Solusi Penyangga Disiapkan dengan Ultrasonikasi

Buffer lisis dapat disiapkan secara efisien dan cepat menggunakan homogenizer jaringan ultrasonik. Karena ultrasonicators adalah alat impian untuk mencampur, melarutkan, dan menyebarkan, mereka memungkinkan persiapan buffer lisis yang andal dan ramah pengguna.

Persiapan Ultrasonik Penyangga Lisis

Homogenizer jaringan ultrasonik adalah alat umum untuk gangguan sel, lisis dan ekstraksi, oleh karena itu tersedia di sebagian besar laboratorium. Aplikasi sekunder untuk ultrasonicators tipe probe adalah persiapan buffer lisis.

Buffer lisis adalah larutan yang digunakan untuk memecah sel terbuka (lisis) dan melepaskan isinya untuk analisis hilir. Komposisi spesifik buffer lisis dapat bervariasi tergantung pada jenis sel yang dilisis dan aplikasi hilir. Namun, buffer lisis tipikal mengandung komponen seperti deterjen, garam, dan penghambat protease. Garam penyangga (misalnya Tris-HCl) dan garam ionik (misalnya NaCl) biasanya digunakan untuk mengatur pH dan osmolaritas lisat.
Untuk membuat buffer lisis, komponen-komponen dicampur bersama dalam konsentrasi dan pH yang sesuai. Campuran biasanya diaduk atau dikocok sampai komponennya larut dan larutannya homogen.
Homogenisasi ultrasonik adalah metode yang dapat digunakan untuk membantu membuat penyangga lisis yang baik dengan meningkatkan pencampuran dan pembubaran komponen. Dalam metode ini, gelombang ultrasound – biasanya dalam kisaran 20 hingga 30 kHz – diterapkan pada campuran, yang menciptakan gelembung kavitasi yang runtuh dan menghasilkan energi lokal yang intens, yang mengarah pada geser mekanis dan pencampuran komponen.
Proses homogenisasi ultrasonik dapat membantu memecah gumpalan atau agregat komponen, dan memastikan bahwa solusinya tercampur secara merata. Akibatnya, buffer lisis yang ditingkatkan seperti itu dapat menyebabkan gangguan sel yang lebih efisien dan hasil bahan yang diekstraksi yang lebih tinggi. Selain itu, homogenisasi ultrasonik dapat mengurangi waktu yang diperlukan untuk membuat buffer lisis dibandingkan dengan metode pengadukan atau pengocok tradisional.
Secara keseluruhan, homogenisasi ultrasonik adalah alat yang ampuh untuk meningkatkan kualitas dan efisiensi persiapan buffer lisis.

Protokol untuk Persiapan Penyangga Lisis Ultrasonik

Ini adalah protokol umum untuk membuat buffer lisis menggunakan ultrasonicator tipe probe:
 
Bahan:

• Deterjen pilihan (misalnya Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Garam pilihan (misalnya NaCl, KCl)
• Inhibitor protease (misalnya PMSF, aprotinin, leupeptin)
• Ultrasonicator
• Stirrer
• Air deionisasi
• Pengukur pH atau strip pH

 
 
Petunjuk langkah demi langkah:

1. Tentukan komposisi buffer lisis berdasarkan sel atau jaringan yang akan Anda lisiskan, dan aplikasi hilir yang akan Anda gunakan lisat. Siapkan larutan stok deterjen, garam, dan inhibitor protease pada konsentrasi yang diinginkan.
2. Tambahkan larutan stok deterjen, garam, dan penghambat protease ke gelas kimia atau labu.
3. Tambahkan air deionisasi untuk menaikkan volume ke jumlah buffer yang diinginkan.
4. Campur komponen menggunakan pengaduk untuk mendapatkan larutan pra-campuran.
5. Ukur pH buffer menggunakan pengukur pH atau strip pH, dan sesuaikan pH seperlunya dengan sedikit asam atau basa.
6. Gunakan ultrasonikator tipe probe untuk menghomogenkan larutan pra-campuran sehingga diperoleh larutan yang sangat homogen. Oleh karena itu, sonikasi larutan selama beberapa detik hingga larutan tercampur rata dan gumpalan atau agregat terurai. Durasi dan kekuatan sonikasi dapat dioptimalkan berdasarkan buffer lisis spesifik dan ultrasonikator yang digunakan.
7. Setelah ultrasonikasi, ukur kembali pH buffer dan sesuaikan seperlunya.
8. Saring buffer melalui filter 0,2 mikron untuk menghilangkan puing-puing atau agregat yang mungkin terbentuk selama sonikasi.
9. Buffer lisis sekarang siap digunakan.

 
Catatan: Komposisi dan pH yang tepat dari buffer lisis dapat bervariasi tergantung pada sel atau jaringan yang dilisis dan aplikasi hilir. Protokol di atas adalah pedoman umum dan mungkin perlu dioptimalkan untuk aplikasi tertentu.
 
Homogenizer ultrasonik biasanya digunakan untuk gangguan sel dan ekstraksi molekul intraseluler. Oleh karena itu banyak aplikasi lisis menggunakan sonikasi tipe probe tidak hanya untuk persiapan buffer lisis, tetapi juga untuk gangguan sel mekanis dan ekstraksi.
Hal ini membuat homogenizer jaringan ultrasonik menjadi alat serbaguna untuk laboratorium dan menjelaskan penggunaan ultrasonicators yang luas dalam mikrobiologi, bioteknologi, dan ilmu kehidupan.

ultrasonik lab homogenisers

Hielscher Ultrasonics memproduksi dan memasok homogenizer dan probe ultrasonik (sonotrodes) pada berbagai peringkat daya dan volume sampel. Hal ini memungkinkan kami untuk menawarkan pengganggu ultrasonik yang paling cocok untuk persiapan sampel Anda. Kami fokus pada kualitas tertinggi, kenyamanan pengguna yang luar biasa dan hasil sonikasi yang andal. Semua ultrasonicator digital memiliki perangkat lunak pintar, pemrograman dan pra-pengaturan protokol sonikasi, remote control browser, kontrol suhu, penerangan sampel serta perekaman data otomatis pada kartu SD bawaan.

Desain, Manufaktur, dan Konsultasi – Kualitas Buatan Jerman

Ultrasonicators Hielscher terkenal dengan kualitas dan standar desainnya yang tertinggi. Ketahanan dan pengoperasian yang mudah memungkinkan integrasi ultrasonicator kami ke dalam fasilitas industri. Kondisi kasar dan lingkungan yang menuntut mudah ditangani oleh ultrasonicator Hielscher.

Hielscher Ultrasonics adalah perusahaan bersertifikat ISO dan memberikan penekanan khusus pada ultrasonicators berkinerja tinggi yang menampilkan teknologi canggih dan keramahan pengguna. Tentu saja, ultrasonicators Hielscher sesuai dengan CE dan memenuhi persyaratan UL, CSA dan RoHs.

Tabel di bawah ini memberi Anda gambaran umum tentang berbagai ultrasonicator lab kami: