Teknologi ultrasound Hielscher

Protokol untuk Inaktivasi Virus Corona SARS-CoV-2 dengan Sonikasi

Hielscher VialTweeter adalah unit persiapan multi-sampel ultrasonik yang unik, yang digunakan untuk menonaktifkan virus corona SARS-COV-2. VialTweeter memungkinkan untuk menyiapkan hingga 10 botol sampel secara bersamaan dan dengan demikian merupakan unit yang ideal untuk pemrosesan sampel massal.

Inaktivasi Virus Corona SARS-CoV-2 dengan VialTweeter

Setelah menghapus fiksatif, monolayer dicuci tiga kali dengan saline penyangga fosfat (PBS) sebelum menggores sel menjadi 1mL MEM / 5% FBS dan disonikasi (3 × 10 detik, 10 detik off pada daya 100% dan amplitudo) menggunakan prosesor ultrasonik Hielscher UP200St dengan VialTweeter Lampiran. Supernatants diklarifikasi dengan sentrifuging pada 3000 × g selama 10 menit. 

Baca protokol lengkap di sini untuk inaktivasi virus corona SARS-CoV-2 oleh Welch et al. (2020) di bawah ini:

Sel dan Virus

Sel Vero E6 (Vero C1008; ATCC CRL-1586) dibuahi dalam medium esensial minimum Eagle (MEM) yang dimodifikasi dilengkapi dengan 10% (v/v) serum betis janin (FCS). Virus yang digunakan adalah SARS-CoV-2 strain hCOV-19/England/2/2020, diisolasi oleh PHE dari klaster pasien pertama di Inggris pada 29/01/2020. Virus ini diperoleh pada bagian 1 dan digunakan untuk studi inaktivasi di bagian 2 atau 3.
Untuk reagen dan bahan kimia yang digunakan untuk inaktivasi SARS-CoV-2 serta penghapusan sitoktoksisitas reagen, silakan lihat laporan ilmiah Welch et al. (2020).

The ultrasonic sample preparation unit VialTweeter is used for the inactivation of SARS-CoV-2 coronavirus

Ketidakaktifan virus oleh deterjen – Protokol Inaktivasi Virus Corona SARS-CoV-2 oleh Welch et al. 2020

