Teknologi ultrasound Hielscher

Lisis Sel BL21 oleh Ultrasonication

Sel BL21 adalah strain E. yang banyak digunakan di laboratorium penelitian, bioteknologi dan produksi industri karena kemampuannya untuk mengekspresikan protein sangat efisien. Gangguan sel ultrasonik, lisis dan ekstraksi protein adalah metode umum untuk mengisolasi dan mengumpulkan protein yang ditargetkan dari interior seluler sel BL21. Ultrasonication mengganggu sel sepenuhnya dan melepaskan semua protein yang terjerat, membuat 100% protein tersedia.

Sel BL21 untuk Ekspresi Protein

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsSel BL21 adalah strain bakteri E. yang kompeten secara kimia yang cocok untuk transformasi dan ekspresi protein tingkat tinggi menggunakan sistem induksi polimerase-IPTG T7 RNA. Sel BL21 memungkinkan ekspresi protein efisiensi tinggi dari gen apa pun yang berada di bawah kendali promotor T7. E. strain BL21(DE3) adalah strain produksi protein berbasis polimerase T7 RNA yang dikombinasikan dengan vektor ekspresi berbasis promotor T7 dan banyak diterapkan di laboratorium dan industri untuk menghasilkan protein rekombeinan. Dalam BL21 (DE3), ekspresi gen pengkodean protein rekombeinan ditranskripsikan oleh polimerase T7 RNA (T7 RNAP) yang dikodekan secara kromosom, yang mentranskripsikan delapan kali lebih cepat daripada E. RNAP konvensional. Hal ini membuat strain BL21 (DE3) sangat efisien dan mengubahnya menjadi salah satu sistem sel ekspresi protein yang paling disukai.

Protokol untuk Ultrasonic Lysis dan Ekstraksi Protein dari Sel BL21

Lisis sel BL21 sebagian besar dilakukan menggunakan ultrasonikasi dalam kombinasi dengan natrium lauroyl sarkosinat (juga dikenal sebagai sarkosil) sebagai penyangga lisis. Keuntungan dari disrupsi sel ultrasonik dan ekstraksi protein terletak pada keandalan, reproduksi serta operasi sederhana, aman dan cepat ultrasonicators. Protokol di bawah ini memberikan arah langkah demi langkah untuk lisis sel BL21 ultrasonik:

Probe-jenis insonifier UP200St untuk lisis

Disruptor sel ultrasonik UP200St dengan micro-tip S26d2 untuk ekstraksi lisis dan protein

Permintaan Informasi




Perhatikan Kebijakan pribadi.


  • Untuk menghilangkan protein pendamping, pelet bakteri BL21 diresuspended dalam 50 ml es dingin Sodium Tris-EDTA (STE) penyangga (terdiri dari 10 mM Tris-HCL, pH 8.0, 1 mM EDTA, 150 mM NaCled dengan 100 mM PMSF).
  • Itu, 500 ul lysozyme (10 mg/ ml) ditambahkan dan sel-sel diinkubasi di atas es selama 15 menit.
  • Setelah itu, 500 ul DTT dan 7 ml sarkosil (10% (w/v) yang terdiri dari penyangga STE) ditambahkan.
  • Sangat penting untuk menjaga semua penyangga pemurnian dingin dan untuk mempertahankan sampel di atas es sepanjang waktu. Semua langkah pemurnian harus dilakukan di ruang dingin jika memungkinkan.
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • Untuk ultrasonik lisis dan ekstraksi protein, sampel disonikasi di Vialtweeter ultrasonikator multisample selama 4 x 30 dk pada amplitudo 100% dengan interval 2 menit di antara setiap sonikasi. Atau, homogenizer ultrasonik tipe probe dengan micro-tip misalnya, UP200Ht dengan S26d2 (3 x 30 detik, 2 menit. jeda antara siklus ultrasonik, 80% amplitudo) dapat digunakan.
  • Untuk langkah pemurnian lebih lanjut, sampel harus disimpan di atas es atau disimpan secara alternatif pada -80 ° C sampai pemrosesan lebih lanjut.

Ultrasonic Lysis di bawah Prescise Kontrol Suhu

Kontrol suhu yang tepat dan dapat diandalkan sangat penting ketika menangani sampel biologis. Suhu tinggi memulai degradasi protein yang diinduksi termal dalam sampel.
Karena semua teknik persiapan sampel mekanis, sonikasi menciptakan panas. Namun, suhu sampel dapat dikontrol dengan baik saat menggunakan VialTweeter. Kami menyajikan berbagai opsi untuk memantau dan mengontrol suhu sampel Anda sambil mempersiapkannya dengan VialTweeter dan VialPress untuk analisis.

