कोशिकाओं को खुरचकर अलग करने की जगह उच्च नमूना प्रसंस्करण क्षमता वाला UIP400MTP सोनिकेटर अपनाएँ
मल्टी-ओमिक्स विश्लेषण के लिए मल्टी-वेल प्लेटों से आसंजित कोशिका लाइनों को अलग करना और उनका निष्कर्षण प्रयोगशालाओं में एक दैनिक कार्य है। मल्टी-वेल प्लेट सोनिकेटर UIP400MTP का उपयोग करके उच्च नमूना प्रसंस्करण क्षमता के साथ कोशिकाओं को अलग करने की प्रक्रिया, कोशिकाओं को हाथ से खुरचकर अलग करने की जगह लेती है, जिससे RNA, कुल लिपिड और कुल ध्रुवीय मेटाबोलाइट की अधिक उपज मिलती है। एक नई विधि Hielscher UIP400MTP सोनिकेटर को Beckman Coulter i7 द्रव हैंडलिंग वर्कस्टेशन के साथ एकीकृत करती है, जिससे RNA, मेटाबोलाइट और लिपिड निष्कर्षण के लिए उच्च नमूना प्रसंस्करण क्षमता के साथ कोशिकाओं का पुनरुत्पादनीय और कुशल प्रसंस्करण संभव होता है। प्रस्तुत विधि विभिन्न कोशिका प्रकारों और प्रायोगिक परिस्थितियों में बेहतर पुनरुत्पादनीयता और उपज प्राप्त करके कोशिकाओं को हाथ से खुरचकर अलग करने की पारंपरिक विधियों से बेहतर प्रदर्शन करती है।
माइक्रोप्लेट सोनिकेटर UIP400MTP से कोशिकाओं को अलग करने की प्रक्रिया को सुव्यवस्थित करें
आसंजित कोशिका संवर्धन प्रणालियाँ विषविज्ञान और जैवचिकित्सा अनुसंधान में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती हैं। इसी संदर्भ में, Cruchley-Fuge और सहकर्मियों (2024) ने PrecisionTox परियोजना में एक महत्वपूर्ण चुनौती का समाधान किया। यह परियोजना रसायनों के खतरे का मूल्यांकन करने के लिए ओमिक्स प्रौद्योगिकियों के उपयोग पर केंद्रित थी। परियोजना का लक्ष्य विभिन्न रसायनों से उपचारित हजारों नमूनों का उच्च नमूना प्रसंस्करण क्षमता के साथ विश्लेषण करना था। इस आवश्यकता को पूरा करने के लिए, शोधकर्ताओं ने एक स्वचालित कार्यप्रवाह विकसित किया, जिसमें द्रव क्रोमैटोग्राफी–द्रव्यमान स्पेक्ट्रोमेट्री (LC-MS) विश्लेषण के लिए UIP400MTP सोनिकेटर को स्थापित द्वि-प्रावस्था निष्कर्षण प्रोटोकॉल के साथ संयोजित किया गया। उनका अध्ययन हाथ से खुरचकर अलग करने और अन्य पारंपरिक विधियों की तुलना में आसंजित कोशिकाओं को अलग करने में UIP400MTP मल्टी-वेल प्लेट सोनिकेटर की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करता है।
UIP400MTP सोनिकेटर से उच्च नमूना प्रसंस्करण क्षमता के साथ किसी भी मानक माइक्रोप्लेट से आसंजित कोशिका संवर्धनों को अलग करना
मल्टी-ओमिक्स को सुव्यवस्थित करना: UIP400MTP से आसंजित कोशिकाओं का स्वचालित निष्कर्षण
बर्मिंघम विश्वविद्यालय की Laura Cruchley-Fuge की शोधकर्ता टीम ने तीन मानव कोशिका लाइनों का उपयोग किया: HepG2 (यकृत कैंसर कोशिकाएँ), HepaRG (विभेदित हेपेटोसाइट जैसी कोशिकाएँ) और H295R (अधिवृक्क कैंसर कोशिकाएँ)। इन कोशिकाओं को 24-वेल और 96-वेल प्लेटों में संवर्धित किया गया और अफ्लाटॉक्सिन B1 तथा फोर्स्कोलिन जैसे परीक्षण रसायनों के संपर्क में लाया गया।
