स्टैफिलोकोकस बायोफिल्म खेती और टुकड़ी प्रोटोकॉल
विश्वसनीय अनुसंधान परिणामों के लिए मानकीकृत तरीके आवश्यक हैं। यहां आप स्टेफिलोकोकल बायोफिल्म के लिए एक खेती और टुकड़ी प्रोटोकॉल पा सकते हैं। यह प्रोटोकॉल 96-अच्छी प्लेटों में कुशल, उच्च-थ्रूपुट बायोफिल्म टुकड़ी के लिए UIP400MTP मल्टी-वेल प्लेट सोनिकेटर का उपयोग करके सुव्यवस्थित उच्च-थ्रूपुट नमूना तैयार करने पर केंद्रित है। प्रोटोकॉल में बायोफिल्म खेती, धुलाई और विज़ुअलाइज़ेशन के लिए महत्वपूर्ण कदम भी शामिल हैं, जिसमें परिवर्तनशीलता को कम करने और प्रजनन क्षमता सुनिश्चित करने पर ध्यान केंद्रित किया गया है।
स्टेफिलोकोकस बायोफिल्म और एंटीबायोटिक अनुसंधान
स्टेफिलोकोकस बायोफिल्म एंटीबायोटिक दवाओं और प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं के प्रतिरोध के कारण लगातार संक्रमण में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। बायोफिल्म गठन बैक्टीरिया के लिए एक सुरक्षात्मक वातावरण प्रदान करता है, जिससे संक्रमण का इलाज मुश्किल हो जाता है। बायोफिल्म में अनुसंधान अक्सर प्रयोगात्मक वर्कफ़्लो को कारगर बनाने के लिए उच्च-थ्रूपुट विधियों पर जोर देने के साथ, रोगाणुरोधी के लिए उनके गठन, व्यवहार और संवेदनशीलता को समझने पर केंद्रित होता है।
UIP400MTP मल्टी-वेल प्लेट सोनिकेटर 96-वेल प्लेटों से बायोफिल्म की तेजी से और कुशल टुकड़ी को सक्षम करके बायोफिल्म अनुसंधान में एक महत्वपूर्ण लाभ प्रदान करता है। यह उपकरण सभी कुओं को एक समान अल्ट्रासोनिक ऊर्जा प्रदान करता है, परिवर्तनशीलता को कम करते हुए लगातार परिणाम सुनिश्चित करता है।
स्टैफिलोकोकस बायोफिल्म खेती और टुकड़ी के लिए प्रोटोकॉल
नीचे, हम आपको स्टेफिलोकोकस बायोफिल्म की खेती और अलग करने की प्रक्रिया के माध्यम से चरण-दर-चरण निर्देश के साथ मार्गदर्शन करते हैं। अनुकरणीय विश्लेषणात्मक कदम के रूप में, हम आपको दिखाते हैं कि क्रिस्टल वायलेट धुंधला द्वारा खेती की गई बायोमास को स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से कैसे निर्धारित किया जाए।
स्टैफिलोकोकस बायोफिल्म की खेती
आवश्यक सामग्री:
- बाँझ फ्लैट-तल 96-अच्छी तरह से पॉलीस्टायर्न ऊतक संस्कृति-इलाज माइक्रोटिटर प्लेटें ढक्कन के साथ
- ट्रिप्टिक सोया शोरबा (टीएसबी) 0.25% ग्लूकोज के साथ
- जैविक सुरक्षा कैबिनेट
सीढ़ी:
- संदूषण को कम करने के लिए एक जैविक सुरक्षा कैबिनेट में एक बाँझ काम के माहौल तैयार करें।
- माइक्रोटिटर प्लेट कुओं में 0.25% ग्लूकोज युक्त टीएसबी जोड़ें। ग्लूकोज के बिना टीएसबी आमतौर पर बायोफिल्म गठन का समर्थन नहीं करता है और यदि आवश्यक हो तो केवल नियंत्रण के रूप में उपयोग किया जाना चाहिए।
- नीचे वर्णित के रूप में तैयार बैक्टीरियल उपभेदों के साथ कुओं टीकाकरण:
- बैक्टीरियल निलंबन तैयार करें, सोनिकेशन का उपयोग करके निलंबन को समरूप करके या 23-गेज सुई और संक्षिप्त भंवर के साथ समूहों को तोड़कर कोई पूर्ववर्ती सेल क्लस्टर सुनिश्चित न करें।
- इसके ढक्कन के साथ प्लेट को सील करें और बायोफिल्म गठन के लिए इष्टतम परिस्थितियों में इनक्यूबेट करें (उदाहरण के लिए, 24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस)।
- विश्वसनीयता सुनिश्चित करने के लिए प्रत्येक जीवाणु तनाव (तनाव प्रति तीन कुओं) के लिए तीन प्रतियों में प्रयोग करें।
- नकारात्मक नियंत्रण के लिए थाली प्रति छह कुओं आवंटित. अप करने के लिए 30 उपभेदों 96 अच्छी तरह से थाली प्रति परीक्षण किया जा सकता है.
बायोफिल्म विज़ुअलाइज़ेशन और धुलाई
- इनक्यूबेशन के बाद, बायोफिल्म को परेशान करने से बचने के लिए माध्यम को सावधानी से त्यागें।
- प्लवक बैक्टीरिया को हटाने के लिए शारीरिक खारा के साथ प्रत्येक अच्छी तरह से चार बार धो लें।
- बायोफिल्म उपस्थिति के संकेत सफेद पैच के लिए कुओं के नीचे का निरीक्षण करें।
मल्टी-वेल प्लेट सोनिकेटर का उपयोग करके बायोफिल्म टुकड़ी UIP400MTP
डिवाइस सेटअप और पैरामीटर:
- UIP400MTP मल्टी-वेल प्लेट सोनिकेटर
- ऑपरेटिंग सेटिंग्स: 60% आयाम, 60 सेकंड के साथ साइकिल मोड / 30 सेकंड बंद
सीढ़ी:
- धुली हुई माइक्रोटिटर प्लेट को UIP400MTP प्लेटफॉर्म पर रखें।
- अनुशंसित सेटिंग्स पर नमूनों को सोनिकेट करें (60% आयाम, 60 सेकंड चालू, 30 सेकंड बंद)। बैक्टीरिया तनाव के लिए सेटिंग्स समायोजित करें।
- बायोफिल्म को अलग करने के लिए सोनीशन प्रक्रिया शुरू करें। अल्ट्रासोनिक तरंगें बायोफिल्म मैट्रिक्स को बाधित करती हैं, जिससे पक्षपाती बैक्टीरिया निकलते हैं।
- UIP400MTP लगातार टुकड़ी परिणामों के लिए सभी कुओं में एक समान जोखिम सुनिश्चित करता है।
स्टेफिलोकोकस बैक्टीरिया
विश्लेषणात्मक कदम: क्रिस्टल वायलेट (सीवी) का उपयोग करके अलग स्टैफिलोकोकस बायोफिल्म बायोमास की मात्रा का ठहराव
आवश्यक सामग्री:
- 0.1% क्रिस्टल वायलेट (सीवी) समाधान
- 95% इथेनॉल या 30% एसिटिक एसिड (घुलनशीलता के लिए)
- माइक्रोप्लेट रीडर 570 एनएम पर पढ़ने में सक्षम
- धुंधला के लिए बाँझ microtiter प्लेटें
सीढ़ी:
- धुंधला प्लेट की तैयारी: एक स्वच्छ, बाँझ 96-अच्छी तरह से microtiter प्लेट के इसी कुओं में sonicated प्लेट के प्रत्येक अच्छी तरह से अलग biofilm निलंबन के 100 μL स्थानांतरण. यह धुंधला के लिए एक स्पष्ट और समान वातावरण सुनिश्चित करता है।
- अलग बायोफिल्म धुंधला हो जाना: अलग बायोफिल्म निलंबन युक्त प्रत्येक अच्छी तरह से 0.1% क्रिस्टल वायलेट समाधान के 150 माइक्रोन जोड़ें। बायोफिल्म निलंबन और क्रिस्टल वायलेट के मिश्रण को सुनिश्चित करने के लिए धीरे से पिपेट।
- इनक्यूबेशन: प्लेट को 15 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर इनक्यूबेट करने की अनुमति दें ताकि क्रिस्टल वायलेट को बायोमास को प्रभावी ढंग से दाग दिया जा सके।
- धुलाई: इनक्यूबेशन के बाद, बायोमास को परेशान किए बिना कुओं से क्रिस्टल वायलेट समाधान को ध्यान से त्यागें। अनबाउंड दाग को हटाने के लिए बाँझ शारीरिक खारा के साथ प्रत्येक अच्छी तरह से तीन बार धो लें।
- सुखाने: प्लेट को कमरे के तापमान पर या बाँझ वायु प्रवाह हुड के नीचे हवा में सूखने दें। हीटिंग से बचें, क्योंकि इससे परिणाम बदल सकते हैं।
- घुलनशीलता: बाध्य क्रिस्टल वायलेट को घुलनशील करने के लिए प्रत्येक अच्छी तरह से 95% इथेनॉल (या 30% एसिटिक एसिड, मानक प्रयोगशाला प्रथाओं के आधार पर) के 200 माइक्रोन जोड़ें। कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए प्लेट को पाइप या हिलाकर धीरे से मिलाएं।
- माप: माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके 570 एनएम पर घुलनशील क्रिस्टल वायलेट समाधान के ऑप्टिकल घनत्व (ओडी) को मापें।
- डेटा विश्लेषण: पृष्ठभूमि धुंधला के लिए खाते में प्रयोगात्मक कुओं से नकारात्मक नियंत्रण (टीएसबी के साथ कुएं लेकिन कोई बैक्टीरियल इनोकुलम) के औसत ओडी 570 मूल्य घटाएं। डेटा रिकॉर्ड करें और उसका विश्लेषण करें।
नोट: प्रजनन क्षमता सुनिश्चित करने के लिए प्रत्येक स्थिति के लिए तीन प्रतियों में प्रयोग करें। क्रिस्टल वायलेट और इथेनॉल की उचित हैंडलिंग सुनिश्चित करें, सुरक्षा और निपटान प्रोटोकॉल का पालन करें।
UIP400MTP अल्ट्रासोनिक स्नान नहीं है। यह केंद्रित सोनिकेशन के लिए एक उच्च तीव्रता वाला कप हॉर्न है। यह शक्तिशाली गैर-संपर्क सोनिकेटर आपके मानक अच्छी तरह से प्लेट के सभी कुओं में एक समान सोनिकेशन प्रदान करता है। आपके पास आयाम, शक्ति और स्पंदन पर सटीक नियंत्रण है। एक अंतर्निहित टाइमर और तापमान जांच लगातार परिणाम सुनिश्चित करती है। UIP400MTP प्लेट सोनिकेटर पानी के स्नान (बाहरी चिलर वैकल्पिक) के साथ नमूनों को ठंडा करता है।
एक नज़र में UIP400MTP के प्रमुख लाभ:
- उच्च-थ्रूपुट प्रसंस्करण: बहु अच्छी तरह से प्लेटों के लिए विशेष रूप से बनाया गया है, आप एक साथ कई नमूनों को संसाधित करने के लिए अनुमति देता है.
- वर्दी अल्ट्रासोनिक वितरण: कुओं में समान अल्ट्रासोनिक तीव्रता सुनिश्चित करता है, सभी नमूनों में लगातार परिणाम प्रदान करता है।
- किसी भी मानक प्लेट का प्रयोग करें: UIP400MTP किसी भी मानक मल्टी-वेल प्लेट, पेट्री डिश और ट्यूब रैक को संभाल सकता है। कोई महंगी मालिकाना प्लेटों की आवश्यकता नहीं है!
- उपभोक्ता - अनुकूल इंटरफेस: स्थापित करने और नियंत्रित करने में आसान, इसे प्रयोगशाला उत्पादकता बढ़ाने के लिए एक उत्कृष्ट उपकरण बनाता है। प्रोग्राम करने योग्य सेटिंग्स और स्वचालन प्रक्रिया मानकीकरण की सुविधा प्रदान करते हैं!
उच्च-थ्रूपुट बायोफिल्म टुकड़ी 96-वेल प्लेट सोनिकेटर UIP400MTP के साथ
साहित्य/सन्दर्भ
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- Lauren E. Cruchley-Fuge, Martin R. Jones, Ossama Edbali, Gavin R. Lloyd, Ralf J. M. Weber, Andrew D. Southam, Mark R. Viant (2024): Automated extraction of adherent cell lines from 24-well and 96-well plates for multi-omics analysis using the Hielscher UIP400MTP sonicator and Beckman Coulter i7 liquid handling workstation. Metabomeeting 2024, University of Liverpool, 26-28th November 2024.
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
- Dreyer J., Ricci G., van den Berg J., Bhardwaj V., Funk J., Armstrong C., van Batenburg V., Sine C., VanInsberghe M.A., Marsman R., Mandemaker I.K., di Sanzo S., Costantini J., Manzo S.G., Biran A., Burny C., Völker-Albert M., Groth A., Spencer S.L., van Oudenaarden A., Mattiroli F. (2024): Acute multi-level response to defective de novo chromatin assembly in S-phase. Molecular Cell 2024.
- Mochizuki, Chika; Taketomi, Yoshitaka; Irie, Atsushi; Kano, Kuniyuki; Nagasaki, Yuki; Miki, Yoshimi; Ono, Takashi; Nishito, Yasumasa; Nakajima, Takahiro; Tomabechi, Yuri; Hanada, Kazuharu; Shirouzu, Mikako; Watanabe, Takashi; Hata, Kousuke; Izumi, Yoshihiro; Bamba, Takeshi; Chun, Jerold; Kudo, Kai; Kotani, Ai; Murakami, Makoto (2024): Secreted phospholipase PLA2G12A-driven lysophospholipid signaling via lipolytic modification of extracellular vesicles facilitates pathogenic Th17 differentiation. BioRxiv 2024.
- Cosenza-Contreras M, Seredynska A, Vogele D, Pinter N, Brombacher E, Cueto RF, Dinh TJ, Bernhard P, Rogg M, Liu J, Willems P, Stael S, Huesgen PF, Kuehn EW, Kreutz C, Schell C, Schilling O. (2024): TermineR: Extracting information on endogenous proteolytic processing from shotgun proteomics data. Proteomics. 2024.
अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न
एक्स्ट्रासेल्युलर पॉलिमरिक पदार्थ (ईपीएस) क्या हैं?
एक्स्ट्रासेल्युलर पॉलिमरिक पदार्थ (ईपीएस) बायोपॉलिमर का एक जटिल मिश्रण है, जो मुख्य रूप से पॉलीसेकेराइड, प्रोटीन, न्यूक्लिक एसिड और लिपिड से बना होता है, जो बायोफिल्म में सूक्ष्मजीवों द्वारा स्रावित होता है। ईपीएस एक सुरक्षात्मक मैट्रिक्स बनाता है जो माइक्रोबियल समुदाय को घेरता है, संरचनात्मक अखंडता प्रदान करता है, सतहों पर मध्यस्थता आसंजन करता है, और एंटीबायोटिक दवाओं और प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं सहित पर्यावरणीय तनाव से कोशिकाओं को परिरक्षण करता है।
प्लैंकटोनिक बैक्टीरिया से क्या तात्पर्य है?
प्लैंकटोनिक बैक्टीरिया मुक्त-तैरने वाले, एकल-कोशिका वाले सूक्ष्मजीव होते हैं जो निलंबन में मौजूद होते हैं, जैसे कि तरल संस्कृति या शारीरिक तरल पदार्थ में, सतहों से जुड़े होने या बायोफिल्म जैसे संरचित समुदायों को बनाने के बजाय।
बायोफिल्म और प्लैंकटोनिक बैक्टीरिया के बीच अंतर क्या है?
मुख्य अंतर बायोफिल्म और प्लवक बैक्टीरिया के बीच उनके संगठन में निहित है। बायोफिल्म एक बाह्य बहुलक पदार्थ (ईपीएस) मैट्रिक्स में एम्बेडेड बैक्टीरिया के संरचित, सतह से जुड़े समुदाय हैं, जबकि प्लैंकटोनिक बैक्टीरिया मुक्त-तैरने वाले हैं और इस तरह के संरचनात्मक संगठन की कमी है।
क्या बायोफिल्म में बैक्टीरिया प्लैंकटोनिक बैक्टीरिया की तुलना में एंटीबायोटिक दवाओं के साथ इलाज करना अधिक कठिन है?
प्लैंकटोनिक बैक्टीरिया की तुलना में बायोफिल्म में बैक्टीरिया एंटीबायोटिक दवाओं के साथ इलाज करना काफी कठिन है। बायोफिल्म मैट्रिक्स एक भौतिक बाधा के रूप में कार्य करता है, और भीतर के बैक्टीरिया चयापचय राज्यों को बदल देते हैं और तनाव प्रतिरोध को बढ़ाते हैं, एंटीबायोटिक प्रभावकारिता को कम करने में योगदान करते हैं।
क्या बायोफिल्म को एंटीबायोटिक दवाओं द्वारा मारा जा सकता है?
बायोफिल्म को कभी-कभी एंटीबायोटिक दवाओं द्वारा मिटाया जा सकता है, लेकिन यह चुनौतीपूर्ण है। प्रभावी उपचार के लिए अक्सर उच्च एंटीबायोटिक सांद्रता, विशिष्ट संयोजन, या सहायक उपचार की आवश्यकता होती है, क्योंकि ईपीएस मैट्रिक्स और जीवाणु प्रतिरोध तंत्र बायोफिल्म को ढालते हैं।
क्या स्टेफिलोकोकस आसन्न बैक्टीरिया हैं?
स्टैफिलोकोकस बैक्टीरिया अपनी पालन क्षमताओं के लिए प्रसिद्ध हैं। वे आसानी से सतहों से जुड़ जाते हैं, बायोफिल्म बनाते हैं, विशेष रूप से चिकित्सा उपकरणों या मेजबान ऊतकों पर, जिससे वे लगातार संक्रमण में एक प्रमुख योगदानकर्ता बन जाते हैं।
स्टेफिलोकोकस बैक्टीरिया कितने प्रकार के होते हैं?
स्टैफिलोकोकस बैक्टीरिया में कई प्रकार शामिल हैं, जिनमें सबसे उल्लेखनीय स्टैफिलोकोकस ऑरियस और स्टैफिलोकोकस एपिडर्मिडिस हैं। एस ऑरियस रोगजनक है और गंभीर संक्रमण पैदा कर सकता है, जबकि एस एपिडर्मिडिस आमतौर पर बायोफिल्म से संबंधित डिवाइस संक्रमण से जुड़ा होता है।
क्रिस्टल वायलेट क्या है?
क्रिस्टल वायलेट एक मूल डाई है जिसका उपयोग आमतौर पर जैविक सामग्री को धुंधला करने के लिए किया जाता है। माइक्रोबायोलॉजी में, इसका उपयोग बायोमास को धुंधला करके बायोफिल्म गठन का आकलन करने के लिए किया जाता है, जिसे बाद में स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से निर्धारित किया जा सकता है।
Hielscher Ultrasonics से उच्च प्रदर्शन अल्ट्रासोनिक homogenizers बनाती है प्रयोगशाला तक औद्योगिक आकार।