Nagy áteresztőképességű FFPE-minta-előkészítés: fehérjekivonás és nukleinsavak nyírása
A nagy áteresztőképességű UIP400MTP ultrahangos készülékkel a Hielscher Ultrasonics megoldást kínál a formalinban fixált, paraffinba ágyazott (FFPE) szövetek előkészítésének kihívásaira. Ismerje meg, hogyan dolgozható fel nagyszámú FFPE-minta ultrahangos kezeléssel paraffinmentesítés, szövetlízis, homogenizálás, fehérjekivonás és DNS/RNS-nyírás céljából! Használja ki az ultrahangos FFPE-szövet-előkészítés előnyeit – dolgozzon fel nagyszámú mintát többlyukú lemezeken! Nyerjen kiváló minőségű mintákat, és érjen el nagy mintaszámot a megbízható kutatási eredmények érdekében! Végül, de nem utolsósorban takarítson meg időt és pénzt!
FFPE-minta-előkészítés egyszerűen, nagy áteresztőképességű ultrahangos kezeléssel
A formalinfixálás és a paraffinba ágyazás (FFPE) a szilárd szövetek tartósításának és archiválásának legelterjedtebb módszere. A biomolekulák kivonása FFPE-szövetmintákból gyakran jelentős kihívásokkal jár a tárolt minták minősége miatt. Ezek a molekuláris biológiában és a klinikai kutatásban felbecsülhetetlen értékű minták gazdag biológiai információforrást biztosítanak retrospektív vizsgálatokhoz és diagnosztikai biomarkerek validálásához. A formalinfixálás és a paraffinba ágyazás folyamata azonban, miközben megőrzi a szövetek szerkezetét és morfológiáját, megnehezíti a kiváló minőségű nukleinsavak és fehérjék kivonását. A formalin keresztkötéseket hoz létre a nukleinsavak és fehérjék között, ami molekuláris fragmentációhoz és kémiai módosulásokhoz vezet. Ismerje meg, hogyan oldja meg a nagy áteresztőképességű UIP400MTP ultrahangos készülék az FFPE-minta-előkészítés kihívásait!
Ultrahangos készülék a hatékony FFPE-minta-előkészítéshez
- Könnyen alkalmazható munkafolyamat: egyszerűsített, felhasználóbarát eljárások.
- Paraffinmentesítés, fehérjekivonás, DNS / RNS nyírása
- Gyors, nagy áteresztőképességű feldolgozás: a többlyukú lemezek hatékony kezelése.
- Hatékony paraffinmentesítés: a fehérjék jobb szolubilizálása.
- Nem mérgező oldószerek: elkerülhető az olyan káros szerves oldószerek használata, mint a xilol.
Nagy áteresztőképességű UIP400MTP ultrahangos készülék FFPE-minták nagy áteresztőképességű feldolgozásához többlyukú lemezeken
Fejlődés az FFPE-szövetekből történő fehérjekivonás módszereiben
A Hielscher Ultrasonics megoldást kínál a nagy áteresztőképességű FFPE-minta-előkészítés kihívásaira. Az ultrahangos kezelés ultrahanghullámokkal hoz létre mechanikai rezgéseket és fókuszált kavitációt, hatékonyan feltárva a sejtszerkezeteket és elősegítve a biomolekulák szolubilizálását. Ez a módszer azért vált népszerűvé, mert képes növelni az FFPE-szövetekből történő nukleinsav- és fehérjekivonás hatékonyságát és hozamát, valamint a könyvtárkészítéshez alkalmazott DNS- és RNS-nyírás hatékonyságát. Különösen fontos hangsúlyozni, hogy a többlyukú lemezek kezelésére szolgáló UIP400MTP ultrahangos készülékkel végzett ultrahangos kezelés megőrzi e biomolekulák épségét a további alkalmazásokhoz.
Nukleinsavak nyírása nagy áteresztőképességű ultrahangos kezeléssel
A nagy áteresztőképességű alkalmazásokhoz készült, többlyukú lemezek kezelésére szolgáló UIP400MTP ultrahangos készülék új szintre emeli az FFPE-minták előkészítését. Ez a többlyukú lemezeken végzett ultrahangos kezelési módszer hatékony és megbízható megoldást kínál több minta egyidejű feldolgozására. Elősegíti a DNS, az RNS és a fehérjék gyors és reprodukálható kivonását, amelyek alapvető fontosságúak különböző analitikai módszerekhez, többek között az új generációs szekvenáláshoz (NGS), a kvantitatív PCR-hez és a proteomikai elemzésekhez. Az ultrahangos kezelés paramétereinek, például az amplitúdónak, az időtartamnak és a hőmérsékletnek az optimalizálása tovább javítja a kivont biomolekulák minőségét és növeli mennyiségüket.
