પેશી અને કોષ સંસ્કૃતિઓમાંથી અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ
- પ્રોટીઓમિક્સમાં પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ એ એક આવશ્યક નમૂના તૈયારી પગલું છે.
- પ્રોટીન છોડ અને પ્રાણી પેશી, ખમીર અને સુક્ષ્મસજીવોમાંથી મેળવી શકાય છે.
- સોનિકેશન એ એક વિશ્વસનીય, કાર્યક્ષમ પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ પદ્ધતિ છે જે ટૂંકા નિષ્કર્ષણના સમયમાં ઉચ્ચ પ્રોટીન ઉપજ આપે છે.
પેશીઓ અને કોષોમાંથી પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ
પેશીઓ અને સંસ્કારી કોષોમાંથી પ્રોટીનનું નિષ્કર્ષણ એ નમૂનાની તૈયારીનું આવશ્યક પગલું છે જે ઘણી બાયોકેમિકલ અને વિશ્લેષણાત્મક તકનીકો જેમ કે ELISA, PAGE, વેસ્ટર્ન બ્લોટિંગ, માસ સ્પેક્ટ્રોમેટ્રી અથવા પ્રોટીન શુદ્ધિકરણ દરમિયાન કરવામાં આવે છે. અલ્ટ્રાસોનિક સેલ વિક્ષેપ, લિસિસ અને નિષ્કર્ષણ એ પ્રોટીનની ઉચ્ચ ઉપજને સુનિશ્ચિત કરવા માટે ચોક્કસપણે નિયંત્રિત, બિન-થર્મલ તકનીક છે.
સાથે કોશિકાઓમાંથી પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોબ UP200St
- ઝડપી
- ઉચ્ચ ઉપજ
- અત્યંત કાર્યક્ષમ
- પરિમાણો પર ચોક્કસ નિયંત્રણ
- પુનઃઉત્પાદન પરિણામો
- રેખીય માપનીયતા
અલ્ટ્રાસોનિક લિસિસ અને પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ માટે સામાન્ય સૂચનાઓ
- તાપમાન નિયંત્રણ: થર્મલ ડિનેચ્યુરેશન વિના ઉચ્ચ પ્રોટીન ઉપજની ખાતરી કરવા માટે, નિષ્કર્ષણ દરમિયાન તાપમાન નિયંત્રિત કરવું આવશ્યક છે. Hielscher માતાનો અદ્યતન અલ્ટ્રાસોનિક homogenizers – અલ્ટ્રાસોનિક વિઘટનકર્તા અથવા અલ્ટ્રાસોનિફાયર પણ કહેવાય છે – ચોક્કસ નિયંત્રણક્ષમ છે. તેઓ પ્લગેબલ તાપમાન સેન્સર સાથે આવે છે. અલ્ટ્રાસોનિક હોમોજેનાઇઝરના સેટિંગ વિકલ્પોમાં, મહત્તમ તાપમાન સેટ કરી શકાય છે. જ્યારે આ મહત્તમ તાપમાન પહોંચી જાય છે, ત્યારે સેમ્પલ ઠંડુ ન થાય ત્યાં સુધી અલ્ટ્રાસોનિકેટર આપમેળે બંધ થઈ જાય છે.
- બફર: યોગ્ય બફરની પસંદગી અને બફરની યોગ્ય માત્રા પેશીથી પેશીમાં બદલાય છે અને ટ્રાયલ-એન્ડ-એરર ટેસ્ટિંગ દ્વારા આકૃતિ-આઉટ થવી જોઈએ.
- અલગતા / શુદ્ધિકરણ: પ્રોટીન લાયસેટ્સમાં ડીએનએ અથવા કાર્બોહાઇડ્રેટ્સ જેવા જૈવ અણુઓનું વધુ પ્રમાણ હોઈ શકે છે, જે પ્રોટીન અવક્ષેપ (ડીઓક્સીકોલેટ-ટ્રિક્લોરોએસેટિક એસિડ) અથવા બફર વિનિમય દ્વારા દૂર થઈ શકે છે.
ચિત્તાપલો અને નૂમહોર્મ (2009) એ તેમના અભ્યાસમાં અહેવાલ આપ્યો છે કે સોનિકેશનનો ઉપયોગ કરીને પ્રોટીન ઉપજમાં વધારો થયો છે અને અલ્ટ્રાસોનિક ટીશ્યુ હોમોજનાઇઝેશન અને લિસિસ પ્રક્રિયા હાલની નિષ્કર્ષણ પ્રક્રિયાઓને નોંધપાત્ર રીતે વધારી શકે છે. – નવી વ્યાપારી નિષ્કર્ષણ તકો માટે સક્ષમ કરવું.
અલ્ટ્રાસોનિક કપહોર્ન પ્રોટીન આઇસોલેશન અને ડીએનએ ફ્રેગમેન્ટેશન માટે સમાન શરતો હેઠળ બહુવિધ નમૂનાઓના એક સાથે, અત્યંત અસરકારક નમૂનાની તૈયારી માટે.
