E. Coli ultraskaņas līze
- E. coli baktērijas ir visbiežāk izmantotās baktērijas mikrobioloģijā un biotehnoloģijā.
- Ultraskaņas šūnu traucētāji sniedz ticamus un reproducējamus rezultātus E. coli līzei.
- Intensīva, bet precīzi kontrolējama kavitācija un bīdes spēki izraisa pilnīgus traucējumus un augstu ekstrakcijas iznākumu (piemēram, olbaltumvielas, DNS).
Kāpēc vēlamā metode ir E. coli ultraskaņas šūnu darbības traucējumi?
Ultraskaņas homogenizatori vai zondes tipa ultrasonikatori piedāvā vairākas priekšrocības E. coli līzei, jo intensīva ultraskaņa efektīvi traucē šūnu sienas un membrānas. Zondes tipa ultrasonikatori tiek plaši izmantoti E. coli līzei šādu iemeslu dēļ:
Olbaltumvielu ekstrakcija no E.coli šūnām tiek efektīvi veikta ar ultraskaņas zonde UP200St
Zondes tipa ultrasonicator piedāvā daudzas priekšrocības E. coli līzei. Uzticama un precīza ultraskaņas procesa parametru kontrole ļauj optimizēt darbības parametrus, piemēram, jaudu, ilgumu un paraugu apstrādi, lai sasniegtu vēlamos rezultātus.
E. coli EDL933 genoma DNS elektroforētiskās analīzes pakļautas 0 – 15 min ultrasonikācijai. L norāda DNS kāpnes.
(pētījums un attēls: ©Basselet et al. 2008)
Šūnu darbības traucējumi, izmantojot ultraskaņas kavitāciju
Ultraskaņas zondes tipa homogenizatori darbojas ar aptuveni 20 000 cikliem sekundē (pie 20 kHz) un izraisa kavitāciju šķidrumos vai suspensijās. Akustiskā kavitācija mikroskopiskas vietas ar vakuumam līdzīgu spiedienu un augstu temperatūru, kas saplēš šūnas. Lai gan temperatūra var sasniegt vairākus tūkstošus grādu pēc Celsija, kavitācijas apjomi ir tik mazi, ka tie būtiski neuzsilda procesu. Ultraskaņas radītie akustiskie kavitācijas un bīdes spēki perforē vai izjauc baktēriju šūnu, piemēram, E.coli, šūnu membrānu. Hielscher ultrasonikatori ļauj precīzi kontrolēt procesa parametrus, piemēram, ultraskaņas intensitāti, amplitūdu, enerģijas ievadi un temperatūru. Tādējādi ultraskaņas līzes procesu var optimāli pielāgot šūnu tipam, šūnu kultūrai un procesa mērķim.
- precīza līzes kontrole (intensitāte, amplitūda, temperatūra)
- ticami, reproducējami rezultāti
- optimāla pielāgošanās konkrētiem paraugiem
- temperatūras kontrole
- ļoti maziem līdz ļoti lieliem paraugiem (μL līdz litriem)
- Tīri mehāniska apstrāde
- Lietotājam draudzīga, droša ekspluatācija
- lineāra palielināšana no laboratorijas līdz ražošanai
VialTweeter Ultraskaņas līzei
Ultraskaņas homogenizators vs Citas līzes metodes
Lai gan ķīmiskā un fermentatīvā līze var būt problemātiska – tā kā ķīmiskā līze var mainīt olbaltumvielu struktūras un ieviest attīrīšanas problēmas, un fermentatīvai līzei ir nepieciešams ilgs inkubācijas laiks, un tā nav reproducējama – Ultraskaņas traucējumi ir sarežģīta, ātra šūnu darbības traucējumu metode.
