Hielscher ულტრაბგერითი ტექნოლოგია

სონიზაციის ლიზი: უჯრედების მოშლა & ექსტრაქცია

საკვების დეზინტეგრაცია ან ლიზინგი ბიოტექნიკურ ლაბორატორიებში ყოველდღიური ნიმუშის მომზადების საერთო ნაწილია. ლიზის მიზანია, ჩაიშალოს უჯრედის კედლის ნაწილები ან სრული საკანში ბიოლოგიური მოლეკულების გათავისუფლება. ე.წ. lysate შეიძლება შედგებოდეს მაგ. პლაზმადი, რეცეპტორული ასლები, პროტეინი, დნმ, რნმ. და ა.შ. ლიზისის შემდგომი ნაბიჯები ფრაქციონირება, ორგანული იზოლაცია ან / და ცილის მოპოვება და გამწმენდი. ამოღებული მასალა (= lysate) უნდა იყოს გამოყოფილი და ექვემდებარება შემდგომ გამოძიებას ან განაცხადებს, მაგ. ულტრაბგერითი ჰომოგენიზატორები წარმატებული უჯრედების ლიზისთვის საერთო საშუალებაა. როგორც ულტრაბგერითი ინტენსივობა შეიძლება გადანაწილდეს პროცედურული პარამეტრების მორევის გზით, ოპტიმალური გამონაბოლქვი ინტენსივობა ძალიან რბილიდან ძალიან რთულად შეიძლება იყოს ინდივიდუალურად ინდივიდუალურად თითოეული ნივთიერებისა და მედიისათვის სპეციფიკური განაცხადის მოთხოვნის დასაკმაყოფილებლად.

უჯრედის სტრუქტურა

უჯრედები დაცულია ნახევრად გამტარი პლაზმური მემბრანით, რომელიც შედგება ფოსფო-ლიპიდური ბილიარით (ასევე ცილა-ლიპიდური ბილაიერი; ჰიდროფობიური ლიპიდების და ჰიდროფილური ფოსფორის მოლეკულების მიერ ჩამოთვლილი ცილის მოლეკულებით წარმოქმნილი) და ქმნის ბარიერს უჯრედის ინტერიერებს (ციტოპლაზმა) და უჯრედული გარემო. მცენარეული უჯრედები და პროკარიოტული უჯრედები გარშემორტყმულია უჯრედის კედლით. ცელულოზის მრავალჯერადი ფენების გამო, მცენარეული უჯრედები ძნელია, ვიდრე ცხოველების საკნები. უჯრედის ინტერიერი, როგორიცაა ორგანიზმები, ბირთვი, მიტოქონდრიონი, ციტოკოკლინის მიერ სტაბილიზირებულია.
უჯრედების მოცილებით, მიზნად ისახავს ორგანიზმებს, პროტეინებს, დნმ-ს, მრგვალდებას ან სხვა ბიომლოლეკულებს.

ჩვეულებრივ, სონიზაცია გამოიყენება უჯრედების მატერიის ნიმუშის დასამზადებლად.

ნახ. 1: უჯრედებისგან ულტრაბგერითი მოპოვება: პიტნის (მენთას პიპერიტა) მიკროსკოპური განივი სექცია (TS) ნაჩვენებია უჯრედებისგან ულტრაბგერითი მოპოვების დროს მოქმედების მექანიზმი (რესურსი: Vilkhu et al. 2011]

მეთოდები

უჯრედში არსებული უჯრედების არსებობის რამდენიმე მეთოდი არსებობს, რომელიც შეიძლება დაიყოს მექანიკურ და ქიმიურ მეთოდებს, რომლებიც მოიცავს სარეცხი საშუალებების ან გამხსნელების გამოყენებას, მაღალ წნევის გამოყენებას ან მძილის წისქვილს ან ფრანგულ პრესას. ამ მეთოდების ყველაზე პრობლემური მინუსი არის რთული კონტროლი და კორექტირების პროცესი პარამეტრების და ამით გავლენა.
საერთო ლიზის მეთოდების ძირითადი ნაკლოვანებები:

