96-वेल सोनिकेटर UIP400MTP के साथ बाह्य मैट्रिक्स निष्कर्षण

पारंपरिक बाह्य मैट्रिक्स (ईएम) निष्कर्षण विधियों में अक्सर बायोफिल्म मैट्रिक्स को बाधित करने के लिए कई चरण शामिल होते हैं। हालांकि, ये तकनीकें समय लेने वाली और असंगत हो सकती हैं, जिससे परिणामों में परिवर्तनशीलता हो सकती है। 96-वेल प्लेट सोनिकेटर UIP400MTP के साथ, ईएम निष्कर्षण प्रक्रिया को काफी सुविधा प्रदान की जाती है, जो उच्च-थ्रूपुट प्रारूपों में अत्यधिक कुशल, सटीक और समान बायोफिल्म व्यवधान प्रदान करती है। UIP400MTP नियंत्रित गुहिकायन उत्पन्न करने के लिए केंद्रित अल्ट्रासाउंड का उपयोग करता है, बायोफिल्म-एम्बेडेड कोशिकाओं की व्यवहार्यता और अखंडता को संरक्षित करते हुए बायोफिल्म मैट्रिक्स को प्रभावी ढंग से तोड़ता है। UIP400MTP का उपयोग डाउनस्ट्रीम परख की प्रजनन क्षमता और सटीकता को बढ़ाता है, जैसे कि मेटाबोलिक और प्रोटिओमिक विश्लेषण, व्यवहार्यता परीक्षण और रोगाणुरोधी संवेदनशीलता अध्ययन। ईएम निष्कर्षण को सुव्यवस्थित करके, UIP400MTP शोधकर्ताओं को लगातार और उच्च गुणवत्ता वाले परिणाम प्राप्त करने में सक्षम बनाता है, बायोफिल्म गतिशीलता और बाहरी एजेंटों के साथ बातचीत में गहरी अंतर्दृष्टि प्रदान करता है।

बाह्य मैट्रिक्स निष्कर्षण

बाह्य मैट्रिक्स (ईएम) कैंडिडा अल्बिकन्स जैसे सूक्ष्मजीवों द्वारा गठित बायोफिल्म का एक महत्वपूर्ण घटक है। पॉलीसेकेराइड, प्रोटीन, लिपिड और बाह्य डीएनए से बना, ईएम संरचनात्मक अखंडता प्रदान करता है, सतहों पर आसंजन की मध्यस्थता करता है, और रोगाणुरोधी प्रतिरोध में महत्वपूर्ण योगदान देता है। बायोफिल्म जीव विज्ञान को समझने, दवा प्रतिरोध के तंत्र को स्पष्ट करने और उपन्यास चिकित्सीय लक्ष्यों की पहचान करने के लिए ईएम को निकालना और विश्लेषण करना आवश्यक है।

एक्स्ट्रासेल्युलर मैट्रिक्स (ईएम) के लिए प्रोटोकॉल कैंडिडा अल्बिकन्स बायोफिल्म्स से निष्कर्षण UIP400MTP का उपयोग करना

यह प्रोटोकॉल स्थैतिक कैंडिडा अल्बिकन्स बायोफिल्म के बाह्य मैट्रिक्स (ईएम) को निकालने पर केंद्रित है। बेहतर दक्षता और प्रजनन क्षमता के लिए पारंपरिक स्क्रैपिंग या एंजाइम-आधारित चरणों को बदलने के लिए UIP400MTP सोनिकेटर को एकीकृत करना।

