ટીશ્યુ અને સેલ કલ્ચર્સ તરફથી અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોટીન એક્સટ્રેક્શન

• પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ પ્રોટિઓમિક્સ આવશ્યક નમૂના તૈયારી પગલું છે.
• પ્રોટીન્સ વનસ્પતિ અને પ્રાણીઓના પેશીઓ, યીસ્ટ અને સુક્ષ્મ કાઢવામાં કરી શકાય છે.
• Sonication ટૂંકા નિષ્કર્ષણ સમય અંદર ઉચ્ચ પ્રોટીન ઉપજ આપતા એક વિશ્વસનીય, કાર્યક્ષમ પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ પદ્ધતિ છે.

પેશીઓ અને કોષોમાંથી પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ

પેશીઓ અને સંસ્કારી કોશિકાઓમાંથી પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ એક આવશ્યક નમૂના તૈયારી પગલું જેમાં ELISA, પાનું તેટલા બાયોકેમિકલ અને વિશ્લેષણાત્મક તકનીકો દરમિયાન કરવામાં આવે છે, પશ્ચિમી શાહીચૂસ, સામૂહિક spectrometry, અથવા પ્રોટીન શુદ્ધિકરણ. અલ્ટ્રાસોનિક સેલ ભંગાણ, lysis અને નિષ્કર્ષણ ચોક્કસ નિયંત્રણક્ષમ ટેકનિક પ્રોટીન ઊંચી ઉપજ ખાતરી કરવા માટે છે.

પ્રાણીઓની પેશીઓમાં માંથી પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ

સમગ્ર કદના પેશીઓ (દા.ત. કિડની, હૃદય, ફેફસાં, સ્નાયુ વગેરે) ની તૈયારી માટે, શુષ્ક સાધનો સાથે ખૂબ જ ટૂંકા ટુકડાઓમાં, બરફ પર પ્રાધાન્યથી, અને પ્રોટીઝ દ્વારા ડિગ્રેડેશન (દા.ત. જેમ કે આરઆઇપીએ અથવા હાયપોટોનિક લિસેસ બફર, પ્રોટીઝ અને ફોસ્ફેટસ ઇનિબિટર કોકટેઇલ). વિશ્લેષણ કર્યા પછી, નમૂના ત્વરિત ફ્રીઝ માટે પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં ડૂબી જાય છે. નમૂનાને પછીના ઉપયોગ માટે -80 ° સે પર સંગ્રહિત કરી શકાય છે અથવા તાત્કાલિક સમાંગીકરણ માટે બરફ પર રાખવું. અલ્ટ્રાસાનેસીક નિષ્કર્ષણ પહેલા તરત જ, બરફના ઠંડુ લિસિસ બફર (પ્રોટીઝ ઇન્હિબિટર્સ ડીટીટી, લ્યૂપ્પીટીન અને એરોટિનિન સાથે) ઝડપથી નમૂના ટ્યુબમાં ઉમેરવામાં આવે છે (દર ~ 10 મિલિગ્રામ પેશીઓ આશરે ~ 600 μL બફરની ભલામણ કરવામાં આવે છે). અંદાજે નમૂનાના નમૂના દીઠ 20-60 એમજીની ટીશ્યુની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
અલ્ટ્રાસોનિક સમાંગીકરણ, lysis અને નિષ્કર્ષણ જેમ કે અવાજ homogenizer સાથે કરવામાં આવે છે Uf200 ः ટી અથવા UP200Stએક માઇક્રો-ટિપ Sonotrode સાથે સજ્જ છે. Sonication સમયગાળો 60-90 સેકન્ડ છે. 15 સેકન્ડ એક અવાજ ચક્ર સ્થિતિ છે. sonication અને 10 સેકન્ડ. વિશ્રામી સમય. નમૂના બરફ તમામ સમય રાખવા જોઈએ.
અવાજ સમાંગીકરણ / નિષ્કર્ષણ પછી, lysate આશરે માટે 27,000g ખાતે સેન્ટ્રિફ્યુજ છે. 20 મિ. પછીથી supernatent એકત્રિત કરવામાં આવે છે, કે જેથી પ્રોટીન એકાગ્રતા જેમ પિયર્સ પ્રોટીન નિબંધ BCA તરીકે પ્રોટીન નિબંધ દ્વારા નક્કી કરી શકાય છે.

