MBEC परख प्रोटोकॉल 96 अच्छी तरह से प्लेट Sonicator UIP400MTP का उपयोग कर

MBEC परख खूंटी ढक्कन पर गठित biofilms को खत्म करने के लिए आवश्यक रोगाणुरोधी एजेंटों की एकाग्रता निर्धारित करने के लिए प्रयोग किया जाता है. बायोफिल्म व्यवहार्यता का आकलन करने के लिए, बायोफिल्म को पहले 96-अच्छी प्लेट के खूंटी ढक्कन से अलग किया जाना चाहिए। इस टुकड़ी के लिए सोनिकेशन सबसे विश्वसनीय और कुशल तरीका है। मल्टी-वेल प्लेट सोनिकेटर UIP400MTP विशेष रूप से अधिकतम दक्षता और सुविधा के साथ परख प्लेटों को संसाधित करने के लिए डिज़ाइन किया गया है, उच्च-थ्रूपुट एमबीईसी परख को सुव्यवस्थित और तेज करता है।

बायोफिल्म डिटैचमेंट के लिए सोनिकेशन

सोनिकेशन न्यूनतम बायोफिल्म उन्मूलन एकाग्रता (एमबीईसी) assays में एक महत्वपूर्ण कदम है, जो बायोफिल्म कोशिकाओं को उनकी सतह के लगाव से प्रभावी रूप से हटाने में सक्षम बनाता है। बायोफिल्म एक बाह्य मैट्रिक्स में संलग्न सूक्ष्मजीवों के स्वाभाविक रूप से संरचित समुदाय हैं, जो उन्हें प्लवक कोशिकाओं की तुलना में रोगाणुरोधी एजेंटों के लिए काफी अधिक प्रतिरोधी बनाता है। एमबीईसी परख के दौरान, सोनिकेशन नियंत्रित गुहिकायन उत्पन्न करने के लिए अल्ट्रासोनिक तरंगों का उपयोग करता है, बायोफिल्म मैट्रिक्स को बाधित करता है और एम्बेडेड कोशिकाओं को निलंबन में जारी करता है। यह कदम सुनिश्चित करता है कि बायोफिल्म कोशिकाओं को समान रूप से वसूली माध्यम में फैलाया जाता है, चढ़ाना, कमजोर पड़ने, या स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक तरीकों के माध्यम से सटीक व्यवहार्यता आकलन की सुविधा। उचित बायोफिल्म टुकड़ी के बिना, अवशिष्ट मैट्रिक्स घटक कोशिकाओं को ढाल सकते हैं, जिससे रोगाणुरोधी प्रभावकारिता को कम करके आंका जा सकता है। इसलिए, विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य एमबीईसी मूल्यों को प्राप्त करने के लिए सोनिकेशन अपरिहार्य है, जो परीक्षण किए गए एजेंटों की वास्तविक उन्मूलन क्षमता को दर्शाता है। मल्टी-वेल प्लेट सोनिकेटर UIP400MTP परख प्लेटों में आसान उच्च-थ्रूपुट नमूना तैयार करने की अनुमति देता है।

न्यूनतम बायोफिल्म उन्मूलन एकाग्रता (MBEC) परख प्रोटोकॉल

चरण 1: बायोफिल्म गठन

1. बैक्टीरियल सस्पेंशन तैयार करें:
   लॉग-चरण विकास के लिए उपयुक्त मीडिया में बैक्टीरिया विकसित करें।
   जीवाणु संस्कृति को एक परिभाषित ऑप्टिकल घनत्व (जैसे, OD600 ~ 0.1) में पतला करें।
2. 96 अच्छी तरह से थाली टीका लगाना:
   एक मानक 96 अच्छी तरह से microtiter थाली के प्रत्येक अच्छी तरह से में बैक्टीरियल निलंबन (जैसे, 150-200 μL) जोड़ें.
3. खूंटी ढक्कन संलग्न करें:
   खूंटी सतहों पर बायोफिल्म गठन की अनुमति देने के लिए टीका प्लेट पर खूंटी ढक्कन रखें।
4. प्लेट सेते हैं:
   बायोफिल्म विकास को बढ़ावा देने के लिए झटकों के बिना 24-48 घंटे के लिए एक उचित तापमान (जैसे, 37 डिग्री सेल्सियस) पर सेटअप सेते हैं।

चरण 2: रोगाणुरोधी एजेंटों के साथ उपचार

• रोगाणुरोधी समाधान तैयार करें:
  ताजा मीडिया में रोगाणुरोधी सांद्रता की एक श्रृंखला तैयार करें।
  बायोफिल्म को रोगाणुरोधी एजेंटों के सामने उजागर करें:
  जीवाणु संस्कृति से खूंटी ढक्कन निकालें और प्लवक कोशिकाओं को हटाने के लिए बाँझ खारा या पीबीएस में यह कुल्ला.
  खूंटी ढक्कन को रोगाणुरोधी समाधान युक्त एक नई 96-अच्छी प्लेट में रखें।
• प्लेट सेते हैं:
  रोगाणुरोधी जोखिम की अनुमति देने के लिए एक परिभाषित अवधि (जैसे, 24 घंटे) के लिए इनक्यूबेट करें।

चरण 3: 96 अच्छी तरह से प्लेट Sonicator UIP400MTP के साथ Sonication

व्यवहार्यता का आकलन करने के लिए खूंटी ढक्कन से बायोफिल्म को अलग करने के लिए सोनीशन कदम महत्वपूर्ण है। UIP400MTP sonicator के लिए, निम्न चरणों का पालन करें:

1. सेटअप तैयार करें:
   प्रत्येक कुएं में वसूली माध्यम (जैसे, शोरबा या ताजा विकास माध्यम को बेअसर करने) के साथ एक ताजा 96-अच्छी तरह से प्लेट भरें।
2. खूंटी ढक्कन को स्थानांतरित करें:
   रोगाणुरोधी उपचार प्लेट से खूंटी ढक्कन निकालें।
   अवशिष्ट रोगाणुरोधी एजेंटों को हटाने के लिए बाँझ खारा या पीबीएस में खूंटी ढक्कन कुल्ला।
3. प्लेट और सोनिकेटर की स्थिति बनाएं:
   खूंटी ढक्कन को वसूली मध्यम प्लेट में संलग्न करें।
   रिकवरी मीडियम प्लेट को UIP400MTP सोनिकेटर प्लेटफॉर्म पर रखें, यह सुनिश्चित करते हुए कि प्लेट केंद्रित और स्थिर है।
4. सोनीशन मापदंडों को समायोजित करें:
   UIP400MTP पर सोनीशन पैरामीटर सेट करें (सेटिंग्स को बायोफिल्म में समायोजित किया जा सकता है):
   आयाम: 70-100%।
   सोनिकेशन समय: चक्र मोड पर 1-3 मिनट (बायोफिल्म मजबूती के आधार पर समायोजित करें)।
5. सोनिकेट:
   सोनीशन प्रक्रिया शुरू करें। अल्ट्रासोनिक कंपन खूंटी सतहों से बायोफिल्म को वसूली माध्यम में हटा देगा।
6. प्रक्रिया की निगरानी करें:
   कुओं में नमूना तापमान की निगरानी के लिए प्लग करने योग्य तापमान संवेदक का उपयोग करें। UIP400MTP को ठंडा करने के लिए लैब चिलर से जोड़ा जा सकता है।
7. पोस्ट-सोनीशन हैंडलिंग:
   तुरंत वसूली माध्यम (अब अलग biofilms युक्त) बहाव विश्लेषण के लिए एक ताजा बाँझ थाली में हस्तांतरण.

(ए) बायोफिल्म गठन, सेल रिकवरी के लिए उपयोग किए जाने वाले 2% ग्लूकोज के साथ टीएसबी युक्त प्लेट, और
एमआईसी और एमबीसीबी का निर्धारण; (बी) स्टेफिलोकोकल बायोफिल्म के गठन के लिए पिन के साथ ढक्कन। एमआईसी और एमबीसीबी का निर्धारण; (बी) स्टेफिलोकोकल बायोफिल्म के गठन के लिए पिन के साथ ढक्कन।
पिंस पर गठित बायोफिल्म कोशिकाओं को कोशिकाओं की वसूली के लिए ताजा संस्कृति माध्यम युक्त 96-अच्छी प्लेटों में 5 मिनट के लिए सोनिकेशन (हिल्स्चर अल्ट्रासाउंड टेक्नोलॉजी) द्वारा उखाड़ फेंका गया था।
(चित्र और अध्ययन: ©डी ओलिवेरा एट अल।

चरण 4: व्यवहार्यता आकलन

प्लेट और संस्कृति अलग बायोफिल्म्स:

1. कॉलोनी बनाने इकाइयों (सीएफयू) की गणना करने के लिए अगर पर वसूली माध्यम और प्लेट के धारावाहिक कमजोर पड़ने प्रदर्शन.
   वैकल्पिक रूप से, एक वर्णमिति या प्रतिदीप्ति आधारित व्यवहार्यता परख का उपयोग करें.
2. रिकॉर्ड परिणाम:
   एमबीईसी को रोगाणुरोधी की सबसे कम एकाग्रता के रूप में निर्धारित करें जिसने पता लगाने योग्य बायोफिल्म व्यवहार्यता को मिटा दिया।

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