आवश्यक सामग्री

ईएम निष्कर्षण के लिए चरण-दर-चरण निर्देश

1. स्टेटिक बायोफिल्म का निर्माण
   स्थैतिक बायोफिल्म के लिए, आरपीएमआई-1640 माध्यम का उपयोग करके 96-अच्छी प्लेट के कुओं में सी. अल्बिकन्स को टीका लगाएं। प्रत्येक अच्छी तरह से inoculum (जैसे, अच्छी तरह से प्रति 200 μL ) की एक सुसंगत मात्रा में होना चाहिए.
   अच्छी तरह से सतहों पर बायोफिल्म गठन की अनुमति देने के लिए 24 घंटे के लिए स्थिर परिस्थितियों में 37 डिग्री सेल्सियस पर प्लेट को इनक्यूबेट करें।
2. निष्कर्षण के लिए बायोफिल्म तैयारी
   इनक्यूबेशन के बाद, बायोफिल्म को परेशान किए बिना प्रत्येक कुएं से खर्च किए गए माध्यम को धीरे से महाप्राण और त्याग दें।
   शिथिल संलग्न कोशिकाओं और प्लवक मलबे को हटाने के लिए बाँझ पीबीएस (जैसे, 200 माइक्रोन) के साथ प्रत्येक अच्छी तरह से कुल्ला। इस चरण को दो बार दोहराएं।
   सोनिकेशन के लिए तैयार करने के लिए प्रत्येक कुएं में ताजा पीबीएस या निष्कर्षण बफर (जैसे, 200 माइक्रोन) जोड़ें।
3. UIP400MTP के साथ सोनिकेशन
   पीबीएस या निष्कर्षण बफर युक्त 96 अच्छी तरह से UIP400MTP sonicator ट्रे में थाली रखें. मल्टी-वेल प्लेट को सही ढंग से रखने के लिए, मैनुअल के निर्देशों का पालन करें।
   एक कोमल सेटिंग (60% आयाम, पल्स मोड) पर 5-6 मिनट के लिए सोनिकेट, बायोफिल्म संरचना के समान व्यवधान और ईएम घटकों की रिहाई सुनिश्चित करना।
   अत्यधिक हीटिंग या नमूना क्षति से बचने के लिए UIP400MTP सोनिकेटर (तापमान सेंसर और सेटिंग्स) के तापमान नियंत्रण का उपयोग करें।
4. कटियन एक्सचेंज राल (सीईआर) उपचार
   प्रत्येक कुएं से सोनिकेटेड तरल को एक नई 96-अच्छी प्लेट में स्थानांतरित करें।
   प्रत्येक अच्छी तरह से (जैसे, अच्छी तरह से प्रति 400 माइक्रोन कुल मात्रा) के लिए सीईआर निलंबन (पीबीएस या बफर में तैयार) की एक दो गुना मात्रा जोड़ें।
   प्लेट को सील करें और इसे ईएम घटकों के बंधन और अलगाव की अनुमति देने के लिए 3 घंटे के लिए 400 आरपीएम पर प्लेट शेकर या रोटेटर पर इनक्यूबेट करें।
5. पृथक्करण और निस्पंदन
   सतह पर तैरनेवाला से राल और कोशिकाओं को अलग करने के लिए 10 मिनट के लिए 2,000 × ग्राम पर थाली अपकेंद्रित्र.
   ध्यान से एक नया 96 अच्छी तरह से थाली के लिए प्रत्येक अच्छी तरह से से ईएम युक्त सतह पर तैरनेवाला हस्तांतरण.
   एक प्लेट-आधारित वैक्यूम कई गुना प्रणाली का उपयोग करके 0.22 माइक्रोन फिल्टर के माध्यम से सतह पर तैरनेवाला फ़िल्टर करें या एक स्वच्छ ईएम निकालने के लिए समकक्ष करें।
6. ईएम का विश्लेषण
   अलक्षित मेटाबोलाइट प्रोफाइलिंग के लिए यूपीएलसी-क्यू-टीओएफ-एमएस जैसी तकनीकों का उपयोग करें, या ईएम घटकों को चिह्नित करने के लिए विशिष्ट परख (जैसे, प्रोटीन, ट्राइग्लिसराइड और कार्बोहाइड्रेट क्वांटिफिकेशन किट के लिए बीसीए) को नियोजित करें।

उच्च-थ्रूपुट बाह्य मैट्रिक्स निष्कर्षण

UIP400MTP सोनिकेटर के साथ बाह्य मैट्रिक्स (ईएम) निष्कर्षण की उच्च दक्षता ने बायोफिल्म गुणों के सटीक विश्लेषण की आवश्यकता वाले परख के लिए नमूना तैयार करने में क्रांति ला दी है। UIP400MTP बायोफिल्म मैट्रिक्स को ठीक और समान रूप से बाधित करने के लिए अल्ट्रासोनिक तरंगों का उपयोग करता है, जिससे सेल व्यवहार्यता और अखंडता को संरक्षित करते हुए ईएम घटकों की प्रभावी रिलीज को सक्षम किया जा सकता है। यह दृष्टिकोण बायोफिल्म व्यवहार्यता परीक्षण, प्रोटिओमिक और मेटाबोलामिक अध्ययन, और रोगाणुरोधी संवेदनशीलता मूल्यांकन जैसे परख की विश्वसनीयता को काफी बढ़ाता है।

कॉलोनी बनाने इकाई (सीएफयू) गिनती के रूप में बायोफिल्म वसूली assays के लिए, UIP400MTP के साथ ईएम निष्कर्षण बायोफिल्म एम्बेडेड कोशिकाओं के लिए अभिकर्मकों की अबाधित पहुंच सुनिश्चित करता है. इसी तरह, प्रोटिओमिक और मेटाबोलिक विश्लेषण, जैसे कि UPLC-Q-TOF-MS, प्रोटीन, लिपिड और मेटाबोलाइट्स के उच्च-उपज अलगाव से लाभान्वित होते हैं। UIP400MTP सटीक रोगाणुरोधी संवेदनशीलता परीक्षण का भी समर्थन करता है, जिससे बायोफिल्म एमआईसी और एमबीईसी मूल्यों का सटीक निर्धारण होता है। इसके अलावा, एंजाइम गतिविधि परख, घटक मात्रा का ठहराव और संरचनात्मक अध्ययन में UIP400MTP एड्स द्वारा कुशल निष्कर्षण की सुविधा प्रदान की जाती है, जो बायोफिल्म वास्तुकला, आसंजन और प्रतिरोध तंत्र में बाह्य मैट्रिक्स की भूमिका में मूल्यवान अंतर्दृष्टि प्रदान करती है।

यह उच्च-थ्रूपुट, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य निष्कर्षण विधि ईएम तैयारी का अनुकूलन करती है, बायोफिल्म से संबंधित assays की एक श्रृंखला में बेहतर परिणाम सुनिश्चित करती है।