Ultraskaņas līze balstās tikai uz mehāniskiem spēkiem. Ķimikālijas netiek pievienotas, ultraskaņas apstrāde izjauc šūnu sienu ar bīdes spēkiem. Ķīmiskā līze var mainīt olbaltumvielu struktūru un radīt attīrīšanas problēmas. Fermentatīviem traucējumiem ir nepieciešams ilgs inkubācijas laiks, un tie nav reproducējami. E.coli baktēriju šūnu ultraskaņas šūnu darbības traucējumi ir ātri, vienkārši, uzticami un reproducējami. Tāpēc Hielscher ultrasonikatori tiek izmantoti bioloģiskajās un bioķīmiskajās laboratorijās visā pasaulē paraugu sagatavošanai, pirmsanalītiskiem līdzekļiem, in vitro diagonstikai un kolektoru testiem.
Vispārīgi ieteikumi ultraskaņas līzei
Ultraskaņas apstrāde ir vispopulārākā metode ļoti mazu, vidēju un lielu daudzumu šūnu suspensiju lizēšanai – no piko litriem līdz 100L / h (izmantojot ultraskaņas plūsmas šūnu). Šūnas tiek lizētas ar šķidruma bīdes un kavitācijas palīdzību. DNS tiek nogriezta arī ultraskaņas apstrādes laikā, tāpēc šūnu suspensijai nav nepieciešams pievienot DNase.
Temperatūras kontrole ultraskaņas E.coli līzes laikā
Iepriekš atdzesējot paraugu un turot paraugu ultraskaņas apstrādes laikā uz ledus, parauga termisko degradāciju var viegli novērst.
Ideālā gadījumā paraugi līzes laikā būtu jātur ledusaukstā, bet lielākajai daļai paraugu pietiek ar to, ka temperatūra nepaaugstinās virs kultūras vai audu avota temperatūras. Tāpēc ir ieteicams saglabāt suspensiju uz ledus un apstrādāt ar ultraskaņu ar vairākiem īsiem ultraskaņas impulsiem 5-10 sek un pauzēm 10-30 sek. Pauzes laikā siltums var izkliedēties, lai atjaunotu zemu temperatūru. Lielākiem šūnu paraugiem ir pieejami dažādi plūsmas šūnu reaktori ar dzesēšanas apvalkiem.
Lasiet šeit detalizētus padomus un ieteikumus veiksmīgai ultraskaņas līzei!
Protokoli E. coli lizātu ultraskaņas sagatavošanai
Pētnieki izmanto Hielscher ultraskaņas homogenizatorus E.coli šūnu traucējumiem. Zemāk jūs varat atrast dažādus pārbaudītus un pārbaudītus E.coli līzes protokolus, izmantojot Hielscher ultraskaņas homogenizatorus dažādiem ar E. coli saistītiem lietojumiem.
Šūnu augšana, šķērssaistīšana un E. coli šūnu ekstraktu sagatavošana, izmantojot Ultrasonics
SeqA un RNS polimerāzei ChIP-Chip E. coli MG1655 vai MG1655 ΔseqA tika audzēts 37 °C temperatūrā līdz OB600 apmēram 0,15 no 50 ml LB (+ 0,2% glikozes), pirms tika pievienoti 27 μl formaldehīda (37%) uz ml barotnes (galīgā koncentrācija 1%). Šķērssaistīšana tika veikta lēnā kratīšanā (100 apgr./min) istabas temperatūrā 20 min, kam sekoja dzesēšana ar 10 ml 2,5 M glicīna (galīgā koncentrācija 0,5 M). Karstuma šoka eksperimentiem E. coli MG1655 tika audzēts 65 ml LB barotnē 30 ° C temperatūrā līdz OB600 apmēram 0,3. Pēc tam 30 ml kultūras pārnesa uz iepriekš sasildītu kolbu 43 °C temperatūrā, bet atlikušo daļu turēja 30 °C temperatūrā. Šķērssaistīšana un rūdīšana notika, kā aprakstīts iepriekš, izņemot to, ka šūnas tika turētas 30 vai 43 °C temperatūrā 5 minūtes pirms turpmākas lēnas kratīšanas istabas temperatūrā. Šūnas savāca centrifugējot un divas reizes mazgāja ar aukstu TBS (pH7,5). Pēc atkārtotas suspendēšanas 1 ml līzes buferšķīdumā (10 mM Tris (pH 8,0), 20% saharozes, 50 mM NaCl, 10 mM EDTA, 10 mg / ml lizocīma) un inkubācijas 37 ° C temperatūrā 30 minūtes, kam sekoja 4 ml IP buferšķīduma pievienošana, šūnas tika apstrādātas ar ultraskaņu uz ledus ar 12 reizes 30 sek un 30 sek pārtraukumiem, izmantojot Hielscher ultraskaņas procesoru UP400St ar 100% jaudas iestatījumu. Pēc centrifugēšanas 10 minūtes 9000 g temperatūrā 800 μl centrifugāta alikvotās daļas uzglabāja -20°C temperatūrā. (Waldminghaus 2010)
Fermentu pārprodukcija un attīrīšana ar ultraskaņas zondi
Dekahistidīna (His10) marķēto proteīnu pārprodukcijai E. coli BL21(DE3) tika pārveidots ar pET19b konstrukcijām. Nakts prekultūra tika novākta centrifugējot, un 1% tika izmantots, lai inokulētu ekspresijas kultūru. Šūnas ar pET19mgtB tika audzētas 22 °C temperatūrā līdz optiskajam blīvumam pie 600 nm (OD600) 0,7. Kultūra tika pārnesta uz 17°C un inducēta ar 100 μM IPTG. Pēc 16 stundām kultūru novāca, centrifugējot 7 500 × g 4 °C temperatūrā. Šūnas tika atkārtoti suspendētas 50 mM fosfātu buferētā sāls šķīdumā (PBS) ar 0,3 M NaCl pie pH 7,4 un traucētas ar ultrasonikāciju ar S2 mikro-galu sonotrodu Hielscher ultrasonicator UP200St ciklā 0,5 un amplitūdā 75%.
Dekahistidīna marķētā GtfC pārprodukcija tika inducēta 37°C temperatūrā pie OB600 no 0,6 ar 100 μM IPTG. Pēc tam šūnas tika inkubētas 4 stundas, novāktas un lizētas, kā minēts iepriekš MgtB.
Kopšūnu ekstraktus centrifugēja 15 000 × g un 4 °C temperatūrā, lai nogulsnētu šūnu atliekas. Dzidrinātie ekstrakti tika ielādēti 1 ml HisTrap FF Crude kolonnās, izmantojot ÄKTAprime Plus sistēmu. Fermenti tika attīrīti saskaņā ar ražotāja protokolu par Viņa marķēto proteīnu gradienta eluēšanu. Eluēto olbaltumvielu šķīdumi tika dializēti divas reizes, salīdzinot ar 1,000 tilpumiem 50 mM PBS, pH 7,4, ar 0,3 M NaCl 4 °C temperatūrā. Attīrīšana tika analizēta ar 12% SDS-PAGE. Olbaltumvielu koncentrācija tika noteikta ar Bredforda metodi, izmantojot Roti-Quant. (Rabausch et al. 2013)
Olbaltumvielu ultraskaņas ekstrakcija no E. coli baktērijām
Interesējošais ēsmas proteīns (šajā gadījumā Arabidopsis thaliana MTV1) tiek sapludināts ar GST tagu un izteikts BL21 Escherichia coli (E. coli) šūnās.
- Ņem vienu GST-MTV1 un GST granulu (kas atbilst 50 ml baktēriju kultūras) un katru atkārtoti saskalo 2,5 ml ledus aukstuma ekstrakcijas buferšķīdumā.
- Izmantojiet ultrasonikatoru UP100H (aprīkots ar MS3 mikrotip-sonotrode maziem apjomiem aptuveni 2-5 ml), lai izjauktu baktēriju šūnas, līdz tās ir lizētas, ko norāda samazināta necaurredzamība un palielināta viskozitāte. Tas jāveic uz ledus, un ieteicams apstrādāt ar ultraskaņu intervālos (piemēram, 10 sekundes ar ultraskaņu, kam seko 10 sek pauze uz ledus un tā tālāk). Jāuzmanās, lai neizturētu ultraskaņu ar pārāk augstu intensitāti. Ja tiek konstatēta putošana vai baltu nogulšņu veidošanās, intensitāte ir jāsamazina.
- Lizēto baktēriju šķīdumu pārnes uz 1,5 ml mikrocentrifūgas mēģenēm un centrifugē 4 °C temperatūrā 16 000 x g 20 minūtes.
Zondes tipa ultrasonikatori, piemēram, UP400St izmantot akustiskās kavitācijas darba principu efektīvai E.coli līzei.
Rekombinantā proteīna ekspresijas analīze un attīrīšana, izmantojot ultraskaņu
E. coli granulas tika apstrādātas ar ultraskaņu ar Hielscher ultrasonicator UP100H. Šim nolūkam šūnu granulas tika atkārtoti suspendētas atdzesētā līzes buferšķīdumā (50 mM Tris-HCl pH=7,5, 100 mM NaCl, 5 mM DTT, 1 mM PMSF) un atdzesētas uz ledus 10 min. Pēc tam šūnu suspensija tika apstrādāta ar ultraskaņu ar 10 īsiem pārrāvumiem 10 s, kam sekoja 30 s intervāls dzesēšanai. Visbeidzot, šūnu atliekas tika noņemtas ar ultracentrifugāciju 4 ° C temperatūrā 15 min pie 14000 apgr./min. Lai apstiprinātu rPR ekspresiju, supernatants tika darbināts ar 12% poliakrilamīda gēlu un analizēts ar SDS-PAGE un Western blotēšanu. rPR attīrīšana tika veikta, izmantojot Ni2+-NTA sveķus (Invitrogen, ASV) saskaņā ar ražotāja rokasgrāmatu. Šajā posmā tika izmantota vietējā attīrīšanas metode. Attīrītā proteīna tīrība tika novērtēta, izmantojot elektroforēzi uz 12% poliakrilamīda gēla un tam sekojošo Coomassie zilo krāsošanu. Attīrīta proteīna koncentrācija tika noteikta ar Micro BCA proteīnu testa komplektu (PIERCE, ASV). (Azarnezhad et al. 2016)
Ultraskaņas homogenizatori E. coli līzei
Hielscher Ultrasonics projektē, ražo un piegādā augstas veiktspējas ultraskaņas homogenizatorus uzticamai un efektīvai E. coli baktēriju un citu šūnu tipu, audu un šūnu kultūru līzei.
Plašais ultraskaņas zondes portfelis, kā arī netiešās ultraskaņas sistēmas ļauj mums piedāvāt jums ideālu ultraskaņas audu homogenizatoru jūsu šūnu darbības traucējumiem un ekstrakcijas pielietojumam.
Projektēšana, ražošana un konsultācijas – Kvalitāte ražots Vācijā
Hielscher ultrasonikatori ir labi pazīstami ar saviem augstākajiem kvalitātes un dizaina standartiem. Viedā programmatūra, intuitīva izvēlne, programmējami iestatījumi un automātiska datu protokolēšana ir tikai dažas Hielscher ultrasonikatoru funkcijas. Robustums un viegla darbība ļauj vienmērīgi integrēt mūsu ultrasonikatorus pētniecības un biotehnoloģiju iekārtās. Hielscher ultrasonikatori viegli apstrādā pat neapstrādātus apstākļus un prasīgu vidi.
Hielscher Ultrasonics ir ISO sertificēts uzņēmums un īpašu uzsvaru liek uz augstas veiktspējas ultrasonikatoriem, kas piedāvā vismodernākās tehnoloģijas un lietotājdraudzīgumu. Protams, Hielscher ultrasonikatori atbilst CE prasībām un atbilst UL, CSA un RoHs prasībām.
Zemāk redzamajā tabulā ir sniegta norāde par mūsu ultrasonikatoru aptuveno apstrādes jaudu:
| Partijas apjoms | Plūsmas ātrums | Ieteicamās ierīces |
|---|---|---|
| vairāku iedobju / mikrotitru plāksnes | n.p. | UIP400MTP |
| CupHorn flakoniem vai vārglāzei | n.p. | Ultraskaņas CupHorn |
| Ultraskaņas mikroplūsmas reaktors | n.p. | GDmini2 |
| līdz 10 flakoniem ar 0,5 līdz 1,5 ml | n.p. | VialTweeter |
| 0.5 līdz 1,5 ml | n.p. | VialTweeter |
| 1 līdz 500 ml | 10 līdz 200 ml/min | UP100H |
| 10 līdz 2000 ml | 20 līdz 400 ml/min | UP200Ht, UP400St |
| 0.1 līdz 20L | 02 līdz 4 l/min | UIP2000hdT |
| 10 līdz 100L | 2 līdz 10L/min | UIP4000 |
| n.p. | 10 līdz 100L/min | UIP16000 |
| n.p. | Lielāku | kopa UIP16000 |
Sazinieties ar mums! / Jautājiet mums!
Papildu protokoli ultraskaņas E. coli līzei
Allicīna modificēti proteīni E. coli, izmantojot ultraskaņas VialTweeter
Sulfhidrila satura noteikšana ar 5,5′-ditiobis(2-nitrobenzoskābes) (DTNB) testu
Lai inokulētu MOPS minimālo barotni (1:100), tika izmantota E. coli MG1655 nakts kultūra. Kultūra tika audzēta aerobi, līdz tika sasniegts A600 0,4. Kultūra tika sadalīta trīs 15 ml kultūrās stresa ārstēšanai. Neapstrādāta kultūra kalpoja kā negatīva kontrole. 0,79 mM allicīns (128 μg ml-1) vai 1 mM diamīds tika pievienots vienai no atlikušajām divām kultūrām katrā. Kultūras inkubēja 15 min. 5 ml no katras kultūras ievāca centrifugējot (8,525 × g, 4°C, 10 min). Šūnas divas reizes mazgāja ar 1 ml fosfāta buferšķīduma (137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4, pH 7,4, pirms lietošanas anaerobi uzglabāja) un centrifugēja (13 000 × g, 4 °C, 10 min). Šūnas tika atkārtoti suspendētas līzes buferšķīdumā (PBS ar 6 mM guanidīnija HCl, pH 7,4) pirms traucējumiem 4 ° C temperatūrā ar ultrasonikāciju (VialTweeter ultrasonicator, Hielscher GmbH, Vācija) (3 × 1 min). Šūnu atliekas granulēja centrifugējot (13 000 × g, 4 °C, 15 min). Centrifugātu pārnesa uz 3,5 ml QS-makro kiveti (10 mm) ar magnētisko maisīšanas stieni un sajauca ar 1 ml līzes buferšķīduma. Paraugu izzušana tika uzraudzīta pie 412 nm ar Jasco V-650 spektrofotometru, kas aprīkots ar PSC-718 temperatūras kontrolētu šūnu turētāju istabas temperatūrā. Pievienoja 100 μl 3 mM ditiobis(2-nitrobenzoskābes) šķīduma. Izzušana tika uzraudzīta, līdz tā sasniedza piesātinājumu. Tiola koncentrācijas aprēķins tika veikts, izmantojot ekstinkcijas koeficientu ε412 = 13 700 m-1 Cm-1 tio-2-nitrobenzoskābei (TNB). Šūnu tiola koncentrācija tika aprēķināta, pamatojoties uz E. coli šūnu tilpumu 6,7 × 10-15 litru un šūnu blīvums A600 = 0,5 (atbilst 1 × 108 šūnas ml-1 kultūru). (Müller et al. 2016)
In vivo glutationa noteikšana, izmantojot ultraskaņas šūnu drupinātāju