სხვადასხვა ლიზის ტექნიკა

ცხრილი: უჯრედული ლიზის ჩვეულებრივი მეთოდები აქვს მნიშვნელოვან ნაკლოვანებებს

პირიქით, sonication არის ძალიან ეფექტური და საიმედო ინსტრუმენტი საკანში დაშლის, რომელიც საშუალებას იძლევა სრული კონტროლი sonication პარამეტრების. ეს უზრუნველყოფს მაღალი შერჩევით მასალების გათავისუფლებას და პროდუქტის სიწმინდეს. [Balasundaram et al. 2009 წ.] შესაფერისია ყველა უჯრედის ტიპით და ადვილად მოქმედი მცირე და დიდი მასშტაბით. Ultrasonicators ადვილად გაწმენდა. ულტრაბგერითი ჰომოგენიზატორი ყოველთვის სუფთა- in- ადგილი (CIP) და სტერილიზაცია-ადგილი (SIP) ფუნქციაა. Sonotrode შედგება მასიური ტიტანის horn რომელიც შეიძლება წაშლილია ან flushed წყალში ან გამხსნელი (დამოკიდებულია სამუშაო საშუალო). ულტრაბგერითი აპარატების შენარჩუნება მათი სიმტკიცეა, თითქმის უგულებელყოფილია.

ლიზი

ლიზი არის მგრძნობიარე პროცესი. უჯრედის მემბრანის დაცვა განადგურებულია, თუმცა აღკვეთილი პროტეინების ინაქტივაცია, დენატრაცია და დეგრადაცია შეუძლებელია არაფსიქოლოგიური გარემოს (pH- ღირებულებიდან გადახრა). ამიტომ, ზოგადად ლიზის ხორციელდება ბუფერული გადაწყვეტა. უმეტესობა სირთულეები წარმოიქმნება უკონტროლო უჯრედების განადგურებისგან, რაც იწვევს ყველა უჯრედულ მასალებს ან / და სამიზნე პროდუქტის დენავრუქას.

ულტრაბგერითი უჯრედების ლიზინგი შეიძლება გამოყენებულ იქნას ლაბორატორიულ ნიმუშზე და დიდი მოცულობების წარმოებისათვის. დააჭირეთ გასადიდებლად!

ფიგურა 1: 200 ვატიანი ულტრაბგერითი ჰომოგენიერი Uf200 ः t ციფრული კონტროლი და ავტომატური მონაცემების ჩაწერა საიმედო და რეპროდუცირებადი საკანში ლიზისთვის.

ულტრაბგერითი ლიზინგი

ზოგადად, ლაბორატორიებში ნიმუშების სიდიდე 15 წამსა და 2 წუთს შორისაა. როგორც sonication- ის ინტენსივობა ძალიან ადვილად გამოსაყენებლად გამოიმუშავებს sonication- ის დროის ამოქმედებას, ასევე სწორი აღჭურვილობის არჩევის გზით, უჯრედის სტრუქტურისა და ლიზისის გათვალისწინებით უჯრედის მემბრანის დარღვევაა შესაძლებელი. მაგ. დნმ-ის ექსტრაქცია მოითხოვს რბილი ჩანაცვლებას, ბაქტერიების სრული ცილის მოპოვებას მოითხოვს უფრო ინტენსიური ულტრაბგერითი მკურნალობა. პროცესის დროს ტემპერატურა შეიძლება მონიტორინგი ინტეგრირებული ტემპერატურის სენსორით და ადვილად აკონტროლებს გაგრილების (ყინულის აბანოს ან გადინების უჯრედების გაგრილებისგან) ან პალიკადის რეჟიმში. პულსის რეჟიმში sonication, მოკლე sonication ადიდებული ციკლები 1-15 წამში ხანგრძლივობა საშუალებას სითბოს გაფრქვევა და გაგრილების დროს აღარ წყვეტილი პერიოდები.
ყველა ულტრაბგერითი ორიენტირებული პროცესი სრულიად რეპროდუქციული და ხაზოვანია.

