96-Well Sonicator UIP400MTP를 사용한 세포외 기질 추출

기존의 세포외 기질(EM) 추출 방법은 종종 생물막 기질을 파괴하기 위해 여러 단계를 거쳐야 합니다. 그러나 이러한 기술은 시간이 많이 걸리고 일관성이 없어 결과의 변동성이 발생할 수 있습니다. 96웰 플레이트 초음파 발생기 UIP400MTP을 사용하면 EM 추출 공정이 크게 촉진되어 고처리량 형식으로 매우 효율적이고 정확하며 균일한 생물막 파괴를 제공합니다. 이 UIP400MTP는 집속 초음파를 사용하여 제어된 캐비테이션을 생성하여 생물막 내장 세포의 생존력과 무결성을 보존하면서 생물막 매트릭스를 효과적으로 분해합니다. 이 UIP400MTP 사용하면 대사체 및 단백질체 분석, 생존도 테스트 및 항균제 감수성 연구와 같은 다운스트림 분석의 재현성과 정확성이 향상됩니다. 이 UIP400MTP는 EM 추출을 간소화함으로써 연구원들이 일관되고 고품질의 결과를 얻을 수 있도록 하여 생물막 역학 및 외부 인자와의 상호 작용에 대한 더 깊은 통찰력을 제공할 수 있도록 합니다.

세포외 기질 추출

세포외 기질(EM)은 칸디다 알비칸스(Candida albicans)와 같은 미생물에 의해 형성된 생물막의 중요한 구성 요소입니다. 다당류, 단백질, 지질 및 세포외 DNA로 구성된 EM은 구조적 무결성을 제공하고 표면에 대한 접착을 매개하며 항생제 내성에 크게 기여합니다. EM을 추출하고 분석하는 것은 생물막 생물학을 이해하고, 약물 내성 메커니즘을 규명하고, 새로운 치료 표적을 식별하는 데 필수적입니다.

UIP400MTP를 사용한 칸디다 알비칸스 생물막에서 세포외 기질(EM) 추출을 위한 프로토콜

이 프로토콜은 정적 칸디다 알비칸스 생물막의 세포외 기질(EM)을 추출하는 데 중점을 둡니다. UIP400MTP 초음파 발생기를 통합하여 기존의 스크래핑 또는 효소 기반 단계를 대체하여 효율성과 재현성을 향상시킵니다.

필요한 재료

EM 추출을 위한 단계별 지침

1. 정적 생물막의 형성
   정적 생물막의 경우 RPMI-96 배지를 사용하여 1640웰 플레이트의 웰에 C. albicans를 접종합니다. 각 웰에는 일정한 양의 접종물이 포함되어야 합니다(예: 웰당 200μL).
   웰 표면에 생물막이 형성될 수 있도록 37°C에서 24시간 동안 정적 조건에서 플레이트를 배양합니다.
2. 추출을 위한 생물막 준비
   배양 후에는 생물막을 방해하지 않고 각 웰에서 사용한 배지를 부드럽게 흡입하고 버립니다.
   멸균 PBS(예: 200μL)로 각 웰을 조심스럽게 헹구어 느슨하게 부착된 세포와 플랑크톤 파편을 제거합니다. 이 단계를 두 번 반복합니다.
   새로운 PBS 또는 추출 완충액(예: 200μL)을 각 웰에 추가하여 초음파 처리를 준비합니다.
3. UIP400MTP와의 초음파 처리
   PBS 또는 추출 완충액이 들어있는 96웰 플레이트를 UIP400MTP 초음파 발생기 트레이에 넣습니다. 멀티웰 플레이트를 올바르게 배치하려면 설명서의 지침을 따르십시오.
   부드러운 설정(60% 진폭, 펄스 모드)에서 5-6분 동안 초음파 처리를 하여 생물막 구조의 균일한 파괴와 EM 구성 요소의 방출을 보장합니다.
   UIP400MTP과도한 가열이나 sonicator의 온도 제어를 사용하십시오.amp르 손상.
4. 양이온 교환 수지(CER) 처리
   각 웰에서 초음파 처리 된 액체를 새로운 96 웰 플레이트로 옮깁니다.
   각 웰에 2배 부피의 CER 현탁액(PBS 또는 완충액으로 준비)을 추가합니다(예: 웰당 총 부피 400μL).
   플레이트를 밀봉하고 400rpm에서 플레이트 셰이커 또는 로테이터에 3시간 동안 배양하여 EM 구성 요소를 결합하고 분리할 수 있도록 합니다.
5. 분리 및 여과
   플레이트를 2,000× g에서 10분 동안 원심분리하여 상층액에서 수지와 세포를 분리합니다.
   EM 함유 상층액을 각 웰에서 새로운 96웰 플레이트로 조심스럽게 옮깁니다.
   플레이트 기반 진공 매니폴드 시스템 또는 이에 상응하는 시스템을 사용하여 0.22μm 필터를 통해 상층액을 여과하여 깨끗한 EM 추출물을 얻습니다.
6. EM 분석
   비표적 대사산물 프로파일링을 위해 UPLC-Q-TOF-MS와 같은 기법을 사용하거나 특정 분석(예: 단백질, 트리글리세라이드 및 탄수화물 정량 키트에 대한 BCA)을 사용하여 EM 성분을 특성화할 수 있습니다.

High-Throughput Extracellular Matrix 추출

UIP400MTP 초음파 발생기를 사용한 세포외 기질(EM) 추출의 높은 효율성은 생물막 특성의 정확한 분석이 필요한 분석을 위한 시료 준비에 혁명을 일으켰습니다. 이 UIP400MTP는 초음파를 사용하여 생물막 매트릭스를 정밀하고 균일하게 파괴하여 세포 생존력과 무결성을 유지하면서 EM 구성 요소를 효과적으로 방출할 수 있도록 합니다. 이 접근법은 생물막 생존도 검사, 단백질체 및 대사체 연구, 항균제 감수성 평가와 같은 분석의 신뢰성을 크게 향상시킵니다.

콜로니 형성 단위(CFU) 계수와 같은 생물막 회수 분석의 경우, UIP400MTP를 사용한 EM 추출은 생물막이 부착된 세포에 대한 시약의 방해 없는 접근을 보장합니다. 마찬가지로, UPLC-Q-TOF-MS와 같은 단백질체 및 대사체 분석은 단백질, 지질 및 대사 산물의 고수율 분리의 이점을 누릴 수 있습니다. 이 UIP400MTP는 또한 정밀한 항균제 감수성 검사를 지원하여 생물막 MIC 및 MBEC 값을 정확하게 측정할 수 있습니다. 또한 UIP400MTP에 의해 촉진된 효율적인 추출은 효소 활성 분석, 구성 요소 정량화 및 구조 연구에 도움이 되어 생물막 구조, 접착 및 내성 메커니즘에서 세포외 기질의 역할에 대한 귀중한 통찰력을 제공합니다.

이 고처리량, 재현성 있는 추출 방법은 EM 준비를 최적화하여 다양한 생물막 관련 분석에서 우수한 결과를 보장합니다.