પ્રાણી પેશીમાંથી પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ
આખા કદના પેશી (દા.ત. કિડની, હૃદય, ફેફસા, સ્નાયુ વગેરે) તૈયાર કરવા માટે, પેશીને સ્વચ્છ સાધનો વડે ખૂબ જ નાના ટુકડાઓમાં વિચ્છેદિત કરવું જોઈએ, પ્રાધાન્ય બરફ પર, અને પ્રોટીઝ દ્વારા અધોગતિ અટકાવવા માટે શક્ય તેટલી ઝડપથી (દા.ત. લિસિસ બફર જેમ કે RIPA અથવા હાયપોટોનિક લિસિસ બફર જેમાં પ્રોટીઝ અને ફોસ્ફેટેઝ ઇન્હિબિટર કોકટેલ હોય છે). વિચ્છેદ કર્યા પછી, નમૂનાને સ્નેપ ફ્રીઝ માટે પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં બોળી દેવામાં આવે છે. નમૂનાને પછીના ઉપયોગ માટે -80 ° સે પર સંગ્રહિત કરી શકાય છે અથવા તાત્કાલિક એકરૂપતા માટે બરફ પર રાખી શકાય છે. અલ્ટ્રાસોનિક નિષ્કર્ષણ પહેલાં તરત જ, આઇસ કોલ્ડ લિસિસ બફર (પ્રોટીઝ ઇન્હિબિટર્સ ડીટીટી, લ્યુપેપ્ટિન અને એપ્રોટીનિન સાથે) ઝડપથી નમૂના ટ્યુબમાં ઉમેરવામાં આવે છે (દર ~10 મિલિગ્રામ ટીશ્યુ આશરે ~600 μL બફરની ભલામણ કરવામાં આવે છે). આશરે. નમૂના ટ્યુબ દીઠ 20-60mg પેશીઓની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
અલ્ટ્રાસોનિક હોમોજનાઇઝેશન, લિસિસ અને એક્સટ્રક્શન અલ્ટ્રાસોનિક હોમોજેનાઇઝર જેમ કે UP100H અથવા UP200Ht સાથે કરવામાં આવે છે, જે માઇક્રો-ટીપ સોનોટ્રોડથી સજ્જ છે. Sonication સમયગાળો 60-90 સેકન્ડ છે. 15 સેકન્ડના અલ્ટ્રાસોનિક સાયકલ મોડ પર. sonication અને 10 સેકન્ડ. આરામનો સમય. નમૂનાને હંમેશા બરફમાં રાખવો જોઈએ.
અલ્ટ્રાસોનિક હોમોજેનાઇઝેશન / એક્સટ્રક્શન પછી, લાઇસેટને આશરે 27,000 ગ્રામ પર સેન્ટ્રીફ્યુજ કરવામાં આવે છે. 20 મિનિટ પછીથી સુપરનેટેન્ટ એકત્ર કરવામાં આવે છે, જેથી પ્રોટીનની સાંદ્રતા પ્રોટીન એસે જેમ કે પિયર્સ પ્રોટીન એસે BCA દ્વારા નક્કી કરી શકાય.
બ્લડ સીરમમાંથી પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ
સીરમ અને ફોસ્ફેટ બફરના સજાતીય મિશ્રણ માટે, અલ્ટ્રાસોનિક સેલ લિસિસ પહેલા નમૂનાને વમળવામાં આવે છે. અલ્ટ્રાસોનિક lysis માટે, નમૂનાને 20% કંપનવિસ્તાર પર 8 ચક્ર માટે UP100H જેવા અલ્ટ્રાસોનિક લેબ હોમોજેનાઇઝર સાથે સોનિકેટ કરવામાં આવે છે, દરેક 5 સેકન્ડ ચાલુ અને 15 સેકન્ડ બંધના ચક્ર માટે. પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ ચક્ર (પલ્સેશન મોડ) માં સોનિકેટ કરીને અને નમૂનાને બરફ પર મૂકીને હાથ ધરવામાં આવે છે જેથી કરીને નમૂનાનું ઓવરહિટીંગ અને થર્મલ ડિગ્રેડેશન ટાળી શકાય. સીરમમાં મોટી માત્રામાં ઉચ્ચ પરમાણુ વજન પ્રોટીન (જેમ કે આલ્બ્યુમિન, α1-એન્ટિટ્રિપ્સિન, ટ્રાન્સફરિન, હેપ્ટોગ્લોબ્યુલિન, ઇમ્યુનોગ્લોબ્યુલિન જી અને ઇમ્યુનોગ્લોબ્યુલિન A) હોય છે, જે IEF દરમિયાન ઓછા પરમાણુ વજનના પ્રોટીનના વિભાજનમાં દખલ કરે છે, તેથી તેને ઘટાડવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે. અવક્ષય કૉલમનો ઉપયોગ કરીને સીરમમાંથી.
છોડની પેશીઓમાંથી પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ
તાજા, નરમ છોડની પેશીઓ, દા.ત. શેવાળ વગેરે, સોનિકેશન માટે લિસિસ બફરમાં સમારેલી નમૂનાની સામગ્રીને સરળતાથી મૂકીને સરળતાથી વિક્ષેપિત થઈ શકે છે. ખડતલ, લિજેનસ છોડની પેશીઓ, જેમ કે બીજ, ફિર સોય વગેરે, જમીન સૂકી હોવી જોઈએ. સોનિકેશન દ્વારા કાઢવામાં આવે તે પહેલાં કેટલીક સખત, લાકડાની વનસ્પતિ સામગ્રીને પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં સ્થિર અને ગ્રાઉન્ડ કરવી આવશ્યક છે. પ્લાન્ટ સેલ કલ્ચર સસ્પેન્શન માટે, લિસિસ બફરમાં 30 અને 150 સેકન્ડ વચ્ચેની અલ્ટ્રાસોનિક ટ્રીટમેન્ટ મોટે ભાગે પૂરતી છે. કોળાના બીજ જેવી સખત સામગ્રીને નીચે વર્ણવ્યા મુજબ વધુ તીવ્ર સોનિકેશનની જરૂર છે.
કોળાના બીજમાંથી અલ્ટ્રાસોનિક નિષ્કર્ષણ માટે પ્રોટોકોલ
ઝીણી-ઝીણી કોળાના બીજના પાવડરમાંથી અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોટીનના અલ્ટ્રાસોનિક નિષ્કર્ષણ માટે, 10 ગ્રામ કોળાના બીજનો પાવડર અને 100 એમએલ ડીયોનાઇઝ્ડ પાણી દ્રાવક તરીકે 250 એમએલ ગ્લાસ બીકરમાં ઉમેરવામાં આવે છે. પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ બે પગલાંમાં સમાવે છે: પ્રથમ, નમૂના સાથે sonicated છે એક પ્રોબ-ટાઈપ અલ્ટ્રાસોનિકેટર UP400St (400W, 24kHz) સોનોટ્રોડ S24d7 થી સજ્જ છે. અલ્ટ્રાસોનિક હોમોજનાઇઝેશન દરમિયાન ગ્લાસ બીકરને ઠંડા પાણીના સ્નાનમાં મૂકવામાં આવે છે. અલ્ટ્રાસોનિકેટર UP400St ના પ્લગ કરી શકાય તેવા તાપમાન સેન્સર અને તાપમાન નિયંત્રણ સેટિંગ્સ ખાતરી કરે છે કે નમૂનાનું તાપમાન હંમેશા 30 °C ની નીચે રાખવામાં આવે છે. સોનિકેશન દરમિયાન ચોક્કસ તાપમાન નિયંત્રણ દ્વારા, આલ્બ્યુમિનનું વિકૃતીકરણ ટાળવામાં આવે છે. બીજું, નિષ્કર્ષણ 200 rpm ઝડપે અને 30°C પર મિક્સર વડે કરવામાં આવ્યું હતું. પછી બીકરને થર્મોસ્ટેટિક શેકરમાં તબદીલ કરવામાં આવે છે. ગ્લોબ્યુલિનને નિસ્યંદિત પાણી સાથે ડાયાલિસિસ દ્વારા દૂર કરવામાં આવે છે. ગ્લોબ્યુલિન દૂર કર્યા પછી, આલ્બ્યુમિન પ્રોફાઇલના નિર્ધારણ માટે પ્રોટીન અર્કનો નમૂના લઈ શકાય છે અને ત્યારબાદ આલ્બ્યુમિન કોગ્યુલેશન માટે 0.1 M HCl નો ઉપયોગ કરીને pI=3.0 માં ગોઠવવામાં આવે છે. નક્કર તબક્કાને 5000g, 20°C પર સેન્ટ્રીફ્યુગેશન દ્વારા અલગ કરવામાં આવે છે અને ડીયોનાઇઝ્ડ પાણીમાં ફરીથી ઓગળવામાં આવે છે. આલ્બ્યુમિન કોગ્યુલેશન એલ્બુમિન સાંદ્રતામાં પ્રોટીન ગુણોત્તર વધારવા માટે બે વાર કરવામાં આવે છે.
ચોખાના બ્રાનમાંથી પ્રોટીન કોન્સન્ટ્રેટ તૈયાર કરવા માટે અલ્ટ્રાસોનિક આલ્કલાઇન પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ દર્શાવે છે કે અલ્ટ્રાસોનિક સારવાર નોંધપાત્ર રીતે ટૂંકા નિષ્કર્ષણના સમયમાં ઉચ્ચ પ્રોટીન ઉપજમાં પરિણમે છે. – પરંપરાગત નિષ્કર્ષણ પદ્ધતિઓની તુલનામાં.
કાર્યાત્મક iNOS એન્ઝાઇમ માટે નમૂના તૈયારી પ્રોટોકોલ
સંપૂર્ણપણે કાર્યરત iNOS એન્ઝાઇમ (દા.ત. દવાની તપાસ માટે) મેળવવા માટે, નીચેના પ્રોટોકોલની ભલામણ કરવામાં આવે છે: સેલ સસ્પેન્શન બરફ પર મૂકવું જોઈએ અને 5 સેકન્ડના ચક્ર મોડ પર 10µm કંપનવિસ્તાર પર UP100H સાથે સોનિકેટેડ છે. sonication અને 25 સે. બરફ પર આરામ કરો. પ્રક્રિયા લગભગ પુનરાવર્તિત થવી જોઈએ. 3 વખત. સોનિકેશન ચક્ર વચ્ચેનો આરામનો સમય તાપમાનમાં વધારો ઘટાડે છે અને તેથી વિકૃતિકરણનું જોખમ ઘટાડશે.
અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોટીન દ્રાવ્યીકરણ
સોનિકેશન પ્રોટીન દ્રાવ્ય પ્રક્રિયાને વેગ આપી શકે છે, જેને સામાન્ય રીતે કેટલાક કલાકોની જરૂર પડે છે. નમૂનાને વધુ ગરમ ન કરવા અને યુરિયા ધરાવતાં સોલ્યુશન્સમાં પ્રોટીનના ઘટાડા અને ફેરફારોને રોકવા માટે, અલ્ટ્રાસોનિક વિસ્ફોટ થોડી સેકંડથી વધુ સમય સુધી ન ચાલવા જોઈએ.
અલ્ટ્રાસોનિકેટર UP200Ht નાના નમૂનાઓના સોનિકેશન માટે 2mm માઇક્રોટીપ S26d2 સાથે.
પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ માટે અલ્ટ્રાસોનિક સાધનો
Hielscher Ultrasonics કોષો, પેશીઓ, બેક્ટેરિયા, સુક્ષ્મસજીવો, ખમીર અને બીજકણના વિઘટન માટે અલ્ટ્રાસોનિક હોમોજેનાઇઝર્સની વિશાળ શ્રેણી પ્રદાન કરે છે.
Hielscher લેબ અલ્ટ્રાસોનિકેટર્સ શક્તિશાળી અને ચલાવવા માટે સરળ છે. 24/7 કામગીરી માટે બિલ્ટ, તેઓ મજબૂત અને કાર્યક્ષમ લેબ અને બેન્ચ-ટોપ ઉપકરણો તરીકે ડિઝાઇન કરવામાં આવ્યા છે. બધા ઉપકરણો માટે, ઊર્જા આઉટપુટ અને કંપનવિસ્તાર ચોક્કસપણે નિયંત્રિત કરી શકાય છે. એક્સેસરીઝની વ્યાપક શ્રેણી વધુ સેટઅપ વિકલ્પો ખોલે છે. ડિજિટલ અલ્ટ્રાસોનિકેટર્સ જેમ કે VialTweeter, UP200Ht, UP200St, અને UP400St પાસે સંકલિત તાપમાન નિયંત્રણ અને સ્વચાલિત ડેટા રેકોર્ડિંગ માટે બિલ્ટ-ઇન SD કાર્ડ છે.
બહુવિધ નમૂનાઓના પરોક્ષ, ક્રોસ-પ્રદૂષણ-મુક્ત અને એક સાથે સોનિકેશન માટે, અમે VialTweeter અથવા અલ્ટ્રાસોનિક કપહોર્ન ઓફર કરીએ છીએ.
નીચે આપેલ કોષ્ટક તમને નમૂનાની તૈયારી, સેલ વિક્ષેપ અને નિષ્કર્ષણ માટે અમારા અલ્ટ્રાસોનિકેટર્સ પર વિહંગાવલોકન આપે છે. દરેક અલ્ટ્રાસોનિક હોમોજેનાઇઝર પર વધુ માહિતી મેળવવા માટે ઉપકરણના પ્રકાર પર ક્લિક કરો. અમારા સારી રીતે પ્રશિક્ષિત અને લાંબા સમયના અનુભવો ટેકનિકલ સ્ટાફને તમારા નમૂનાની તૈયારી માટે સૌથી યોગ્ય અલ્ટ્રાસોનિકેટર પસંદ કરવામાં તમારી મદદ કરવામાં આનંદ થશે!
| બેચ વોલ્યુમ | પ્રવાહ દર | ભલામણ કરેલ ઉપકરણો |
|---|---|---|
| 10 શીશીઓ અથવા ટ્યુબ સુધી | na | VialTweeter |
| મલ્ટીવેલ / માઇક્રોટાઇટર પ્લેટો | na | UIP400MTP |
| બહુવિધ નળીઓ / જહાજો | na | કપહોર્ન |
| 1 થી 500 મિલી | 10 થી 200 એમએલ/મિનિટ | UP100H |
| 10 થી 1000 એમએલ | 20 થી 200 એમએલ/મિનિટ | UP200Ht, UP200St |
| 10 થી 2000 એમએલ | 20 થી 400 એમએલ/મિનિટ | UP400St |
તમારી એપ્લિકેશન, સામગ્રી અને નમૂનાની માત્રાના આધારે, અમે તમને તમારા નમૂનાની તૈયારી માટે સૌથી યોગ્ય સેટઅપની ભલામણ કરીશું. આજે અમારો સંપર્ક કરો!
અમારો સંપર્ક કરો! / અમને પૂછો!
Hielscher ડિજિટલ અલ્ટ્રાસોનિકેટર્સ એક સંકલિત SD-કાર્ડ પર બ્રાઉઝર રિમોટ કંટ્રોલ અને ઓટોમેટિક ડેટા પ્રોટોકોલિંગ ધરાવે છે.
VialTweeter પરોક્ષ sonication માટે.
જાણવા લાયક હકીકતો
પ્રોટીઓમિક્સ
પ્રોટીઓમિક્સ એ સંશોધન ક્ષેત્ર છે જે પ્રોટીન અને પ્રોટીઓમની તપાસ કરે છે. પ્રોટીન સજીવોમાં મહત્વપૂર્ણ કાર્યોની વિશાળ શ્રેણીને પૂર્ણ કરે છે. પ્રોટીઓમ એ ચોક્કસ સમયે જીનોમ, કોષ, પેશી અથવા સજીવ દ્વારા વ્યક્ત કરાયેલ પ્રોટીનનો સંપૂર્ણ સમૂહ છે. પ્રોટીઓમ સમય અને વિશિષ્ટ જરૂરિયાતો અથવા તાણ સાથે બદલાય છે, જે કોષ અથવા જીવતંત્ર પસાર કરે છે. વધુ વિશિષ્ટ રીતે, તે ચોક્કસ સમયે, નિર્ધારિત પરિસ્થિતિઓ હેઠળ આપેલ પ્રકારના કોષ અથવા જીવતંત્રમાં વ્યક્ત પ્રોટીનનો સમૂહ છે. આ શબ્દ પ્રોટીન અને જીનોમનું મિશ્રણ છે. પ્રોટીઓમિક્સ એ પ્રોટીઓમનો અભ્યાસ છે.
પ્રોટીન
પ્રોટીન એ મોટા બાયોમોલેક્યુલ્સ છે, કહેવાતા મેક્રોમોલેક્યુલ્સ છે – જે એમિનો એસિડ અવશેષોની એક અથવા વધુ લાંબી સાંકળોમાંથી બનેલા હોય છે. વનસ્પતિ અને પ્રાણી મૂળના તમામ જીવોમાં પ્રોટીન હાજર હોય છે અને મોટાભાગના જૈવિક કાર્યો માટે તે નિર્ણાયક છે. પ્રોટીનમાં ઘણી બધી જૈવિક માહિતી હોય છે, તેથી તેને વિશ્લેષણાત્મક હેતુ માટે કાઢવામાં આવે છે, દા.ત. પ્રોટીઓમિક સંશોધન માટે. પ્રોટીન દ્વારા કરવામાં આવતા સૌથી મહત્વપૂર્ણ કાર્યમાં ચયાપચયની પ્રતિક્રિયાઓનું ઉત્પ્રેરક, ડીએનએ પ્રતિકૃતિ, ઉત્તેજનાની પ્રતિક્રિયા અને પરમાણુઓનું એક સ્થાનથી બીજા સ્થાને પરિવહનનો સમાવેશ થાય છે. પ્રોટીન એક બીજાથી મુખ્યત્વે એમિનો એસિડના ક્રમમાં અલગ પડે છે, જે તેમના જનીનોના ન્યુક્લિયોટાઇડ ક્રમ દ્વારા નક્કી કરવામાં આવે છે, અને જે સામાન્ય રીતે પ્રોટીનને ચોક્કસ ત્રિ-પરિમાણીય બંધારણમાં ફોલ્ડિંગમાં પરિણમે છે જે તેની પ્રવૃત્તિ નક્કી કરે છે. પ્રોટીન છે – પેપ્ટાઇડ્સ ઉપરાંત – ખોરાકના મુખ્ય ઘટકોમાંનું એક. તેથી, પ્રક્રિયાઓ, ખાદ્ય સુરક્ષા અને પોષણ મૂલ્યાંકનને શ્રેષ્ઠ બનાવવા માટે પ્રોટીઓમિક્સ એ ખોરાક વિજ્ઞાનમાં એક શક્તિશાળી સાધન છે.
Cloud Point Extraction
Cloud Point Extraction વિશ્લેષકોને અલગ કરવા અને પૂર્વ-સંકલિત કરવા માટેની પૂર્વ-વિશ્લેષણાત્મક પ્રક્રિયા છે. અલ્ટ્રાસોનિકેશન સાથે સંયોજનમાં, ક્લાઉડ પોઇન્ટ નિષ્કર્ષણ પ્રક્રિયાને વધુ કાર્યક્ષમ, ઝડપી અને પર્યાવરણ-મૈત્રીપૂર્ણ બનાવીને વધુ તીવ્ર બનાવી શકાય છે. અલ્ટ્રાસોનિકેશન સાથે, ક્લાઉડ પોઈન્ટ એક્સ્ટ્રક્શન એ વિશ્લેષક તૈયારીની નોંધપાત્ર રીતે વધુ કાર્યક્ષમ પદ્ધતિ છે. અલ્ટ્રાસોનિકલી સહાયિત ક્લાઉડ પોઇન્ટ નિષ્કર્ષણ વિશે વધુ વાંચો!જેલ ઇલેક્ટ્રોફોરેસિસ
જેલ ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ એ ડીએનએ, આરએનએ અને પ્રોટીન જેવા મેક્રોમોલેક્યુલ્સ તેમજ તેમના કદ અને ચાર્જના આધારે તેમના ટુકડાઓના વિભાજન અને વિશ્લેષણ માટેની મુખ્ય પદ્ધતિ છે. તેનો ઉપયોગ ક્લિનિકલ રસાયણશાસ્ત્રમાં પ્રોટીનને ચાર્જ અને/અથવા કદ દ્વારા અલગ કરવા માટે થાય છે (IEF agarose, આવશ્યકપણે કદ સ્વતંત્ર) અને બાયોકેમિસ્ટ્રી, મોલેક્યુલર બાયોલોજી અને પ્રોટીઓમિક્સમાં DNA અને RNA ટુકડાઓની મિશ્ર વસ્તીને લંબાઈ દ્વારા અલગ કરવા, DNA ના કદનો અંદાજ કાઢવા માટે વપરાય છે. અને આરએનએ ટુકડાઓ અથવા ચાર્જ દ્વારા પ્રોટીનને અલગ કરવા.
સેલ સંસ્કૃતિઓ
કોષ સંસ્કૃતિ એ નિયંત્રિત વૃદ્ધિની પ્રક્રિયા છે જેના દ્વારા નિયંત્રિત પરિસ્થિતિઓમાં કોષોની ખેતી કરવામાં આવે છે. સેલ કલ્ચરની સ્થિતિ દરેક કોષ પ્રકાર માટે અલગ અલગ હોય છે. સામાન્ય રીતે, કોષ સંસ્કૃતિના વાતાવરણમાં સબસ્ટ્રેટ અથવા માધ્યમ સાથે યોગ્ય પાત્ર (દા.ત. પેટ્રી ડીશ) હોય છે જે આવશ્યક પોષક તત્વો (એમિનો એસિડ, કાર્બોહાઇડ્રેટ્સ, વિટામિન્સ, ખનિજો), વૃદ્ધિ પરિબળો, હોર્મોન્સ અને વાયુઓ (CO) પૂરા પાડે છે.2, ઓ2), અને ભૌતિક-રાસાયણિક વાતાવરણ (pH બફર, ઓસ્મોટિક દબાણ, તાપમાન) ને નિયંત્રિત કરે છે. મોટાભાગના કોષોને સપાટી અથવા કૃત્રિમ સબસ્ટ્રેટની જરૂર હોય છે, જ્યારે અન્ય કોષ સંસ્કૃતિઓને સંસ્કૃતિ માધ્યમ (સસ્પેન્શન કલ્ચર, સેલ સસ્પેન્શન)માં મુક્ત તરતી ખેતી કરી શકાય છે.
વાઈરલ રસીઓ અને અન્ય બાયોટેકનોલોજીથી મેળવેલા ઉત્પાદનોના ઔદ્યોગિક ઉત્પાદનમાં પ્રાણી કોષ રેખાઓના સમૂહ સંસ્કૃતિનો ઉપયોગ થાય છે. માનવ સ્ટેમ કોશિકાઓ કોષોની સંખ્યાને વિસ્તૃત કરવા અને પ્રત્યારોપણ હેતુઓ માટે કોષોને વિવિધ સોમેટિક સેલ પ્રકારોમાં અલગ પાડવા માટે સંવર્ધિત કરવામાં આવે છે.
પેશીના નમૂનાઓ
ટિશ્યુ શબ્દ સેલ્યુલર મધ્યવર્તીનું વર્ણન કરે છે, જ્યાં કોષ સામગ્રી કોષો અને સંપૂર્ણ અંગ વચ્ચે સંસ્થાકીય સ્તર પર હોય છે. પેશીઓમાં, સમાન મૂળના કોષો, જે એકસાથે ચોક્કસ કાર્ય કરે છે, એસેમ્બલ થાય છે. બહુવિધ પેશીઓના કાર્યાત્મક જૂથ દ્વારા, અંગોની જટિલ રચનાઓ રચાય છે.
જીવવિજ્ઞાન, હિસ્ટોલોજી/હિસ્ટોપેથોલોજી, પેરાસીટોલોજી, બાયોકેમિસ્ટ્રી, ઇમ્યુનોહિસ્ટોકેમિસ્ટ્રીમાં સંશોધન માટે તેમજ ડીએનએની ખેતી અને અર્ક માટે પેશીના નમૂના લેવામાં આવે છે. તે પ્રાણી (પેટાવિભાગ: સસ્તન પેશી) અને છોડની પેશીઓ વચ્ચે તફાવત કરી શકાય છે. પ્રાણીઓની પેશીઓને ચાર મૂળભૂત પ્રકારના જોડાણયુક્ત, સ્નાયુ, નર્વસ અને ઉપકલા પેશીમાં જૂથબદ્ધ કરવામાં આવે છે. છોડની પેશી નીચેની ત્રણ પેશી પ્રણાલીઓમાં વિભાજિત થાય છે: બાહ્ય ત્વચા, જમીનની પેશી અને વેસ્ક્યુલર પેશી.
પેશીના નમૂના પ્રાણી અથવા છોડના ભાગોમાંથી તૈયાર કરી શકાય છે, દા.ત. હાડકા, સ્નાયુ, પાંદડા વગેરે.
શારીરિક પ્રવાહી
લોહી, સીરમ, પ્લાઝ્મા, સેરેબ્રોસ્પાઇનલ પ્રવાહી, લાળ અને સાયનોવિયલ પ્રવાહી એ શરીરના પ્રવાહી છે, જે નિદાનની રીતે સંબંધિત માહિતીનો મોટો સ્ત્રોત પ્રદાન કરે છે. તેથી, વિશ્લેષણ માટે શરીરના પ્રવાહીના નમૂનાઓની અત્યાધુનિક તૈયારી મહત્વપૂર્ણ છે. પ્રથમ મુશ્કેલી શરીરના પ્રવાહીમાં હાજર ઘટકોની વ્યાપક ગતિશીલ શ્રેણી સાથે સંકળાયેલી છે.
પ્રોટીનની સાંદ્રતાનું નિર્ધારણ
પ્રોટીનની સાંદ્રતા નક્કી કરવા માટે બ્રેડફોર્ડ એસે, લોરી એસે અને બાયસિન્કોનિનિક એસિડ (BCA) એસે સામાન્ય છે. બોવાઇન સીરમ આલ્બ્યુમિન (BSA) એ સૌથી વધુ ઉપયોગમાં લેવાતા પ્રોટીન ધોરણોમાંનું એક છે.
lysis બફર
કોષની સામગ્રી અથવા પેશીઓ (ટીશ્યુ કલ્ચર, છોડ, બેક્ટેરિયા, ફૂગ વગેરે) અને કોષો બંધારણમાં છે કે કેમ અને બંધારણના પ્રકાર અનુસાર લિસિસ બફર પસંદ કરવું આવશ્યક છે. પ્રોટીન, મેમ્બ્રેન અને ઓર્ગેનેલ્સના નિષ્કર્ષણ માટે લિસિસ બફરની વિશાળ શ્રેણી એક અથવા વધુ ડિટર્જન્ટ સાથે તૈયાર કરવામાં આવે છે. ડીટરજન્ટ સામાન્ય રીતે અજમાયશ અને ભૂલ પરીક્ષણો દ્વારા પસંદ કરવામાં આવે છે અથવા – જો હોય તો – હાલના પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ પ્રોટોકોલ અનુસાર. ડીટરજન્ટ પેશીના સ્ત્રોત અને પ્રોટીન સાથે સુસંગત હોવું જોઈએ. સામાન્ય રીતે, હળવા ડીટરજન્ટ કે જે ચોક્કસ પેશી/પ્રોટીન માટે કામ કરે છે, તે અર્કની મહત્તમ કાર્યક્ષમતા જાળવવા માટે પસંદ કરવામાં આવે છે. વધુમાં, પટલ અને ઓર્ગેનેલ્સના નિષ્કર્ષણના કિસ્સામાં, હળવા ડીટરજન્ટ પટલને અકબંધ રાખે છે. લિસિસ બફર્સમાં સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાતા ડિટરજન્ટ મોટે ભાગે નોનિયોનિક અથવા ઝ્વિટેરિયોનિક હોય છે, દા.ત. CHAPS, deoxycholate, Triton™ X-100, NP40 અને Tween 20.