प्रायोगिक रूपरेखा:
- चरण 1: UIP400MTP सोनिकेटर की शक्ति सेटिंग का अनुकूलन और कोशिकाओं को हाथ से खुरचकर अलग करने तथा अल्ट्रासोनिक जल स्नानों से तुलना। RNA, मेटाबोलाइट और लिपिड की प्राप्ति का मूल्यांकन करने के लिए HepG2 कोशिकाओं का उपयोग किया गया।
- चरण 2: Beckman Coulter i7 प्रणाली का उपयोग करके UIP400MTP को द्वि-प्रावस्था निष्कर्षण कार्यप्रवाह में एकीकृत करना। HepaRG और H295R कोशिकाओं का उपयोग करके सत्यापन किया गया।
निष्कर्षण कार्यप्रवाह: कार्यप्रवाह में मल्टी-वेल प्लेटों में कोशिकाओं को रसायनों के संपर्क में लाना, UIP400MTP से कोशिकाओं को अलग करना और Bligh & Dyer (B&D) विधि से द्वि-प्रावस्था निष्कर्षण शामिल था। लिपिडस्नेही और ध्रुवीय यौगिकों के लिए Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 का उपयोग करके LC-MS विश्लेषण किया गया। लिपिड की मात्रा निर्धारित करने की स्वर्ण मानक विधि B&D में मेथनॉल, क्लोरोफॉर्म और पानी के साथ दो चरणों में निष्कर्षण किया जाता है, जिसके बाद क्लोरोफॉर्म प्रावस्था में लिपिड की मात्रा निर्धारित की जाती है।
UIP400MTP माइक्रोप्लेट सोनिकेटर मल्टी-वेल प्लेटों और पेट्री डिशों से आसंजित कोशिका लाइनों को अलग करना आसान बनाता है
परिणाम:
- चरण 1: 60% शक्ति पर सोनिकेशन की इष्टतम परिस्थितियों की पहचान की गई।
हाथ से खुरचकर अलग करने और अल्ट्रासोनिक स्नानों की तुलना में UIP400MTP से असाधारण पुनरुत्पादनीयता के साथ सर्वाधिक RNA प्राप्त हुआ।
सभी विधियों में ध्रुवीय मेटाबोलाइट की प्राप्ति समान रही, जबकि UIP400MTP से लिपिड की प्राप्ति उल्लेखनीय रूप से बेहतर थी। - चरण 2: HepaRG और H295R कोशिकाओं पर सत्यापन ने लिपिडोमिक्स और मेटाबोलोमिक्स डेटा में उच्च पुनरुत्पादनीयता दर्शाई, जिसका संकेत पास-पास समूहित PCA स्कोर से मिला।
अफ्लाटॉक्सिन B1 और फोर्स्कोलिन उपचारों को नियंत्रण समूहों से प्रभावी रूप से अलग पहचाना गया, जो विधि की संवेदनशीलता और विश्वसनीयता को रेखांकित करता है।
माइक्रोप्लेट सोनिकेटर UIP400MTP उच्च नमूना प्रसंस्करण क्षमता के साथ कोशिकाओं को अलग करने के लिए
“Hielscher UIP400MTP सोनिकेशन उपकरण कोशिकाओं को हाथ से खुरचकर अलग करने के “स्वर्ण मानक” का एक उच्च-गुणवत्ता वाला और पुनरुत्पादनीय विकल्प प्रदान करता है, जिससे RNA, कुल लिपिड और कुल ध्रुवीय मेटाबोलाइट की अधिक उपज मिलती है।” (Cruchley-Fuge और सहकर्मी, 2024)
Cruchley-Fuge और सहकर्मी आसंजित कोशिकाओं के प्रसंस्करण के लिए UIP400MTP सोनिकेटर के लाभों पर प्रकाश डालते हैं। हाथ से खुरचकर अलग करने की प्रक्रिया की जगह लेकर यह विधि पुनरुत्पादनीयता, नमूना प्रसंस्करण क्षमता और उपज बढ़ाती है, जिससे यह PrecisionTox जैसे बड़े पैमाने के अध्ययनों के लिए एक अमूल्य उपकरण बनती है। UIP400MTP का स्वचालित कार्यप्रवाहों में एकीकरण न केवल परिवर्तनशीलता को कम करता है, बल्कि श्रमसाध्य प्रक्रियाओं को भी सुव्यवस्थित करता है, जिससे उच्च-गुणवत्ता वाले मल्टी-ओमिक्स डेटा का संग्रह संभव होता है।