  1. Pemantauan suhu sampel: Prosesor ultrasonik UP200St, yang menggerakkan VialTweeter, dilengkapi dengan perangkat lunak cerdas dan sensor suhu pluggable. Colokkan sensor suhu ke UP200St dan masukkan ujung sensor suhu di salah satu tabung sampel. Melalui layar sentuh berwarna digital, Anda dapat mengatur menu UP200St kisaran suhu tertentu untuk sonikasi sampel Anda. Ultrasonicator akan secara otomatis berhenti ketika suhu maks tercapai dan jeda sampai suhu sampel turun ke nilai yang lebih rendah dari suhu yang ditetapkan ∆. Kemudian sonikasi dimulai secara otomatis lagi. Fitur pintar ini mencegah degradasi yang diinduksi panas.
  2. Blok VialTweeter dapat didinginkan t depan. Masukkan blok VialTweeter (hanya sonotrode tanpa transduser!) ke dalam lemari es atau freezer untuk mendinginkan blok titanium terlebih dahulu membantu menunda kenaikan suhu dalam sampel. Jika memungkinkan, sampel itu sendiri dapat didinginkan juga.
  3. Gunakan es kering untuk mendinginkan selama sonikasi. Gunakan nampan dangkal yang diisi dengan es kering dan letakkan VialTweeter di atas es sehingga panas dapat dengan cepat menghilang.

Pelanggan di seluruh dunia menggunakan VialTweeter dan VialPress untuk pekerjaan persiapan sampel harian mereka di laboratorium biologis, biokimia, medis dan klinis. Perangkat lunak cerdas dan kontrol suhu prosesor UP200St, suhu dikontrol dengan andal dan degradasi sampel yang diinduksi panas dihindari. Persiapan sampel ultrasonik dengan VialTweeter dan VialPress memberikan hasil yang sangat andal dan dapat direproduksi!

Temukan Disruptor Ultrasonik Optimal untuk Aplikasi Lysis Anda

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher Ultrasonics adalah produsen lama yang berpengalaman dari gangguan sel ultrasonik kinerja tinggi dan homogenizers untuk laboratorium, bench-top dan sistem skala industri. Ukuran kumpulan sel bakteri Anda, tujuan penelitian atau produksi Anda dan volume sel untuk diproses per jam atau hari adalah faktor penting untuk menemukan disruptor sel ultrasonik yang tepat untuk aplikasi Anda.
Hielscher Ultrasonics menawarkan berbagai solusi untuk sonikasi simultan multi-sampel (hingga 10 botol dengan VialTweeter) dan sampel massa (yaitu, pelat mikrotiter / pelat ELISA dengan UIP400MTP), serta ultrasonikator lab tipe probe klasik dengan tingkat daya yang berbeda dari 50 hingga 400 watt hingga prosesor ultrasonik industri sepenuhnya dengan hingga 16.000watt per unit untuk gangguan sel komersial dan ekstraksi protein dalam produksi besar. Semua ultrasonicators Hielscher dibangun untuk operasi 24/7/365 di bawah beban penuh. Ketahanan dan keandalan adalah fitur inti dari perangkat ultrasonik kami.
Semua homogenizers ultrasonik digital dilengkapi dengan perangkat lunak pintar, tampilan sentuh berwarna dan protokol data otomatis, yang membuat perangkat ultrasonik menjadi alat kerja yang nyaman di laboratorium dan fasilitas produksi.
Beri tahu kami, sel seperti apa, volume apa, dengan frekuensi apa dan dengan target apa Anda harus memproses sampel biologis Anda. Kami akan merekomendasikan Anda disruptor sel ultrasonik yang paling cocok untuk persyaratan proses Anda.

Tabel di bawah ini memberi Anda indikasi perkiraan kapasitas pemrosesan sistem ultrasonik kami dari homogenizers genggam kompak dan Ultrasonicator MultiSample hingga prosesor ultrasonik industri untuk aplikasi komersial:

Batch Volume Flow Rate Direkomendasikan perangkat
Pelat 96-well / microtiter n.a. UIP400MTP
10 botol à 0,5 hingga 1,5mL n.a. VialTweeter di UP200St
0.01 hingga 250mL 5 hingga 100mL/menit UP50H
0.01 hingga 500mL 10-200mL/min UP100H
10-2000mL 20 hingga 400mL/min UP200Ht, UP400St
0.1 hingga 20L 0.2 sampai 4L/min UIP2000hdT
10 sampai 100L 2-10L/min UIP4000hdT
n.a. 10 sampai 100L/menit UIP16000
n.a. kristal yang lebbig cluster UIP16000

Hubungi Kami! / Tanya Kami!

