न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता (एमआईसी) परख प्रोटोकॉल

बायोफिल्म आधारित न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता (एमआईसी) परख बायोफिल्म से जुड़े सूक्ष्मजीवों के खिलाफ रोगाणुरोधी एजेंटों की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करने के लिए एक आवश्यक तरीका है, जो उनके सुरक्षात्मक बाह्य मैट्रिक्स के कारण बढ़े हुए प्रतिरोध का प्रदर्शन करते हैं। इस परख में एक महत्वपूर्ण कदम सटीक व्यवहार्यता मूल्यांकन के लिए एम्बेडेड कोशिकाओं को जारी करने के लिए बायोफिल्म संरचनाओं का विघटन है। UIP400MTP मल्टी-वेल प्लेट सोनिकेटर नियंत्रित गुहिकायन उत्पन्न करने के लिए केंद्रित अल्ट्रासाउंड को नियोजित करके, बायोफिल्म कोशिकाओं को कुशलतापूर्वक अलग करके और उन्हें एक समान निलंबन में फैलाकर इस प्रक्रिया को सुविधाजनक बनाता है। यह सटीक और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य बायोफिल्म व्यवधान एमआईसी परख की विश्वसनीयता और थ्रूपुट को बढ़ाता है, जिससे UIP400MTP बायोफिल्म अनुसंधान को आगे बढ़ाने में एक आवश्यक उपकरण बन जाता है।

बायोफिल्म डिटैचमेंट के लिए सोनिकेशन

बायोफिल्म आधारित एमआईसी परख आमतौर पर चढ़ाना, कॉलोनी गिनती, या ऑप्टिकल घनत्व माप जैसे तरीकों का उपयोग करके जीवाणु व्यवहार्यता या विकास अवरोध को मापता है। बायोफिल्म से जुड़े सूक्ष्मजीवों की रोगाणुरोधी संवेदनशीलता का आकलन करते समय बायोफिल्म-आधारित एमआईसी परख में सोनिकेशन एक महत्वपूर्ण कदम है। इसका प्राथमिक कार्य सटीक विश्लेषण के लिए बायोफिल्म मैट्रिक्स में एम्बेडेड कोशिकाओं को एक समान निलंबन में अलग करना और फैलाना है।
बायोफिल्म प्लवक कोशिकाओं की तुलना में रोगाणुरोधी एजेंटों के लिए काफी अधिक प्रतिरोधी हैं, जिससे सटीक विश्लेषण के लिए उचित टुकड़ी महत्वपूर्ण हो जाती है। इस प्रक्रिया के दौरान, अल्ट्रासोनिक तरंगें नियंत्रित गुहिकायन उत्पन्न करती हैं, बायोफिल्म मैट्रिक्स को तोड़ती हैं और रिकवरी माध्यम के भीतर एक समान निलंबन में एम्बेडेड कोशिकाओं को जारी करती हैं। यह कदम चढ़ाना, कमजोर पड़ने और कॉलोनी गिनती जैसे तरीकों के माध्यम से बायोफिल्म-छितरी हुई कोशिकाओं के सटीक व्यवहार्यता आकलन को सक्षम बनाता है। सोनिकेशन के माध्यम से उचित बायोफिल्म व्यवधान अवशिष्ट मैट्रिक्स घटकों को कोशिकाओं को परिरक्षण से रोकता है, जो अन्यथा रोगाणुरोधी गतिविधि को कम करके आंका जा सकता है। मल्टी-वेल प्लेट सोनिकेटर UIP400MTP इस उद्देश्य के लिए विशेष रूप से अच्छी तरह से अनुकूल है, जो परख प्लेटों की विश्वसनीय और उच्च-थ्रूपुट तैयारी सुनिश्चित करने के लिए सटीक और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य सोनीशन स्थितियों की पेशकश करता है।

बायोफिल्म आधारित न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता परख में सोनिकेशन क्यों आवश्यक है

व्यवहार्यता माप और सेल गिनती के लिए, एकल कोशिकाओं की एक पूर्ण और विश्वसनीय टुकड़ी और फैलाव की आवश्यकता होती है। UIP400MTP मजबूत परख परिणामों के लिए एक समान, गैर-हानिकारक बायोफिल्म टुकड़ी और सेल फैलाव को बढ़ावा देता है।

• बायोफिल्म जटिलता: बायोफिल्म एक बाह्य बहुलक पदार्थ (ईपीएस) मैट्रिक्स में संलग्न संरचित माइक्रोबियल समुदाय हैं, जो सूक्ष्मजीवों की रक्षा करता है और उन्हें रोगाणुरोधी एजेंटों के लिए अधिक प्रतिरोधी बनाता है।
• वर्दी फैलाव: बायोफिल्म-एम्बेडेड कोशिकाओं की व्यवहार्यता या रोगाणुरोधी के लिए उनकी संवेदनशीलता को सटीक रूप से मापने के लिए, बायोफिल्म को पहले उखाड़ फेंकना चाहिए और एक सजातीय निलंबन में टूट जाना चाहिए।

बायोफिल्म आधारित न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता परख प्रोटोकॉल

न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता (एमआईसी) परख सूक्ष्मजीवों के दृश्य विकास को बाधित करने के लिए आवश्यक रोगाणुरोधी एजेंट की सबसे कम एकाग्रता निर्धारित करता है। यह प्रोटोकॉल बायोफिल्म से जुड़े सूक्ष्मजीवों के लिए डिज़ाइन किया गया है, बायोफिल्म व्यवधान के लिए UIP400MTP बहु-अच्छी प्लेट सोनिकेटर का उपयोग करके।

चरण 1: बैक्टीरियल इनोकुलम की तैयारी

1. बैक्टीरियल सस्पेंशन तैयार करें:
   मध्य-लघुगणक चरण में उपयुक्त मीडिया में बैक्टीरिया विकसित करें।
   एक मानकीकृत सेल घनत्व (जैसे, 0.5 मैकफारलैंड मानक या OD600 ~ 0.1) प्राप्त करने के लिए संस्कृति को पतला करें।
2. रोगाणुरोधी समाधान तैयार करें:
   सांद्रता की एक श्रृंखला बनाने के लिए एक उपयुक्त माध्यम में रोगाणुरोधी एजेंट को पतला करें (जैसे, दो गुना धारावाहिक dilutions)।
3. 96 अच्छी प्लेट में बांटना:
   ~ 150-200 माइक्रोन की अंतिम अच्छी मात्रा के साथ, एक मानक 96-अच्छी प्लेट के कुओं में रोगाणुरोधी समाधान जोड़ें।
   विकास नियंत्रण (कोई रोगाणुरोधी नहीं) और बाँझपन नियंत्रण (कोई बैक्टीरियल इनोकुलम नहीं) शामिल करें।

चरण 2: खूंटी ढक्कन पर बायोफिल्म गठन

• खूंटी ढक्कन संलग्न करें:
  टीका कुओं पर विशेष खूंटी ढक्कन रखें, यह सुनिश्चित करना कि खूंटे बैक्टीरिया निलंबन में पूरी तरह से डूबे हुए हैं।
• प्लेट सेते हैं:
  खूंटे पर बायोफिल्म गठन की अनुमति देने के लिए स्थिर परिस्थितियों में एक निर्दिष्ट अवधि (जैसे, 24 घंटे) के लिए उचित तापमान (जैसे, 37 डिग्री सेल्सियस) पर सेते हैं।

चरण 3: रोगाणुरोधी एक्सपोजर

• खूंटे कुल्ला:
  बैक्टीरियल निलंबन से खूंटी ढक्कन निकालें और धीरे बाँझ खारा या पीबीएस में कुल्ला, शिथिल संलग्न प्लवक कोशिकाओं को हटाने के लिए.
• रोगाणुरोधी के संपर्क में आना:
  खूंटी ढक्कन को एक नई 96 अच्छी प्लेट में स्थानांतरित करें जिसमें पहले तैयार किए गए रोगाणुरोधी कमजोर पड़ने हों।
  रोगाणुरोधी एजेंट को बायोफिल्म पर कार्य करने की अनुमति देने के लिए स्थिर परिस्थितियों में एक परिभाषित अवधि (जैसे, 24 घंटे) के लिए इनक्यूबेट करें।

चरण 4: माइक्रोप्लेट सोनिकेटर UIP400MTP के साथ सोनिकेशन

व्यवहार्यता का आकलन करने के लिए खूंटी ढक्कन से बायोफिल्म को अलग करने के लिए सोनीशन कदम महत्वपूर्ण है। UIP400MTP sonicator के लिए, निम्न चरणों का पालन करें:

1. सेटअप तैयार करें:
   प्रत्येक अच्छी तरह से वसूली माध्यम (जैसे, शोरबा या बाँझ विकास माध्यम को बेअसर करने) के साथ एक ताजा 96 अच्छी तरह से थाली भरें.
2. खूंटी ढक्कन को स्थानांतरित करें:
   रोगाणुरोधी उपचार प्लेट से खूंटी ढक्कन निकालें।
   अवशिष्ट रोगाणुरोधी एजेंटों को हटाने के लिए बाँझ खारा या पीबीएस में खूंटी ढक्कन कुल्ला।
3. प्लेट को सोनिकेटर में रखें:
   खूंटी ढक्कन को वसूली मध्यम प्लेट में संलग्न करें।
   रिकवरी मीडियम प्लेट को UIP400MTP सोनिकेटर में रखें, यह सुनिश्चित करें कि प्लेट वर्णित मैनुअल के अनुसार केंद्रित और स्थिर बैठती है।
4. सोनीशन मापदंडों को समायोजित करें:
   UIP400MTP पर सोनीशन पैरामीटर सेट करें (सेटिंग्स को बायोफिल्म में समायोजित किया जा सकता है):
   आयाम: 70-100%।
   सोनिकेशन समय: चक्र मोड में 1-3 मिनट (बायोफिल्म संरचना के आधार पर समायोजित करें)।
5. सोनिकेट:
   सोनीशन प्रक्रिया शुरू करें। अल्ट्रासोनिक तरंगें बायोफिल्म मैट्रिक्स को बाधित करेंगी और कोशिकाओं को पुनर्प्राप्ति माध्यम में हटा देंगी।
6. प्रक्रिया की निगरानी करें:
   कुओं में नमूना तापमान की निगरानी के लिए प्लग करने योग्य तापमान संवेदक का उपयोग करें। UIP400MTP को ठंडा करने के लिए लैब चिलर से जोड़ा जा सकता है।
7. पोस्ट-सोनीशन हैंडलिंग:
   तुरंत बाद के विश्लेषण के लिए एक ताजा बाँझ थाली में अलग biofilms युक्त वसूली माध्यम हस्तांतरण.

(ए) बायोफिल्म गठन, सेल रिकवरी, और एमआईसी और एमबीईसी के निर्धारण के लिए उपयोग किए जाने वाले 2% ग्लूकोज के साथ टीएसबी युक्त प्लेट; (बी) स्टेफिलोकोकल बायोफिल्म के गठन के लिए पिन के साथ ढक्कन।
पिंस पर गठित बायोफिल्म कोशिकाओं को कोशिकाओं की वसूली के लिए ताजा संस्कृति माध्यम युक्त 96-अच्छी प्लेटों में 5 मिनट के लिए सोनिकेशन (हिल्स्चर अल्ट्रासाउंड टेक्नोलॉजी) द्वारा उखाड़ फेंका गया था।
(चित्र और अध्ययन: ©डी ओलिवेरा एट अल।

चरण 4: व्यवहार्यता आकलन

प्लेट और संस्कृति अलग बायोफिल्म्स:

1. कॉलोनी बनाने इकाइयों (सीएफयू) की गणना करने के लिए अगर पर वसूली माध्यम और प्लेट के धारावाहिक कमजोर पड़ने प्रदर्शन.
2. एमआईसी का मूल्यांकन करें:
   एमआईसी को सबसे कम रोगाणुरोधी एकाग्रता के रूप में निर्धारित करें जो वसूली माध्यम में दृश्यमान माइक्रोबियल विकास को पूरी तरह से रोकता है।

एमआईसी न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता: माइक्रोटिटर प्लेट का उदाहरण और माइक्रोडिल्यूशन परिणामों की व्याख्या।
(अध्ययन और छवि: ©जैस्किविक्ज़ एट अल 2019)

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यहां पढ़ें कि एएसटीएम ई 2799 प्रोटोकॉल में बायोफिल्म टुकड़ी के लिए UIP400MTP का उपयोग कैसे किया जाता है – एमबीईसी परख का उपयोग करके स्यूडोमोनास एरुगिनोसा बायोफिल्म के खिलाफ कीटाणुनाशक प्रभावकारिता का परीक्षण।