एएसटीएम E2799-22 रोगाणुरोधी मूल्यांकन के लिए प्रोटोकॉल

Hielscher UIP400MTP ASTM E2799-22 प्रोटोकॉल में sonication कदम को कारगर बनाने के लिए डिज़ाइन किया गया एक शक्तिशाली और कुशल बहु अच्छी तरह से प्लेट sonicator है। पूरे माइक्रोटिटर प्लेट में एक समान अल्ट्रासोनिक ऊर्जा प्रदान करके, UIP400MTP कोशिकाओं को नुकसान पहुंचाए बिना या नमूना अखंडता से समझौता किए बिना खूंटी ढक्कन से बायोफिल्म की लगातार और विश्वसनीय टुकड़ी सुनिश्चित करता है। इसकी उच्च-थ्रूपुट क्षमता और उपयोगकर्ता के अनुकूल संचालन प्रजनन क्षमता को बढ़ाते हुए प्रसंस्करण समय को काफी कम कर देता है, जिससे यह बायोफिल्म व्यवहार्यता परख और रोगाणुरोधी प्रभावकारिता परीक्षण करने वाली प्रयोगशालाओं के लिए एक आदर्श समाधान बन जाता है।

एएसटीएम E2799

ASTM E2799 एक मानकीकृत परीक्षण विधि है जिसे बायोफिल्म के खिलाफ रोगाणुरोधी एजेंटों की प्रभावकारिता का मूल्यांकन करने के लिए डिज़ाइन किया गया है, विशेष रूप से स्यूडोमोनास एरुगिनोसा पर ध्यान केंद्रित कर रहा है। बायोफिल्म जटिल माइक्रोबियल समुदाय हैं जो सतहों का पालन करते हैं और रोगाणुरोधी उपचार के लिए बढ़े हुए प्रतिरोध का प्रदर्शन करते हैं, जिससे उन्हें स्वास्थ्य देखभाल, औद्योगिक और पर्यावरणीय संदर्भों में एक महत्वपूर्ण चुनौती मिलती है। यह विधि यथार्थवादी बायोफिल्म स्थितियों के तहत कीटाणुनाशकों के परीक्षण के लिए एक विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य ढांचा प्रदान करने के लिए न्यूनतम बायोफिल्म उन्मूलन एकाग्रता (एमबीईसी) परख का उपयोग करती है।

ASTM E2799 में सोनिकेशन कैसे योगदान देता है?

सोनिकेशन ASTM E2799 प्रोटोकॉल में परीक्षण सतहों से बायोफिल्म की टुकड़ी को सुविधाजनक बनाकर, उपचार के बाद माइक्रोबियल व्यवहार्यता का सटीक मूल्यांकन सुनिश्चित करके महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। नियंत्रित अल्ट्रासोनिक ऊर्जा का उपयोग करके, प्रोटोकॉल कोशिकाओं को नुकसान पहुंचाए बिना कुशल और सुसंगत बायोफिल्म व्यवधान प्राप्त करता है, सटीक और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम सक्षम करता है। यह ASTM E2799 को बायोफिल्म अनुसंधान को आगे बढ़ाने और प्रभावी रोगाणुरोधी रणनीतियों को विकसित करने के लिए एक आवश्यक उपकरण बनाता है।

ASTM E2799-22 के अनुसार MBEC परख कैसे चलाएं

ASTM E2799-22 प्रोटोकॉल बायोफिल्म के खिलाफ रोगाणुरोधी एजेंटों की प्रभावकारिता के मूल्यांकन के लिए चरणों की रूपरेखा तैयार करता है। Hielscher UIP400MTP microtiter प्लेट sonicator का उपयोग करते समय, प्रोटोकॉल बायोफिल्म टुकड़ी के लिए इस उन्नत sonication विधि को शामिल करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है. नीचे माइक्रोप्लेट सोनिकेटर UIP400MTP का उपयोग करने के लिए तैयार किए गए चरणों का विवरण दिया गया है:

1. बायोफिल्म की तैयारी
   वियोज्य खूंटी ढक्कन के साथ एक बाँझ 96 अच्छी तरह से microtiter थाली तैयार करें.
   एक उपयुक्त विकास माध्यम में एक मानकीकृत जीवाणु निलंबन के साथ कुओं टीका लगाना.
   खूंटी ढक्कन को प्लेट पर रखें, यह सुनिश्चित करते हुए कि खूंटे पूरी तरह से बैक्टीरियल सस्पेंशन में डूबे हुए हैं।
   खूंटे पर बायोफिल्म गठन की अनुमति देने के लिए नियंत्रित परिस्थितियों (जैसे, तापमान और समय) के तहत थाली सेते हैं.
2. रोगाणुरोधी एजेंटों के साथ उपचार
   बायोफिल्म गठन के बाद, विभिन्न सांद्रता पर परीक्षण रोगाणुरोधी एजेंटों युक्त ताजा माध्यम के साथ माध्यम की जगह.
   खूंटी ढक्कन को फिर से संलग्न करें और परीक्षण डिजाइन में निर्दिष्ट शर्तों के तहत सेते हैं।
3. बायोफिल्म डिटैचमेंट की तैयारी
   उपचार के बाद, अवशिष्ट रोगाणुरोधी एजेंटों और शिथिल पालन प्लवक कोशिकाओं को हटाने के लिए इसे एक बाँझ कुल्ला समाधान में डुबोकर खूंटी ढक्कन कुल्ला।
4. बायोफिल्म टुकड़ी UIP400MTP Sonicator का उपयोग कर
   एक वसूली माध्यम (जैसे, शोरबा बेअसर करने) युक्त एक ताजा 96 अच्छी तरह से microtiter थाली तैयार करें.
   वसूली मध्यम प्लेट के कुओं में खूंटी ढक्कन रखकर बायोफिल्म को अलग करें।
   प्लेट को UIP400MTP सोनिकेटर में डालें, यह सुनिश्चित करते हुए कि ढक्कन और प्लेट ठीक से संरेखित हैं।
   सोनिकेटर को 70% -80% आयाम पर सेट करें और सेल लसीका के बिना लगातार बायोफिल्म टुकड़ी सुनिश्चित करने के लिए चक्र मोड में 3-4 मिनट के लिए सोनिकट करें।
5. बायोफिल्म व्यवहार्यता का आकलन
   सोनिकेशन के बाद, मानक सूक्ष्मजीवविज्ञानी या विश्लेषणात्मक तकनीकों का उपयोग करके अलग बायोफिल्म कोशिकाओं वाले पुनर्प्राप्ति माध्यम को संसाधित करें, जैसे:
   • कॉलोनी बनाने इकाई (सीएफयू) मायने रखता है: व्यवहार्य सेल गणना के लिए अगर पर धारावाहिक dilutions और प्लेट प्रदर्शन.
   • ऑप्टिकल घनत्व (ओडी) माप: सेल घनत्व का आकलन करने के लिए स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक विश्लेषण का उपयोग करें।
   • प्रतिदीप्ति आधारित व्यवहार्यता परख: फ्लोरोसेंट रंगों का उपयोग कर जीवित और मृत कोशिकाओं यों यों की।
6. डेटा विश्लेषण
   रोगाणुरोधी एजेंटों की प्रभावकारिता निर्धारित करने के लिए उपचारित और अनुपचारित बायोफिल्म के व्यवहार्यता डेटा की तुलना करें।
   व्यवहार्य बायोफिल्म कोशिकाओं को खत्म करने के लिए आवश्यक एकाग्रता के आधार पर न्यूनतम बायोफिल्म उन्मूलन एकाग्रता (एमबीईसी) की गणना करें।
7. गुणवत्ता नियंत्रण
   नियमित रूप से UIP400MTP को कैलिब्रेट करके और यह सत्यापित करके लगातार सोनिकेशन की स्थिति सुनिश्चित करें कि बायोफिल्म टुकड़ी प्रक्रिया के परिणामस्वरूप महत्वपूर्ण सेल लसीका या विनाश नहीं होता है।
   परिणामों को मान्य करने के लिए अनुपचारित बायोफिल्म और मध्यम-केवल रिक्त स्थान जैसे उचित नियंत्रण शामिल करें।

पिंस पर गठित बायोफिल्म कोशिकाओं को कोशिकाओं की वसूली के लिए ताजा संस्कृति माध्यम युक्त 96-अच्छी प्लेटों में 5 मिनट के लिए सोनिकेशन (हिल्स्चर अल्ट्रासाउंड टेक्नोलॉजी, टेल्टो, जर्मनी, UIP250MTP) द्वारा उखाड़ फेंका गया था।
(चित्र और अध्ययन: ©डी ओलिवेरा एट अल।

ASTM E2799-22 वर्कफ़्लो में UIP400MTP को एकीकृत करके, बायोफिल्म टुकड़ी की प्रक्रिया को स्थिरता, दक्षता और उच्च-थ्रूपुट अनुप्रयोगों के लिए अनुकूलित किया जाता है।