Alfa-sinukleīna sadrumstalotība, izmantojot VialTweeter Sonicator

α-sinukleīna fibrilas un lentes ir sadrumstalotas zinātniskos pētījumos, lai radītu mazākus fibrila fragmentus vai pat atsevišķas olbaltumvielu molekulas, kuras var vieglāk analizēt, izmantojot dažādas eksperimentālas metodes. VialTweeter Sonicator ir viens no visbiežāk izmantotajiem ultrasonikatoriem efektīvai un uzticamai alfa-sinukleīna sadrumstalotībai.

α-sinukleīns pētniecībā

Alfa-sinukleīna fibrili ir olbaltumvielu agregāti, kas ir cieši saistīti ar neirodeģeneratīviem traucējumiem, piemēram, Parkinsona slimību un dažām demences formām, tostarp demenci ar Lewy ķermeņiem. Pētījumi, kas vērsti uz alfa-sinukleīna fibriliem, ir vērsti uz to, lai izprastu to lomu slimības progresēšanā un izstrādātu iespējamās terapeitiskās iejaukšanās. Sadalot alfa-sinukleīna fibrilus mazākos fragmentos, pētnieki var izpētīt to īpašās strukturālās iezīmes. Piemēram, alfa-sinukleīna fibrilu fragmentēšana ļauj pētniekiem izpētīt to mijiedarbību ar citām molekulām, piemēram, olbaltumvielām, lipīdiem vai mazām molekulām. Ražojot mazākus fragmentus, var efektīvāk pārbaudīt šo mijiedarbojošos partneru saistīšanās vietas un afinitāti. Mazākiem α-Syn fribriliem un lentēm arī var būt izmainīta toksicitāte un bioķīmiska iedarbība. Tāpēc izšķiroša nozīme ir uzticamai un efektīvai sadrumstalotības metodei, kas nodrošina reproducējamus rezultātus ātrā un vienkāršā paraugu apstrādē.
Ultraskaņas Alpha-Syn sadrumstalotība: VialTweeter sonikators ir izveidota ultraskaņas paraugu sagatavošanas sistēma, kas vienlaikus apstrādā līdz 10 flakoniem tieši tādos pašos apstākļos. Programmējamie iestatījumi ļauj vienkārši un ātri atkārtoti veikt tos pašus eksperimentus, kas dod ļoti ticamus un reproducējamus rezultātus alfa-sinukleīna fibrila fragmentācijā.

α-sinukleīna parauga sagatavošana ar sonikatoru

Viena pieeja alfa-sinukleīna fibrilu izpētei ietver to ekstrakciju un sadrumstalotību, izmantojot tādas metodes kā ultraskaņas apstrāde. Ultraskaņas apstrāde ir process, kas izmanto augstas intensitātes, zemas frekvences ultraskaņas viļņus, lai izjauktu un sadalītu olbaltumvielu agregātus, kā rezultātā izdalās mazāki fibrili vai atsevišķas olbaltumvielu molekulas. Sonicator VialTweeter ir bieži izmantota ierīce ar α-sinukleīnu saistītos pētījumos šim nolūkam.

Daudzi pētījumi apraksta precīzus alfa-sinukleīna fibrilu ultraskaņas paraugu sagatavošanas protokolus, kas izmanto Hielscher VialTweeter efektīvai un uzticamai α-sinukleīna fibrila sadrumstalotībai. Fragmentējot fibrilus ultrasoniski, pētnieki var analizēt iegūtos produktus un pārbaudīt to struktūru, toksicitāti un mijiedarbību ar citām molekulām. Šis pētījums sniedz svarīgu ieskatu par mehānismiem, kas ir neirodeģenerācijas pamatā, un potenciāli identificē jaunus terapeitiskos mērķus. Labi izveidotie α-sinukleīna ultraskaņas apstrādes protokoli, izmantojot VialTweeter sonikatoru, ļauj iegūt ticamus un reproducējamus rezultātus.