E.coli MG1655 tika audzēts MOPS minimālā barotnē ar kopējo tilpumu 200ml, līdz tika sasniegts A600 0,5. Kultūra tika sadalīta 50 ml kultūrās stresa ārstēšanai. Pēc 15 min inkubācijas ar 0,79 mM allicīnu, 1 mM diamīdu vai dimetilsulfoksīdu (kontrole) šūnas tika novāktas 4,000 g 4 ° C temperatūrā 10 minūtes. Šūnas divas reizes tika mazgātas ar KPE buferšķīdumu, pirms granulu atkārtotas saskalošanas 700 μl KPE buferšķīduma. Deproteinācijai pirms šūnu darbības pārtraukšanas ar ultrasonikāciju tika pievienoti 300l 10% (m/V) sulfosalicilskābes (3 x 1 min; VialTweeter ultrasonicator). Superfugātus savāca pēc centrifugēšanas (30 min, 13 000 g, 4°C). Sulfosalicilskābes koncentrācija tika samazināta līdz 1%, pievienojot 3 tilpumus KPE buferšķīduma. Kopējā glutationa un GSSG mērījumi tika veikti, kā aprakstīts iepriekš. Šūnu glutationa koncentrācija tika aprēķināta, pamatojoties uz E. coli šūnu tilpumu 6,7×10-15 litru un šūnu blīvums A600 0,5 (ekvivalents 1×108 šūnas ml-1 kultūru). GSH koncentrācijas tika aprēķinātas, no kopējā glutationa atņemot 2[GSSG]. (Müller et al. 2016)
Cilvēka mAspAT ekspresija E. coli, izmantojot ultraskaņas homogenizatoru
Vienīgā E. coli BL21 (DE3) kolonija, kurā atrodas izteiksmes vektors 30 ml Luria-Bertani (LB) barotnes, kas satur 100 μg/ml ampicilīna, un pēc tam kultivēta 37 °C temperatūrā līdz optiskajam blīvumam (OB)600) sasniedza 0,6. Šūnas ievāca, centrifugējot 4 000 × g 10 min, un atkārtoti suspendēja 3L svaigā LB barotnē, kas satur 100 μg/ml ampicilīna.
Pēc tam olbaltumvielu ekspresiju inducēja ar 1 mM izopropil-β-ᴅ-1-tiogalaktopiranozīdu (IPTG) 20 stundas 16 °C temperatūrā. Šūnas ievāca, centrifugējot 8 000 × g 15 minūtes, un mazgāja ar A buferšķīdumu (20 mM NaH2PO4, 0,5 M NaCl, pH 7,4). No 3 L kultūras tika iegūtas aptuveni 45 g (mitra svara) šūnas. Pēc centrifugēšanas šūnu granulas tika atkārtoti suspendētas 40 ml (1 L kultūrai) ledusaukstā ekstrakcijas buferī A un lizētas ar ultrasonikāciju ledus aukstā temperatūrā, izmantojot Hielscher ultraskaņas šūnu drupinātāju UP400St. Šūnu līzi centrifugēja pie 12 000 apgriezieniem minūtē 15 minūtes, lai atdalītu šķīstošās (centrifugāta) un nogulsnētās (granulu) frakcijas. (Jiang et al. 2015)
Fakti, kurus ir vērts zināt
E.coli
Escherichia coli (E. coli) ir gramnegatīva, fakultatīvi anaeroba, stieņa formas, Escherichia ģints koliformas baktērija, kas parasti sastopama siltā asins organismu (endotermmu) apakšējā zarnā. Ir liels skaits E. coli celmu (vai apakštipu) ar dažādām īpašībām. Lielākā daļa E. coli celmu ir nekaitīgi cilvēkiem, piemēram, B un K-12 celmi, kurus parasti izmanto pētniecībā laboratorijās. Tomēr daži celmi ir kaitīgi un var izraisīt nopietnas slimības.
E. coli ir svarīga loma mūsdienu bioloģiskajā inženierijā un rūpnieciskajā mikrobioloģijā, jo ar baktērijām ir viegli manipulēt. Bieži sastopami laboratorijas lietojumi, kas bieži ietver E. coli izmantošanu, piemēram, lai radītu rekombinantu dezoksiribonukleīnskābi (DNS) vai darbotos kā paraugorganisms.
E. coli ir ļoti daudzpusīgs saimniekorganisms heterologu proteīnu ražošanai, un ir pieejamas daudzveidīgas proteīnu ekspresijas sistēmas, lai ražotu rekombinantos proteīnus E. coli. Izmantojot plazmīdas, kas nodrošina augsta līmeņa olbaltumvielu ekspresiju, baktērijās var ievadīt gēnus, kas ļauj ražot šādus proteīnus lielos daudzumos rūpnieciskās fermentācijas procesos.