A többlyukú lemezek kezelésére szolgáló UIP400MTP ultrahangos készülék jelentős előnyöket kínál az FFPE-szövetekből származó DNS és RNS fragmentálásához és nyírásához. A rendszer egyik kiemelkedő tulajdonsága, hogy szűk mérettartományba eső DNS- és RNS-fragmentumok előállítására képes, és az ultrahangos kezelés intenzitásának pontos beállításával rövid, 150–200 bázispár (bp) hosszúságú vagy hosszabb, 15–20 kilobázispár (kbp) hosszúságú fragmentumok nyerhetők. Ez a sokoldalúság nélkülözhetetlenné teszi az UIP400MTP készüléket mind a rövid, mind a hosszú leolvasású szekvenálási alkalmazásokban, kiváló minőségű eredményeket biztosítva az új generációs szekvenáláshoz (NGS) és a teljesgenom-szekvenáláshoz (WGS). A fragmentumméret pontos szabályozása a genomika minden területén alapvető fontosságú a kutatók számára, mivel lehetővé teszi a minták specifikációknak megfelelő előkészítését.
Lépjen kapcsolatba velünk az FFPE-szövetekhez kínált fejlett megoldásokért
Ismerje meg a többlyukú lemezek kezelésére szolgáló UIP400MTP ultrahangos készüléket, amellyel hatékonyan nyerhetők ki biomolekulák FFPE-mintákból, miközben megmarad a kivont nukleinsavak és fehérjék épsége, és biztosított az eredmények reprodukálhatósága. Ez a technológia zökkenőmentesen illeszkedik más előkészítési és analitikai munkafolyamatokhoz, egyszerűsítve és javítva az archivált FFPE-szöveteken végzett molekuláris vizsgálatokat.
Fixálószerek és hatásaik
A fixálás a minta-előkészítés alapvető lépése, amely megőrzi a sejtszerkezeteket, leállítja a biokémiai reakciókat és megakadályozza a lebomlást. A konkrét kísérleti követelményektől függően különböző fixálószereket alkalmaznak. A két leggyakoribb fixálószer a formaldehid és a paraformaldehid, amelyek keresztkötéseket hoznak létre a fehérjék és a nukleinsavak között, megőrizve a sejtek és szövetek morfológiáját és antigenitását. Más fixálószereket, például etanolt, metanolt és glutáraldehidet meghatározott alkalmazásokhoz használnak.
A formaldehid- és paraformaldehid-fixálószerek metilénhidakat hoznak létre az aminocsoportok között, ami a fehérjék keresztkötéséhez vezet. Ez a folyamat hatékonyan immobilizálja a sejtalkotókat, megőrizve épségüket a későbbi elemzési lépések során. E fixálószerek hatását olyan tényezők befolyásolhatják, mint a koncentráció, a pH és a hőmérséklet; e paraméterek optimalizálása alapvető fontosságú a sejtszerkezetek optimális megőrzéséhez.
Az ultrahangos FFPE-előkészítés előnyei
Az ultrahangos kezelés a fixált sejtek és szövetek feltárásának hatékony módszere, amely felülmúlja a hagyományos technikákat. Számos jelentős előnyt kínál a hagyományos lízismódszerekkel szemben:
- Gyorsaság és hatékonyság: Az ultrahangos lízis gyors sejt- és szövetfeltárást biztosít, jelentősen csökkentve a feldolgozási időt a mechanikai vagy kémiai lízismódszerekhez képest. Az ultrahangos szonda által keltett nagyfrekvenciás hanghullámok mechanikai nyíróerőket hoznak létre, amelyek feltárják a fixált sejtszerkezeteket. Ez a gyors és hatékony feltárás lehetővé teszi, hogy a kutatók rövid idő alatt nagy mintatérfogatokat dolgozzanak fel.
- Kíméletes és szabályozható: Az ultrahangos lízis kíméletes feltárási mechanizmust kínál, amely minimálisra csökkenti az érzékeny biomolekulák, például a fehérjék, nukleinsavak és enzimek károsodását. A túlzott hőtermeléssel vagy nyíróerőkkel járó mechanikai módszerekkel ellentétben az ultrahangos lízis szabályozott kavitációval tárja fel a sejteket, miközben megőrzi az intracelluláris alkotók épségét és működőképességét.
- Sokoldalúság: Az ultrahangos lízis különböző fixálószerekkel kezelt mintákhoz alkalmazható, lehetővé téve, hogy a kutatók a fixált minták széles körével dolgozzanak. Akár formaldehidet, paraformaldehidet, akár más fixálószereket használnak, az ultrahangos lízis következetesen hatékony feltárást biztosít, így a sejtalkotók optimálisan nyerhetők ki.
- Nagy hozam és kiváló minőség: Az ultrahangos lízis az ép sejtalkotók nagy hozamú kinyerését segíti elő, mivel képes a fixált sejteket és szöveteket egyenletesen feltárni. Ez lehetővé teszi, hogy a további alkalmazások, például a fehérjeelemzés, a nukleinsav-kivonás és az enzimatikus vizsgálatok megbízható és reprodukálható eredményeket adjanak.
- Automatizálhatóság: Az ultrahangos lízis könnyen integrálható automatizált rendszerekbe, lehetővé téve a nagy áteresztőképességű mintafeldolgozást. Ez a kompatibilitás lehetővé teszi a kutatók számára munkafolyamataik egyszerűsítését és a termelékenység növelését, különösen nagyszabású vizsgálatokban.
UIP400MTP ultrahangos készülék 96 lyukú lemezekhez mikrotiter- és többlyukú lemezek ultrahangos kezelésére
Az ultrahangos lízis forradalmasította a fixált sejtek és szövetek feltárását, számos előnyt kínálva a hagyományos lízismódszerekkel szemben. Gyorsasága, hatékonysága, szelektivitása, sokoldalúsága, nagy hozama és automatizálhatósága nélkülözhetetlen eszközzé teszi a molekuláris biológiai és biotechnológiai kutatásban. Az érintkezésmentes és szondás ultrahangos készülékeket egyaránt kínáló Hielscher Ultrasonics az Ön élettudományi alkalmazásához legmegfelelőbb ultrahangos homogenizátort biztosítja. Akár egyetlen mintát, több mintát vagy igen nagy számú mintát szeretne egyidejűleg feldolgozni, a kutatási és diagnosztikai követelményeinek leginkább megfelelő ultrahangos készüléket kínáljuk Önnek.
Olvasson tovább a Hielscher érintkezésmentes ultrahangos készülékeiről több minta előkészítéséhez és nagy áteresztőképességű minta-előkészítéshez!
- egyszeri beruházás
- használja saját fogyóeszközeit
- nincsenek visszatérő költségek gyártóspecifikus tartozékokra és fogyóeszközökre
- nagy áteresztőképesség
- precíz szabályozás
- a legkorszerűbb technológia
- megbízhatóság és robusztusság
- állítható, pontos folyamatszabályozás
- ipari kivitel: folyamatosan, 24/7 üzemeltethető
- egyszerű és biztonságos működtetés
- alacsony karbantartási igény
Olvasson tovább az ultrahangos készülékek élettudományi alkalmazásairól!
UIP400MTP ultrahangos lemezkezelő készülék bármilyen 96 lyukú lemezhez, mikrotiterlemezhez és többlyukú lemezhez.
Tervezés, gyártás és tanácsadás – Németországban készült minőség
A Hielscher ultrahangos készülékei a legmagasabb minőségi és tervezési követelmények teljesítéséről ismertek. A robusztusság és az egyszerű működtetés lehetővé teszi ultrahangos készülékeink zökkenőmentes integrálását ipari létesítményekbe. A Hielscher ultrahangos készülékei könnyedén megbirkóznak a mostoha körülményekkel és a nagy igénybevételt jelentő környezetekkel.
A Hielscher Ultrasonics ISO-tanúsítvánnyal rendelkező vállalat, amely különös hangsúlyt fektet a legkorszerűbb technológiával és felhasználóbarát kialakítással rendelkező, nagy teljesítményű ultrahangos készülékekre. A Hielscher ultrahangos készülékei természetesen megfelelnek a CE-előírásoknak, és teljesítik az UL, CSA és RoHs követelményeit.
Lépjen kapcsolatba velünk! / Kérdezzen tőlünk!
UIP400MTP ultrahangos készülék: Nagy áteresztőképességű FFPE-minta-előkészítés többlyukú lemezen
Gyakran ismételt kérdések
Az alábbiakban az FFPE-szövetek előkészítésével és az FFPE-minták ultrahangos kezelésével kapcsolatos gyakran ismételt kérdésekre válaszolunk.
Hogyan készítik elő az FFPE-szövetet?
Az FFPE-szövet-előkészítés lépései: a friss szövet gondos kezelése és feldolgozása alapvető fontosságú a kiváló minőségű FFPE-minták előállításához. A sejtszerkezet, a nukleinsavak és a fehérjék megőrzésének biztosítása nélkülözhetetlen a későbbi pontos elemzéshez. Minden lépés – a mintavételtől a beágyazásig – pontosságot igényel ahhoz, hogy a minta épsége megmaradjon a különböző elemzésekhez, többek között a szövettani vizsgálathoz, az immunhisztokémiához és a molekuláris vizsgálatokhoz. Megfelelően végrehajtva ez a fixálási és beágyazási folyamat biztosítja, hogy a tartósított szövet pontosan tükrözze az in vivo állapotot, lehetővé téve a megbízható diagnosztikai és kutatási eredményeket.
Végigvezetjük Önt az FFPE-szövetminták beágyazási folyamatának 6 fő lépésén.
- Szövetmintavétel
Az élő emlősökből vett biopsziák és a szövettenyészetek egyaránt megfelelő forrásai az FFPE-minta-előkészítéshez szükséges friss szöveteknek.
Fontos az aszeptikus technika alkalmazása: használjon steril eszközöket és kesztyűt a szennyeződés elkerülésére. Ideális esetben steril környezetben, például műtőben vagy lamináris áramlású fülkében végezze a szövetmintavételt.
Mivel a minta nagyon sérülékeny, alapvető fontosságú a kíméletes kezelése: minimalizálja a feldolgozás késedelmét, és a kimetszés után azonnal kezdje meg a szövet további feldolgozását. Ez elengedhetetlen az autolízis és a lebomlás megelőzéséhez. Tartsa a szövetet szobahőmérsékleten; kerülje a fagyasztást, mivel az jégkristályok képződését és szövetkárosodást okozhat. - Szövetfixálás
Először a szövetet fixálóoldattal kezelik: használjon 10% semleges pufferelt formalint (NBF), amely semleges pH-ra pufferelt, vízben oldott 4% formaldehidnek felel meg.
Merítse a szövetet teljesen a formalinba. Biztosítson legalább 10:1 fixálószer–szövet térfogatarányt. A fixálási idő a szövet típusától és méretétől függően általában 6 és 24 óra között van. Fontos, hogy a fixálószer alaposan átjárhassa a szövetet. A túlzott fixálás azonban olyan keresztkötésekhez vezethet, amelyek megnehezítik az antigénfeltárást, míg az elégtelen fixálás a szövet nem megfelelő megőrzését eredményezheti. - A szövet méretre vágása
Másodszor vágja a szövetet körülbelül 3–5 mm vastagságúra, hogy a fixálószer megfelelően behatolhasson. Biztosítsa a szövet megfelelő orientációját, hogy a releváns szövettani struktúrák bekerüljenek a mintába. Ez megkönnyíti a kivonási folyamatot, amikor a szövetet később elemzésre használják. - A fixált minta feldolgozása
Most a fixált szövetet vízteleníteni kell: fixálás után a szövetet vízteleníteni szükséges, hogy a paraffinviasz alaposan átjárhassa. A víz eltávolításához vezesse át a szövetet növekvő koncentrációjú etanololdatok sorozatán (70%, 80%, 90% és 100%).
Derítés xilollal: a paraffinviasz vízben oldhatatlan, xilolban viszont oldódik. Ezért a szövetben lévő vizet xilolra kell cserélni. Maga a xilol azonban vízben oldhatatlan, alkoholban viszont oldódik, ezért szükség van egy köztes lépésre, amelyben a vizet először alkoholra cserélik. Merítse a szövetet xilolba vagy xilolhelyettesítőbe az etanol eltávolításához és a szövet paraffininfiltrációra történő előkészítéséhez.
Infiltráció paraffinnal: ágyazza a szövetet olvadt paraffinviaszba, biztosítva a teljes infiltrációt. Ez a lépés általában a paraffin többszöri cseréjét foglalja magában az alapos átitatás biztosítása érdekében. - A szövet beágyazása
Ebben a lépésben a szövetet szövetblokká formálják: helyezze a szövetet a kívánt orientációban egy formába, és öntsön rá olvadt paraffint. Hagyja a paraffint megszilárdulni szobahőmérsékleten vagy hűtőlapon történő hűtéssel. - Metszés és tárgylemezre helyezés
Mikrotómia: a beágyazott szövet szeleteléséhez mikrotómmal vágjon vékony, általában 4–5 mikrométer vastag metszeteket a paraffinblokkból. Ezután helyezze a metszeteket üveg tárgylemezekre a későbbi festéshez és mikroszkópos elemzéshez.
Végül ellenőrizze a szövettani minőséget: vizsgálja meg az első metszeteket mikroszkóp alatt a megfelelő fixálás és feldolgozás ellenőrzésére. Szükség szerint módosítsa a protokollokat a szövet típusa és a megfigyelt minőség alapján.
Az FFPE-szövetek RNS, DNS és fehérjék kinyerésére, valamint daganatos vagy más betegségek jeleinek felismerésére használhatók. Évekig tárolhatók, és alapvető szerepet játszanak abban, ahogyan a kutatók és az orvosok a szövetmintákat diagnosztikai és kutatási célokra használják.
Melyek az FFPE-szövetekkel kapcsolatos gyakori problémák és kihívások?
A formalinban fixált, paraffinba ágyazott (FFPE) szövetmintákat széles körben használják a kutatásban és a diagnosztikában, de számos kihívással és gyakori problémával járnak:
- Biomolekulák lebomlása: Az elhúzódó fixálás a DNS, az RNS és a fehérjék lebomlásához vezethet, megnehezítve a kiváló minőségű nukleinsavak vagy fehérjék kivonását a további alkalmazásokhoz. A megfelelő fixálás – az elégtelen és a túlzott fixálás elkerülése – alapvető fontosságú a szövet megőrzéséhez.
- Antigének elfedése: A fixálási folyamat elfedheti az antigénhelyeket, csökkentve az antitestkötődés hatékonyságát az immunhisztokémiai és más immunológiai vizsgálatokban. Ez gyakran antigénfeltárást igényel, amely olyan eljárás, amelynek során megszüntetik egy epitóp elfedését, és helyreállítják az epitóp–antitest kötődést. A teljes antigenitás azonban nem minden esetben állítható helyre.
- Változó fixálási minőség: A fixálási idők és körülmények eltérései ingadozó mintaminőséghez vezethetnek, befolyásolva az eredmények reprodukálhatóságát és összehasonlíthatóságát. Használjon megbízható fixálási protokollokat, és kerülje az elégtelen és a túlzott fixálást.
- DNS-károsodás és fragmentáció: Az FFPE-minták formalinfixálása különböző típusú DNS-károsodásokat okozhat, többek között citozindeaminációt (C → T mutációk), oxidatív károsodást (például G → T mutációkhoz vezető 8-oxo-guanint), valamint olyan fizikai sérüléseket, mint az egyszálú törések, hézagok és bázishiányos helyek, amelyek gátolják a DNS-polimeráz aktivitását. A formalinfixálási folyamat a DNS fragmentációját okozhatja, megnehezítve a genetikai és genomikai elemzéseket, például a PCR-t és a szekvenálást.
- RNS-minőség: Az FFPE-szövetekből kivont RNS gyakran fragmentált és kémiailag módosult, ami megnehezíti a kiváló minőségű transzkriptomikai elemzések elvégzését.
- Fehérjemódosulások: A formalin kémiai módosulásokat idézhet elő a fehérjékben, befolyásolva szerkezetüket és működésüket, ami zavarhatja a proteomikai elemzéseket.
- Mintafeldolgozási műtermékek: A beágyazás és a metszés során a mechanikai igénybevétel és a hő műtermékeket hozhat létre, és további szövetkárosodást okozhat.
- Tételek közötti változékonyság: A különböző tételek fixálási és beágyazási protokolljainak eltérései az eredmények jelentős változékonyságához vezethetnek, megnehezítve a vizsgálatok közötti összehasonlításokat.
- Tárolási problémák: Az FFPE-blokkok hosszú távú tárolása idővel további lebomláshoz és a nukleinsavak épségének csökkenéséhez vezethet, befolyásolva az archivált minták retrospektív vizsgálatokra való alkalmasságát.
Keresztkötések kialakulása: A formalinfixálás keresztkötéseket hoz létre a fehérjék és a nukleinsavak között, ami akadályozhatja a molekuláris elemzést, és befolyásolhatja az immunhisztokémiai és más vizsgálatok pontosságát.
Az optimalizált protokollok használata, a gondos mintakezelés és a fejlett technikák alkalmazása segít javítani az FFPE-szövetekből nyert adatok minőségét és megbízhatóságát.
Mi a különbség az FFPE-szövet és a fagyasztott szövet között?
Az FFPE-szövetet (formalinban fixált, paraffinba ágyazott szövetet) formalinos fixálással tartósítják, majd paraffinviaszba ágyazzák, ami lehetővé teszi a hosszú távú, szobahőmérsékleten történő tárolást a szövet morfológiájának megőrzése mellett. Ezzel szemben a fagyasztott szövetet gyorsan, fagyasztással tartósítják, ami jobban megőrzi a nukleinsavak és fehérjék épségét, de nagyon alacsony hőmérsékleten történő tárolást igényel.
Milyen vegyszereket használnak az FFPE-beágyazáshoz?
Az FFPE-beágyazáshoz használt vegyszerek általában a fixáláshoz alkalmazott formalint és a beágyazáshoz alkalmazott paraffinviaszt foglalják magukban. Az FFPE-beágyazáshoz a szöveteket jellemzően vagy 10% (v/v) semleges pufferelt formalinnal (FA), vagy paraformaldehidporból frissen készített 4% (w/v) formaldehidoldattal (PFA) fixálják. A formalint, amely a formaldehid vizes oldata, semleges pH-ra pufferelik a szövet morfológiájának megőrzése és a túlzott keresztkötés-képződés megelőzése érdekében. A paraformaldehid-alapú oldat szintén hatékony fixálást biztosít a fehérjék keresztkötésével, így stabilizálja a szövetszerkezetet a későbbi paraffinviaszba ágyazáshoz. Ezek a vegyszerek nélkülözhetetlenek a szövet épségének és morfológiájának megőrzéséhez a fixálási és beágyazási folyamat során.
Hogyan távolítják el a paraffint az FFPE-mintákból?
A paraffin FFPE-mintákból történő eltávolításához a szövetmetszeteket általában xilolos mosások sorozatának vetik alá, majd csökkenő koncentrációjú alkoholok sorozatán és végül vízen keresztül rehidratálják. Mivel a xilol erősen mérgező, és olyan egészségügyi kockázatokat jelent, mint a légzőszervi problémák, a bőrirritáció és az ismételt expozícióval járó lehetséges hosszú távú hatások, az ultrahangos paraffineltávolítás számos laboratóriumban ígéretes alternatívaként jelenik meg. Ez a módszer intenzív ultrahanghullámokkal hatékonyan és biztonságosan távolítja el a paraffint anélkül, hogy mérgező oldószerekre, például xilolra lenne szükség, ezáltal csökkentve a laboratóriumi személyzet kockázatát és biztonságosabb munkakörnyezetet teremtve.
Mennyi ideig kell fixálnom a szöveteimet a jó FFPE-mintaminőséghez?
A fixálás időtartamára vonatkozó általános ajánlások jellemzően a szövetminták 24–48 órás formalinfixálását javasolják. Ez az időtartam általában elegendő a szövet morfológiájának és a sejtszerkezeteknek a megőrzéséhez, miközben minimálisra csökkenti a túlzott fixálást, amely túlzott keresztkötés-képződéshez és a nukleinsavak, valamint a fehérjék lebomlásához vezethet. Az optimális fixálási idő azonban a szövet méretétől és típusától függően változhat; a kisebb vagy sérülékenyebb minták rövidebb fixálási időt igényelnek. Alapvető fontosságú a megfelelő egyensúly megtalálása: a fixálás legyen elegendő a szövet autolízisének és lebomlásának megelőzéséhez, ugyanakkor kerülni kell az elhúzódó fixálást, amely megnehezítheti a későbbi molekuláris elemzéseket.