દાખલા તરીકે, મગજ, યકૃત, આંતરડા, કિડની, બરોળ વગેરે જેવા પેશીઓને ફક્ત RIPA સાથે બફર કરી શકાય છે. – જો કે પ્રોટીઝ અવરોધકો અને ડીટીટી (દા.ત. જેલ ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ માટે) નો સમાવેશ થવો જોઈએ.
હાડપિંજરના સ્નાયુ પેશીઓ (બરફના ઠંડા) માટે લિસિસ બફર: 20 એમએમ ટ્રિસ (પીએચ 7.8), 137 એમએમ NaCl, 2.7 એમએમ કેસીએલ, 1 એમએમ એમજીસીએલ2, 1 % ટ્રાઇટોન X-100, 10 % (w/v) ગ્લિસરોલ, 1 એમએમ EDTA , 1 એમએમ ડિથિઓથ્રેઇટોલ પ્રોટીઝ અને ફોસ્ફેટેઝ ઇન્હિબિટર કોકટેલ સાથે પૂરક
સામાન્ય બફર અને તેમની pH શ્રેણીનું કોષ્ટક. સામાન્ય રીતે, આ બફર્સનો ઉપયોગ સામાન્ય રીતે 20-50 એમએમની સાંદ્રતામાં થાય છે.
| બફર | pH શ્રેણી |
|---|---|
| સાઇટ્રિક એસીડ – NaOH | 2.2 – 6.5 |
| સોડિયમ સાઇટ્રેટ – સાઇટ્રિક એસીડ | 3.0 – 6.2 |
| સોડિયમ એસિટેટ – એસિટિક એસિડ | 3.6 – 5.6 |
| કેકોડિલિક એસિડ સોડિયમ મીઠું – HCl | 5.0 – 7.4 |
| MES – NaOH | 5.6 – 6.8 |
| સોડિયમ ડાયહાઇડ્રોજન ફોસ્ફેટ – ડિસોડિયમ હાઇડ્રોજન ફોસ્ફેટ | 5.8 – 8.0 |
| ઇમિડાઝોલ – HCl | 6.2 – 7.8 |
| MOPS – કોહ | 6.6 – 7.8 |
| ટ્રાયથેનોલામાઇન હાઇડ્રોક્લોરાઇડ – NaOH | 6.8 – 8.8 |
| ટ્રિસ – HCl | 7.0 – 9.0 |
| HEPES – NaOH | 7.2 – 8.2 |
| ટ્રાઇસીન – NaOH | 7.6 – 8.6 |
| સોડિયમ ટેટ્રાબોરેટ – બોરિક એસિડ | 7.6 – 9.2 |
| બાયસીન – NaOH | 7.7 – 8.9 |
| ગ્લાયસીન – NaOH | 8.6 – 10.6 |
મોટાભાગના બફર્સ તાપમાન સાથે પીએચ-નિર્ભરતા દર્શાવે છે. આ ખાસ કરીને ટ્રિસ બફર્સ માટે સાચું છે. pKa 25°C પર 8.06 થી 0°C પર 8.85 માં બદલાય છે.
(બફરનું pH અને pKa: pH એ જલીય દ્રાવણમાં હાઇડ્રોજન આયનોની સાંદ્રતાને માપે છે. pKa (= એસિડ ડિસોસિએશન કોન્સ્ટન્ટ) એ સંબંધિત છે, પરંતુ વધુ ચોક્કસ માપ છે, જેમાં તે અનુમાન કરવામાં મદદ કરે છે કે પરમાણુ ચોક્કસ પર કેવી રીતે કાર્ય કરશે. pH મૂલ્ય.)
TRIzol
TRIzol એ રાસાયણિક દ્રાવણ છે જેનો ઉપયોગ guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform નિષ્કર્ષણ દરમિયાન RNA/DNA/પ્રોટીન કાઢવા માટે થાય છે. અલ્ટ્રાસોનિકલી આસિસ્ટેડ TRIzol નિષ્કર્ષણનો ઉપયોગ એ જ નમૂનામાંથી ઉચ્ચ ડીએનએ, આરએનએ અને પ્રોટીન ઉપજમાં પરિણમે છે અને અન્ય નિષ્કર્ષણ પદ્ધતિઓ દ્વારા ઉત્કૃષ્ટ થાય છે.
સાહિત્ય/સંદર્ભ
- Chittapalo T, Noomhorm A (2009): Ultrasonic assisted alkali extraction of protein from defatted rice bran and properties of the protein concentrates. Int J Food Sci Technol 44: 1843–1849.
- Simões, André E.S:; Pereira, Diane M.; Amaral, Joana D.; Nunes, Ana F.; Gomes, Sofia E.; Rodrigues, Pedro M.; Lo, Adrian C.; D’Hooge, Rudi; Steer, Clifford J.; Thibodeau, Stephen N.; Borralho, Pedro M.; Rodrigues, Cecília M.P. (2013): Efficient recovery of proteins from multiple source samples after trizol or trizol LS RNA extraction and long-term storage. BMC Genomics 2013, 14:181.