Augšējie attēli: nefragmentēti alfa-sinukleīna fibrili
Zemāki attēli: Ultrasoniski sadrumstaloti alfa-sinukleīna fibrili ar VialTweeter sonikatoru
(pētījums un attēli: ©Dieriks et al., 2022)

α-sinukleīna fibrilu ultraskaņas sadrumstalotība – Protokolus

Tā kā daudzi pētnieki izmanto VialTweeter sonicator kā vēlamo fragmentācijas tehniku, lai radītu vienveidīgus α-sinukleīna fibrila fragmentus, izveidotie protokoli ir viegli pieejami. Zemāk jūs varat atrast dažus piemērus fragmentācijas protokoliem.
 

 
ClearTau sēklu sagatavošana: ClearTau fibrili tika atšķaidīti līdz 10 μM dH2O un apstrādāti ar ultraskaņu 70 % amplitūdā 50 s ar 1 s ON 1 s OFF cikla caurulē, izmantojot sonikatoru UP200St ar VialTweeter. Sēklas raksturoja elektronu mikroskopija.
TS fluorescences mērīšana: ClearTau fibrili tika atšķaidīti līdz 2,5 μM dH2O un apstrādāti ar ultraskaņu 70 % amplitūdā 50 s ar 1 s ON 1 s OFF ciklu mēģenē, izmantojot UP200St ar VialTweeter. Kā kontrole tika izmantots 2,5 μM pilna garuma Tau 4R2N monomērs. 100 μl reakcijai tika pievienoti 100 μl ThS (10 μM), iegūstot galīgo olbaltumvielu koncentrāciju 1,25 μM. Vienreizēja punkta ThS fluorescence tika mērīta, izmantojot 96 labi caurspīdīgas apakšējās plates, kas uzstādītas FLUOstar Omega mikroplates nolasītājā ar ierosmi pie 445 nm un emisiju pie 485 nm.
(sal.: Limorenko et al., 2023)
 
Vienots α-sinukleīna garums, izmantojot ultraskaņu: α-syn fibrilu un lentu garuma neviendabīgums tika samazināts ar ultraskaņu 20 minūtes uz ledus 2 ml Eppendorf mēģenēs VialTweeter, kas iestatīts uz 75% amplitūdu, 0,5 s impulsiem.
(sal. ar Bousset et al., 2013)
 
Tika veikta cilvēka rekombinantā monomēra WT vai S129A a-Syn un to radīto fibrillāro polimorfu, kā arī a-Syn 1–110 kvalitātes kontrole. Pēc tam fibrillārie polimorfi tika sadrumstaloti ar ultraskaņu 20 minūtes 2 ml Eppendorf caurulēs VialTweeter ultrasonikatorā, lai radītu fibrillāras daļiņas ar vidējo izmēru 42–52 nm, kas ir piemērotas endocitozei.
(sk. Shrivastava et al., 2020)
 

Piecu fibrillāro α-Syn polimorfu raksturojums. (A) Tiek parādīti negatīvi iekrāsotu α-Syn fibrillar polimorfu fibrilu, lentu, fibrilu-91, fibrils-65 un fibrils-110 transmisijas elektronu mikrogrāfi pirms (augšējā josla) un pēc fragmentācijas ar VialTweeter (apakšējā josla). B) Parādīts fragmentēto fibrilāro polimorfu garuma sadalījums. Ir norādīts to fibrilāro mezglu skaits (n), no kuriem atvasinātas histogrammas.
(pētījums un attēli: Shrivastava et al., 2020)

 
α-Syn fibrili tika sadrumstaloti ar ultraskaņu 20 minūtes 2 ml Eppendorf mēģenēs VialTweeter, lai radītu fibrilāras daļiņas ar vidējo izmēru 42–52 nm, kā novērtēts ar TEM analīzi.
(sal.: Negrini et al., 2022)
 