Inaktivasi SARS-CoV-2

Untuk produk komersial, persiapan virus (cairan culture jaringan, titer berkisar antara 1 × 106 ke 1 × 108. PFU /ml) dirawat dalam tiga kali lipat dengan reagen pada konsentrasi dan untuk waktu kontak yang direkomendasikan dalam instruksi produsen untuk digunakan, jika tersedia, atau untuk konsentrasi dan waktu yang secara khusus diminta oleh laboratorium pengujian. Di mana berbagai konsentrasi diberikan oleh produsen, rasio terendah produk terhadap sampel diuji (yaitu konsentrasi produk uji yang direkomendasikan terendah). Reagen tabung pengangkut spesimen diuji menggunakan rasio satu volume cairan butur jaringan hingga sepuluh volume reagen, kecuali rasio volume cairan sampel terhadap reagen ditentukan oleh produsen. Deterjen, fiksatif, dan pelarut diuji pada konsentrasi yang ditunjukkan untuk waktu yang ditunjukkan. Semua langkah inaktivasi dilakukan pada suhu ruangan sekitar (18 - 25 ° C). Untuk pengujian jenis sampel alternatif, virus berduri ke dalam matriks sampel yang ditunjukkan pada rasio 1:9, kemudian diobati dengan reagen uji seperti di atas. Semua eksperimen termasuk sampel triplicate control mock-treated dengan volume PBS yang setara menggantikan reagen uji. Segera setelah waktu kontak yang diperlukan, 1mL sampel yang dirawat diproses menggunakan matriks filtrasi yang dipilih dengan tepat. Penghapusan reagen untuk pengujian inaktivasi dilakukan dalam format spin column yang lebih besar menggunakan Pierce 4mL Detergent Removal Spin Columns (Thermo Fisher), atau dengan mengisi kolom centrifuge kapasitas Pierce 10mL kosong (Thermo Fisher) dengan SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-400HR atau Sephadex LH-20 untuk memberikan manik-manik/resin kemasan 4mL. Untuk pemurnian menggunakan filter Amicon, 2 × sampel 500μl dimurnikan menggunakan dua filter sentrifugal dengan metode yang dijelaskan sebelumnya, lalu disatukan. Untuk formaldehida dan formaldehida dengan penghapusan glutaraldehyde, satu filter digunakan dengan volume sampel 1× 500μl, diresuspended setelah diproses di PBS 500μl, dan ditambahkan ke 400ul MEM / 5% FBS. Untuk inaktivasi terinfeksi VialTweeter at the ultrasonic processor UP200STmonolayers, 12,5 cm2 termos sel Vero E6 (2,5 × 106 sel/termos dalam 2,5mL MEM/5% FBS) terinfeksi pada MOI 0,001 dan diinkubasi pada 37 ° C / 5% CO2 selama 24 jam. Supernatant dihapus, dan sel-sel tetap menggunakan 5mL formaldehida, atau formaldehida dan glutaraldehyde pada suhu kamar selama 15 atau 60 menit. Fiksatif dihapus, dan monolayer dicuci tiga kali dengan PBS sebelum menggores sel menjadi 1mL MEM / 5% FBS dan disonikasi (3 × 10 detik pada, 10 detik off pada daya 100% dan amplitudo) menggunakan UP200St dengan lampiran VialTweeter (Hielscher Ultrasound Technology). Supernatants diklarifikasi dengan sentrifuging pada 3000 × g selama 10 menit.

VialTweeter untuk yang intens Sonication dari vial tertutup

VialTweeter untuk Sonikasi Intens Botol Tertutup

Permintaan Informasi




Perhatikan Kebijakan pribadi.


Various reagents have been tested for the inactivation of the SARS-CoV-2 coronavirus using the ultrasonic sample prep unit VialTweeter.

Rincian reagen yang digunakan untuk inaktivasi virus corona SARS-CoV-2 dengan VialTweeter ultrasonik sesuai protokol oleh Welch et al. 2020

Protokol lengkap termasuk penggunaan Hielscher VialTweeter dapat ditemukan di sini:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

The multi-sample ultrasonicator VialTweeter allows for simultaneous sample preparation of up to 10 vials under same process conditions. The VialTweeter is an established ultrasonic device used for the inactivation of corona virus SARS-CoV-2 (Click to enlarge!)

VialTweeter untuk inaktivasi virus ultrasonik

Sekilas Keuntungan dari VialTweeter

  • Sonikasi hingga 10 botol secara bersamaan
  • Tidak ada kontaminasi silang
  • Tidak ada kehilangan sampel
  • Perekaman data otomatis
  • Mudah dan aman untuk beroperasi
VialTweeter juga digunakan untuk

  • Lisis sel
  • Gangguan partikel virus
  • Ekstraksi asam nukleat: Isolasi DNA/RNA
  • Fragmentasi DNA/RNA
  • Lysate solubilisasi
  • Canggih Ultrasonic Dismembrator dan Pengganggu Sel

