सेल स्क्रैपिंग को UIP400MTP उच्च-थ्रूपुट सोनिकेटर से बदलें
मल्टी-ओमिक्स विश्लेषण के लिए मल्टी-वेल प्लेटों से आसन्न सेल लाइनों की टुकड़ी और निष्कर्षण प्रयोगशालाओं में एक दैनिक कार्य है। मल्टी-वेल प्लेट सोनिकेटर UIP400MTP का उपयोग करके उच्च-थ्रूपुट सेल टुकड़ी मैनुअल सेल स्क्रैपिंग की जगह लेती है जिससे आरएनए, कुल लिपिड और कुल ध्रुवीय चयापचयों की उच्च पैदावार होती है। एक नई विधि बेकमैन कूल्टर i7 तरल हैंडलिंग वर्कस्टेशन के साथ Hielscher UIP400MTP sonicator को एकीकृत करती है, जिससे RNA, मेटाबोलाइट और लिपिड निष्कर्षण के लिए कोशिकाओं के उच्च-थ्रूपुट, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और कुशल प्रसंस्करण को सक्षम किया जा सकता है। प्रस्तुत विधि विभिन्न सेल प्रकारों और प्रयोगात्मक स्थितियों में बेहतर प्रजनन क्षमता और उपज प्राप्त करके पारंपरिक मैनुअल सेल स्क्रैपिंग विधियों को उत्कृष्टता प्रदान करती है।
माइक्रोप्लेट सोनिकेटर UIP400MTP के साथ सेल डिटैचमेंट को सुव्यवस्थित करें
पक्षपाती सेल संस्कृति प्रणाली विष विज्ञान और जैव चिकित्सा अनुसंधान में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती है। इस संदर्भ में, Cruchley-Fuge et al. (2024) ने रासायनिक खतरे के मूल्यांकन के लिए ओमिक्स प्रौद्योगिकियों का लाभ उठाने पर केंद्रित PrecisionTox परियोजना में एक महत्वपूर्ण चुनौती को संबोधित किया। परियोजना का उद्देश्य विभिन्न रसायनों के साथ इलाज किए गए हजारों नमूनों के उच्च-थ्रूपुट विश्लेषण के लिए है। इस मांग को पूरा करने के लिए, शोधकर्ताओं ने तरल क्रोमैटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एलसी-एमएस) विश्लेषण के लिए स्थापित द्विध्रुवीय निष्कर्षण प्रोटोकॉल के साथ UIP400MTP सोनिकेटर के संयोजन के साथ एक स्वचालित वर्कफ़्लो विकसित किया। उनका अध्ययन मैनुअल स्क्रैपिंग और अन्य पारंपरिक तरीकों की तुलना में पक्षपाती कोशिकाओं को अलग करने में UIP400MTP मल्टी-वेल प्लेट सोनिकेटर की प्रभावकारिता का मूल्यांकन करता है।
किसी भी मानक माइक्रोप्लेट से पक्षपाती सेल संस्कृतियों को अलग करना – UIP400MTP सोनिकेटर के साथ उच्च-थ्रूपुट पर
मल्टी-ओमिक्स को सुव्यवस्थित करना: UIP400MTP के साथ स्वचालित पक्षपाती सेल निष्कर्षण
बर्मिंघम विश्वविद्यालय से लौरा क्रूचले-फ्यूज की शोधकर्ता टीम ने तीन मानव कोशिका लाइनों का उपयोग किया: हेपजी 2 (यकृत कैंसर कोशिकाएं), हेपाआरजी (विभेदित हेपेटोसाइट जैसी कोशिकाएं), और एच 2 9 5 आर (अधिवृक्क कैंसर कोशिकाएं)। इन कोशिकाओं को 24-अच्छी और 96-अच्छी प्लेटों में सुसंस्कृत किया गया था और एफ्लाटॉक्सिन बी 1 और फोर्स्कोलिन जैसे परीक्षण रसायनों के संपर्क में लाया गया था।
प्रायोगिक डिजाइन:
- चरण 1: UIP400MTP सोनिकेटर की पावर सेटिंग्स का अनुकूलन और मैनुअल सेल स्क्रैपिंग और सोनिक वॉटर बाथ के साथ तुलना। हेपजी 2 कोशिकाओं को आरएनए, मेटाबोलाइट और लिपिड रिकवरी का मूल्यांकन करने के लिए नियोजित किया गया था।
