Fragmentasi Alfa-Sinuklein menggunakan Sonikator VialTweeter

Fibril dan pita α-sinuklein difragmentasi dalam penelitian ilmiah untuk menghasilkan potongan fibril yang lebih kecil atau bahkan molekul protein individual, yang dapat lebih mudah dianalisis menggunakan berbagai teknik eksperimental. Sonikator VialTweeter merupakan salah satu sonikator yang paling umum digunakan untuk fragmentasi alfa-sinuklein yang efisien dan andal.

α-Sinuklein dalam Penelitian

Fibril alfa-sinuklein merupakan agregat protein yang sangat terkait dengan gangguan neurodegeneratif seperti penyakit Parkinson dan bentuk demensia tertentu, termasuk demensia dengan badan Lewy. Penelitian yang berfokus pada fibril alfa-sinuklein bertujuan untuk memahami perannya dalam perkembangan penyakit dan mengembangkan intervensi terapeutik potensial. Dengan memecah fibril alfa-sinuklein menjadi fragmen yang lebih kecil, peneliti dapat menyelidiki karakteristik struktural spesifiknya. Misalnya, fragmentasi fibril alfa-sinuklein memungkinkan peneliti menyelidiki interaksinya dengan molekul lain, seperti protein, lipid, atau molekul kecil. Dengan menghasilkan fragmen yang lebih kecil, situs pengikatan dan afinitas terhadap mitra interaksi ini dapat diteliti secara lebih efektif. Fibril dan pita α-Syn yang lebih kecil juga dapat menunjukkan perubahan toksisitas dan efek biokimia. Oleh karena itu, teknik fragmentasi yang andal dan efisien, yang menghasilkan hasil yang dapat direproduksi melalui perlakuan sampel yang cepat dan sederhana, sangatlah penting.
Fragmentasi Alfa-Syn Ultrasonik: Sonikator VialTweeter merupakan sistem preparasi sampel ultrasonik yang telah mapan, yang melakukan sonikasi hingga 10 vial secara bersamaan dalam kondisi yang persis sama. Pengaturan yang dapat diprogram memungkinkan pengulangan eksperimen yang sama secara sederhana dan cepat, sehingga memberikan hasil yang sangat andal dan dapat direproduksi dalam fragmentasi fibril alfa-sinuklein.

Preparasi Sampel α-Sinuklein dengan Sonikator

Salah satu pendekatan untuk mempelajari fibril alfa-sinuklein melibatkan ekstraksi dan fragmentasinya menggunakan teknik seperti sonikasi. Sonikasi merupakan proses yang menggunakan gelombang ultrasonik berintensitas tinggi dan berfrekuensi rendah untuk mendisrupsi dan memecah agregat protein, sehingga melepaskan fibril yang lebih kecil atau molekul protein individual. Sonikator VialTweeter merupakan perangkat yang umum digunakan dalam studi penelitian terkait α-sinuklein untuk tujuan ini.

Banyak studi penelitian menjelaskan protokol preparasi sampel yang presisi untuk sonikasi fibril alfa-sinuklein, yang menggunakan Hielscher VialTweeter untuk fragmentasi fibril α-sinuklein yang efisien dan andal. Dengan memfragmentasi fibril secara ultrasonik, peneliti dapat menganalisis produk yang dihasilkan dan memeriksa struktur, toksisitas, serta interaksinya dengan molekul lain. Penelitian ini memberikan wawasan penting mengenai mekanisme yang mendasari neurodegenerasi dan berpotensi mengidentifikasi target terapeutik baru. Protokol sonikasi α-sinuklein yang telah mapan menggunakan sonikator VialTweeter memungkinkan hasil yang andal dan dapat direproduksi.

Gambar atas: fibril alfa-sinuklein yang belum difragmentasi
Gambar bawah: Fibril alfa-sinuklein yang difragmentasi secara ultrasonik dengan sonikator VialTweeter
(studi dan gambar: ©Dieriks et al., 2022)

Fragmentasi Ultrasonik Fibril α-Sinuklein – Protokol

Karena banyak peneliti menggunakan sonikator VialTweeter sebagai teknik fragmentasi pilihan untuk menghasilkan fragmen fibril α-sinuklein yang seragam, protokol yang telah mapan tersedia dengan mudah. Di bawah ini Anda dapat menemukan beberapa contoh protokol fragmentasi.
 

 
Preparasi benih ClearTau: Fibril ClearTau diencerkan hingga 10 μM dalam dH2O dan disonikasi pada amplitudo 70 % selama 50 s dengan siklus 1 s AKTIF 1 s NONAKTIF di dalam tabung menggunakan sonikator UP200St dengan VialTweeter. Benih dikarakterisasi menggunakan mikroskopi elektron.
Pengukuran fluoresensi ThS: Fibril ClearTau diencerkan hingga 2,5 μM dalam dH2O dan disonikasi pada amplitudo 70 % selama 50 s dengan siklus 1 s AKTIF 1 s NONAKTIF di dalam tabung menggunakan UP200St dengan VialTweeter. Monomer Tau 4R2N panjang penuh sebesar 2,5 μM digunakan sebagai kontrol. Ke dalam reaksi 100 μl ditambahkan 100 μl ThS (10 μM), sehingga menghasilkan konsentrasi protein akhir 1,25 μM. Fluoresensi ThS pada satu titik waktu diukur menggunakan pelat 96 sumur dengan dasar transparan yang ditempatkan dalam pembaca pelat mikro FLUOstar Omega dengan eksitasi pada 445 nm, dan emisi pada 485 nm dicatat.
(bdk. Limorenko et al., 2023)
 
