96웰 플레이트 초음파 발생기를 사용한 MBEC 분석 프로토콜 UIP400MTP
MBEC 분석은 페그 뚜껑에 형성된 생물막을 제거하는 데 필요한 항균제의 농도를 측정하는 데 사용됩니다. 생물막 생존력을 평가하려면 먼저 96웰 플레이트의 페그 뚜껑에서 생물막을 분리해야 합니다. 초음파 처리는이 분리를위한 가장 신뢰할 수 있고 효율적인 방법입니다. 멀티웰 플레이트 초음파 발생기 UIP400MTP는 최대의 효율성과 편의성으로 분석 플레이트를 처리하여 고처리량 MBEC 분석을 간소화하고 가속화하도록 특별히 설계되었습니다.
Biofilm Detachment에 대한 초음파 처리
초음파 처리는 MBEC (Minimum Biofilm Eradication Concentration) 분석에서 중요한 단계로, 표면 부착에서 생물막 세포를 효과적으로 제거 할 수 있습니다. 생물막은 본질적으로 세포외 기질에 둘러싸인 미생물의 구조화된 군집으로, 플랑크톤 세포에 비해 항균제에 훨씬 더 저항력이 있습니다. MBEC 분석 중에 초음파 검사는 초음파를 사용하여 제어 된 캐비테이션을 생성하여 생물막 매트릭스를 파괴하고 내장 된 세포를 현탁액으로 방출합니다. 이 단계는 생물막 세포가 회수 매체에 고르게 분산되도록 하여 도금, 희석 또는 분광광도계 방법을 통해 정확한 생존력 평가를 용이하게 합니다. 적절한 생물막 분리가 없으면 잔류 매트릭스 구성 요소가 세포를 보호하여 항균 효능을 과소평가할 수 있습니다. 따라서 초음파 처리는 신뢰할 수 있고 재현 가능한 MBEC 값을 얻는 데 필수적이며, 이는 테스트 된 약제의 진정한 박멸 잠재력을 반영합니다. multi-well plate sonicator UIP400MTP는 분석 플레이트에서 고처리량 시료 준비를 용이하게 합니다.
멀티웰 플레이트 초음파 발생기 UIP400MTP 분석 플레이트에서 고처리량 시료 준비를 용이하게 합니다.
최소 생물막 박멸 농도(MBEC) 분석 프로토콜
1단계: 생물막 형성
- 박테리아 현탁액을 준비합니다.
로그 단계 성장을 위해 적절한 매체에서 박테리아를 성장시킵니다.
박테리아 배양액을 정의된 광학 밀도(예: OD600 ~0.1)로 희석합니다. - 96웰 플레이트를 접종합니다.
박테리아 현탁액(예: 150–200 μL)을 표준 96웰 마이크로타이터 플레이트의 각 웰에 추가합니다. - 페그 뚜껑을 부착합니다.
페그 표면에 생물막이 형성될 수 있도록 페그 뚜껑을 접종된 플레이트에 놓습니다. - 플레이트를 배양합니다.
생물막 성장을 촉진하기 위해 흔들지 않고 적절한 온도(예: 37°C)에서 24-48시간 동안 설정을 배양합니다.
2단계: 항균제로 처리
- 항균 용액 준비:
새로운 배지에 다양한 농도의 항균제를 준비합니다.
생물막을 항균제에 노출시키기:
박테리아 배양액에서 페그 뚜껑을 제거하고 멸균 식염수 또는 PBS로 헹구어 플랑크톤 세포를 제거합니다.
페그 뚜껑을 항균 용액이 들어있는 새로운 96웰 플레이트에 넣습니다. - 플레이트를 배양합니다.
항균제 노출을 허용하기 위해 지정된 기간(예: 24시간) 동안 배양합니다.
멀티웰 플레이트 초음파 발생기 UIP400MTP 고처리량 시료 전처리용
3 단계 : 96-Well Plate Sonicator UIP400MTP로 초음파 처리
초음파 처리 단계는 생존 가능성을 평가하기 위해 페그 뚜껑에서 생물막을 분리하는 데 중요합니다. UIP400MTP 초음파 발생기에 대해 다음 단계를 따르십시오.
- 설정을 준비합니다.
각 웰에 회수 배지(예: 중화수 또는 신선한 성장 배지)를 새 96웰 플레이트를 채웁니다. - 페그 뚜껑을 옮깁니다.
항균 처리판에서 못 뚜껑을 제거합니다.
페그 뚜껑을 멸균 식염수 또는 PBS로 헹구어 잔류 항균제를 제거합니다. - 플레이트와 초음파 발생기를 배치합니다.
페그 뚜껑을 회수 매체 플레이트에 부착합니다.
회수 매체 플레이트를 UIP400MTP 초음파 발생기 플랫폼에 놓고 플레이트가 중앙에 있고 안정적인지 확인합니다. - 초음파 처리 매개 변수 조정 :
UIP400MTP에서 초음파 처리 매개 변수를 설정합니다 (설정은 생물막에 맞게 조정할 수 있음).
진폭: 70–100%.
초음파 처리 시간 : 사이클 모드에서 1-3 분 (생물막 견고성에 따라 조정). - 초음파 처리:
초음파 처리 과정을 시작하십시오. 초음파 진동은 페그 표면에서 회수 매체로 생물막을 제거합니다. - 프로세스를 모니터링합니다.
플러그형 온도 센서를 사용하여 웰의 샘플 온도를 모니터링합니다. UIP400MTP는 냉각을 위해 실험실 냉각기에 연결할 수 있습니다. - 초음파 처리 후 :
회수 매체(현재 분리된 생물막 포함)를 즉시 새로운 멸균 플레이트로 옮겨 다운스트림 분석을 수행합니다.
(A) 생물막 형성, 세포 회수 및
MIC 및 MBCB의 결정; (B) 포도상 구균 생물막 형성을 위한 핀이 있는 뚜껑. MIC 및 MBCB의 결정; (B) 포도상 구균 생물막 형성을 위한 핀이 있는 뚜껑.
핀에 형성된 생물막 세포는 세포 회수를 위한 신선한 배양 배지를 포함하는 96웰 플레이트에서 5분 동안 초음파 처리(Hielscher 초음파 기술)에 의해 제거되었습니다.
(사진 및 연구: ©de Oliveira et al., 2016)
4단계: 실행 가능성 평가
플레이트 및 배양 분리 생물막:
- 회수 매체를 연속으로 희석하고 한천에 플레이트하여 콜로니 형성 단위(CFU)를 열거합니다.
또는 비색 또는 형광 기반 생존도 분석을 사용하십시오. - 결과 기록:
MBEC를 검출 가능한 생물막 생존력을 제거한 가장 낮은 농도의 항균제로 결정합니다.
설계, 제조 및 컨설팅 – 독일에서 만든 품질
Hielscher 초음파는 최고의 품질과 디자인 표준으로 잘 알려져 있습니다. 견고 함과 쉬운 작동으로 초음파기를 산업 시설에 원활하게 통합 할 수 있습니다. 거친 조건과 까다로운 환경은 Hielscher 초음파 발생기로 쉽게 처리 할 수 있습니다.
Hielscher 초음파는 ISO 인증 회사이며 최첨단 기술과 사용자 친화성을 갖춘 고성능 초음파에 특히 중점을 둡니다. 물론, Hielscher 초음파는 CE를 준수하며 UL, CSA 및 RoHs의 요구 사항을 충족합니다.
96웰 플레이트(96-well plate) 및 어세이 플레이트(assay plate)에서 시료 전처리 간소화 멀티웰 플레이트 초음파 발생기 사용 UIP400MTP
문헌 / 참고문헌
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
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- Microplate Sonicator Validated in Peer-Reviewed Proteomics Study
자주 묻는 질문
MBEC 분석이란 무엇입니까?
MBEC(Minimum Biofilm Eradication Concentration) 분석은 생물막 관련 박테리아를 근절하는 데 필요한 항균제의 최저 농도를 결정하는 데 사용되는 표준화된 방법입니다. 여기에는 특수 표면에서 생물막을 성장시키고, 다양한 항균 농도에 노출시키고, 일반적으로 초음파 처리를 통해 생물막 파괴 후 분리된 세포의 생존 가능성을 평가하여 치료의 효능을 평가하는 것이 포함됩니다.
MBIC와 MBEC의 차이점은 무엇입니까?
최소 생물막 억제 농도(MBIC)는 생물막 형성을 방지하는 데 필요한 항균제의 가장 낮은 농도인 반면, 최소 생물막 박멸 농도(MBEC)는 확립된 생물막을 근절하는 데 필요한 가장 낮은 농도입니다. MBIC는 생물막 예방에 중점을 두는 반면 MBEC는 성숙한 생물막에 대한 치료 효능을 평가합니다.
MBEC 어세이에 일반적으로 사용되는 플레이트는 무엇입니까?
MBEC 분석에 일반적으로 사용되는 마이크로타이터 플레이트는 일반적으로 폴리스티렌 또는 폴리프로필렌으로 만든 96웰 플레이트입니다. 이러한 물질은 생물막 형성에 적합한 표면을 제공하며 분석 중에 테스트한 항균제에 화학적으로 내성이 있습니다. 폴리스티렌 플레이트는 광학 투명도 때문에 널리 선호되며, 이는 분광 광도계 또는 형광 기반 측정과 같은 다운스트림 분석에 유리합니다. 이 플레이트의 설계에는 분리 가능한 페그 뚜껑이 포함되어 있으며, 이는 성장 매체가 포함된 웰에 잠긴 페그에 생물막이 형성되기 때문에 분석에 필수적입니다. MBEC 분석 프로토콜을 준수하는 플레이트와 같은 표준화된 플레이트는 UIP400MTP 초음파 발생기 또는 기타 처리 장비와의 재현성 및 호환성을 보장하도록 특별히 설계되었습니다.
PEG-뚜껑 플레이트란 무엇입니까?
PEG-lid 플레이트는 뚜껑에 각 웰로 확장되는 작은 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 페그 또는 핀이 장착된 특수 멀티 웰 플레이트 시스템입니다. 이 못은 통제된 조건에서 미생물 생물막 형성을 위한 표면을 제공하여 실제 생물막 성장을 모방합니다. 이 설계는 웰에 성장 매체 또는 항균제가 포함되어 있는 동안 페그에서 생물막이 발달할 수 있도록 하여 MBEC 및 MBIC 분석과 같은 치료에 대한 생물막 감수성의 고처리량 테스트를 가능하게 합니다.
