항균 평가를 위한 ASTM E2799-22 프로토콜

Hielscher UIP400MTP는 ASTM E2799-22 프로토콜에서 초음파 처리 단계를 간소화하도록 설계된 강력하고 효율적인 멀티 웰 플레이트 초음파 발생기입니다. 이 UIP400MTP는 전체 마이크로타이터 플레이트에 균일한 초음파 에너지를 전달함으로써 세포를 손상시키거나 시료 무결성을 손상시키지 않으면서 페그 뚜껑에서 생물막을 일관되고 안정적으로 분리할 수 있습니다. 고처리량 기능과 사용자 친화적인 작동으로 처리 시간을 크게 단축하는 동시에 재현성을 향상시켜 생물막 생존도 분석 및 항균 효능 검사를 수행하는 실험실에 이상적인 솔루션입니다.

ASTM의 E2799

ASTM E2799는 생물막에 대한 항균제의 효능을 평가하기 위해 고안된 표준화된 테스트 방법으로, 특히 녹농균에 중점을 둡니다. 생물막은 표면에 부착되어 항균 처리에 대한 내성이 높아지는 복잡한 미생물 군집으로, 의료, 산업 및 환경 맥락에서 중요한 문제가 됩니다. 이 방법은 MBEC(Minimum Biofilm Eradication Concentration) 분석을 사용하여 실제 생물막 조건에서 소독제를 테스트하기 위한 신뢰할 수 있고 재현 가능한 프레임워크를 제공합니다.

초음파 처리는 ASTM E2799에 어떻게 기여합니까?

초음파 처리는 시험 표면에서 생물막의 분리를 촉진하여 ASTM E2799 프로토콜에서 중요한 역할을 하며, 처리 후 미생물 생존력의 정확한 평가를 보장합니다. 제어된 초음파 에너지를 사용함으로써 프로토콜은 세포를 손상시키지 않고 효율적이고 일관된 생물막 파괴를 달성하여 정확하고 재현 가능한 결과를 가능하게 합니다. 따라서 ASTM E2799는 생물막 연구를 발전시키고 효과적인 항균 전략을 개발하기 위한 필수 도구입니다.

ASTM E2799-22에 따라 MBEC 분석을 실행하는 방법

ASTM E2799-22 프로토콜은 생물막에 대한 항균제의 효능을 평가하기 위한 단계를 설명합니다. Hielscher UIP400MTP 마이크로 타이 터 플레이트 초음파 발생기를 사용할 때, 프로토콜은 생물막 분리를 위해이 고급 초음파 처리 방법을 통합하도록 조정할 수 있습니다. 다음은 마이크로플레이트 초음파 발생기 UIP400MTP 사용하기 위해 맞춤화된 단계에 대한 설명입니다.

1. 생물막의 제조
   탈착식 페그 뚜껑이 있는 멸균 96웰 마이크로타이터 플레이트를 준비합니다.
   적절한 성장 배지에 표준화된 박테리아 현탁액을 웰에 접종합니다.
   못 뚜껑을 접시에 놓고 못이 박테리아 현탁액에 완전히 잠기도록 합니다.
   제어된 조건(예: 온도 및 시간)에서 플레이트를 배양하여 못에 생물막이 형성될 수 있도록 합니다.
2. 항균제에 의한 치료
   생물막 형성 후 배지를 다른 농도의 테스트 항균제가 포함된 새 배지로 교체합니다.
   페그 뚜껑을 다시 부착하고 테스트 설계에 지정된 조건에서 배양합니다.
3. 생물막 박리를 위한 준비
   처리 후에는 못 뚜껑을 멸균 헹굼 용액에 담가 잔류 항균제와 느슨하게 부착된 플랑크톤 세포를 제거합니다.
4. UIP400MTP 초음파 발생기를 사용한 생물막 박리
   회수 매체(예: 중화 육수)가 포함된 새로운 96웰 마이크로타이터 플레이트를 준비합니다.
   못 뚜껑을 회수 매체 플레이트의 웰에 넣어 생물막을 분리합니다.
   플레이트를 UIP400MTP 초음파 발생기에 삽입하고 뚜껑과 플레이트가 제대로 정렬되었는지 확인합니다.
   초음파 발생기를 70 % -80 % 진폭으로 설정하고 사이클 모드에서 3-4 분 동안 초음파 처리하여 세포 용해없이 일관된 생물 막 분리를 보장합니다.
5. 생물막 생존력 평가
   초음파 처리 후 다음과 같은 표준 미생물 또는 분석 기술을 사용하여 분리 된 생물막 세포를 포함하는 회수 매체를 처리하십시오.
   • Colony-forming unit (CFU) counts: 생존 가능한 세포 계수를 위해 연속 희석을 수행하고 한천에 플레이트를 만듭니다.
   • 광학 밀도(OD) 측정: 분광 광도계 분석을 사용하여 세포 밀도를 평가합니다.
   • Fluorescence-based viability assay: 형광 염료를 사용하여 살아있는 세포와 죽은 세포를 정량화합니다.
6. 데이터 분석
   항균제의 효능을 결정하기 위해 처리된 생물막과 처리되지 않은 생물막의 생존력 데이터를 비교합니다.
   생존 가능한 생물막 세포를 제거하는 데 필요한 농도를 기준으로 최소 생물막 박멸 농도(MBEC)를 계산합니다.
7. 품질 관리
   정기적으로 UIP400MTP을 보정하고 생물막 분리 과정이 중요한 세포 용해 또는 파괴를 초래하지 않는지 확인하여 일관된 초음파 처리 조건을 보장합니다.
   결과를 검증하기 위해 처리되지 않은 생물막 및 매체 전용 블랭크와 같은 적절한 대조군을 포함합니다.

핀에 형성된 생물막 세포는 세포의 회수를 위한 신선한 배양 배지를 포함하는 96웰 플레이트에서 5분 동안 초음파 처리(Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Germany, UIP250MTP)에 의해 제거되었습니다.
(사진 및 연구: ©de Oliveira et al., 2016)

UIP400MTP를 ASTM E2799-22 워크플로우에 통합함으로써 생물막 분리 공정은 일관성, 효율성 및 고처리량 응용 분야에 최적화됩니다.