- चरण 2: बेकमैन कूल्टर i7 सिस्टम का उपयोग करके एक द्विध्रुवीय निष्कर्षण वर्कफ़्लो में UIP400MTP का एकीकरण। सत्यापन HepaRG और H295R कोशिकाओं का उपयोग करके आयोजित किया गया था।
निष्कर्षण कार्यप्रवाह: वर्कफ़्लो बहु अच्छी तरह से प्लेटों, सेल टुकड़ी UIP400MTP का उपयोग कर में रासायनिक जोखिम शामिल, और Bligh के माध्यम से द्विध्रुवीय निष्कर्षण & डायर (बी&डी) विधि। एलसी-एमएस विश्लेषण लिपोफिलिक और ध्रुवीय यौगिकों के लिए थर्मो साइंटिफिक ऑर्बिटरैप एक्सप्लोरिस 120 का उपयोग करके किया गया था। बी&डी विधि, लिपिड मात्रा का ठहराव के लिए एक स्वर्ण मानक, मेथनॉल, क्लोरोफॉर्म और पानी के साथ दो-चरणीय निष्कर्षण शामिल है, इसके बाद क्लोरोफॉर्म चरण में लिपिड मात्रा का ठहराव होता है।
UIP400MTP माइक्रोप्लेट सोनिकेटर मल्टी-वेल प्लेट्स और पेट्री डिश से आसन्न सेल लाइनों की टुकड़ी की सुविधा प्रदान करता है
परिणाम:
- चरण 1: इष्टतम sonication शर्तों 60% शक्ति पर पहचान की गई.
UIP400MTP ने मैनुअल स्क्रैपिंग और सोनिक स्नान की तुलना में असाधारण प्रजनन क्षमता के साथ उच्चतम आरएनए रिकवरी प्राप्त की।
ध्रुवीय मेटाबोलाइट वसूली तरीकों में सुसंगत थी, जबकि लिपिड वसूली UIP400MTP के साथ विशेष रूप से बेहतर थी। - चरण 2: HepaRG और H295R कोशिकाओं पर सत्यापन ने लिपिडोमिक्स और मेटाबोलामिक्स डेटा में उच्च प्रजनन क्षमता का प्रदर्शन किया, जैसा कि कसकर क्लस्टर किए गए पीसीए स्कोर द्वारा इंगित किया गया है।
Aflatoxin B1 और forskolin उपचार प्रभावी रूप से नियंत्रण से अलग थे, विधि की संवेदनशीलता और विश्वसनीयता को रेखांकित करते हुए।
माइक्रोप्लेट सोनिकेटर UIP400MTP उच्च-थ्रूपुट सेल टुकड़ी के लिए
“Hielscher UIP400MTP sonication डिवाइस मैनुअल सेल स्क्रैपिंग के "स्वर्ण मानक" के लिए एक उच्च-गुणवत्ता और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य वैकल्पिक दृष्टिकोण प्रदान करता है, जिससे आरएनए, कुल लिपिड और कुल ध्रुवीय चयापचयों की उच्च पैदावार होती है।” (क्रूचली-फ्यूज एट अल., 2024)
Cruchley-Fuge एट अल पक्षपाती सेल प्रसंस्करण के लिए UIP400MTP sonicator के फायदों पर प्रकाश डाला. मैनुअल स्क्रैपिंग की जगह, यह विधि प्रजनन क्षमता, थ्रूपुट और उपज को बढ़ाती है, जिससे यह प्रेसिजनटॉक्स जैसे बड़े पैमाने पर अध्ययन के लिए एक अमूल्य उपकरण बन जाता है। स्वचालित वर्कफ़्लोज़ में UIP400MTP का एकीकरण न केवल परिवर्तनशीलता को कम करता है, बल्कि श्रम-गहन प्रक्रियाओं को भी सुव्यवस्थित करता है, जिससे उच्च गुणवत्ता वाले मल्टी-ओमिक्स डेटा अधिग्रहण को सक्षम किया जाता है।
Cruchley-Fuge et al. (2024) का काम मल्टी-ओमिक्स विश्लेषण के लिए आसन्न सेल संस्कृतियों के प्रसंस्करण को सुविधाजनक और सुव्यवस्थित करता है। स्वचालित वर्कफ़्लोज़ के साथ UIP400MTP सोनिकेटर का एकीकरण लगातार और कुशल नमूना तैयार करना सुनिश्चित करता है, जिससे यह उच्च-थ्रूपुट विष विज्ञान अनुसंधान के लिए आदर्श रूप से अनुकूल हो जाता है।
