Teknologi ultrasound Hielscher

Persiapan Sampel Ultrasonik untuk Alat Tes ELISA

Alat tes seperti ELISA banyak digunakan untuk diagnostik in-vitro, deteksi protein terkait penyakit dan kontrol kualitas (misalnya memantau alergen makanan). Persiapan sampel ultrasonik adalah teknik cepat, andal dan dapat direproduksi untuk lyse cell dan mengisolasi protein intraseluler, DNA, RNA dan organel. Hielscher Ultrasonics menawarkan berbagai solusi ultrasonik untuk persiapan sampel tunggal yang nyaman, beberapa botol serta untuk pelat mikrotiter dan piring 96 sumur.

ELISA – Enzim-Linked Immunosorbent Assay

ELISA adalah singkatan dari alat tes imunosorbent terkait enzim dan merupakan teknik analisis biokimia yang banyak digunakan dari kategori alat tes ligan-mengikat. Di ELISA, sampel cairan ditambahkan ke fase padat stasioner dengan sifat pengikatan khusus. Biasanya, fase padat stasioner diterapkan sebagai pelapis ke pelat sumur atau pelat ELISA. Kemudian, berbagai reagen cair ditambahkan secara berurutan, diinkubasi, dan dicuci, sehingga akhirnya terjadi perubahan optik (misalnya, pengembangan warna oleh produk reaksi enzimatik) terjadi pada cairan akhir di dalam sumur. Perubahan optik memungkinkan untuk mengukur kuantitas anilit oleh apa yang disebut kuantitatif “membaca". Untuk pembacaan kuantitatif, spektrofotometer, fluorometer, atau luminometer digunakan untuk mendeteksi dan mengukur intensitas cahaya yang ditransmisikan. Sensitivitas deteksi dipengaruhi oleh amplifikasi sinyal selama reaksi analitik. Karena reaksi enzim diselidiki dengan baik dan proses amplifikasi yang dapat diandalkan, enzim digunakan untuk membuat sinyal. Enzim terkait dengan reagen deteksi dalam proporsi tetap untuk memungkinkan kuantifikasi yang akurat, yang menjelaskan juga nama "enzim-linked" alat tes imuno.
Karena alat tes ELISA dilakukan dalam pelat mikrotiter / pelat 96 sumur, dikenal sebagai teknik alat tes berbasis lempeng dan digunakan misalnya dalam diagnostik in-vitro klinis, penelitian, pengembangan obat dll untuk mendeteksi dan mengukur antibodi, peptida, protein, dan hormon.
Teknik ELISA sering digunakan sebagai alat diagnostik dalam kedokteran, bioteknologi, patologi tanaman dan juga merupakan pengukuran kontrol kualitas yang penting di beberapa industri.

Menyelesaikan VialTweeter setup: VialTweeter sonotrode di ultrasonik prosesor UP200St

Unit persiapan sampel ultrasonik VialTweeter digunakan untuk tesis sel dan ekstraksi protein sebelum alat tes ELISA

Permintaan Informasi




Perhatikan Kebijakan pribadi.


Persiapan Sampel Ultrasonik sebelum ELISA

Sebelum alat tes ELISA dapat dilakukan, sampel memerlukan langkah-langkah persiapan lisis sel tersebut dan ekstraksi protein intraseluler, DNA, RNA dll. Keuntungan dari lisis sel ultrasonik dan isolasi protein adalah efisiensi, keandalan, dan reproduksi yang tinggi. Semua faktor ini penting untuk mendapatkan diagnostik dan hasil penelitian berkualitas tinggi

Keuntungan dari Ultrasonic Lysis sebelum ELISA

  • Perawatan sampel homogen
  • Lisis lengkap
  • Ekstraksi protein lengkap (misalnya antibodi, DNA)
  • Adaptasi optimal ke tipe sel
  • Untuk ukuran sampel apa pun
  • direproduksi
  • Dikendalikan suhu
  • Protokol data otomatis pada kartu SD