ულტრაბგერითი ჰომოგენიზატორი VialTweeter- ის სინთეზური მომზადების 10-მდე ტესტირებისთვის. (დააჭირეთ გასადიდებლად!)

ულტრაბგერითი მოწყობილობა VialTweeter იძლევა ერთდროულად მომზადებული 10 ფლაკონის მომზადების ერთდროული მომზადების პირობებს.

ულტრაბგერითი Homogenizers

სხვადასხვა სახის ულტრაბგერითი მოწყობილობები ნებადართული ნიმუშის მომზადების მიზნის შესატყვისი და მომხმარებელთა კეთილგანწყობა და ოპერაციის კომფორტი. კვლევის ტიპის ულტრაბგერითი ლაბორატორიის ყველაზე გავრცელებული მოწყობილობებია. ისინი უმჯობესია მცირე და საშუალო ზომის ნიმუშების მომზადება 0.1 მლ-მდე 1000 მლ-მდე მოცულობით. სხვადასხვა სიმძლავრის ზომისა და სინოტოდების საშუალებას იძლევა მოერგოს ულტრაბგერითი ნიმუში ნიმუშის მოცულობას და ხომალდს ყველაზე ეფექტურად და ეფექტური გამონაბოლქვის შედეგებისთვის. ულტრაბგერითი გამოსაძიებელი მოწყობილობა საუკეთესო არჩევანია, როდესაც ერთი ნიმუშის მომზადებაა საჭირო.

თუ მეტი ნიმუშები უნდა მომზადდეს, მაგალითად, 8 ფლაკონი საკანში გადაწყვეტა, მოწყობილობები, როგორიცაა VialTweeter ან ულტრაბგერითი cuphorn არის შესაფერისი homogenizer for lysis. ამავე დროს, რამდენიმე ინტენსივობით ხსნის რამდენიმე ფლაკონი. ეს ზოგავს არა მარტო დროს, არამედ უზრუნველყოფს ყველა ნიმუშის იგივე მკურნალობას, რაც უზრუნველყოფს ნიმუშების შედეგებს საიმედო და შედარებით. გარდა ამისა, თავიდან აცილება ულტრაბგერითი sonotrode (ასევე ცნობილია, როგორც ულტრაბგერითი გამოსაძიებელი, საყვირი, წვერი ან თითი). მას შემდეგ, რაც ფლაკონები გამოიყენება, დროის შრომატევადი სუფთა- up და ნიმუში დაკარგვა გამო decanting გემების გამოტოვებული.
უფრო მაღალი მოცულობისთვის, მაგალითად, საკანში ექსტრაქტები, უწყვეტი ულტრაბგერითი სისტემები ნაკადის საკანში რეაქტორით. დამუშავებული მასალის უწყვეტი და კიდევ ნაკადი უზრუნველყოფს თუნდაც sonication. ულტრაბგერითი დეზინტეგრაციის პროცესის ყველა პარამეტრი ოპტიმიზირებულია და შეესაბამება განაცხადის მოთხოვნებს და სპეციფიკურ უჯრედს.

ბაქტერიული უჯრედების ულტრაბგერითი ლიზინგის სამაგალითო პროცედურა:

  • უჯრედის შეჩერების მომზადება: უჯრედის მარცვლები უნდა მთლიანად შეჩერდეს ბუფერული ხსნარით ჰომოგენიზით (აირჩიე ბუფერული ხსნარი შემდეგი ანალიზით, მაგ. კონკრეტული ქრომატოგრაფიული მეთოდი). საჭიროების შემთხვევაში, საჭიროა ლიზოსმენების და სხვა დანამატების დამატება (მათ ასევე უნდა შეესაბამებოდეს გამყოფი / გამწმენდი საშუალებებით). შერბილება / ჰომოგენიზაცია ხსნარით ნაზად სენსიციურად, სანამ არ დასრულდება სრული შეჩერება.
  • ულტრაბგერითი ლიზი: მოათავსეთ ნიმუში ყინულის აბანოში. უჯრედის დარღვევისთვის, 60-90 წამში შეჩერებული შეჩერება (თქვენი ულტრასონისტორის პულსის რეჟიმში).
  • დაშორიშორება: ცენტრიფუგა lysate (მაგ. 10 წთ at 10,000 xg; 4degC). გამოყოფა ზეპირად მენჯის საკანში. სუპერვატანიტი არის მთლიანი უჯრედის ლაზერი. ზედაპირის ფილტრაციის შემდეგ, ხსნადი უჯრედის ცილის ნათელი სითხე მიიღე.

ყველაზე გავრცელებული განაცხადების ultrasonicators ბიოლოგიისა და ბიოტექნოლოგიის არიან:

  • საკანი ამონაწერი მომზადება
  • დარღვევა საფუარი, ბაქტერია, მცენარეული უჯრედები, რბილი & მძიმე საკანში ქსოვილის, ნუკლეინის მასალა
  • ცილის მოპოვება
  • ფერმენტების მომზადება და იზოლაცია
  • ანტიგენების წარმოება
  • დნმ მოპოვება და / ან მიზნობრივი ფრაგმენტაცია
  • ლიპოზომის მომზადება
მაღალი სიმძლავრის ულტრაბგერითი ჰომოგენიზატორები, როგორიცაა UIP1000hd გამოიყენება საკანში დარღვევისა და მოპოვებისათვის სურათების ან უწყვეტი ნაკადის რეჟიმში. (დააჭირეთ გასადიდებლად!)

ულტრაბგერითი benchtop სისტემები, როგორიცაა UIP1000hd (1 კვ) შეუძლია ბიოლოგიური მასალის უფრო დიდი მოცულობების დამუშავება.

ბიოტექნოლოგია, ბიოინჟინერია, მიკრობიოლოგია, მოლეკულური ბიოლოგია, ბიოქიმია, იმუნოლოგია, ბაქტერიოლოგია, ვირუსოლოგია, პროტეომიკა, გენეტიკა, ფიზიოლოგია, ფიჭური ბიოლოგია, ჰემატოლოგია და ბოტანიკა.

მომხმარებელთა აპლიკაციების შეფასებისა და ოპტიმიზაციის მიზნით, Hielscher Ultrasonics გთავაზობთ სრულყოფილ აღჭურვილობას ულტრაბგერითი პროცესის ლაბორატორია. დამატებითი ინფორმაციისთვის დაგვიკავშირდით!

ლიტერატურა / ლიტერატურა

  • ბალაშანდრამი, ბ .; ჰარისონი, ს. Bracewell, DG (2009): ავანსები პროდუქტის გამოშვების სტრატეგიებსა და ბიოპროცესის დიზაინის გავლენას. ტენდენციები ბიოტექნოლოგიაში 27/8, 2009. გვ. 477-485.
  • ვილხუ, კ .; მენაშე, რ .; მაუსონი, რ .; Ashokkumar, M. (2011): ულტრაბგერითი აღდგენა და მოდიფიკაცია სურსათის ინგრედიენტები. In: Feng / Barbosa-Cánovas / Weiss (2011): ულტრაბგერითი ტექნოლოგიები სურსათისა და ბიოპროცესორი. ნიუ-იორკი: Springer, 2011. pp. 345-368.

დაგვიკავშირდით / მოითხოვეთ მეტი ინფორმაცია

გველაპარაკებიან თქვენი დამუშავების მოთხოვნებს. ჩვენ გირჩევთ შესაფერისი კონფიგურაცია და დამუშავების პარამეტრების თქვენი პროექტი.





გთხოვთ გაითვალისწინოთ ჩვენი კონფიდენციალურობის პოლიტიკა.