UIP400MTP अल्ट्रासोनिक स्नान नहीं है। यह केंद्रित सोनिकेशन के लिए एक उच्च तीव्रता वाला कप हॉर्न है। यह शक्तिशाली गैर-संपर्क सोनिकेटर आपके मानक अच्छी तरह से प्लेट के सभी कुओं में एक समान सोनिकेशन प्रदान करता है। आपके पास आयाम, शक्ति और स्पंदन पर सटीक नियंत्रण है। एक अंतर्निहित टाइमर और तापमान जांच लगातार परिणाम सुनिश्चित करती है। UIP400MTP प्लेट सोनिकेटर पानी के स्नान (बाहरी चिलर वैकल्पिक) के साथ नमूनों को ठंडा करता है।
डिजाइन, विनिर्माण और परामर्श – गुणवत्ता जर्मनी में निर्मित
Hielscher अल्ट्रासोनिकेटर अपने उच्चतम गुणवत्ता और डिजाइन मानकों के लिए प्रसिद्ध हैं। मजबूती और आसान संचालन औद्योगिक सुविधाओं में हमारे अल्ट्रासोनिकेटर के सुचारू एकीकरण की अनुमति देता है। किसी न किसी स्थिति और मांग वातावरण आसानी से Hielscher ultrasonicators द्वारा नियंत्रित कर रहे हैं।
Hielscher Ultrasonics एक आईएसओ प्रमाणित कंपनी है और अत्याधुनिक प्रौद्योगिकी और उपयोगकर्ता-मित्रता की विशेषता वाले उच्च प्रदर्शन वाले सोनिकेटर पर विशेष जोर देती है। बेशक, Hielscher अल्ट्रासोनिकेटर सीई के अनुरूप हैं और उल, सीएसए और RoHs की आवश्यकताओं को पूरा करते हैं।
सेल स्क्रैपिंग के बिना उच्च-थ्रूपुट सेल टुकड़ी – UIP400MTP सोनिकेटर प्रयोगशाला के काम की सुविधा प्रदान करता है।
साहित्य/सन्दर्भ
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- Lauren E. Cruchley-Fuge, Martin R. Jones, Ossama Edbali, Gavin R. Lloyd, Ralf J. M. Weber, Andrew D. Southam, Mark R. Viant (2024): Automated extraction of adherent cell lines from 24-well and 96-well plates for multi-omics analysis using the Hielscher UIP400MTP sonicator and Beckman Coulter i7 liquid handling workstation. Metabomeeting 2024, University of Liverpool, 26-28th November 2024.
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अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न
सेल डिटैचमेंट क्या है?
अनुसंधान में सेल टुकड़ी एक संस्कृति पोत या सब्सट्रेट की सतह से आसन्न कोशिकाओं को अलग करने की प्रक्रिया को संदर्भित करता है। यह आमतौर पर विश्लेषण, उपसंस्कृति, या क्रायोप्रिजर्वेशन जैसे डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों के लिए कोशिकाओं की कटाई के लिए किया जाता है। सेल प्रकार और अनुसंधान आवश्यकताओं के आधार पर, एंजाइमेटिक तरीकों (जैसे, ट्रिप्सिन), रासायनिक एजेंटों (जैसे, ईडीटीए), यांत्रिक तरीकों (जैसे, स्क्रैपिंग), या सोनिकेशन जैसी भौतिक तकनीकों का उपयोग करके टुकड़ी प्राप्त की जा सकती है।
आप पक्षपाती कोशिकाओं को कैसे अलग करते हैं?
