Ultraschall Uwendungen am MonkeyPox Virus
Ultrasonication ass eng wichteg Veraarbechtungsmethod fir d'Isolatioun vum Monkeypox Virus (MPXV) aus analytesche Proben, fir Virus DNA Fragmentatioun wéi och an der Monkeypox Impfung Fabrikatioun. Fir Probevirbereedung virun der Diagnostik an der Analyse (PCR, ELISA etc.) Ultrasonication gëtt benotzt fir Zellen ze lyséieren fir de Monkeypox Virus aus dem Zellinterieur ze befreien an / oder DNA ze fragmentéieren. An der Impfungproduktioun variéieren d'Applikatioune vu Viruspartikel / DNA Virbereedung, Verkapselung an Drogenträger a Formuléierung vun der Inokula.
Hei ënnen fannt Dir detailléiert Informatiounen iwwer Ultraschall Monkeypox Virus Probe Virbereedung souwéi ultraschall assistéiert MPXV Impfung Produktioun.
Wat Dir op dëser Säit fannt:
- Ultrasonic Lysis fir Monkeypox Virus Extraktioun
- Ultraschall Fragmentatioun vum Monkeypox Virus DNA
- Ultraschall Uwendungen an der MPXV Impfstoffproduktioun
Dëse System vun 2x 1kW Ultraschaller fir kontinuéierlech Flow Operatioun ass an enger Impfstoffproduktiounsanlag installéiert.
Ultrasonic Lysis an DNA Fragmentatioun virun Polymerase Chain Reaction (PCR)
Eng Monkeypox Virus Infektioun gëtt duerch Nukleinsäure Amplifikatioun Tester (NAAT) festgestallt, mat Echtzäit oder konventionell Polymerase Kettenreaktioun (PCR), fir d'Detektioun vun eenzegaartege Sequenzen vu viraler DNA. D'Probe (zB aus Nasopharyngeal Swap oder Hautbiopsien) enthält de Virus an Zellen.
Fir Analyse muss de Virus aus den Zellen fräigelooss ginn an d'viral DNA muss fir PCR fragmentéiert ginn.
Ultraschall Lysis:
Ultrasonic Zell Stéierung / Lysis ass eng zouverlässeg an effizient Method fir Virussen aus Zellproben ze isoléieren an doduerch eng bevorzugt Technik iwwer chemesch Agenten, wéi Lysozym, Proteinase K a verschidde Detergenten déi alternativ benotzt ginn fir Zelllysis a Verëffentlechung vun DNA z'erreechen.
Wéi och ëmmer, d'Benotzung vun esou chemesche Reagenser erfuerdert Zäitopwänneg Probepräparatioun a verschiddene Schrëtt virun der PCR Analyse fir d'Inhibitioun vun der PCR Reaktioun ze vermeiden. Zënter PCR-Inhibitoren d'Effizienz vun der Amplifikatioun beaflossen, kënnen kleng Variatiounen vun der Quantitéit vun Inhibitoren, déi net ewechgeholl ginn, zu grousse Variatiounen an der PCR-Produktverstärkung féieren (Diaco, 1995).
De Virdeel vun der Ultraschall fir Lysis ass datt eng komplett Ënnerbriechung vun de celluläre Strukturen an der Verëffentlechung vun der DNA ouni d'Bedierfnes fir d'Lysreagenz an d'Zäit-opwänneg Probepräparatioun wënschenswäert sinn. (cf. Fykse et al., 2003)
Ultraschall DNA Fragmentatioun:
Ultraschall DNA Fragmentatioun ass einfach an zouverlässeg wéi et produzéiert DNA Fragmenter déi an der Längt tunbar sinn (Basepairen, bp). Mat Ultraschall kann DNA effektiv op déi gezielt DNA Längt fragmentéiert ginn. Präzis Kontroll iwwer Ultraschallparameter a raffinéiert Killoptiounen verhënneren DNA-Degradatioun.
Liest méi iwwer Ultraschall DNA Fragmentatioun!
Ultraschall Uwendungen an Monkeypox Virus Impfung
Impfungen, déi géint de Monkeypox Virus benotzt ginn, sinn aktuell Live Virus Impfungen. Nei entwéckelt Impfungen kënnen aner Plattformen benotzen wéi DNA-baséiert. De Moment enthält eng modifizéiert Vaccinia Ankara Viurs, en attenuéierten, net replikéierende Orthopoxvirus. Et enthält och Tris (Tris-Aminomethan) a Natriumchlorid. D'Impfung kann och kleng Quantitéiten un DNA a Protein aus de Chicken Embryo Fibroblast Zellen enthalen, déi benotzt gi fir den Impfungvirus, Benzonase an Antibiotike Verbindungen wéi Gentamicin a Ciprofloxacin ze wuessen.
Ultrasonic Homogeniséierung gëtt an der Produktioun vu Live-attenuéierte Virus Impfungen, DNA Impfungen, multivalent DNA Cocktailer, mRNA Impfungen, rekombinant Protein Impfungen, Virusähnlech Partikel Impfungen, etc.
- Dispersioun vu Viruspartikelen an Agenten
- Emulgatioun
- Inaktivéierung vu Viren
- Drogenträger Formuléierung (NLC, SLN)
- encapsulation
- Opléisung vun Agenten
- Virbereedung vun Adjuvantë
- Entgasung / Entgasung
Protokoll fir Ultraschallisolatioun vum Monkeypox Virus
D'Fuerschungsteam vu Stittelaar (2005) huet Ultrasonic Lysis benotzt fir den Apenpoxvirus aus der Wuesstumshostzellkultur ze befreien wéi och aus Zellen, déi iwwer Halsswaps vun infizéierte Primaten kritt goufen.
Monkeypox Impfung Virbereedung:
Monkeypox Viren goufen op spezifesch Pathogen-gratis Poulet Embryo Fibroblast Zellen ugebaut. No der Inkubatioun fir 1 bis 2 Deeg, gouf d'Viruszellsuspension duerch eng Ronn vun der Gefriess-Tauung gesammelt an duerno duerch Zentrifugéierung konzentréiert. De Pellet gouf resuspendéiert an e puer Ronnen vun der Ultraschallhomogeniséierung ënnerworf.
Monkeypox Virus Isolatioun vu geimpften Macaques:
Echantillon goufen dräimol gefruer-thawed an sonicated an engem Ultrasonic CupHorn. Zwou Verdünnungen (1:10 an 1:100) am Transportmëttel ergänzt mat 1% Fetal Rëndfleeschserum goufen benotzt fir Vero Zell Monolayer a sechs-gutt Placke ze inokuléieren. No 1 h Inkubatioun bei 37 ° C, goufen d'Inokula geläscht a mat Kulturmedium ersat, ergänzt mat 1% Fetal Rëndserum. D'Monolayer goufen fir 5 Deeg bei 37 ° C kultivéiert a mat enger Kristallsviolett Léisung gefierft.
(cf. Stittelaar et al., 2005)
Ultraschaller fir Virusanalyse an Impfungsproduktioun
Hielscher Ultrasonics breet Produktportfolio bitt den ideale Ultrasonicator fir Fuerschung an analytesch Laboratoiren wéi och fir industriell Impfstofffabrikatioun.
Hielscher Ultrasonics ass spezialiséiert am Design, Fabrikatioun a Verdeelung vun High-Performance Ultrasonicatoren a Sono-Bioreaktoren fir d'Benotzung a Fuerschung an analytesch Laboratoiren wéi och fir d'Ëmsetzung an der industrieller Impfungsproduktioun (z. Impfungen, APIen).
Sonication kann op oppe Schëffer applizéiert ginn, zougemaach kontinuéierlech geréiert Reaktoren a kontinuéierlech Flux-duerch Reaktoren. All Deeler vun den Ultraschallsystemer, déi a Kontakt mat dem flëssege Medium kommen, ginn aus Edelstahl, Titan oder Glas gemaach. Autoclavable Deeler a sanitär Armature suergen der Produktioun ënner pharma-grade Konditiounen.
Automatesch Datenopname: Intelligent Software registréiert d'Parameteren vum Sonikatiounsprozess automatesch op der integréierter SD Memory Card. Déi genee Kontroll vun all Prozess Parameteren suergen der reproducibility, Standardiséierung vun der Produktioun, a erliichtert d'Erfëllung vun de pharmazeuteschen Produktsécherheetsnormen.
Hielscher Ultrasonics’ Ultraschallprozessoren sinn héich zouverlässeg a kënne präzis kontrolléiert ginn. All industriell Ultraschaller kënnen ugepasst ginn fir de ganze Spektrum vu méi niddereg bis ganz héich Amplituden ze liwweren. D'Robustitéit vun den Ultraschallsystemer vun Hielscher erlaabt 24/7 Operatioun ënner schwéierer Pflicht an an usprochsvollen Ëmfeld.
D'Tabell hei drënner gëtt Iech eng Indikatioun vun der geschätzter Veraarbechtungskapazitéit vun eisen Ultraschaller:
| Batch Volume | Duerchflossrate | Recommandéiert Apparater |
|---|---|---|
| Multi-Well / Mikrotiter Placke | n/a | UIP400MTP |
| 1 bis 500 ml | 10 bis 200 ml/min | UP100H |
| 10 bis 2000 ml | 20 bis 400 ml/min | UP200Ht, UP 400 St |
| 0.1 bis 20L | 02 bis 4 l/min | UIP2000hdT |
| 10 bis 100 l | 2 bis 10 l/min | UIP4000hdT |
| n/a | 10 bis 100 l/min | UIP16000 |
| n/a | méi grouss | Stärekoup vun UIP16000 |
Kontaktéiert eis! / Frot eis!
Ultraschall DNA Scheren
Adaptéiert vum Jkwchui ënner CC-BY-SA.03
Literatur / Referenzen
- Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
- Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
- J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
- Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
- Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.
Fakten Worth Wëssen
Monkeypox Virus
Monkeypox (MPV, MPXV oder hMPXV) ass eng Spezies vum duebelstrengegen DNA Virus, deen eng viral zoonotesch Krankheet verursaacht. Dës Krankheet ass bekannt als Monkeypox Infektioun a ka bei Mënschen an Déieren optrieden. Et gehéiert zu der Gattung Orthopoxvirus an der Famill Poxviridae. Monkeypox Virus ass ee vun de mënschlechen Orthopoxvirus zesumme mat Variola (VARV), Cowpox (CPX), an Vaccinia (VACV) Virussen. Orthopoxvirussen si charakteriséiert duerch grouss brickfërmeg Viruspartikelen, mat engem duebelstrengegen DNA Genom vun ongeféier 200.000 bp.
ELISA Assay
ELISA steet fir Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay an ass e markéierte Immunoassay deen als de Goldstandard vun Immunoassays ugesi gëtt. ELISA ass en immunologeschen Test, geschätzt fir seng héich diagnostesch Empfindlechkeet, gëtt benotzt fir Molekülle z'entdecken an ze quantifizéieren, dorënner Antikörper, Antigen, Proteinen, Glykoproteine, an Hormonen. De Prinzip vun der ELISA baséiert op enger Antigen-Antikörper Interaktioun. Duerch dës Antigen-Antikörper Interaktioun binden déi spezifesch Antikörper un säin Zilantigen. Nëmme wann d'Interaktioun stattfënnt, kann de Substrat un den Enzym binden an eng spéider Substratkonversioun kann beobachtet ginn, wat heescht datt e positiv Resultat kritt gëtt.
Hielscher Ultrasonics fabrizéiert High-Performance Ultrasonic Homogenisatoren aus Labo zu industriell Gréisst.