Panjang α-sinuklein yang seragam menggunakan sonikasi: Heterogenitas panjang fibril dan pita α-syn dikurangi melalui sonikasi selama 20 min di atas es dalam tabung Eppendorf 2-ml di dalam VialTweeter yang diatur pada amplitudo 75%, pulsa 0,5 s.
(bdk. Bousset et al., 2013)
 
Kontrol kualitas dilakukan terhadap a-Syn WT atau S129A monomerik rekombinan manusia dan polimorf fibrilar yang dihasilkannya, serta terhadap a-Syn 1–110. Selanjutnya, polimorf fibrilar difragmentasi melalui sonikasi selama 20 min dalam tabung Eppendorf 2-mL di dalam sonikator VialTweeter untuk menghasilkan partikel fibrilar berukuran rata-rata 42–52 nm yang sesuai untuk endositosis.
(bdk. Shrivastava et al., 2020)
 

Karakterisasi lima polimorf fibrilar α-Syn. (A) Ditampilkan mikrograf elektron transmisi polimorf fibrilar α-Syn yang diwarnai negatif, yaitu fibril, pita, fibrils-91, fibrils-65, dan fibrils-110, sebelum (baris atas) dan setelah fragmentasi dengan VialTweeter (baris bawah). (B) Ditampilkan distribusi panjang polimorf fibrilar yang telah difragmentasi. Jumlah (n) rakitan fibrilar yang menjadi dasar penyusunan histogram ditunjukkan.
(studi dan gambar: Shrivastava et al., 2020)

 
Fibril α-Syn difragmentasi melalui sonikasi selama 20 min dalam tabung Eppendorf 2 ml di dalam VialTweeter untuk menghasilkan partikel fibrilar berukuran rata-rata 42–52 nm sebagaimana dinilai melalui analisis TEM.
(bdk. Negrini et al., 2022)
 
Fibrils91 yang disuspensikan kembali (dalam PBS) difragmentasi sebelum ditambahkan ke kultur sel melalui sonikasi selama 20 min dalam tabung Eppendorf 2 mL menggunakan sonikator Vial Tweeter, dibagi menjadi alikuot, dibekukan seketika dalam nitrogen cair, dan disimpan hingga digunakan pada -80 ̊C.
(bdk. Vajhøj et al., 2021)
 

VialTweeter dan Sonikator Laboratorium untuk Fragmentasi α-Syn

Hielscher Ultrasonics diakui di seluruh dunia sebagai produsen terkemuka sonikator mutakhir. Dipercaya dan telah digunakan secara luas di laboratorium penelitian besar di seluruh dunia, sonikator kami menawarkan kualitas dan kinerja yang tak tertandingi untuk eksperimen penting Anda.
Dengan Hielscher VialTweeter dan sonikator Hielscher lainnya, Anda akan merasakan kenyamanan penggunaan yang tak tertandingi, karena perangkat ini dirancang secara saksama untuk memberikan hasil yang dapat direproduksi, kemudahan penggunaan, dan pengoperasian yang lancar. Dengan fitur pencatatan data otomatis, Anda dapat berfokus pada penelitian sementara sonikator kami mencatat data penting secara teliti demi reproduktibilitas dan presisi.
Raih hasil yang konsisten dan dapat direproduksi dengan penuh keyakinan!
Sonikator kami dirancang dan diproduksi di Jerman. Presisi Jerman dan kualitas rekayasa tertinggi memastikan preparasi sampel yang andal dan akurat, seperti fragmentasi fibril alfa-sinuklein, setiap saat. Tidak perlu lagi khawatir tentang hasil yang tidak konsisten – teknologi ultrasonik kami memastikan penelitian Anda tetap berada di garis depan kemajuan ilmiah.
Namun, bukan itu saja! Komitmen kami terhadap keunggulan melampaui produk kami. Kami bangga akan layanan pelanggan kami yang istimewa, dengan dukungan ahli untuk menjawab setiap pertanyaan atau kekhawatiran yang mungkin Anda miliki. Tim kami yang berdedikasi siap membantu Anda pada setiap langkah perjalanan penelitian Anda, memastikan Anda memperoleh manfaat maksimal dari sonikator kami.
Pilih inovasi, keandalan, dan pengalaman pengguna yang istimewa – pilih sonikator laboratorium kami seperti VialTweeter untuk fragmentasi fibril alfa-sinuklein. Manfaatkan protokol yang telah mapan dan bergabunglah dengan jajaran peneliti terkemuka yang memercayai teknologi kami untuk studi penting mereka. Tingkatkan penelitian Anda dan jelajahi cakrawala baru dalam penelitian demensia dan penyakit neurodegeneratif dengan sonikator mutakhir kami.

Desain, Manufaktur, dan Konsultasi – Kualitas Buatan Jerman

Sonikator Hielscher terkenal karena standar kualitas dan desainnya yang tertinggi. Ketangguhan dan kemudahan pengoperasian memungkinkan integrasi sonikator kami secara lancar ke dalam fasilitas industri. Kondisi berat dan lingkungan yang menuntut dapat ditangani dengan mudah oleh sonikator Hielscher.

Hielscher Ultrasonics merupakan perusahaan bersertifikasi ISO dan memberikan perhatian khusus pada sonikator berkinerja tinggi yang dilengkapi teknologi mutakhir serta mudah digunakan. Tentu saja, sonikator Hielscher mematuhi CE dan memenuhi persyaratan UL, CSA, dan RoHs.
 
Tabel di bawah ini memberikan gambaran perkiraan kapasitas pemrosesan sonikator skala laboratorium kami: