UIP400MTP सोनिकेटर का उपयोग करके प्रायनों का उच्च नमूना प्रसंस्करण क्षमता वाला पता लगाने के लिए PMCA

UIP400MTP मल्टी-वेल प्लेट सोनिकेटर प्रोटीन मिसफोल्डिंग चक्रीय प्रवर्धन (PMCA) में उच्च नमूना प्रसंस्करण क्षमता के साथ नमूना तैयार करने का एक शक्तिशाली समाधान प्रदान करता है। कई वेल में ऊर्जा का समान वितरण करके और सोनिकेशन के सटीक मापदंड बनाए रखकर, यह प्रणाली असाधारण पुनरुत्पादकता के साथ अनेक नमूनों का एक साथ प्रसंस्करण संभव बनाती है। लार जैसे चुनौतीपूर्ण जैविक नमूनों में कम सांद्रता पर प्रायनों का पता लगाने के लिए PMCA को अनुकूलित करने में ये क्षमताएँ अत्यंत महत्वपूर्ण हैं, क्योंकि ऐसे नमूनों में परीक्षण अवरोधक परिणामों को अस्पष्ट कर सकते हैं।

हिरण कुल के पशुओं में क्रॉनिक वेस्टिंग डिज़ीज़ (CWD) और मनुष्यों में क्रॉयत्सफेल्ट-जैकब रोग (CJD) जैसे प्रायन रोग, गलत तरीके से मुड़े हुए प्रायन प्रोटीन (PrP^Sc) के कारण होने वाले तंत्रिका अपक्षयी विकार हैं। इन रोगों में अक्सर लार, रक्त और मूत्र जैसे शारीरिक द्रवों में संक्रामक प्रायनों का स्तर कम होता है, जिससे निदान और अनुसंधान जटिल हो जाते हैं। पर्यावरणीय माध्यमों में उत्सर्जित प्रायनों के माध्यम से CWD के क्षैतिज संचरण के वन्यजीव प्रबंधन और पारिस्थितिक स्वास्थ्य पर विशेष रूप से महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ते हैं। इसी प्रकार, क्रॉयत्सफेल्ट-जैकब रोग जैसे रोगों में मानव नमूनों से गलत तरीके से मुड़े हुए प्रायन प्रोटीन का विश्वसनीय प्रवर्धन, निदान को आगे बढ़ाने और रोग की प्रगति को समझने के लिए अत्यंत आवश्यक है।

संशोधित PMCA प्रोटोकॉल का उपयोग सामान्य परीक्षण अवरोधकों (जैसे लार में म्यूसिन) के प्रभाव से बचने और ऐसे प्रायनों का पता लगाने में उच्च संवेदनशीलता प्राप्त करने में सक्षम बनाता है, जिनका अन्यथा रियल-टाइम क्वेकिंग-इंड्यूस्ड कन्वर्ज़न (RT-QuIC) जैसी तकनीकों से पता नहीं चल पाता या जिनके पहचान परिणाम अस्पष्ट होते हैं। ये प्रगतियाँ विभिन्न रोगों में प्रायनों का पता लगाने की क्षमता बढ़ाती हैं और PMCA को प्रायन अनुसंधान तथा निदान के लिए एक अपरिहार्य साधन बनाती हैं। मल्टी-वेल प्लेट सोनिकेटर UIP400MTP माइक्रोप्लेटों (जैसे 6-, 24- या 96-वेल प्लेटों) या ट्यूब रैक में रखी वायल में अनेक नमूनों का सोनिकेशन करके उच्च नमूना प्रसंस्करण क्षमता वाला PMCA सुगम बनाता है।

उच्च नमूना प्रसंस्करण क्षमता वाले प्रोटीन मिसफोल्डिंग चक्रीय प्रवर्धन (PMCA) के लिए प्रोटोकॉल

निम्नलिखित प्रोटोकॉल सुदृढ़ अनुसंधान परिणामों के लिए बिल्कुल समान परिस्थितियों में बड़ी संख्या में नमूनों का कुशल प्रसंस्करण संभव बनाता है।

नमूना तैयारी

प्रारंभिक सामग्री:
नमूने इस प्रकार तैयार करें:

• PMCA सब्सट्रेट में सार्कोसिल निष्कर्षण पेलेट को पुनः निलंबित करके।
• मस्तिष्क होमोजेनेट या रक्त के नमूनों में सीधे प्रायन सीड मिलाकर।

सब्सट्रेट:

• 10% (wt/vol) मस्तिष्क होमोजेनेट का उपयोग करें, जो PrP^C की अतिअभिव्यक्ति करने वाले ट्रांसजेनिक चूहों (जैसे Tg चूहों) से तैयार किया गया हो।
• मस्तिष्क ऊतक को निम्नलिखित में होमोजेनाइज़ करें:
  – 1× PBS।
  – 150 mM NaCl।
  – 1% Triton X-100।
• उपयोग तक सब्सट्रेट को -80ºC पर संग्रहित करें।

माइक्रोप्लेट या ट्यूब में नमूना व्यवस्था:
ट्यूब:

• 90 μL मस्तिष्क होमोजेनेट सब्सट्रेट डालें और उसमें 10 μL नमूना (जैसे रक्त, मस्तिष्क होमोजेनेट या सार्कोसिल पेलेट) मिलाकर सीड करें।
• प्रत्येक 0.2 mL ट्यूब में 3 Teflon बीड (1.59-mm या 2.38-mm व्यास वाले) रखें।
• ट्यूबों को UIP400MTP सोनिकेटर के अनुकूल रैक में लगाएँ।

6-वेल माइक्रोप्लेट:

• प्रत्येक वेल में 5 mL मस्तिष्क होमोजेनेट सब्सट्रेट डालें और 500 μL नमूना मिलाकर सीड करें।
• प्रत्येक वेल में 3 Teflon बीड डालें।

PMCA प्रक्रिया

स्थापन:
निर्माता के निर्देशों के अनुसार ट्यूब रैक या 6-वेल माइक्रोप्लेट को UIP400MTP सोनिकेटर में रखें।

चक्रण प्रोग्राम:
144 PMCA चक्र निम्नानुसार चलाएँ:

• इन्क्यूबेशन: 37°C पर 29 मिनट और 30 सेकंड।
• सोनिकेशन: 60% आयाम पर 30 सेकंड।
• तापमान की निगरानी करें: नमूने के तापमान की निगरानी के लिए प्लग से जुड़ने वाले तापमान सेंसर का उपयोग करें और UIP400MTP को अधिकतम 48–50°C तापमान के लिए प्रोग्राम करें।

बाद के दौर:
144 चक्रों का पहला दौर पूरा करने के बाद, प्रवर्धित सामग्री का एक अंश स्थानांतरित करें:

• ताज़े ट्रांसजेनिक चूहे के मस्तिष्क होमोजेनेट सब्सट्रेट में 10 गुना तनु करें।
• सोनिकेशन के वही मापदंड बनाए रखते हुए बाद के दौरों के लिए 96 PMCA चक्र चलाएँ।
• वांछित संख्या में दौर पूरे होने तक जारी रखें (आमतौर पर 5 तक)।

पहचान: PrP^Sc

1. Proteinase K पाचन:
   – नमूनों को Proteinase K (50 μg/mL) से 37°C पर 1 घंटे तक उपचारित करें।
   – SDS-सैंपल बफर मिलाकर और 10 मिनट तक उबालकर पाचन समाप्त करें।
2. वेस्टर्न ब्लॉट विश्लेषण:
   – पाचित नमूनों का विश्लेषण निम्नलिखित का उपयोग करके करें:
   – 6H4 या PRC1 एंटी-PrP एंटीबॉडी।
   – SDS-PAGE करें और पहचान के लिए PVDF झिल्लियों पर स्थानांतरित करें।

 

Hielscher UIP400MTP आपकी बहु-कूप प्लेटों, PCR प्लेटों या नमूना नलिकाओं के लिए सबसे बहुउपयोगी सोनिकेटर है। 400 वाट के निरंतर सोनिकेशन आउटपुट के साथ इसे कोशिका लयन, पायसीकरण, प्रोटीन निष्कर्षण, DNA / RNA विखंडन, कणसमूहों के विघटन, FFPE निष्कर्षण, कोशिकाओं और जैवपरतों को अलग करने या पायसीकरण जैसे अनुप्रयोगों के लिए बनाया गया है। UIP400MTP एक पराश्रव्य स्नान नहीं है। यह केंद्रित सोनिकेशन के लिए उच्च तीव्रता वाला कप हॉर्न है। यह शक्तिशाली संपर्करहित सोनिकेटर आपकी मानक बहु-कूप प्लेट के सभी कूपों में एकसमान सोनिकेशन प्रदान करता है। आयाम, शक्ति और स्पंदन पर आपका सटीक नियंत्रण रहता है। अंतर्निर्मित टाइमर और तापमान प्रोब सुसंगत परिणाम सुनिश्चित करते हैं। UIP400MTP प्लेट सोनिकेटर जल स्नान से नमूनों को ठंडा करता है, और बाहरी शीतलक वैकल्पिक है।

 

अधिक सुदृढ़ परिणामों के लिए अधिक नमूने संसाधित करें

UIP400MTP मल्टी-वेल प्लेट सोनिकेटर प्रोटीन मिसफोल्डिंग चक्रीय प्रवर्धन (PMCA) की दक्षता और प्रसंस्करण का पैमाना बढ़ाने की क्षमता को उल्लेखनीय रूप से बढ़ाता है, जिससे इस प्रक्रिया में परंपरागत रूप से लगने वाले अधिक समय की समस्या का समाधान होता है। 96-वेल प्लेट में एक साथ 96 तक नमूनों का प्रसंस्करण संभव बनाकर, यह प्रणाली सभी वेल में सोनिकेशन की सटीक और समान परिस्थितियाँ बनाए रखते हुए PMCA कार्यप्रवाहों को सुव्यवस्थित करती है। यह उच्च नमूना प्रसंस्करण क्षमता हाथ से किए जाने वाले कार्य को न्यूनतम करती है, श्रमसाध्य चरणों को कम करती है और पुनरुत्पादकता सुनिश्चित करती है, जिससे यह प्रायन अनुसंधान के लिए एक अपरिहार्य साधन बन जाता है। चाहे क्रॉनिक वेस्टिंग डिज़ीज़ की जाँच की जा रही हो या क्रॉयत्सफेल्ट-जैकब रोग की, UIP400MTP अधिक दक्षता के साथ बड़े पैमाने पर अध्ययन सुगम बनाता है, जिससे शोधकर्ता आधुनिक नैदानिक और वैज्ञानिक अनुप्रयोगों की आवश्यकताओं को पूरा कर सकते हैं।

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