E.coli izmanto kā šūnu rūpnīcas insulīna ražošanai. Citi pielietojumi ietver modificētu E. coli šūnu izmantošanu vakcīnu un imobilizētu fermentu izstrādē un ražošanā, biodegvielas ražošanā, kā arī bioremediācijā.
Celms K-12 ir E. coli mutanta forma, kas pārmērīgi izsaka enzīmu sārmaino fosfatāzi (ALP). Šī mutācija rodas gēna defekta dēļ, kas pastāvīgi kodē fermentu. Ja gēns ražo produktu bez jebkādas inhibīcijas, to sauc par konstitutīvo aktivitāti. Šo specifisko mutantu formu izmanto ALP enzīma izolēšanai un attīrīšanai.
E. coli baktērijas tiek plaši izmantotas arī kā šūnu rūpnīcas. Inženierijas ceļā iegūtus mikrobus (piemēram, baktērijas) un augu šūnas var izmantot kā tā sauktās šūnu rūpnīcas. Šīs ģenētiski modificētās šūnas ražo molekulas, ķīmiskas vielas, polimērus, olbaltumvielas un citas vielas, ko izmanto, piemēram, farmācijā, pārtikas un ķīmiskajā rūpniecībā. Lai atbrīvotu molekulas, kas ražotas šādu bioinženierētu šūnu iekšpusē, ultraskaņas līze ir izplatīta metode, lai izjauktu šūnu sienas un pārnestu mērķa vielas apkārtējā šķidrumā. Lasiet vairāk par bioinženierijas šūnu līzi!
Ultraskaņas DNS nobīde
Ultraskaņas bīdes spēki ir parasti izmantota metode, lai atbrīvotu molekulas, organellus un proteīnus no šūnu iekšpuses, kā arī sadalītu DNS dzīslas gabalos. Akustiskā kavitācija pārtrauc šūnu sienas un membrānas, lai iegūtu DNS no šūnām un radītu aptuveni 600 fragmentus – 800 bp garumā, kas ir ideāli piemērots analīzei.
Noklikšķiniet šeit, lai uzzinātu vairāk par ultraskaņas homogenizatoriem DNS sadrumstalotībai!
Literatūra / Atsauces
- Azarnezhad A., Sharifi Z., Seyedabadi R., Hosseini A., Johari B., Sobhani Fard M. (2016): Cloning and Expression of Soluble Recombinant HIV-1 CRF35 Protease-HP Thioredoxin Fusion Protein. Avicenna J Med Biotechnol. 8(4), 2016. 175–181.
- Jiang X., Wang J., Chang H.; Zhou Y. (2016): Recombinant expression, purification and crystallographic studies of the mature form of human mitochondrial aspartate aminotransferase. BioScience Trends 2016.
- Müller A., Eller J., Albrecht F., Prochnow P., Kuhlmann K., Bandow J.E., Slusarenko A.J., Leichert L.I.O. (2016): Allicin Induces Thiol Stress in Bacteria through S-Allylmercapto Modification of Protein Cysteines. Journal of Biological Chemistry Vol. 291, No. 22, 2016. 11477–11490.
- Rabausch U., Juergensen J., Ilmberger N., Böhnke S., Fischer S., Schubach B., Schulte M., Streit W. R. (2013): Functional Screening of Metagenome and Genome Libraries for Detection of Novel Flavonoid-Modifying Enzymes. Applied and Environmental Microbiology 79(15), 2013. 4551–4563.
- Sauer M. (2014): MTV1 Pull-down Assay in Arabidopsis. bio-protocol Vol 4, Iss 12, Jun 20, 2014.
- Waldminghaus T., Skarstad K. (2010): ChIP on Chip: surprising results are often artifacts. BMC Genomics 11, 2010. 414.
Hielscher Ultrasonics ražo augstas veiktspējas ultraskaņas homogenizatorus no Lab līdz rūpnieciskais izmērs.