Meminta informasi lebih lanjut

Silakan gunakan formulir di bawah ini untuk meminta informasi tambahan tentang prosesor ultrasonik, aplikasi dan harga. Kami akan senang untuk mendiskusikan proses Anda dengan Anda dan menawarkan sistem ultrasonik yang memenuhi kebutuhan Anda!









Harap dicatat bahwa Kebijakan pribadi.


Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

Ultrasonicator UP200Ht dengan microtip 2mm S26d2 untuk sonikasi sampel kecil

Literatur/referensi



Fakta-fakta yang Patut Diketahui

Bakteri Escherichia

Escherichia adalah jenis bakteri, yang tidak berbentuk spora, Gram-negatif dan ditandai dengan bentuk batang lurus. Bakteri E.coli hadir di lingkungan, makanan, dan usus manusia dan hewan. E. biasanya beraneka raga dengan menggunakan flagella peritrichous, tetapi ada jenis yang tidak subur juga. E.coli disebut organisme kemoorganotroph anaerobik secara kura-kura, yang berarti mereka mampu metabolisme pernapasan dan fermentatif. Sebagian besar jenis E.coli jinak dan memenuhi fungsi yang berguna dalam tubuh, misalnya menekan pertumbuhan spesies bakteri berbahaya, mensintesis vitamin dll.
Sel bakteri Escherichia dari apa yang disebut jenis B adalah kategori khusus strain E.coli, yang banyak digunakan dalam penelitian untuk menyelidiki mekanisme seperti sensitivitas bakteriofphage atau sistem modifikasi pembatasan. Selain itu, bakteri E.coli dihargai sebagai workhorse yang dapat diandalkan untuk ekspresi protein di laboratorium bioteknologi dan ilmu hayati. Misalnya, E.coli digunakan untuk mensintesis senyawa seperti protein dan oligosakarida pada skala industri. Karena fitur khusus seperti kekurangan protease, produksi asetat rendah pada tingkat glukosa yang tinggi, dan permeabilitas yang ditingkatkan, sel E. B adalah dia paling sering menggunakan sel inang untuk produksi protein rekayasa genetika.

Protein Rekombeinan

Protein rekombatan (rProt) mendapatkan kepentingan yang signifikan dalam cabang manifold, termasuk dalam produksi kimia, farmasi, kosmetik, obat manusia dan hewan, pertanian, makanan serta industri pengolahan limbah.
Produksi protein rekombeinan membutuhkan penggunaan sistem ekspresi. Seperti mengekspresikan sistem sel untuk produksi DNA rekombatan, sel prokariotik dan eukariotik dapat digunakan. Sementara sel bakteri paling banyak digunakan untuk ekspresi protein karena faktor-faktor seperti biaya rendah, skalabilitas mudah dan kondisi media sederhana, mamalia, ragi, ganggang, serangga dan sistem bebas sel adalah alternatif yang mapan. Jenis protein, aktivitas fungsional, serta hasil protein yang diekspresikan yang diperlukan mempengaruhi pemilihan sistem sel yang digunakan untuk ekspresi protein.
Untuk mengekspresikan protein rekombeinan, sel tertentu harus ditransinfeksi dengan vektor DNA yang mengandung template DNA rekombeinan. Sel-sel yang ditransinfeksi dengan template kemudian berbu budaya. Sebagai konsekuensi dari mekanisme seluler, sel-sel mentranskripsikan dan menerjemahkan protein yang menarik, sehingga menghasilkan protein yang ditargetkan.
Karena protein yang diekspresikan terjerat dalam matriks seluler, sel harus dilisingkan (terganggu dan rusak) untuk melepaskan protein. Dalam langkah pemurnian berikutnya, protein dipisahkan dan dimurnikan.
Protein rekombeinan pertama yang digunakan dalam pengobatan adalah insulin manusia rekombeinan pada tahun 1982. Saat ini, lebih dari 170 jenis protein rekombeinan diproduksi di seluruh dunia untuk perawatan medis. Protein rekombeinan yang umum digunakan dalam kedokteran adalah misalnya hormon rekombeinan, interferon, interleukin, faktor pertumbuhan, faktor nekrosis tumor, faktor pembekuan darah, obat trombolitik, dan enzim untuk mengobati penyakit utama seperti diabetes, dwarfisme, infark miokard, gagal jantung kongestif, apoplexy serebral, multiple sclerosis, neutropenia, trombositopenia, anemia, hepatitis, rheumatoid arthritis, asma, crohn's (cf. Phuc V. Pham, dalam Omics Technologies and Bio-Engineering, 2018)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Ultrasonik kinerja tinggi! Rangkaian produk Hielscher mencakup spektrum penuh dari ultrasonikator lab kompak di atas unit bench-top hingga sistem ultrasonik industri penuh.