Persiapan Sampel dengan VialTweeter Ultrasonik

Persiapan sampel sebelum analisis dapat memerlukan berbagai proses pra-analitik seperti homogenisasi jaringan, lisis, ekstraksi protein, DNA, RNA, organel dan zat intraseluler lainnya, pelarutan dan degassing. VialTweeter adalah perangkat ultrasonik unik yang menyiapkan beberapa tabung sampel secara bersamaan dalam kondisi yang persis sama. Karena sonikasi tidak langsung dari tabung reaksi tertutup, kontaminasi silang dan kehilangan sampel dihindari.

Persiapan sampel ultrasonik

Ultrasonikasi adalah teknik umum perlakuan sampel untuk menyiapkan sampel untuk analisis seperti reaksi berantai polimer (PCR), Western Blots, pengujian, pengurutan molekuler, kromatografi dll. Ultrasonikasi adalah teknik yang banyak digunakan di laboratorium untuk mengobati sampel pra-analitik. Keuntungan utama dari sonikasi adalah bahwa prinsip kerja ultrasound didasarkan pada gaya mekanis murni. Lisis ultrasonik dan gangguan sel dicapai oleh gaya geser sonomekanik, yang memberikan ultrasonikasi keuntungan bahwa pelarut yang digunakan untuk ekstraksi protein dapat digunakan juga selama lisis. Pengganggu sel ultrasonik seperti VialTweeter memecahkan dinding / membran sel dan meningkatkan perpindahan massa antara interior sel dan pelarut. Dengan demikian, analit (misalnya DNA, RNA, protein, organel, dll.) secara efisien ditransfer dari matriks sel ke pelarut. Ini berarti langkah-langkah pendinginan dan ekstraksi tumpang tindih dengan proses gangguan sel ultrasonik, yang membuat lisis ultrasonik sangat efektif. Selain itu, preparasi sampel ultrasonik tidak memerlukan deterjen dan reagen lisis lainnya, yang dapat mengubah dan menghancurkan struktur lisat dan diketahui karena masalah selanjutnya dengan pemurnian. Metode lisis lainnya, gangguan enzimatik membutuhkan waktu inkubasi yang lama dan seringkali memberikan hasil yang tidak dapat direproduksi. Persiapan sampel ultrasonik mengatasi masalah umum dalam persiapan sampel seperti homogenisasi jaringan, gangguan sel, lisis, ekstraksi protein, dan pelarutan lisat. Karena intensitas perawatan ultrasonik dapat dikontrol dengan tepat dan disesuaikan dengan sampel biologis, degradasi dan kehilangan sampel dihindari. Suhu sampel yang dipantau dan dikontrol secara otomatis, mode pulsa dan durasi sonikasi memastikan hasil yang optimal.
 

VialTweeter sangat nyaman untuk pekerjaan laboratorium yang memerlukan persiapan beberapa sampel secara simultan dalam kondisi yang sama. VialTweeter adalah sonotrode blok ultrasonik yang dapat menampung hingga 10 botol (misalnya Eppendorf, sentrisguge, tabung NUNC, cryo-vial) dan sonikasinya secara intens dalam kondisi yang dikontrol dengan tepat. Karena energi ultrasonik digabungkan melalui dinding botol ke dalam media sampel, botol tetap tertutup selama perawatan. Dengan demikian, kehilangan sampel dan kontaminasi silang benar-benar dihindari.

Botol dan Tabung yang dipasang dengan VialTweeter

VialTweeter cocok untuk menampung 10 tabung berbentuk kerucut atau bulat umum seperti Eppendorf, centrifuge, cryo-vial, dan berbagai jenis botol NUNC, tetapi lubangnya dapat disesuaikan dengan ukuran botol dan tabung lain berdasarkan permintaan. Beri tahu kami jenis tabung reaksi apa yang ingin Anda gunakan sehingga kami dapat memodifikasi VialTweeter Anda. Untuk tabung reaksi yang lebih besar seperti tabung Falcon dan wadah uji lainnya, gelas kimia, dan bejana, VialPress adalah solusi yang nyaman.

VialTweeter dengan VialPress

Sementara VialTweeter sendiri dengan 10 lubang tabungnya sudah menjadi perangkat ultrasonik yang unik dan sangat fungsional, add-on VialPress membuat VialTweeter menjadi lebih serbaguna dan fleksibel untuk pengoperasian. VialPress adalah aksesori untuk VialTweeter yang terdiri dari batang penjepit yang memungkinkan untuk mengfiksasi tabung sampel yang lebih besar seperti tabung Falcon atau gelas kimia uji berukuran kecil hingga menengah lainnya ke bagian depan VialTweeter. Gambar di sebelah kiri menunjukkan VialTweeter memegang 10 botol Eppendorf di blok, sementara VialPress memasang satu tabung reaksi yang lebih besar ke depan untuk sonikasi. VialPress mampu menampung hingga 5 tabung reaksi yang lebih besar untuk sonikasi yang intens.

Protokol Persiapan Sampel VialTweeter

VialTweeter banyak digunakan untuk sonikasi sampel biologis. Sebelum analisis, sampel harus disiapkan untuk analisis dan pengujian biokimia atau biofisik, misalnya dengan lisis, homogenisasi jaringan, ekstraksi protein, pemotongan DNA / RNA, degassing, dll. VialTweeter memenuhi proses ultrasonik ini dengan andal dan memberikan hasil yang dapat direproduksi. Aplikasi umum dari VialTweeter adalah lisis / gangguan sel jaringan mamalia (manusia dan hewan) serta sel bakteri dan partikel virus. Sampel biologis yang berhasil diobati VialTweeter termasuk sel epitel paru-paru manusia, sel punca hematopoietik, sel leukemia myeloid, Escherichia, Bacillus subtilis, Bacillus anthracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptococcus pyogenes, Caulobacter crescentus, Mycoplasma pneumoniae, mikobakteri / Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) dan banyak sel bakteri, tumbuhan, dan mikroba lainnya.
Di bawah ini, Anda dapat menemukan beberapa protokol pilihan yang menampilkan VialTweeter.

E.Lysis Dengan VialTweeter untuk Penentuan Glutathione In-Vivo

Bakteri Escherichia dari strain MG1655 ditanam dalam media minimal MOPS dalam volume total 200ml hingga A600 0,5 tercapai. Kultur dibagi menjadi kultur 50 ml untuk pengobatan stres. Setelah 15 menit inkubasi dengan 0,79 mM allicin, 1 mM diamide, atau dimetil sulfoksida (kontrol), sel dipanen pada 4.000g pada 4°C selama 10 menit. Sel dicuci dua kali dengan buffer KPE sebelum resuspension pelet dalam 700μl buffer KPE. Untuk deproteinasi, 300μl asam sulfosalicylic 10% (w / v) ditambahkan sebelum gangguan sel oleh ultrasonikasi (3 x 1 menit; VialTweeter ultrasonicator). Supernatan dikumpulkan setelah sentrifugasi (30 menit, 13.000g, 4°C). Konsentrasi asam sulfosalicylic diturunkan menjadi 1% dengan penambahan 3 volume buffer KPE. Pengukuran total glutathione dan GSSG dilakukan seperti yang dijelaskan di atas. Konsentrasi glutathione seluler dihitung berdasarkan volume sel E. 6,7×10-15 liter dan kepadatan sel A600 0,5 (setara dengan kultur 1×108 sel ml-1). Konsentrasi GSH dihitung dengan pengurangan 2 [GSSG] dari total glutathione. (Müller dkk. 2016)

Fragmentasi Fibril Alpha-Synuclein dengan VialTweeter

Sonikator VialTweeter banyak digunakan untuk fragmentasi fibril dan pita alfa-synuclein yang andal dan efisien. Klik di sini untuk menemukan deskripsi terperinci, protokol, dan referensi untuk fragmentasi alfa-synuclein dengan VialTweeter!