Atkārtoti suspendētie fibrils91 (PBS) tika sadrumstaloti pirms pievienošanas šūnu kultūrām ar ultraskaņu 20 minūtes 2 ml Eppendorf mēģenēs, izmantojot Vial Tweeter sonikatoru, alikvoti, zibspuldze sasaldēta šķidrā slāpeklī un uzglabāta līdz lietošanai -80 ̊C temperatūrā.
(sk. Vajhøj et al., 2021)
 

VialTweeter un Lab Sonicators α-syn sadrumstalotībai

Hielscher Ultrasonics ir visā pasaulē atzīts par vadošo modernāko ultrasonikatoru ražotāju. Uzticami un izveidoti lielākajās pētniecības laboratorijās visā pasaulē, mūsu ultrasonikatori piedāvā nepārspējamu kvalitāti un veiktspēju jūsu kritiskajiem eksperimentiem.
Izmantojot Hielscher VialTweeter un jebkuru citu Hielscher sonikatoru, jūs pieredzēsit nepārspējamu lietotāja komfortu, jo tie ir pārdomāti izstrādāti, lai iegūtu reproducējamus rezultātus, ērtu lietošanu un nevainojamu darbību. Izmantojot automātiskās datu ierakstīšanas funkcijas, jūs varat koncentrēties uz savu pētījumu, kamēr mūsu ultrasonikatori rūpīgi ieraksta būtiskus datus reproducējamībai un precizitātei.
Sasniedziet konsekventus un reproducējamus rezultātus ar pārliecību!
Mūsu ultrasonikatori ir izstrādāti un ražoti Vācijā. Vācu precizitāte un augstākā inženiertehniskā kvalitāte, lai nodrošinātu uzticamu un precīzu paraugu sagatavošanu, piemēram, alfa-sinukleīna fibrilu fragmentāciju katru reizi. Vairs neuztraucieties par nekonsekventiem rezultātiem - mūsu ultraskaņas tehnoloģija nodrošina, ka jūsu pētījumi paliek zinātnes attīstības priekšgalā.
Bet tas vēl nav viss! Mūsu apņemšanās sasniegt izcilību sniedzas tālāk par mūsu produktiem. Mēs lepojamies ar mūsu izcilo klientu apkalpošanu, sniedzot ekspertu atbalstu, lai atbildētu uz visiem jautājumiem vai bažām, kas jums varētu rasties. Mūsu īpašā komanda ir šeit, lai palīdzētu jums katrā jūsu pētniecības ceļojuma posmā, nodrošinot, ka jūs maksimāli izmantojat mūsu ultrasonikatorus.
Izvēlieties inovācijas, uzticamību un izcilu lietotāja pieredzi - izvēlieties mūsu laboratorijas ultraskaņas datorus, piemēram, VialTweeter, lai iegūtu alfa-sinukleīna fibrilu sadrumstalotību. Izmantojiet jau izveidotos protokolus un pievienojieties vadošo pētnieku rindām, kuri uzticas mūsu tehnoloģijai viņu kritiskajos pētījumos. Paaugstiniet savus pētījumus un izpētiet jaunas robežas demences un neirodeģeneratīvo slimību pētniecībā, izmantojot mūsu modernākos ultrasonikatorus.

Projektēšana, ražošana un konsultācijas – Kvalitāte ražots Vācijā

Hielscher ultrasonikatori ir labi pazīstami ar saviem augstākajiem kvalitātes un dizaina standartiem. Robustums un viegla darbība ļauj vienmērīgi integrēt mūsu ultrasonikatorus rūpnieciskajās iekārtās. Hielscher ultrasonikatori viegli apstrādā neapstrādātus apstākļus un prasīgu vidi.

Hielscher Ultrasonics ir ISO sertificēts uzņēmums un īpašu uzsvaru liek uz augstas veiktspējas ultrasonikatoriem, kas piedāvā vismodernākās tehnoloģijas un lietotājdraudzīgumu. Protams, Hielscher ultraskaņas aparāti atbilst CE prasībām un atbilst UL, CSA un RoHs prasībām.
 
Zemāk redzamajā tabulā ir sniegta norāde par mūsu laboratorijas lieluma ultrasonikatoru aptuveno apstrādes jaudu: