रोगाणुरोधी मूल्यांकन के लिए ASTM E2799-22 प्रोटोकॉल
Hielscher UIP400MTP एक शक्तिशाली और कुशल मल्टी-वेल प्लेट सोनिकेटर है, जिसे ASTM E2799-22 प्रोटोकॉल में सोनिकेशन चरण को सुव्यवस्थित करने के लिए डिज़ाइन किया गया है। पूरी माइक्रोटाइटर प्लेट में एकसमान अल्ट्रासोनिक ऊर्जा प्रदान करके, UIP400MTP कोशिकाओं को नुकसान पहुँचाए बिना या नमूने की अखंडता से समझौता किए बिना पेग वाले ढक्कनों से बायोफिल्म का सुसंगत और विश्वसनीय पृथक्करण सुनिश्चित करता है। इसकी उच्च नमूना प्रसंस्करण क्षमता और उपयोग में आसान संचालन पुनरुत्पादकता बढ़ाते हुए प्रसंस्करण समय को काफी कम करते हैं, जिससे यह बायोफिल्म की जीवितता के परीक्षण और रोगाणुरोधी प्रभावकारिता परीक्षण करने वाली प्रयोगशालाओं के लिए एक आदर्श समाधान बनता है।
ASTM E2799
ASTM E2799 एक मानकीकृत परीक्षण विधि है, जिसे बायोफिल्म के विरुद्ध रोगाणुरोधी कारकों की प्रभावकारिता का मूल्यांकन करने के लिए डिज़ाइन किया गया है और जो विशेष रूप से Pseudomonas aeruginosa पर केंद्रित है। बायोफिल्म जटिल सूक्ष्मजीवी समुदाय हैं, जो सतहों से चिपकते हैं और रोगाणुरोधी उपचारों के प्रति बढ़ा हुआ प्रतिरोध प्रदर्शित करते हैं। इस कारण वे स्वास्थ्य सेवा, उद्योग और पर्यावरण से जुड़े क्षेत्रों में एक बड़ी चुनौती हैं। यह विधि वास्तविक परिस्थितियों जैसी बायोफिल्म स्थितियों में विसंक्रामकों के परीक्षण के लिए एक विश्वसनीय और पुनरुत्पादनीय ढाँचा प्रदान करने हेतु न्यूनतम बायोफिल्म उन्मूलन सांद्रता (MBEC) परीक्षण का उपयोग करती है।
96-वेल प्लेट सोनिकेटर UIP400MTP उच्च नमूना प्रसंस्करण क्षमता वाली स्क्रीनिंग के लिए
सोनिकेशन ASTM E2799 में कैसे योगदान देता है?
सोनिकेशन परीक्षण सतहों से बायोफिल्म के पृथक्करण को सुगम बनाकर ASTM E2799 प्रोटोकॉल में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है और उपचार के बाद सूक्ष्मजीवों की जीवितता का सटीक आकलन सुनिश्चित करता है। नियंत्रित अल्ट्रासोनिक ऊर्जा का उपयोग करके, यह प्रोटोकॉल कोशिकाओं को नुकसान पहुँचाए बिना बायोफिल्म का कुशल और सुसंगत विघटन करता है, जिससे सटीक और पुनरुत्पादनीय परिणाम प्राप्त होते हैं। इससे ASTM E2799 बायोफिल्म अनुसंधान को आगे बढ़ाने और प्रभावी रोगाणुरोधी रणनीतियाँ विकसित करने का एक आवश्यक साधन बनता है।
ASTM E2799-22 के अनुसार MBEC परीक्षण कैसे करें
ASTM E2799-22 प्रोटोकॉल बायोफिल्म के विरुद्ध रोगाणुरोधी कारकों की प्रभावकारिता का मूल्यांकन करने के चरणों की रूपरेखा प्रस्तुत करता है। Hielscher UIP400MTP माइक्रोटाइटर प्लेट सोनिकेटर का उपयोग करते समय, बायोफिल्म पृथक्करण के लिए इस उन्नत सोनिकेशन विधि को शामिल करने हेतु प्रोटोकॉल को अनुकूलित किया जा सकता है। नीचे माइक्रोप्लेट सोनिकेटर UIP400MTP के उपयोग के अनुरूप चरणों का विवरण दिया गया है:
- बायोफिल्म की तैयारी
अलग किए जा सकने वाले पेग वाले ढक्कनों सहित एक निर्जीवाणुकृत 96-वेल माइक्रोटाइटर प्लेट तैयार करें।
उपयुक्त वृद्धि माध्यम में मानकीकृत जीवाणु निलंबन से वेलों का संरोपण करें।
पेग वाला ढक्कन प्लेट पर रखें और सुनिश्चित करें कि पेग जीवाणु निलंबन में पूरी तरह डूबे हों।
पेगों पर बायोफिल्म बनने देने के लिए प्लेट को नियंत्रित परिस्थितियों (जैसे तापमान और समय) में इनक्यूबेट करें। - रोगाणुरोधी कारकों से उपचार
बायोफिल्म बनने के बाद, माध्यम को ऐसे ताज़े माध्यम से बदलें जिसमें विभिन्न सांद्रताओं पर परीक्षणाधीन रोगाणुरोधी कारक हों।
पेग वाला ढक्कन फिर से लगाएँ और परीक्षण की रूपरेखा में निर्दिष्ट परिस्थितियों में इनक्यूबेट करें। - बायोफिल्म पृथक्करण की तैयारी
उपचार के बाद, अवशिष्ट रोगाणुरोधी कारकों और ढीले ढंग से चिपकी प्लवकीय कोशिकाओं को हटाने के लिए पेग वाले ढक्कन को निर्जीवाणुकृत धुलाई विलयन में डुबोकर धोएँ। - UIP400MTP सोनिकेटर का उपयोग करके बायोफिल्म पृथक्करण
पुनर्प्राप्ति माध्यम (जैसे उदासीनीकरण ब्रॉथ) वाली एक नई 96-वेल माइक्रोटाइटर प्लेट तैयार करें।
पेग वाले ढक्कन को पुनर्प्राप्ति माध्यम वाली प्लेट के वेलों में रखकर बायोफिल्म को अलग करें।
प्लेट को UIP400MTP सोनिकेटर में डालें और सुनिश्चित करें कि ढक्कन और प्लेट सही ढंग से संरेखित हों।
कोशिका लयन के बिना सुसंगत बायोफिल्म पृथक्करण सुनिश्चित करने के लिए सोनिकेटर को 70%–80% आयाम पर सेट करें और चक्रीय मोड में 3–4 मिनट तक सोनिकेशन करें। - बायोफिल्म की जीवितता का आकलन
सोनिकेशन के बाद, अलग की गई बायोफिल्म कोशिकाओं वाले पुनर्प्राप्ति माध्यम को मानक सूक्ष्मजीवविज्ञानी या विश्लेषणात्मक तकनीकों का उपयोग करके संसाधित करें, जैसे:- कॉलोनी बनाने वाली इकाई (CFU) की गणना: जीवित कोशिकाओं की गणना के लिए क्रमिक तनुकरण करें और एगर पर प्लेट करें।
- प्रकाशिक घनत्व (OD) मापन: कोशिका घनत्व का आकलन करने के लिए स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक विश्लेषण का उपयोग करें।
- प्रतिदीप्ति आधारित जीवितता परीक्षण: प्रतिदीप्त रंजकों का उपयोग करके जीवित और मृत कोशिकाओं का परिमाण निर्धारित करें।
- डेटा विश्लेषण
रोगाणुरोधी कारकों की प्रभावकारिता निर्धारित करने के लिए उपचारित और अनुपचारित बायोफिल्म की जीवितता के डेटा की तुलना करें।
जीवित बायोफिल्म कोशिकाओं को समाप्त करने के लिए आवश्यक सांद्रता के आधार पर न्यूनतम बायोफिल्म उन्मूलन सांद्रता (MBEC) की गणना करें। - गुणवत्ता नियंत्रण
UIP400MTP का नियमित अंशांकन करके और यह सत्यापित करके कि बायोफिल्म पृथक्करण प्रक्रिया के परिणामस्वरूप उल्लेखनीय कोशिका लयन या विनाश नहीं होता है, सोनिकेशन की सुसंगत परिस्थितियाँ सुनिश्चित करें।
परिणामों को मान्य करने के लिए उपयुक्त नियंत्रण शामिल करें, जैसे अनुपचारित बायोफिल्म और केवल माध्यम वाले ब्लैंक।
पिनों पर बनी बायोफिल्म कोशिकाओं को कोशिकाओं की पुनर्प्राप्ति के लिए ताज़े संवर्धन माध्यम वाली 96-वेल प्लेटों में 5 min तक सोनिकेशन (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Germany, UIP250MTP) द्वारा अलग किया गया।
(चित्र और अध्ययन: ©de Oliveira et al., 2016)
ASTM E2799-22 कार्यप्रवाह में UIP400MTP को एकीकृत करके, बायोफिल्म पृथक्करण प्रक्रिया को सुसंगतता, दक्षता और उच्च नमूना प्रसंस्करण क्षमता वाले अनुप्रयोगों के लिए अनुकूलित किया जाता है।
साहित्य / संदर्भ
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- ASTM E2799-22 Standard Test Method for Testing Disinfectant Efficacy against Pseudomonas aeruginosa Biofilm using the MBEC Assay
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न
ASTM E2799 क्या है?
ASTM E2799, MBEC परीक्षण का उपयोग करके Pseudomonas aeruginosa बायोफिल्म के विरुद्ध विसंक्रामक की प्रभावकारिता का परीक्षण करने के लिए ASTM International द्वारा स्थापित एक मानक परीक्षण विधि है। इस विधि का व्यापक रूप से बायोफिल्म निर्माण, रोगाणुरोधी प्रभावकारिता और पदार्थों की सतहों पर होने वाली अंतःक्रियाओं का मूल्यांकन करने के लिए उपयोग किया जाता है, जिससे बायोफिल्म संबंधी अनुसंधान में मानकीकृत तुलनाएँ संभव होती हैं।
ASTM E2799-22 और ASTM E2799-11, ASTM E2799-12 तथा ASTM E2799-17 के बीच क्या अंतर है?
ASTM E2799 एक मानकीकृत परीक्षण विधि है, जो MBEC (न्यूनतम बायोफिल्म उन्मूलन सांद्रता) परीक्षण का उपयोग करके Pseudomonas aeruginosa बायोफिल्म के विरुद्ध विसंक्रामकों की प्रभावकारिता का मूल्यांकन करती है। इस विधि की सटीकता और प्रयोज्यता बढ़ाने के लिए इसमें कई संशोधन किए गए हैं।
- ASTM E2799-11: यह मानक का प्रारंभिक संस्करण था, जिसमें MBEC परीक्षण का उपयोग करके P. aeruginosa बायोफिल्म के विरुद्ध विसंक्रामक की प्रभावकारिता का आकलन करने की आधारभूत प्रक्रियाएँ स्थापित की गई थीं।
- ASTM E2799-12: इस संशोधन में स्पष्टता में सुधार करने और 2011 संस्करण में पहचानी गई अस्पष्टताओं को दूर करने के लिए छोटे तकनीकी अद्यतन शामिल किए गए थे।
- ASTM E2799-17: इस अद्यतन में प्रोटोकॉल में अधिक महत्वपूर्ण बदलाव किए गए, जिनमें बायोफिल्म संवर्धन प्रक्रिया, उपचार के अनुप्रयोग और उदासीनीकरण प्रक्रियाओं में समायोजन शामिल थे। इनका उद्देश्य पुनरुत्पादकता बढ़ाना और बायोफिल्म अनुसंधान में हुई प्रगति के साथ तालमेल सुधारना था।
- ASTM E2799-22: सबसे हालिया संशोधन बायोफिल्म अध्ययनों में नवीनतम वैज्ञानिक समझ और तकनीकी प्रगति को दर्शाता है। इसमें बायोफिल्म वृद्धि, उपचार और विश्लेषण के लिए परिष्कृत पद्धतियाँ शामिल हैं, जो सुनिश्चित करती हैं कि परीक्षण विधि वर्तमान विसंक्रामक प्रभावकारिता मूल्यांकनों के लिए प्रासंगिक और प्रभावी बनी रहे।
ASTM E2799 का प्रत्येक संशोधन विधि की विश्वसनीयता, पुनरुत्पादकता और प्रासंगिकता में सुधार करने के लिए किया गया है, ताकि यह बायोफिल्म अनुसंधान के क्षेत्र में वैज्ञानिक और तकनीकी प्रगति के साथ अद्यतन बनी रहे।
MBEC और MBIC परीक्षणों के बीच क्या अंतर है?
MBEC (न्यूनतम बायोफिल्म उन्मूलन सांद्रता) और MBIC (न्यूनतम बायोफिल्म निरोधी सांद्रता) परीक्षणों के बीच मुख्य अंतर उनके केंद्रबिंदु में है:
MBEC परीक्षण पहले से बनी बायोफिल्म को पूरी तरह समाप्त करने के लिए आवश्यक रोगाणुरोधी कारक की सबसे कम सांद्रता मापते हैं और बायोफिल्म में समाहित सूक्ष्मजीवों को मारने की किसी पदार्थ की क्षमता का आकलन करते हैं।
MBIC परीक्षण रोगाणुरोधी कारक की वह सबसे कम सांद्रता निर्धारित करते हैं जो बायोफिल्म के प्रारंभिक निर्माण को रोकती है, और बायोफिल्म के विकास को बाधित करने की उसकी क्षमता का मूल्यांकन करते हैं।
दोनों परीक्षण बायोफिल्म के विरुद्ध रोगाणुरोधी कारकों की प्रभावकारिता को समझने के लिए अत्यंत महत्वपूर्ण हैं, लेकिन वे बायोफिल्म के जीवनचक्र के अलग-अलग चरणों को लक्षित करते हैं।
जानें कि MBIC परीक्षणों में बायोफिल्म को अलग करने के लिए UIP400MTP माइक्रोप्लेट सोनिकेटर का उपयोग कैसे किया जाता है!
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