē, ka tie spēj gan elpošanas, gan fermentatīvo metabolismu. Lielākā daļa E.coli veidu ir labdabīgi un pilda noderīgas funkcijas organismā, piemēram, nomāc kaitīgu baktēriju sugu augšanu, vitamīnu sintēzi utt.
Escherichia coli baktēriju šūnu tā saukto B tipa ir īpaša kategorija E.coli celmiem, kas tiek plaši izmantoti pētniecībā, lai izpētītu mehānismus, piemēram, bakteriofāžas jutīgumu vai ierobežojumu modifikācijas sistēmas. Turklāt E.coli baktērijas tiek novērtētas kā uzticams proteīna ekspresijas darba zirgs biotehnoloģijas un dzīvības zinātņu laboratorijās. Piemēram, E.coli izmanto, lai sintezētusavienojumus, piemēram, olbaltumvielas un oligosaharīdus rūpnieciskā mērogā. Sakarā ar īpašām iezīmēm, piemēram, proteāzes deficītu, zemu acetāta ražošanu augstā glikozes līmenī un uzlabotu caurlaidību, E. coli B šūnas ir viņš visbiežāk izmanto saimniekšķīdās šūnas ģenētiski inženierijas olbaltumvielu ražošanai.

Rekombinants proteīns

Rekombinantās olbaltumvielas (rProt) kļūst ļoti svarīgas daudzveidīgās nozarēs, tostarp ķīmiskajā ražošanā, farmācijā, kosmētikas, cilvēku un dzīvnieku medicīnā, lauksaimniecībā, pārtikā, kā arī atkritumu apstrādes nozarēs.
Rekombinantā proteīna ražošanai ir jāizmanto ekspress sistēma. Kā ekspresējošas šūnu sistēmas rekombinantās DNS ražošanai var izmantot gan prokariotu, gan eukariotu šūnas. Kaut arī baktēriju šūnu visplašāk izmanto olbaltumvielu ekspresiju, jo tādi faktori kā zemas izmaksas, viegli mērogojamību un vienkāršus apstākļus, zīdītāju, rauga, aļģu, kukaiņu un bezšūnu sistēmas ir izveidotas alternatīvas. Olbaltumvielu veids, funkcionālā aktivitāte, kā arī vajadzīgais ekspress olbaltumvielu ražība ietekmē olbaltumvielu ekspresim izmantotās šūnu sistēmas izvēli.
Lai izteiktu rekombinanto proteīnu, konkrēta šūna jātransficē ar DNS vektoru, kas satur rekombinantās DNS paraugu. Šūnas, kas transfected ar veidni pēc tam kultivētas. Šūnu mehānisma rezultātā šūnas pārtulko un tulko interesējošo proteīnu, tādējādi ražojot mērķa olbaltumvielu.
Tā kā izteiktie proteīni ir iesprūduši šūnu matricā, šūna ir jāizkliedē (jāpārtrauc un jāsalauž), lai atbrīvotu olbaltumvielas. Nākamajā attīrīšanas posmā proteīns tiek atdalīts un attīrīts.
Pirmais rekombinantais proteīns, ko izmantoja ārstējot, bija rekombinants cilvēka insulīns 1982. gadā. Šodien visā pasaulē ārstēšanai tiek ražoti vairāk nekā 170 rekombinanto proteīnu veidi. Parasti izmantotie rekombinantie proteīni, ko izmanto medicīnā, ir, piemēram, rekombinanti interferoni, interleikīni, augšanas faktori, audzēja nekrozes faktori, asins recēšanas faktori, trombolītiskas zāles, un fermenti, lai ārstētu galvenās slimības, piemēram, diabēts, dwarfism, miokarda infarkts, sastrēguma sirds mazspēja, smadzeņu apaļķojošs, multiplās sklerozes, neitropēnija, trombocitopēnija, anēmija, hepatīts, reimatoīdais artrīts, astma, Krona slimība, un vēža terapiju. (sal. ar Phuc V. Pham, omikas tehnoloģijās un biotehnikā, 2018)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Augstas veiktspējas ultrasonikācija! Hielscher produktu klāsts aptver pilnu spektru no kompaktā laboratorijas ultrasonatora pār galda vienībām līdz pilnas rūpniecības ultraskaņas sistēmām.