    Ultrasonicator multi-sampel VialTweeter hanyalah salah satu dari banyak solusi ultrasonik untuk persiapan sampel di laboratorium biologis, biokimia dan klinis. Hielscher Ultrasonics menawarkan dismembrator ultrasonik yang ideal untuk aplikasi Anda, misalnya lisis sel, ekstraksi sel, homogenisasi jaringan, solubilisasi lisat, larut, degassing sampel dll.
    Beri tahu kami berapa banyak sampel yang harus Anda proses per jam dan hari, jika Anda lebih suka sonikasi langsung atau tidak langsung dan apa target perawatan sampel ultrasonik. Kami akan merekomendasikan Anda unit ultrasonik yang paling cocok untuk rutinitas kerja harian Anda!
    Prosesor ultrasonik digital Hielscher Ultrasonics dilengkapi dengan perangkat lunak pintar, perekaman data otomatis, opsi pra-pengaturan yang mudah untuk kontrol suhu, durasi sonikasi, mode siklus / pulsa serta iluminasi sampel dan kontrol jarak jauh browser. Kami berusaha untuk membuat perangkat ultrasonik kami sepintar mungkin sehingga penelitian dan rutinitas kerja Anda menjadi senyaman dan sesukses mungkin.
    Klik di sini, untuk menemukan lebih banyak aplikasi termasuk protokol persiapan sampel ultrasonik dengan VialTweeter!

    Hubungi Kami! / Tanya Kami!

    Meminta informasi lebih lanjut

    Silakan gunakan formulir di bawah ini untuk meminta informasi tambahan tentang prosesor ultrasonik, aplikasi dan harga. Kami akan senang untuk mendiskusikan proses Anda dengan Anda dan menawarkan sistem ultrasonik yang memenuhi kebutuhan Anda!









    Harap dicatat bahwa Kebijakan pribadi.


    Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

    Hielscher Ultrasonics memproduksi homogenizers ultrasonik kinerja tinggi untuk aplikasi pencampuran, dispersi, emulsifikasi dan ekstraksi pada laboratorium, pilot dan skala industri.

    Literatur/referensi



    Fakta-fakta yang Patut Diketahui

    Apa itu Sel Vero?

    Vero E6, juga dikenal sebagai Vero C1008 (ATCC No. CRL-1586) adalah garis sel kloning dari Vero 76 dan digunakan dalam penelitian virus corona SARS-CoV dan SARS-CoV-2. Sel vero adalah garis keturunan sel yang digunakan dalam ribuan sel. Vero itu’ garis keturunan diisolasi dari sel epitel ginjal yang diekstraksi dari monyet hijau Afrika (Chlorocebus sp.).
    Sel Vero E6 menunjukkan beberapa penghambatan kontak, sehingga cocok untuk menyebarkan virus yang mereplikasi secara perlahan. Garis sel Vero E6 umumnya digunakan untuk menyelidiki sittopatologi coronavirus SARS-CoV dan SARS-CoV-2 sebagai sel Vero (sel ginjal monyet hijau Afrika) menunjukkan ekspresi berlimpah reseptor enzim konversi angiotensin 2 (ACE2). Reseptor ACE2 adalah tempat docking utama untuk virus corona SARS-CoV-2.
    Misalnya, Ogando et al. (2020) menemukan bahwa SARS-CoV-2 – dibandingkan dengan SARS-CoV – menghasilkan tingkat RNA virus intraseluler yang lebih tinggi, tetapi secara mencolok sekitar 50 kali lipat keturunan virus yang kurang menular dipulihkan dari media budaya. Selanjutnya, mereka menentukan bahwa sensitivitas kedua virus terhadap tiga inhibitor replikasi coronavirus yang mapan (Remdesivir, Alisporivir dan klorokuin) sangat mirip, tetapi infeksi SARS-CoV-2 secara substansial lebih sensitif terhadap pra-pengobatan sel dengan alfa interferon pegylated. Perbedaan penting antara kedua virus adalah fakta bahwa – setelah melintas di sel Vero E6 – SARS-CoV-2 rupanya berada di bawah tekanan seleksi yang kuat untuk memperoleh mutasi adaptif pada gen protein lonjakannya. Mutasi ini mengubah atau menghapus 'situs pembelahan seperti furin' putatif di wilayah yang menghubungkan domain S1 dan S2 dan menghasilkan perubahan fenotipik yang sangat menonjol dalam alat tes plak.