Protokol untuk Pra-ELISA Ultrasonic Cell Lysis

Probe-jenis insonifier UP200St untuk lisis

  • Untuk Budaya Sel: Sebelum lisis sel ultrasonik, sel sentrifuge selama 5 menit pada 270 x g dalam mikrocentrifuge. Hapus supernatant dengan aspirasi dan resuspend sel dalam 30 – 100 μL penyangga RIPA. Kemudian, inkubasi pelet sel di atas es selama 30 menit.
  • Sekarang, sampel sel siap untuk lisis ultrasonik:
    Gunakan ultrasonikator tipe probe (misalnya. UP200Ht dengan S26d2 probe) atau perangkat multi-sampel ultrasonik (misalnya VialTweeter untuk sonikasi simultan hingga 10 botol atau UIP400MPT untuk pelat mikrotiter / pelat 96-sumur) tergantung pada jumlah sampel yang perlu Anda siapkan.
    Untuk sonikasi jenis probe dari satu sampel, tempatkan sel dalam tabung mikrocentrifuge 1,5 mL.
  • Pra-atur durasi ultrasonik Anda, input energi total, mode siklus dan / atau batas suhu di menu digital ultrasonikator. Ini memastikan sonikasi dan pengulangan yang sangat andal.
  • Inset sonotrode dan nyalakan perangkat ultrasonik. Gerakkan mikro-ujung probe ultrasonik dengan lembut melalui sampel untuk membuat sonikasi sampel secara seragam.
    Untuk sebagian besar sel, lisis ultrasonik akan selesai setelah 2 -4 siklus sonikasi 10 detik.
  • Setelah sonikasi, keluarkan sonotrode dari sampel. Sampel harus diinkubasi di atas es selama 5 menit. Kemudian, sentrifuge pada 10.000 x g selama 20 menit untuk pelet puing-puing. Transfer supernatants ke tabung microcentrifuge baru. Beri label analit dan simpan pada -20 °C.
  • Sonotrode ultrasonik dapat dibersihkan dengan menyekanya dengan benar dengan alkohol atau sonikat dalam gelas bir yang diisi dengan alkohol, misalnya 70% etanol. Semua probe ultrasonik yang terbuat dari titanium dapat diotolabel.

Untuk Homogenates Jaringan:

  • Bilas jaringan dengan PBS dingin es (0,01M, pH = 7,4) untuk menghilangkan kelebihan darah hemolisis secara menyeluruh.
  • Timbang jaringan (ginjal, jantung, paru-paru, limpa dll.) dan maserasi menjadi potongan-potongan kecil, yang homogen di PBS. Volume PBS yang dibutuhkan terkait dengan berat jaringan. Sebagai aturan praktis, 1g jaringan membutuhkan sekitar 9mL PBS. Disarankan untuk menambahkan beberapa inhibitor protease ke PBS. (RIPA atau penyangga lisis hipontonik yang mengandung koktail protease dan inhibitor fosfat dapat digunakan sebagai alternatif.)
  • Tergantung pada ukuran jaringan, perawatan pusaran pendek (sekitar 1-2 menit. dalam 15 detik. pulsa) dapat membantu untuk pra-mengobati jaringan.
  • Pasang micro-tip, misalnya S26d2, ke ultrasonikator Anda. Tempatkan tabung sampel dengan jaringan di bak es.
  • Sonikasikan sampel dengan ultrasonikator Anda, misalnya UP200St (amplitudo 80%) selama 1 menit dalam mode pulsa (15 detik pada, jeda 15 detik). Simpan sampelnya di bak es.
  • Homogenates kemudian diberangkatkan untuk mendapatkan kolam tertentu (sitoksolik, nuklir, mitokondria atau lisosomal) untuk memperkaya protein untuk analisis. Dengan memerutkan sampel selama 5 menit pada 5000×g, supernatant diambil.
Sonotrode MTP-24-8-96 memiliki delapan probe ultrasonik untuk sonikasi sumur pelat mikrotiter.

Sonotrode MTP-24-8-96 memiliki delapan probe ultrasonik untuk sonikasi sumur pelat mikrotiter.

Kontrol Suhu yang Andal selama Sonikasi

Suhu adalah faktor yang mempengaruhi proses penting yang sangat penting untuk pengobatan sampel biologis, misalnya untuk mencegah degradasi termal protein. Karena semua teknik persiapan sampel mekanis, sonikasi menciptakan panas. Namun, suhu sampel dapat dikontrol dengan baik ketika menggunakan perangkat Hielscher Ultrasonics. Kami menyajikan berbagai opsi untuk memantau dan mengontrol suhu sampel Anda sambil mempersiapkannya dengan ultrasonikator tipe probe atau VialTweeter pra-analitik.

  1. Pemantauan suhu sampel: Semua prosesor ultrasonik digital Hielscher dilengkapi dengan perangkat lunak cerdas dan sensor suhu pluggable. Colokkan sensor suhu ke perangkat ultrasonik (misalnya, UP200Ht, UP200St, VialTweeter, UIP400MTP) dan masukkan ujung sensor suhu di salah satu tabung sampel. Melalui tampilan sentuh berwarna digital, Anda dapat mengatur menu prosesor ultrasonik kisaran suhu tertentu untuk sonikasi sampel Anda. Ultrasonicator akan secara otomatis berhenti ketika suhu maks tercapai dan jeda sampai suhu sampel turun ke nilai yang lebih rendah dari suhu yang ditetapkan ∆. Kemudian sonikasi dimulai secara otomatis lagi. Fitur pintar ini mencegah degradasi yang diinduksi panas.
  2. Mengenai unit multi-sampel ultrasonik VialTweeter, blok titanium, yang memegang tabung sampel, dapat didinginkan t depan. Masukkan blok VialTweeter (hanya sonotrode tanpa transduser!) ke dalam lemari es atau freezer untuk mendinginkan blok titanium terlebih dahulu membantu menunda kenaikan suhu dalam sampel. Jika memungkinkan, sampel itu sendiri dapat didinginkan juga.
  3. Gunakan mandi es atau es kering untuk mendinginkan selama sonikasi. Tempatkan tabung sampel Anda selama sonikasi ke dalam bak es. Untuk VialTweeter, gunakan nampan dangkal yang diisi dengan es kering dan letakkan VialTweeter di atas es kering sehingga panas dapat dengan cepat menghilang.

Pelanggan di seluruh dunia menggunakan hielscher probe-ultrasonicators serta unit sonikasi multi-sampel VialTweeter dan UIP400MTP untuk pekerjaan persiapan sampel harian mereka di laboratorium biologis, biokimia, medis dan klinis. Perangkat lunak cerdas dan kontrol suhu prosesor Hielscher, suhu dikontrol dengan andal dan degradasi sampel yang diinduksi panas dihindari. Persiapan sampel ultrasonik dengan solusi ultrasonik Hielscher memberikan hasil yang sangat andal dan dapat direproduksi!

Hubungi Kami! / Tanya Kami!

Meminta informasi lebih lanjut

Silakan gunakan formulir di bawah ini untuk meminta informasi tambahan tentang prosesor ultrasonik, aplikasi dan harga. Kami akan senang untuk mendiskusikan proses Anda dengan Anda dan menawarkan sistem ultrasonik yang memenuhi kebutuhan Anda!









Harap dicatat bahwa Kebijakan pribadi.


Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

Hielscher Ultrasonics memproduksi homogenizers ultrasonik kinerja tinggi untuk aplikasi pencampuran, dispersi, emulsifikasi dan ekstraksi pada laboratorium, pilot dan skala industri.

Literatur/referensi



Fakta-fakta yang Patut Diketahui

Jenis ELISA

Ada beberapa jenis ELISA, yang dibedakan oleh prinsip fungsinya. Mereka dikenal sebagai ELISA langsung, ELISA tidak langsung, sandwich ELISA, ELISA kompetitif, dan ELISA terbalik. Di bawah ini, kami menyajikan gambaran umum tentang berbagai jenis ELISA dan karakteristik dan perbedaan utamanya.
ELISA dapat dijalankan dalam format kualitatif atau kuantitatif. Hasil kualitatif memberikan hasil positif atau negatif yang sederhana, sementara dalam ELISA kuantitatif kepadatan optik (OD) sampel dibandingkan dengan kurva standar, yang biasanya merupakan pengenceran serial dari larutan konsentrasi yang diketahui dari molekul target.

ELISA Langsung

ELISA langsung adalah bentuk alat tes paling sederhana dari Elisa, di mana hanya antibodi primer berlabel enzim yang digunakan dan antibodi sekunder tidak diperlukan. Antibodi primer berlabel enzim mengikat langsung ke target, yaitu antigen. Larutan antigen buffer ditambahkan ke setiap sumur pelat microtiter (biasanya pelat 96 sumur, pelat ELISA), di mana menganut permukaan plastik melalui interaksi pengisian daya. Ketika enzim yang terkait dengan antibodi primer bereaksi dengan substratnya, itu menghasilkan sinyal yang terlihat yang dapat diukur melalui spektrofotometer, fluorometer, atau luminometer.

ELISA tidak langsung

Untuk tes ELISA tidak langsung, antibodi primer dan antibodi sekunder diperlukan. Namun, bertentangan dengan ELISA langsung, bukan antibodi utama, tetapi antibodi sekunder dilabeli dengan enzim. Antigen tidak bergerak ke piring sumur dan diikat oleh antibodi utama. Selanjutnya, antibodi sekunder berlabel enzim mengikat antibodi primer. Akhirnya, enzim yang terkait dengan antibodi sekunder bereaksi dengan substratnya untuk menghasilkan sinyal yang terlihat yang dapat dideteksi.

Sandwich ELISA

Sementara dalam tes ELISA langsung dan tidak langsung, antigen tidak bergerak dan dilapisi ke permukaan pelat sumur, di sandwich ELISA antibodi tidak bergerak ke permukaan plastik pelat ELISA. Antibodi yang tidak bergerak dalam sandwich ELISA dikenal sebagai antibodi penangkapan. Selain antibodi penangkapan, dalam sandwich ELISA juga disebut antibodi deteksi diperlukan. Antibodi deteksi termasuk antibodi deteksi primer yang tidak berlabel dan antibodi deteksi sekunder berlabel enzim.
Stepwise, antigen bunga mengikat antibodi penangkapan yang tidak bergerak ke piring. Kemudian, antibodi deteksi primer mengikat antigen. Setelah itu, antibodi deteksi sekunder mengikat antibodi deteksi primer. Dalam langkah reaksi akhir, enzim bereaksi dengan substratnya untuk menghasilkan sinyal yang terlihat yang dapat dideteksi secara optik.

ELISA kompetitif

ELISA kompetitif, juga dikenal sebagai penghambat ELISA, adalah jenis ELISA yang paling kompleks karena melibatkan penggunaan antigen penghambat. Masing-masing dari tiga format, elisa langsung, tidak langsung, dan sandwich, dapat disesuaikan dengan format ELISA yang kompetitif. Dalam ELISA yang kompetitif, antigen penghambat dan antigen minat bersaing untuk mengikat antibodi primer.
Untuk ELISA yang kompetitif, antibodi tanpa label diinkubasi di hadapan antigennya, yaitu sampel. Kompleks antibodi / antigen terikat ini kemudian ditambahkan ke sumur berlapis antigen.
Piring dicuci, sehingga antibodi yang tidak terikat dihilangkan. ELISA kompetitif memiliki namanya karena fakta bahwa semakin banyak antigen dalam sampel, semakin banyak kompleks antibodi antigen terbentuk. Ini berarti, ada lebih sedikit antibodi yang tidak terikat yang tersedia untuk mengikat antigen di sumur dan antigen harus bersaing untuk antibodi yang tersedia. Antibodi sekunder, yang cocok dengan antibodi utama, ditambahkan. Antibodi kedua ini terkait dengan enzim. Ketika substrat ditambahkan, enzim yang tersisa menghasilkan sinyal kromogenik atau fluorescent.
Pada titik ini, reaksi dihentikan untuk menghindari kejenuhan akhirnya dari sinyal.
Beberapa kit ELISA yang kompetitif termasuk antigen yang terkait dengan enzim alih-alih antibodi yang terkait dengan enzim. Antigen berlabel bersaing untuk situs pengikatan antibodi primer dengan antigen sampel (tanpa label). Semakin sedikit antigen dalam sampel, semakin banyak antigen berlabel dipertahankan di dalam sumur dan semakin kuat sinyalnya.

ELISA Terbalik

Elisa terbalik tidak menggunakan pelat sumur, tetapi meninggalkan antigen yang ditangguhkan dalam cairan uji. Tes ELISA terbalik mengukur jumlah antibodi terikat melalui antigen. Ini dikembangkan khusus untuk mendeteksi dan menyelidiki protein amplop virus West Nile dan bagaimana ia dapat menemukan antibodi khusus virus.

Enzymatic Marker Digunakan untuk ELISA

Daftar di bawah ini memberikan penanda enzimatik paling umum yang digunakan dalam alat tes ELISA, yang memungkinkan hasil tes diukur setelah selesai.

  • OPD (o-phenylenediamine dihydrochloride) berubah menjadi amber untuk mendeteksi HRP (Horseradish Peroxidase), yang sering digunakan sebagai protein konjugasi.
  • TMB (3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine) berubah menjadi biru ketika mendeteksi HRP dan menguning setelah penambahan asam sulfat atau fosfat.
  • ABTS (2,2′-Azinobis [3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid]-diammonium salt) berubah menjadi hijau ketika mendeteksi HRP.
  • PNPP (p-Nitrophenyl Fosfat, Garam Disodium) menjadi kuning ketika mendeteksi fosfat alkali.