सोनिकेशन का उपयोग करके पक्षपाती कोशिकाओं को अलग करने में एक नियंत्रित वातावरण के भीतर सेल-सतह आसंजन को बाधित करने के लिए केंद्रित अल्ट्रासाउंड तरंगों का अनुप्रयोग शामिल है। विशेष रूप से, UIP400MTP माइक्रोप्लेट सोनिकेटर स्थानीयकृत यांत्रिक कंपन उत्पन्न करके इसे प्राप्त करता है जो कोशिकाओं और संस्कृति की सतह के बीच के बंधन को तोड़ता है। प्रमुख चरणों में शामिल हैं:
- तैयारी: कोशिकाओं बहु अच्छी तरह से प्लेटों में उगाया जाता है और प्रयोगात्मक डिजाइन के हिस्से के रूप में विशिष्ट रसायनों के संपर्क में किया जा सकता है.
- सॉनिकेशन: सोनिकेटर UIP400MTP को अनुकूलित सेटिंग्स (जैसे, 60% शक्ति) के साथ प्रोग्राम किया जाता है ताकि कोशिकाओं को नुकसान पहुंचाए बिना या बायोमोलेक्यूल अखंडता से समझौता किए बिना प्रभावी टुकड़ी सुनिश्चित की जा सके।
- तापमान नियंत्रण: प्रक्रिया के दौरान गर्मी से प्रेरित सेल या आणविक गिरावट को रोकने के लिए डिवाइस तापमान स्थिरता बनाए रखता है।
- टुकड़ी के बाद: अलग कोशिकाओं को डाउनस्ट्रीम निष्कर्षण प्रोटोकॉल के अधीन किया जाता है, जैसे कि ब्लिग & डायर द्विध्रुवीय विधि, आरएनए, लिपिड और मेटाबोलाइट्स की वसूली के लिए।
यह विधि अपने स्वचालन, प्रजनन क्षमता और उच्च-थ्रूपुट नमूनों को कुशलतापूर्वक संसाधित करने की क्षमता के कारण मैनुअल स्क्रैपिंग से बेहतर है।
गैर-हानिकारक सेल डिटैचमेंट क्या है?
गैर-हानिकारक सेल टुकड़ी सेल व्यवहार्यता, अखंडता या कार्यक्षमता से समझौता किए बिना अपने सब्सट्रेट से पक्षपाती कोशिकाओं को अलग करने की प्रक्रिया को संदर्भित करता है। यह नियंत्रित सोनिकेशन या एंजाइम मुक्त समाधान जैसे कोमल तरीकों का उपयोग करके प्राप्त किया जाता है।
कोशिकाओं के संरक्षण के लिए कोशिका विनाश से बचना महत्वपूर्ण है’ संरचनात्मक और आणविक विशेषताएं, जो मल्टी-ओमिक्स विश्लेषण, कार्यात्मक परख, या चिकित्सीय उपयोग जैसे सटीक डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों के लिए आवश्यक हैं। क्षतिग्रस्त कोशिकाएं इंट्रासेल्युलर सामग्री जारी कर सकती हैं, संभावित रूप से प्रयोगात्मक परिणामों को भ्रमित कर सकती हैं या नमूना गुणवत्ता से समझौता कर सकती हैं।
एंजाइम-फ्री सेल डिटेचमेंट का लाभ क्या है?
एंजाइम मुक्त सेल टुकड़ी सेल सतह प्रोटीन और रिसेप्टर्स को संरक्षित करने, सेल व्यवहार्यता को बनाए रखने, और biomolecules के लिए संभावित एंजाइमेटिक क्षति से बचने सहित कई फायदे प्रदान करता है. यह दृष्टिकोण संवेदनशील डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों के लिए विशेष रूप से फायदेमंद है, जैसे प्रवाह साइटोमेट्री, प्रोटिओमिक्स, या कार्यात्मक परख, जहां एंजाइमी परिवर्तन डेटा गुणवत्ता या प्रयोगात्मक परिणामों से समझौता कर सकते हैं। इसके अतिरिक्त, एंजाइम-मुक्त विधियां अक्सर अधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य होती हैं और उच्च-थ्रूपुट वर्कफ़्लोज़ के लिए अनुकूलित की जा सकती हैं।
Hielscher Ultrasonics से उच्च प्रदर्शन अल्ट्रासोनिक homogenizers बनाती है प्रयोगशाला तक औद्योगिक आकार।