Cruchley-Fuge और सहकर्मियों (2024) का कार्य मल्टी-ओमिक्स विश्लेषण के लिए आसंजित कोशिका संवर्धनों के प्रसंस्करण को आसान और सुव्यवस्थित बनाता है। स्वचालित कार्यप्रवाहों के साथ UIP400MTP सोनिकेटर का एकीकरण सुसंगत और कुशल नमूना तैयारी सुनिश्चित करता है, जिससे यह उच्च नमूना प्रसंस्करण क्षमता वाले विषविज्ञान अनुसंधान के लिए आदर्श रूप से उपयुक्त बनता है।
डिज़ाइन, विनिर्माण और परामर्श – जर्मनी में निर्मित गुणवत्ता
Hielscher अल्ट्रासोनिकेटर अपने उच्चतम गुणवत्ता और डिज़ाइन मानकों के लिए प्रसिद्ध हैं। मजबूती और आसान संचालन के कारण हमारे अल्ट्रासोनिकेटर को औद्योगिक संयंत्रों में सहजता से एकीकृत किया जा सकता है। Hielscher अल्ट्रासोनिकेटर कठिन परिस्थितियों और चुनौतीपूर्ण परिवेशों में आसानी से काम करते हैं।
Hielscher Ultrasonics एक ISO प्रमाणित कंपनी है और अत्याधुनिक प्रौद्योगिकी तथा उपयोग में आसानी वाले उच्च-प्रदर्शन सोनिकेटर पर विशेष जोर देती है। स्वाभाविक रूप से, Hielscher अल्ट्रासोनिकेटर CE के अनुरूप हैं और UL, CSA तथा RoHs की आवश्यकताओं को पूरा करते हैं।
कोशिकाओं को खुरचे बिना उच्च नमूना प्रसंस्करण क्षमता के साथ अलग करना – UIP400MTP सोनिकेटर प्रयोगशाला का काम आसान बनाता है।
साहित्य / संदर्भ
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- Lauren E. Cruchley-Fuge, Martin R. Jones, Ossama Edbali, Gavin R. Lloyd, Ralf J. M. Weber, Andrew D. Southam, Mark R. Viant (2024): Automated extraction of adherent cell lines from 24-well and 96-well plates for multi-omics analysis using the Hielscher UIP400MTP sonicator and Beckman Coulter i7 liquid handling workstation. Metabomeeting 2024, University of Liverpool, 26-28th November 2024.
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अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न
कोशिकाओं को अलग करना क्या है?
अनुसंधान में कोशिकाओं को अलग करने का अर्थ आसंजित कोशिकाओं को संवर्धन पात्र या सब्सट्रेट की सतह से पृथक करने की प्रक्रिया है। यह आमतौर पर विश्लेषण, उपसंवर्धन या क्रायोप्रिज़र्वेशन जैसे आगे के अनुप्रयोगों के लिए कोशिकाएँ एकत्र करने हेतु किया जाता है। कोशिका प्रकार और अनुसंधान की आवश्यकताओं के आधार पर, एंजाइमी विधियों (जैसे ट्रिप्सिन), रासायनिक एजेंटों (जैसे EDTA), यांत्रिक विधियों (जैसे खुरचना) या सोनिकेशन जैसी भौतिक तकनीकों से कोशिकाओं को अलग किया जा सकता है।
आसंजित कोशिकाओं को कैसे अलग किया जाता है?
सोनिकेशन से आसंजित कोशिकाओं को अलग करने के लिए नियंत्रित परिवेश में केंद्रित अल्ट्रासाउंड तरंगें लागू की जाती हैं, ताकि कोशिकाओं और सतह के बीच आसंजन टूट जाए। विशेष रूप से, UIP400MTP माइक्रोप्लेट सोनिकेटर स्थानीय यांत्रिक कंपन उत्पन्न करके ऐसा करता है, जो कोशिकाओं और संवर्धन सतह के बीच के बंधनों को तोड़ते हैं। प्रमुख चरणों में शामिल हैं:
- तैयारी: कोशिकाओं को मल्टी-वेल प्लेटों में उगाया जाता है और प्रायोगिक रूपरेखा के हिस्से के रूप में उन्हें विशिष्ट रसायनों के संपर्क में लाया जा सकता है।
- सोनिकेशन: UIP400MTP सोनिकेटर को अनुकूलित सेटिंग (जैसे 60% शक्ति) के साथ प्रोग्राम किया जाता है, ताकि कोशिकाओं को क्षति पहुँचाए बिना या जैवअणुओं की अखंडता से समझौता किए बिना प्रभावी रूप से अलग करना सुनिश्चित हो सके।
- तापमान नियंत्रण: प्रक्रिया के दौरान ऊष्मा से होने वाले कोशिकीय या आणविक क्षरण को रोकने के लिए उपकरण तापमान की स्थिरता बनाए रखता है।
- अलग करने के बाद: RNA, लिपिड और मेटाबोलाइट प्राप्त करने के लिए अलग की गई कोशिकाओं पर आगे के निष्कर्षण प्रोटोकॉल, जैसे Bligh & Dyer द्वि-प्रावस्था विधि, लागू किए जाते हैं।
अपने स्वचालन, पुनरुत्पादनीयता और उच्च नमूना प्रसंस्करण क्षमता के साथ नमूनों को कुशलतापूर्वक संसाधित करने की योग्यता के कारण यह विधि हाथ से खुरचकर अलग करने से बेहतर है।
क्षति पहुँचाए बिना कोशिकाओं को अलग करना क्या है?
क्षति पहुँचाए बिना कोशिकाओं को अलग करने का अर्थ आसंजित कोशिकाओं को उनकी जीवनक्षमता, अखंडता या कार्यक्षमता से समझौता किए बिना उनके सब्सट्रेट से पृथक करना है। यह नियंत्रित सोनिकेशन या एंजाइम-मुक्त विलयनों जैसी सौम्य विधियों से किया जाता है।
कोशिकाओं की संरचनात्मक और आणविक विशेषताओं को सुरक्षित रखने के लिए कोशिका विनाश से बचना अत्यंत महत्वपूर्ण है। ये विशेषताएँ मल्टी-ओमिक्स विश्लेषण, कार्यात्मक परीक्षणों या चिकित्सीय उपयोग जैसे आगे के अनुप्रयोगों की सटीकता के लिए आवश्यक हैं। क्षतिग्रस्त कोशिकाएँ अपनी अंतःकोशिकीय सामग्री छोड़ सकती हैं, जिससे प्रायोगिक परिणामों की व्याख्या जटिल हो सकती है या नमूने की गुणवत्ता प्रभावित हो सकती है।
एंजाइम-मुक्त तरीके से कोशिकाओं को अलग करने का क्या लाभ है?
एंजाइम-मुक्त तरीके से कोशिकाओं को अलग करने के कई लाभ हैं, जिनमें कोशिका सतह के प्रोटीन और रिसेप्टर को सुरक्षित रखना, कोशिकाओं की जीवनक्षमता बनाए रखना और जैवअणुओं को संभावित एंजाइमी क्षति से बचाना शामिल है। यह तरीका आगे के संवेदनशील अनुप्रयोगों, जैसे फ्लो साइटोमेट्री, प्रोटीओमिक्स या कार्यात्मक परीक्षणों के लिए विशेष रूप से लाभकारी है, जहाँ एंजाइमी बदलाव डेटा की गुणवत्ता या प्रायोगिक परिणामों को प्रभावित कर सकते हैं। इसके अतिरिक्त, एंजाइम-मुक्त विधियाँ अक्सर अधिक पुनरुत्पादनीय होती हैं और इन्हें उच्च नमूना प्रसंस्करण क्षमता वाले कार्यप्रवाहों के लिए अनुकूलित किया जा सकता है।
Hielscher Ultrasonics उच्च-प्रदर्शन अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइज़र बनाती है, जिनके आकार प्रयोगशाला स्तर से औद्योगिक स्तर तक होते हैं।