Lisis Sel dengan VialTweeter sebelum Spektrometri Serapan Atom Tungku Grafit

Bacillus subtilis 168 (trpC2) dipaparkan pada stres antibiotik selama 15 menit, kemudian sel dipanen pada 3.320 x g, dicuci lima kali dengan 100 mM Tris/1 mM EDTA, pH 7,5, tersuspensi kembali dalam 10 mM Tris, pH 7,5 dan diganggu oleh ultrasonikasi pada instrumen Hielscher VialTweeter. (Wenzel dkk. 2014)

Persiapan Sampel VialTweeter sebelum Spektrometri Massa

Pelet sel liofilisasi dari sel induk / nenek moyang hematopoietik CD34 manusia disuspensi kembali dalam 10μ (200μl untuk persiapan HEK293 massal untuk seri pengenceran peptida) 8 M urea dalam 100 mM amonium hidrogen karbonat dan dilisis dibantu oleh sonikasi dengan Hielscher VialTweeter pada amplitudo 60%, siklus 60% dan durasi 20 detik selama tiga kali dengan pendinginan menengah di atas es. (Amon dkk. 2019)

Protokol Persiapan Sampel menggunakan VialPress

Selada segar (Lactuca sativa) dihomogenisasi dalam buffer HEPES 0,5 M (pH 8, KOH disesuaikan) dengan perbandingan 1 g tanaman (berat segar) dengan larutan buffer 200, 100, 50, atau 20 mL. Rasio massa tanaman terhadap volume larutan penyangga bervariasi untuk menjaga total volume homogenat antara 3,5 dan 12 mL. Rasio massa tanaman terhadap volume larutan penyangga bervariasi untuk menjaga total volume homogenat antara 3,5 dan 12 mL, memungkinkan homogenisasi dengan probe. Homogenat kemudian menjalani ultrasonikasi tidak langsung menggunakan UP200St dengan VialTweeter yang dilengkapi dengan 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Jerman) selama 3 menit (pulsa 80% dan daya 100%). Menggunakan perangkat ini menghindari kontaminasi. (Laughton dkk. 2019)

Kontrol Suhu yang Andal selama Sonikasi dengan VialTweeter

Suhu merupakan faktor penting yang mempengaruhi proses yang sangat penting untuk perlakuan sampel biologis. Seperti semua teknik persiapan sampel mekanis, sonikasi menciptakan panas. Namun, suhu sampel dapat dikontrol dengan baik saat menggunakan VialTweeter. Kami menyajikan berbagai opsi untuk memantau dan mengontrol suhu sampel Anda sambil menyiapkannya dengan VialTweeter dan VialPress untuk analisis.

1. Memantau suhu sampel: Prosesor ultrasonik UP200St, yang menggerakkan VialTweeter, dilengkapi dengan perangkat lunak cerdas dan sensor suhu yang dapat dicolokkan. Colokkan sensor suhu ke UP200St dan masukkan ujung sensor suhu ke salah satu sample tabung. Melalui layar sentuh berwarna digital, Anda dapat mengatur di menu UP200St kisaran suhu tertentu untuk sonikasi sampel Anda. Ultrasonicator akan berhenti secara otomatis ketika suhu maksimum tercapai dan berhenti sampai sample suhu turun ke nilai yang lebih rendah dari ∆ suhu yang disetel. Kemudian sonikasi dimulai secara otomatis lagi. Fitur pintar ini mencegah degradasi yang disebabkan oleh panas.
2. Blok VialTweeter dapat didinginkan terlebih dahulu. Masukkan blok VialTweeter (hanya sonotrode tanpa transduser!) ke dalam lemari es atau freezer untuk mendinginkan blok titanium membantu menunda kenaikan suhu dalam sampel. Jika memungkinkan, sampel itu sendiri juga dapat didinginkan terlebih dahulu.
3. Gunakan es kering untuk mendinginkan selama sonikasi. Gunakan nampan dangkal berisi es kering dan letakkan VialTweeter di atas es kering agar panas dapat menghilang dengan cepat.

Pelanggan di seluruh dunia menggunakan VialTweeter dan VialPress untuk pekerjaan persiapan sampel harian mereka di laboratorium biologi, biokimia, medis, dan klinis. Perangkat lunak cerdas dan kontrol suhu prosesor UP200St, suhu dikontrol dengan andal dan degradasi sampel yang diinduksi panas dihindari. Persiapan sampel ultrasonik dengan VialTweeter dan VialPress memberikan hasil yang sangat andal dan dapat direproduksi!

Detail Teknis VialTweeter

VialTweeter adalah sonotrode blok yang terbuat dari titanium yang dapat menampung hingga 10 botol di lubang di dalam blok. Selain itu, hingga 5 tabung reaksi yang lebih besar dapat dijepit ke bagian depan VialTweeter menggunakan VialPress. VialTweeter dirancang sedemikian rupa sehingga energi ultrasonikasi didistribusikan secara merata ke dalam setiap botol yang dimasukkan untuk memastikan hasil sonikasi yang andal dan seragam. Pivot kecil menyesuaikan sonotrode VialTweeter ke tanah yang tidak rata dan menyelaraskan tabung reaksi secara vertikal.

Sekilas Keuntungan dari VialTweeter

• Intens sonifikasi hingga 10 vial secara bersamaan
• Sonikasi tidak langsung pada intensitas ultrasonik tinggi melalui dinding bejana ke dalam sampel
• Tidak langsung sonifikasi untuk menghindari kontaminasi silang dan sampel yang gagal
• Hasil yang dapat direproduksi karena amplitudo sonikasi yang dapat disesuaikan dan dapat dikontrol
• VialPress memungkinkan Anda untuk sonikasi tabung yang lebih besar
• Amplitudo yang dapat disesuaikan dari 20 hingga 100%
• Penyesuaian pulse mode dari 0 untuk 100%
• AUTOCLAVABLE

VialTweeter didukung oleh UP200St, prosesor ultrasonik 200 watt yang kuat. UP200St dilengkapi dengan perangkat lunak cerdas yang memungkinkan kontrol yang tepat atas semua parameter proses ultrasonik penting seperti amplitudo, waktu sonikasi, denyut, dan suhu. Hal ini menjadikan VialTweeter alat yang andal untuk hasil proses yang dapat direproduksi yang sukses di laboratorium biologi dan biokimia.
Amplitudo dapat disesuaikan antara 20 dan 100% dan memungkinkan untuk menyesuaikan intensitas ultrasonik dengan sampel Anda. Misalnya, geser dan fragmentasi DNA dan RNA membutuhkan amplitudo yang lebih ringan untuk mencegah produksi fragmen DNA yang terlalu kecil, homogenisasi jaringan otak tikus membutuhkan sonikasi intensitas tinggi. Pilih amplitudo, intensitas sonikasi, dan durasi yang ideal melalui menu cerdas dan intuitif pada prosesor UP200St. Menu dan pengaturan dapat dengan mudah diakses dan dioperasikan melalui layar sentuh berwarna. Dalam pengaturan, Anda dapat mengatur parameter sonikasi sebelumnya seperti amplitudo, mode denyut / siklus, durasi sonikasi, input energi total, dan batas suhu. Dalam penelitian dan produksi, pengulangan uji coba dan hasil pengujian sangat penting. Ini berarti perekaman yang tepat dari kondisi proses dan protokol sonikasi sangat penting. Protokol data otomatis menulis semua data sonikasi ke dalam file CSV pada kartu SD terintegrasi sehingga Anda dapat dengan mudah memeriksa dan membandingkan berbagai proses sonikasi. Semua data proses ultrasonik dapat dengan mudah diakses dan dibagikan sebagai file CSV.
Hielscher Ultrasonics berusaha untuk memberi Anda teknologi canggih untuk memfasilitasi dan meningkatkan pekerjaan penelitian Anda!