રક્ત સિઅરમ થી પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ

સીરમ અને ફોસ્ફેટ બફરના એક સમાન મિશ્રણ માટે, નમૂના અલ્ટ્રાસોનોગ્રાફી સેલ લિસિસ પહેલાં સૌપ્રથમ વક્રીત છે. અવાજ lysis માટે, નમૂના જેમ કે એક અલ્ટ્રાસોનોગ્રાફી લેબ homogenizer સાથે sonicated છે UP100H 20% કંપનવિસ્તાર ખાતે 8 ચક્ર પર દરેક 5 સેકન્ડ ચક્ર અને 15 સેકન્ડ બંધ છે. Sonocation ચક્રોમાં sonicationg અને બરફ પર નમૂના મૂકીને કે જેથી એક ઓવરહિટીંગ અને નમૂના થર્મલ અધઃપતન ટાળવામાં આવે છે દ્વારા હાથ ધરવામાં આવે છે. ત્યારથી સીરમ ઉચ્ચ પરમાણુ વજન પ્રોટીન (જેમ કે એલ્બુમિન, α1-antitrypsin, ટ્રાન્સ્ફેરીન, haptoglobulin, ઇમ્યુનોગ્લોબિન જી અને ઇમ્યુનોગ્લોબુલિન એક તરીકે), જે IEF દરમિયાન નીચા પરમાણુ વજન પ્રોટીન અલગ સાથે દખલ મોટી રકમ ધરાવે છે, તેને અવક્ષય માટે ભલામણ કરવામાં આવે છે સીરમ એક અવક્ષય સ્તંભ ઉપયોગ કરવાથી.

પ્લાન્ટ પેશીઓ માંથી પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ

તાજા, નરમ પ્લાન્ટ પેશીઓ, દા.ત. શેવાળ વગેરે, સરળતાથી ફક્ત sonication માટે lysis બફર માં સમારેલી નમૂના સામગ્રી મૂકીને ખોરવાયો શકાય છે. આવા બીજ, ફિર સોય વગેરે જેવા ખડતલ, ligenous પ્લાન્ટ પેશીઓ, શુષ્ક જમીન હોવી જોઈએ. કેટલાક મુશ્કેલ છે, લાકડાં પ્લાન્ટ સામગ્રી સ્થિર હોવું જ જોઈએ અને તેના ઉપર પ્રવાહી નાઇટ્રોજનના ગ્રાઉન્ડ પહેલાં sonication દ્વારા કાઢવામાં. છોડ કોષ સંસ્કૃતિ સસ્પેન્શન, એક lysis બફર 30 અને 150 સેકન્ડ વચ્ચે અવાજ સારવાર મોટે ભાગે પર્યાપ્ત છે. આવા કોળાના બીજ કારણ કે આકરા સામગ્રી વધુ તીવ્ર sonication કારણ કે નીચે વર્ણવેલ જરૂરી છે.

કોળાના બીજ માંથી એલ્બુમિન ના અવાજ નિષ્કર્ષણ માટે પ્રોટોકૉલ

ફાઇન-ગ્રાઉન્ડ કોળું બીજ પાવડર માંથી એલ્બુમિન ના અવાજ પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ માટે, defatted કોળું બીજ પાઉડર 10 ગ્રામ અને દ્રાવક તરીકે deionised પાણી 100 એમએલ એક 250ml કાચ કટોરો ઉમેરવામાં આવે છે. પ્રથમ, નમૂના એક ચકાસણી પ્રકારના ultrasonicator સાથે sonicated છે: પ્રોટિન નિષ્કર્ષણ બે પગલાં સમાવેશ થાય છે યુપી 40000 (400W, 24 કિલોગ્રામ) માઉન્ટ Sonotrode S24d7 સાથે. કાચ કટોરો અવાજ સમાંગીકરણ દરમિયાન ઠંડા પાણીની વાસણમાં મૂકવામાં આવે છે. ultrasonicator નિર્ધારિત UP400St પ્લગયોગ્ય તાપમાન સંવેદનાથી ખાતરી થઈ કે નમૂનાનું તાપમાન હંમેશા 30 ° સે નીચે રાખવામાં આવે છે. Sonication દરમિયાન ચોક્કસ તાપમાન નિયંત્રણ દ્વારા, એલ્બુમિન એક denaturation ટાળવામાં આવે છે. બીજું, 200 આરપીએમ ગતિએ મિક્સર અને 30 ડિગ્રી સેલ્સિયસ સાથે નિષ્કર્ષણ કરવામાં આવતું હતું. પછીથી બીકર થર્મોસ્ટેટિક ટાયર વિનાની સાઇકલ માં સ્થાનાંતરિત થાય છે. ગ્લોબ્યુલિનને નિસ્યંદિત પાણી સાથે ડાયાલિસિસ દ્વારા દૂર કરવામાં આવે છે. ગ્લોબ્યુલિન દૂર કર્યા પછી, ઍલ્બુમિન રૂપરેખાના નિર્ધારણ માટે પ્રોટીન ઉતારાને નમૂનારૂપ કરી શકાય છે અને ત્યારબાદ એલ્બુમિન કોગ્યુલેશન માટે 0.1 એમ એચસીએલનો ઉપયોગ કરીને પીઆઈ = 3.0 માં ગોઠવવામાં આવે છે. નક્કર તબક્કો 5000 ગ્રામ, 20 ડિગ્રી સેલ્સિયસમાં સેન્ટીરિફ્યુગેશનથી અલગ પડે છે અને ડીયોનેઇઝ્ડ પાણીમાં પુનઃમુદ્રિત થાય છે. આલ્બ્યુઇન કોન્સેન્ટરેટમાં પ્રોટીન રેશિયો વધારવા માટે આલ્બુમિન કોગ્યુલેશન બે વાર કરવામાં આવે છે.

અલ્ટ્રાસોનિક ચોખાની કુશકીમાંથી પ્રોટીન ઘટ્ટ તૈયાર કરવા માટે આલ્કલાઇન પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ બતાવે છે કે નોંધપાત્ર ટૂંકા નિષ્કર્ષણ સમય ઉચ્ચ પ્રોટીન ઉપજ અવાજ સારવાર પરિણામો – પરંપરાગત નિષ્કર્ષણ પદ્ધતિઓ સરખામણીમાં.

કાર્યાત્મક iNOS એન્ઝાઇમ માટે નમૂના તૈયારી પ્રોટોકોલ

સંપૂર્ણપણે કાર્યલક્ષી iNOS એન્ઝાઇમ (દવા સ્ક્રીનીંગ માટે દા.ત.) મેળવવા માટે, નીચેના પ્રોટોકોલ આગ્રહણીય છે: સેલ સસ્પેન્શન એક સાથે બરફ અને sonicate પર મૂકવામાં હોવું જોઈએ UP100H 5 સેકન્ડ ચક્ર સ્થિતિ પર 10μm કંપનવિસ્તાર ખાતે. sonication અને 25 સેકન્ડ. બરફ પર આરામ. પ્રક્રિયા આશરે પુનરાવર્તન કરવો જોઇએ. 3 વખત. sonication ચક્ર વચ્ચે આરામ સમય તાપમાનમાં થયેલા વધારા પાછળનું ઘટાડે છે અને તેથી ગુણવિકૃતીકરણ જોખમ ઘટાડો કરશે.

અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોટીન Solubilization

Sonication પ્રોટીન solubilization પ્રક્રિયા, કે જે સામાન્ય રીતે કેટલાક કલાકો માટે જરૂરી વેગ કરી શકો છો. ક્રમમાં નમૂના overheat અને અટકાવવા માટે નથી પ્રોટીન ડિગ્રેડેશન એન્ડ યુરિયા સમાવતી દ્રાવણમાં ફેરફારો માં, અવાજ ભડકો થોડીવાર કરતાં લાંબા સમય સુધી ટકી ન જોઈએ.

સામાન્ય સૂચનાઓ

તાપમાન નિયંત્રણ: થર્મલ ગુણવિકૃતીકરણ વગર ઊંચા પ્રોટીન ઉપજ ખાતરી કરવા માટે, નિષ્કર્ષણ પ્રક્રિયા દરમિયાન તાપમાનમાં નિયંત્રિત હોવું જ જોઈએ. Hielscher માતાનો રાજ્ય ઓફ ધ આર્ટ અવાજ homogenizers – પણ અવાજ disintegrator અથવા sonificator કહેવાય – ચોક્કસપણે નિયંત્રણક્ષમ છે. તેઓ એક plugable તાપમાન સેન્સર સાથે આવે છે. અવાજ homogenizer ના સેટિંગ વિકલ્પો માં, મહત્તમ તાપમાન સુયોજિત કરી શકાય છે. જ્યારે આ તાપમાન મહત્તમ સુધી પહોંચ્યાં છે, ultrasonicator આપોઆપ સુધી નમૂના નીચે ઠંડુ છે અટકી જાય છે.
બફર: યોગ્ય બફર અને બફર જમણી વોલ્યુમ choise પેશીઓ સાથે પેશી થી બદલાય અને figured આઉટ હોવા જ જોઈએ ટ્રાયલ-એન્ડ-એરર પરીક્ષણ દ્વારા.
આઇસોલેશનથી / શુદ્ધિકરણ: પ્રોટીન lysates જેમ ડીએનએ અથવા કાર્બોહાઈડ્રેટ કારણ કે જૈવિકઅણુઓ, જે પ્રોટીન ભેજપાત (deoxycholate-trichloroacetic એસિડ) દ્વારા દૂર કરવામાં આવી શકે એક વધારાનું સમાવી શકે છે અથવા વિનિમય બફર.

Chittapalo અને Noomhorm (2009) અહેવાલ આપ્યો હતો કે પ્રોટીન ઉપજ sonication મદદથી વધારો થયો છે અને અવાજ પેશી સમાંગીકરણ અને lysis પ્રક્રિયા વર્તમાન નિષ્કર્ષણ પ્રક્રિયાઓ નોંધપાત્ર વધારવા કરી શકો છો કે – નવા વ્યાપારી નિષ્કર્ષણ તકો માટે સક્ષમ બનાવે છે.

પ્રોટીન એક્સટ્રેક્શન માટે અવાજ સાધનો

Hielscher Ultrasonics કોશિકાઓ, પેશીઓ, બેક્ટેરિયા, સુક્ષ્મસજીવો, યીસ્ટના, અને બીજ વિઘટન માટે અવાજ homogenizers એક વ્યાપક શ્રેણી પૂરી પાડે છે.
Hielscher લેબ ultrasonicators શક્તિશાળી અને ચલાવવા માટે સરળ હોય છે. 24/7 કામગીરી માટે બાંધવામાં આવી છે, તેઓ મજબૂત અને કાર્યક્ષમ લેબ અને બેન્ચ-ટોપ ઉપકરણો તરીકે ડિઝાઇન કરવામાં આવે છે. બધા ઉપકરણો માટે, ઊર્જા આઉટપુટ અને કંપનવિસ્તાર ચોક્કસ નિયંત્રિત કરી શકાય છે. વ્યાપક શ્રેણી એસેસરીઝ વધુ સેટઅપ વિકલ્પો ખોલે છે. જેમ કે ડિજીટલ ઉપકરણો વીયલટેવેટર, Uf200 ः ટી, UP200St, અને UP400St એક સંકલિત તાપમાન નિયંત્રણ અને હોય બિલ્ટ-ઇન એસ.ડી. આપોઆપ માહિતી રેકોર્ડિંગ માટે કાર્ડ.
પરોક્ષ, ક્રોસ દૂષણ મુક્ત અને બહુવિધ નમૂનાઓની સાથે sonication માટે, અમે ઓફર વીયલટેવેટર અથવા અલ્ટ્રાસોનિક cuphorn.
તમારી એપ્લિકેશન, સામગ્રી અને નમૂના વોલ્યુમ પર આધાર રાખીને, અમે તમને તમારા નમૂના પ્રેપ માટે સૌથી યોગ્ય સુયોજિત ભલામણ કરશે. આજે અમારો સંપર્ક કરો!