Fragmentasi Alpha-Synuclein menggunakan Sonicator VialTweeter

Fibril dan pita α-synuclein terfragmentasi dalam penelitian ilmiah untuk menghasilkan cuplikan fibril yang lebih kecil atau bahkan molekul protein individu, yang dapat lebih mudah dianalisis menggunakan berbagai teknik eksperimental. VialTweeter Sonicator adalah salah satu ultrasonicator yang paling umum digunakan untuk fragmentasi alfa-synuclein yang efisien dan andal.

α-Synuclein dalam Penelitian

Fibril alfa-synuclein adalah agregat protein yang sangat terkait dengan gangguan neurodegeneratif seperti penyakit Parkinson dan bentuk demensia tertentu, termasuk demensia dengan tubuh Lewy. Penelitian yang berfokus pada fibril alfa-synuclein bertujuan untuk memahami perannya dalam perkembangan penyakit dan mengembangkan intervensi terapeutik potensial. Dengan memecah fibril alfa-synuclein menjadi fragmen yang lebih kecil, para peneliti dapat menyelidiki fitur struktural spesifik mereka. Misalnya, pemecahan fibril alfa-synuclein memungkinkan peneliti untuk menyelidiki interaksinya dengan molekul lain, seperti protein, lipid, atau molekul kecil. Dengan menghasilkan fragmen yang lebih kecil, situs pengikatan dan afinitas untuk mitra yang berinteraksi ini dapat diselidiki dengan lebih efektif. Fribrils dan pita α-Syn yang lebih kecil juga dapat menunjukkan perubahan toksisitas dan efek biokimia. Oleh karena itu, teknik fragmentasi yang andal dan efisien, yang menghasilkan hasil yang dapat direproduksi dalam perawatan sampel yang cepat dan sederhana, sangat penting.
Fragmentasi Alpha-Syn Ultrasonik: Sonikator VialTweeter adalah sistem persiapan sampel ultrasonik yang mapan yang melakukan sonikasi hingga 10 botol secara bersamaan dalam kondisi yang persis sama. Pengaturan yang dapat diprogram memungkinkan eksekusi ulang yang sederhana dan cepat dari eksperimen yang sama, yang memberikan hasil yang sangat andal dan dapat direproduksi dalam fragmentasi fibril alfa-synuclein.

Persiapan Sampel α-Synuclein dengan Sonicator

Salah satu pendekatan untuk mempelajari fibril alfa-synuclein melibatkan ekstraksi dan fragmentasi mereka menggunakan teknik seperti sonikasi. Sonikasi adalah proses yang menggunakan gelombang ultrasound intensitas tinggi, frekuensi rendah untuk mengganggu dan memecah agregat protein, yang mengarah pada pelepasan fibril yang lebih kecil atau molekul protein individu. Sonicator VialTweeter adalah perangkat yang umum digunakan dalam studi penelitian terkait α-synuclein untuk tujuan ini.

Berbagai studi penelitian menjelaskan protokol persiapan sampel yang tepat dari sonikasi fibril alfa-synuclein, yang menggunakan Hielscher VialTweeter untuk fragmentasi fibril α-synuclein yang efisien dan andal. Dengan memecah fibril secara ultrasonik, peneliti dapat menganalisis produk yang dihasilkan dan memeriksa struktur, toksisitas, dan interaksinya dengan molekul lain. Penelitian ini memberikan wawasan penting tentang mekanisme yang mendasari neurodegenerasi dan berpotensi mengidentifikasi target terapeutik baru. Protokol sonikasi α-synuclein yang mapan menggunakan sonicator VialTweeter memungkinkan hasil yang andal dan dapat direproduksi.

Gambar atas: fibril alfa-synuclein yang tidak terfragmentasi
Gambar bawah: Fibril alfa-synuclein yang terfragmentasi secara ultrasonik dengan sonicator VialTweeter
(studi dan gambar: ©Dieriks et al., 2022)

Fragmentasi Ultrasonik Fibril α-Synuclein – Protokol

Karena banyak peneliti menggunakan sonicator VialTweeter sebagai teknik fragmentasi yang disukai untuk menghasilkan fragmen fibril α-synuclein yang seragam, protokol yang ditetapkan sudah tersedia. Di bawah ini Anda dapat menemukan beberapa protokol fragmentasi yang patut dicontoh.
 

 
Persiapan benih ClearTau: Fibril ClearTau diencerkan menjadi 10 μM dalam dH2O dan disonikasi pada amplitudo 70% selama 50 detik dengan siklus 1 detik ON 1 detik OFF dalam tabung menggunakan sonicator UP200St dengan VialTweeter. Benih ditandai dengan mikroskop elektron.
Pengukuran fluoresensi ThS: Fibril ClearTau diencerkan menjadi 2,5 μM dalam dH2O dan disonikasi pada amplitudo 70% selama 50 detik dengan siklus 1 detik ON 1 detik OFF dalam tabung menggunakan UP200St dengan VialTweeter. Monomer Tau 4R2N panjang penuh 2,5 μM digunakan sebagai kontrol. Untuk reaksi 100 μl, 100 μl ThS (10 μM) ditambahkan, menghasilkan konsentrasi protein akhir 1,25 μM. Fluoresensi ThS titik waktu tunggal diukur menggunakan 96 pelat bawah bening yang dipasang di pembaca pelat mikro FLUOstar Omega dengan eksitasi pada 445 nm dan emisi pada 485 nm dicatat.
(lih. Limorenko et al., 2023)
 
Panjang α-synuclein seragam menggunakan sonikasi: Heterogenitas panjang fibril dan pita α-syn dikurangi dengan sonikasi selama 20 menit di atas es dalam tabung Eppendorf 2 ml dalam VialTweeter yang ditetapkan pada amplitudo 75%, pulsa 0,5 detik.
(lih. Bousset et al., 2013)
 
Kontrol kualitas monomer rekombinan manusia WT atau S129A a-Syn dan polimorf fibrillar yang mereka hasilkan serta a-Syn 1-110 dilakukan. Selanjutnya, polimorf fibrillar difragmentasi oleh sonikasi selama 20 menit dalam tabung Eppendorf 2-mL di ultrasonicator VialTweeter untuk menghasilkan partikel fibrillar dengan ukuran rata-rata 42-52 nm yang cocok untuk endositosis.
(lih. Shrivastava et al., 2020)
 

Karakterisasi lima polimorf fibrillar α-Syn. (A) Mikrograf elektron transmisi polimorf fibrillar α-Syn yang diwarnai negatif, fibril, pita, fibril-91, fibrils-65, dan fibrils-110 sebelum (jalur atas) dan setelah fragmentasi dengan VialTweeter (jalur bawah) ditampilkan. (B) Distribusi panjang polimorf fibrillar yang terfragmentasi ditunjukkan. Jumlah (n) rakitan fibrillar dari histogram diturunkan ditunjukkan.
(studi dan gambar: Shrivastava et al., 2020)

 
Fibril α-Syn difragmentasi oleh sonikasi selama 20 menit dalam tabung Eppendorf 2 ml dalam VialTweeter untuk menghasilkan partikel fibrillar dengan ukuran rata-rata 42-52 nm seperti yang dinilai oleh analisis TEM.
(lih. Negrini et al., 2022)
 
Fibril yang ditangguhkan ulang91 (dalam PBS) difragmentasi sebelum ditambahkan ke kultur sel dengan sonikasi selama 20 menit dalam tabung Eppendorf 2 mL menggunakan sonicator Vial Tweeter, dikutip, dibekukan kilat dalam nitrogen cair dan disimpan sampai digunakan pada -80 ̊C.
(lih. Vajhøj et al., 2021)
 

VialTweeter dan Sononitator Lab untuk Fragmentasi α-Syn

Hielscher Ultrasonics diakui di seluruh dunia sebagai produsen ultrasonicator mutakhir terkemuka. Dipercaya dan didirikan di laboratorium penelitian utama di seluruh dunia, ultrasonicator kami menawarkan kualitas dan kinerja yang tak tertandingi untuk eksperimen kritis Anda.
Dengan Hielscher VialTweeter dan sonicator Hielscher lainnya, Anda akan merasakan kenyamanan pengguna yang tak tertandingi, karena direkayasa dengan cermat untuk hasil yang dapat direproduksi, kemudahan penggunaan, dan pengoperasian yang mulus. Dengan fitur perekaman data otomatis, Anda dapat fokus pada penelitian Anda sementara ultrasonicators kami dengan cermat merekam data penting untuk reproduktifitas dan presisi.
Raih hasil yang konsisten dan dapat direproduksi dengan percaya diri!
Ultrasonicator kami direkayasa dan diproduksi di Jerman. Presisi Jerman dan kualitas teknik tertinggi untuk memastikan persiapan sampel yang andal dan akurat seperti fragmentasi fibril alfa-synuclein setiap saat. Tidak perlu lagi khawatir tentang hasil yang tidak konsisten – teknologi ultrasound kami memastikan penelitian Anda tetap menjadi yang terdepan dalam kemajuan ilmiah.
Tapi itu belum semuanya! Komitmen kami terhadap keunggulan melampaui produk kami. Kami bangga dengan layanan pelanggan kami yang luar biasa, memberikan dukungan ahli untuk menjawab pertanyaan atau masalah apa pun yang mungkin Anda miliki. Tim kami yang berdedikasi ada di sini untuk membantu Anda di setiap langkah perjalanan penelitian Anda, memastikan Anda mendapatkan hasil maksimal dari ultrasonicator kami.
Pilih inovasi, keandalan, dan pengalaman pengguna yang luar biasa – pilih sonicator lab kami seperti VialTweeter untuk fragmentasi fibril alfa-synuclein. Manfaatkan protokol yang sudah ditetapkan dan bergabunglah dengan jajaran peneliti terkemuka yang mempercayai teknologi kami untuk studi kritis mereka. Tingkatkan penelitian Anda dan jelajahi batas baru dalam penelitian demensia dan penyakit neurodegeneratif dengan ultrasonicator canggih kami.

Desain, Manufaktur, dan Konsultasi – Kualitas Buatan Jerman

Ultrasonicators Hielscher terkenal dengan kualitas dan standar desainnya yang tertinggi. Ketahanan dan pengoperasian yang mudah memungkinkan integrasi ultrasonicator kami ke dalam fasilitas industri. Kondisi kasar dan lingkungan yang menuntut mudah ditangani oleh ultrasonicator Hielscher.

Hielscher Ultrasonics adalah perusahaan bersertifikat ISO dan memberikan penekanan khusus pada ultrasonicators berkinerja tinggi yang menampilkan teknologi canggih dan keramahan pengguna. Tentu saja, sonicator Hielscher sesuai dengan CE dan memenuhi persyaratan UL, CSA dan RoHs.
 
Tabel di bawah ini memberi Anda indikasi perkiraan kapasitas pemrosesan ultrasonicator ukuran lab kami: