ટીશ્યુ અને સેલ કલ્ચર્સ તરફથી અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોટીન એક્સટ્રેક્શન
- પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ પ્રોટિઓમિક્સ આવશ્યક નમૂના તૈયારી પગલું છે.
- પ્રોટીન્સ વનસ્પતિ અને પ્રાણીઓના પેશીઓ, યીસ્ટ અને સુક્ષ્મ કાઢવામાં કરી શકાય છે.
- Sonication ટૂંકા નિષ્કર્ષણ સમય અંદર ઉચ્ચ પ્રોટીન ઉપજ આપતા એક વિશ્વસનીય, કાર્યક્ષમ પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ પદ્ધતિ છે.
પેશીઓ અને કોષોમાંથી પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ
પેશીઓ અને સંસ્કારી કોષોમાંથી પ્રોટીનનું નિષ્કર્ષણ એ નમૂનાની તૈયારીનું આવશ્યક પગલું છે જે ઘણી બાયોકેમિકલ અને વિશ્લેષણાત્મક તકનીકો જેમ કે ELISA, PAGE, વેસ્ટર્ન બ્લોટિંગ, માસ સ્પેક્ટ્રોમેટ્રી અથવા પ્રોટીન શુદ્ધિકરણ દરમિયાન કરવામાં આવે છે. અલ્ટ્રાસોનિક સેલ વિક્ષેપ, લિસિસ અને નિષ્કર્ષણ એ પ્રોટીનની ઉચ્ચ ઉપજને સુનિશ્ચિત કરવા માટે ચોક્કસપણે નિયંત્રિત, બિન-થર્મલ તકનીક છે.
સાથે કોશિકાઓમાંથી પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોબ UP200St
- ઝડપી
- ઉચ્ચ ઉપજ
- અત્યંત કાર્યક્ષમ
- પરિમાણો પર ચોક્કસ નિયંત્રણ
- પ્રજનન પરિણામો
- રેખીય માપનીયતા
અલ્ટ્રાસોનિક લિસિસ અને પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ માટે સામાન્ય સૂચનાઓ
- તાપમાન નિયંત્રણ: થર્મલ ગુણવિકૃતીકરણ વગર ઊંચા પ્રોટીન ઉપજ ખાતરી કરવા માટે, નિષ્કર્ષણ પ્રક્રિયા દરમિયાન તાપમાનમાં નિયંત્રિત હોવું જ જોઈએ. Hielscher માતાનો રાજ્ય ઓફ ધ આર્ટ અવાજ homogenizers – અલ્ટ્રાસોનિક વિઘટનકર્તા અથવા અલ્ટ્રાસોનિફાયર પણ કહેવાય છે – ચોક્કસપણે નિયંત્રણક્ષમ છે. તેઓ એક plugable તાપમાન સેન્સર સાથે આવે છે. અવાજ homogenizer ના સેટિંગ વિકલ્પો માં, મહત્તમ તાપમાન સુયોજિત કરી શકાય છે. જ્યારે આ તાપમાન મહત્તમ સુધી પહોંચ્યાં છે, ultrasonicator આપોઆપ સુધી નમૂના નીચે ઠંડુ છે અટકી જાય છે.
- બફર: યોગ્ય બફર અને બફર જમણી વોલ્યુમ choise પેશીઓ સાથે પેશી થી બદલાય અને figured આઉટ હોવા જ જોઈએ ટ્રાયલ-એન્ડ-એરર પરીક્ષણ દ્વારા.
- આઇસોલેશનથી / શુદ્ધિકરણ: પ્રોટીન lysates જેમ ડીએનએ અથવા કાર્બોહાઈડ્રેટ કારણ કે જૈવિકઅણુઓ, જે પ્રોટીન ભેજપાત (deoxycholate-trichloroacetic એસિડ) દ્વારા દૂર કરવામાં આવી શકે એક વધારાનું સમાવી શકે છે અથવા વિનિમય બફર.
ચિત્તાપલો અને નૂમહોર્મ (2009) એ તેમના અભ્યાસમાં અહેવાલ આપ્યો છે કે સોનિકેશનનો ઉપયોગ કરીને પ્રોટીન ઉપજમાં વધારો થયો છે અને અલ્ટ્રાસોનિક ટીશ્યુ હોમોજનાઇઝેશન અને લિસિસ પ્રક્રિયા હાલની નિષ્કર્ષણ પ્રક્રિયાઓને નોંધપાત્ર રીતે વધારી શકે છે. – નવા વ્યાપારી નિષ્કર્ષણ તકો માટે સક્ષમ બનાવે છે.
અલ્ટ્રાસોનિક cuphorn પ્રોટીન આઇસોલેશન અને ડીએનએ ફ્રેગમેન્ટેશન માટે સમાન શરતો હેઠળ બહુવિધ નમૂનાઓના એક સાથે, અત્યંત અસરકારક નમૂનાની તૈયારી માટે.
પ્રાણીઓની પેશીઓમાં માંથી પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ
સમગ્ર કદના પેશીઓ (દા.ત. કિડની, હૃદય, ફેફસાં, સ્નાયુ વગેરે) ની તૈયારી માટે, શુષ્ક સાધનો સાથે ખૂબ જ ટૂંકા ટુકડાઓમાં, બરફ પર પ્રાધાન્યથી, અને પ્રોટીઝ દ્વારા ડિગ્રેડેશન (દા.ત. જેમ કે આરઆઇપીએ અથવા હાયપોટોનિક લિસેસ બફર, પ્રોટીઝ અને ફોસ્ફેટસ ઇનિબિટર કોકટેઇલ). વિશ્લેષણ કર્યા પછી, નમૂના ત્વરિત ફ્રીઝ માટે પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં ડૂબી જાય છે. નમૂનાને પછીના ઉપયોગ માટે -80 ° સે પર સંગ્રહિત કરી શકાય છે અથવા તાત્કાલિક સમાંગીકરણ માટે બરફ પર રાખવું. અલ્ટ્રાસાનેસીક નિષ્કર્ષણ પહેલા તરત જ, બરફના ઠંડુ લિસિસ બફર (પ્રોટીઝ ઇન્હિબિટર્સ ડીટીટી, લ્યૂપ્પીટીન અને એરોટિનિન સાથે) ઝડપથી નમૂના ટ્યુબમાં ઉમેરવામાં આવે છે (દર ~ 10 મિલિગ્રામ પેશીઓ આશરે ~ 600 μL બફરની ભલામણ કરવામાં આવે છે). અંદાજે નમૂનાના નમૂના દીઠ 20-60 એમજીની ટીશ્યુની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
અલ્ટ્રાસોનિક હોમોજનાઇઝેશન, લિસિસ અને એક્સટ્રક્શન અલ્ટ્રાસોનિક હોમોજેનાઇઝર જેમ કે UP100H અથવા UP200Ht સાથે કરવામાં આવે છે, જે માઇક્રો-ટીપ સોનોટ્રોડથી સજ્જ છે. Sonication સમયગાળો 60-90 સેકન્ડ છે. 15 સેકન્ડના અલ્ટ્રાસોનિક સાયકલ મોડ પર. sonication અને 10 સેકન્ડ. આરામનો સમય. નમૂનાને હંમેશા બરફમાં રાખવો જોઈએ.
અવાજ સમાંગીકરણ / નિષ્કર્ષણ પછી, lysate આશરે માટે 27,000g ખાતે સેન્ટ્રિફ્યુજ છે. 20 મિ. પછીથી supernatent એકત્રિત કરવામાં આવે છે, કે જેથી પ્રોટીન એકાગ્રતા જેમ પિયર્સ પ્રોટીન નિબંધ BCA તરીકે પ્રોટીન નિબંધ દ્વારા નક્કી કરી શકાય છે.
રક્ત સિઅરમ થી પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ
સીરમ અને ફોસ્ફેટ બફરના સજાતીય મિશ્રણ માટે, અલ્ટ્રાસોનિક સેલ લિસિસ પહેલા નમૂનાને વમળવામાં આવે છે. અલ્ટ્રાસોનિક lysis માટે, નમૂનાને 20% કંપનવિસ્તાર પર 8 ચક્ર માટે UP100H જેવા અલ્ટ્રાસોનિક લેબ હોમોજેનાઇઝર સાથે સોનિકેટ કરવામાં આવે છે, દરેક 5 સેકન્ડ ચાલુ અને 15 સેકન્ડ બંધના ચક્ર માટે. પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ ચક્ર (પલ્સેશન મોડ) માં સોનિકેટ કરીને અને નમૂનાને બરફ પર મૂકીને હાથ ધરવામાં આવે છે જેથી કરીને નમૂનાનું ઓવરહિટીંગ અને થર્મલ ડિગ્રેડેશન ટાળી શકાય. સીરમમાં મોટી માત્રામાં ઉચ્ચ પરમાણુ વજન પ્રોટીન (જેમ કે આલ્બ્યુમિન, α1-એન્ટિટ્રિપ્સિન, ટ્રાન્સફરિન, હેપ્ટોગ્લોબ્યુલિન, ઇમ્યુનોગ્લોબ્યુલિન જી અને ઇમ્યુનોગ્લોબ્યુલિન A) હોય છે, જે IEF દરમિયાન ઓછા પરમાણુ વજનના પ્રોટીનના વિભાજનમાં દખલ કરે છે, તેથી તેને ઘટાડવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે. અવક્ષય કૉલમનો ઉપયોગ કરીને સીરમમાંથી.
પ્લાન્ટ પેશીઓ માંથી પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ
તાજા, નરમ પ્લાન્ટ પેશીઓ, દા.ત. શેવાળ વગેરે, સરળતાથી ફક્ત sonication માટે lysis બફર માં સમારેલી નમૂના સામગ્રી મૂકીને ખોરવાયો શકાય છે. આવા બીજ, ફિર સોય વગેરે જેવા ખડતલ, ligenous પ્લાન્ટ પેશીઓ, શુષ્ક જમીન હોવી જોઈએ. કેટલાક મુશ્કેલ છે, લાકડાં પ્લાન્ટ સામગ્રી સ્થિર હોવું જ જોઈએ અને તેના ઉપર પ્રવાહી નાઇટ્રોજનના ગ્રાઉન્ડ પહેલાં sonication દ્વારા કાઢવામાં. છોડ કોષ સંસ્કૃતિ સસ્પેન્શન, એક lysis બફર 30 અને 150 સેકન્ડ વચ્ચે અવાજ સારવાર મોટે ભાગે પર્યાપ્ત છે. આવા કોળાના બીજ કારણ કે આકરા સામગ્રી વધુ તીવ્ર sonication કારણ કે નીચે વર્ણવેલ જરૂરી છે.
કોળાના બીજ માંથી એલ્બુમિન ના અવાજ નિષ્કર્ષણ માટે પ્રોટોકૉલ
ઝીણી-ઝીણી કોળાના બીજના પાવડરમાંથી અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોટીનના અલ્ટ્રાસોનિક નિષ્કર્ષણ માટે, 10 ગ્રામ કોળાના બીજનો પાવડર અને 100 એમએલ ડીયોનાઇઝ્ડ પાણી દ્રાવક તરીકે 250 એમએલ ગ્લાસ બીકરમાં ઉમેરવામાં આવે છે. પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ બે પગલાંમાં સમાવે છે: પ્રથમ, નમૂના સાથે sonicated છે એક પ્રોબ-ટાઈપ અલ્ટ્રાસોનિકેટર UP400St (400W, 24kHz) સોનોટ્રોડ S24d7 થી સજ્જ છે. અલ્ટ્રાસોનિક હોમોજનાઇઝેશન દરમિયાન ગ્લાસ બીકરને ઠંડા પાણીના સ્નાનમાં મૂકવામાં આવે છે. અલ્ટ્રાસોનિકેટર UP400St ના પ્લગ કરી શકાય તેવા તાપમાન સેન્સર અને તાપમાન નિયંત્રણ સેટિંગ્સ ખાતરી કરે છે કે નમૂનાનું તાપમાન હંમેશા 30 °C ની નીચે રાખવામાં આવે છે. સોનિકેશન દરમિયાન ચોક્કસ તાપમાન નિયંત્રણ દ્વારા, આલ્બ્યુમિનનું વિકૃતીકરણ ટાળવામાં આવે છે. બીજું, નિષ્કર્ષણ 200 rpm ઝડપે અને 30°C પર મિક્સર વડે કરવામાં આવ્યું હતું. પછી બીકરને થર્મોસ્ટેટિક શેકરમાં તબદીલ કરવામાં આવે છે. ગ્લોબ્યુલિનને નિસ્યંદિત પાણી સાથે ડાયાલિસિસ દ્વારા દૂર કરવામાં આવે છે. ગ્લોબ્યુલિન દૂર કર્યા પછી, આલ્બ્યુમિન પ્રોફાઇલના નિર્ધારણ માટે પ્રોટીન અર્કનો નમૂના લઈ શકાય છે અને ત્યારબાદ આલ્બ્યુમિન કોગ્યુલેશન માટે 0.1 M HCl નો ઉપયોગ કરીને pI=3.0 માં ગોઠવવામાં આવે છે. નક્કર તબક્કાને 5000g, 20°C પર સેન્ટ્રીફ્યુગેશન દ્વારા અલગ કરવામાં આવે છે અને ડીયોનાઇઝ્ડ પાણીમાં ફરીથી ઓગળવામાં આવે છે. આલ્બ્યુમિન કોગ્યુલેશન એલ્બુમિન સાંદ્રતામાં પ્રોટીન ગુણોત્તર વધારવા માટે બે વાર કરવામાં આવે છે.
અલ્ટ્રાસોનિક ચોખાની કુશકીમાંથી પ્રોટીન ઘટ્ટ તૈયાર કરવા માટે આલ્કલાઇન પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ બતાવે છે કે નોંધપાત્ર ટૂંકા નિષ્કર્ષણ સમય ઉચ્ચ પ્રોટીન ઉપજ અવાજ સારવાર પરિણામો – પરંપરાગત નિષ્કર્ષણ પદ્ધતિઓ સરખામણીમાં.
કાર્યાત્મક iNOS એન્ઝાઇમ માટે નમૂના તૈયારી પ્રોટોકોલ
સંપૂર્ણપણે કાર્યરત iNOS એન્ઝાઇમ (દા.ત. દવાની તપાસ માટે) મેળવવા માટે, નીચેના પ્રોટોકોલની ભલામણ કરવામાં આવે છે: સેલ સસ્પેન્શન બરફ પર મૂકવું જોઈએ અને 5 સેકન્ડના ચક્ર મોડ પર 10µm કંપનવિસ્તાર પર UP100H સાથે સોનિકેટેડ છે. sonication અને 25 સે. બરફ પર આરામ કરો. પ્રક્રિયા લગભગ પુનરાવર્તિત થવી જોઈએ. 3 વખત. સોનિકેશન ચક્ર વચ્ચેનો આરામનો સમય તાપમાનમાં વધારો ઘટાડે છે અને તેથી વિકૃતિકરણનું જોખમ ઘટાડશે.
અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોટીન Solubilization
Sonication પ્રોટીન solubilization પ્રક્રિયા, કે જે સામાન્ય રીતે કેટલાક કલાકો માટે જરૂરી વેગ કરી શકો છો. ક્રમમાં નમૂના overheat અને અટકાવવા માટે નથી પ્રોટીન ડિગ્રેડેશન એન્ડ યુરિયા સમાવતી દ્રાવણમાં ફેરફારો માં, અવાજ ભડકો થોડીવાર કરતાં લાંબા સમય સુધી ટકી ન જોઈએ.
અલ્ટ્રાસોનિકેટર UP200Ht નાના નમૂનાઓના સોનિકેશન માટે 2mm માઇક્રોટીપ S26d2 સાથે.
પ્રોટીન એક્સટ્રેક્શન માટે અવાજ સાધનો
Hielscher Ultrasonics કોશિકાઓ, પેશીઓ, બેક્ટેરિયા, સુક્ષ્મસજીવો, યીસ્ટના, અને બીજ વિઘટન માટે અવાજ homogenizers એક વ્યાપક શ્રેણી પૂરી પાડે છે.
Hielscher લેબ અલ્ટ્રાસોનિકેટર્સ શક્તિશાળી અને ચલાવવા માટે સરળ છે. 24/7 કામગીરી માટે બિલ્ટ, તેઓ મજબૂત અને કાર્યક્ષમ લેબ અને બેન્ચ-ટોપ ઉપકરણો તરીકે ડિઝાઇન કરવામાં આવ્યા છે. બધા ઉપકરણો માટે, ઊર્જા આઉટપુટ અને કંપનવિસ્તાર ચોક્કસપણે નિયંત્રિત કરી શકાય છે. એક્સેસરીઝની વ્યાપક શ્રેણી વધુ સેટઅપ વિકલ્પો ખોલે છે. ડિજિટલ અલ્ટ્રાસોનિકેટર્સ જેમ કે VialTweeter, UP200Ht, UP200St, અને UP400St પાસે સંકલિત તાપમાન નિયંત્રણ અને સ્વચાલિત ડેટા રેકોર્ડિંગ માટે બિલ્ટ-ઇન SD કાર્ડ છે.
બહુવિધ નમૂનાઓના પરોક્ષ, ક્રોસ-પ્રદૂષણ-મુક્ત અને એક સાથે સોનિકેશન માટે, અમે VialTweeter અથવા અલ્ટ્રાસોનિક કપહોર્ન ઓફર કરીએ છીએ.
નીચે આપેલ કોષ્ટક તમને નમૂનાની તૈયારી, સેલ વિક્ષેપ અને નિષ્કર્ષણ માટે અમારા અલ્ટ્રાસોનિકેટર્સ પર વિહંગાવલોકન આપે છે. દરેક અલ્ટ્રાસોનિક હોમોજેનાઇઝર પર વધુ માહિતી મેળવવા માટે ઉપકરણના પ્રકાર પર ક્લિક કરો. અમારા સારી રીતે પ્રશિક્ષિત અને લાંબા સમયના અનુભવો ટેકનિકલ સ્ટાફને તમારા નમૂનાની તૈયારી માટે સૌથી યોગ્ય અલ્ટ્રાસોનિકેટર પસંદ કરવામાં તમારી મદદ કરવામાં આનંદ થશે!
| બેચ વોલ્યુમ | પ્રવાહ દર | ભલામણ ઉપકરણો |
|---|---|---|
| 10 શીશીઓ અથવા ટ્યુબ સુધી | ના | વીયલટેવેટર |
| મલ્ટીવેલ / માઇક્રોટાઇટર પ્લેટો | ના | UIP400MTP |
| બહુવિધ નળીઓ / જહાજો | ના | કપહોર્ન |
| 1 થી 500 એમએલ | 10 થી 200 એમએલ / મિનિટ | UP100H |
| 10 થી 1000 એમએલ | 20 થી 200 એમએલ/મિનિટ | Uf200 ः ટી, UP200St |
| 10 થી 2000 એમએલ | 20 થી 400 એમએલ / મિનિટ | UP400St |
તમારી એપ્લિકેશન, સામગ્રી અને નમૂના વોલ્યુમ પર આધાર રાખીને, અમે તમને તમારા નમૂના પ્રેપ માટે સૌથી યોગ્ય સુયોજિત ભલામણ કરશે. આજે અમારો સંપર્ક કરો!
અમારો સંપર્ક કરો! / અમારો કહો!
Hielscher ડિજિટલ અલ્ટ્રાસોનિકેટર્સ એક સંકલિત SD-કાર્ડ પર બ્રાઉઝર રિમોટ કંટ્રોલ અને ઓટોમેટિક ડેટા પ્રોટોકોલિંગ ધરાવે છે.
વીયલટેવેટર પરોક્ષ sonication છે.
જાણવાનું વર્થ હકીકતો
પ્રોટિઓમિક્સ
પ્રોટિઓમિક્સ સંશોધન ક્ષેત્ર છે કે પ્રોટીન અને proteome તપાસ છે. પ્રોટીન્સ સજીવ અંદર મહત્વપૂર્ણ કાર્યો એક વિશાળ એરે fullfil. proteome ચોક્કસ સમયે એક વંશસૂત્રના, સેલ, પેશી, અથવા સજીવ દ્વારા વ્યક્ત પ્રોટીન સમગ્ર સમૂહ છે. proteome, સમય અને અલગ જરૂરિયાતો, અથવા દબાણ સાથે બદલાય છે કે કોષ અથવા સજીવ પસાર થાય છે. વધુ ખાસ રીતે, તે કોષ અથવા સજીવ આપેલ પ્રકાર વ્યક્ત પ્રોટીન સમૂહ છે વ્યાખ્યાયિત શરતો હેઠળ, એક સમયે. શબ્દ પ્રોટીન અને વંશસૂત્રના મિશ્રણ છે. પ્રોટિઓમિક્સ proteome અભ્યાસ છે.
પ્રોટીન
પ્રોટીન્સ મોટી જૈવિકઅણુઓ છે, કહેવાતા macromolecules – જે એમિનો એસિડ અવશેષોના એક અથવા વધુ લાંબી સાંકળોથી બનેલા છે. પ્રોટીન વનસ્પતિ અને પ્રાણીઓના બન્ને બન્ને જીવોમાં હાજર છે અને મોટાભાગના જૈવિક કાર્યો માટે તેઓ નિર્ણાયક છે. પ્રોટીનમાં ઘણી બધી જૈવિક માહિતી શામેલ છે, તેથી વિશ્લેષણાત્મક હેતુ માટે તેને કાઢવામાં આવે છે, દા.ત. પ્રોટોમીક રિસર્ચ માટે. પ્રોટીન દ્વારા કરવામાં આવતી સૌથી મહત્વપૂર્ણ કાર્યમાં મેટાબોલિક પ્રતિક્રિયાઓ, ડીએનએ પ્રતિક્રિયા, ઉદ્દીપક પ્રતિક્રિયા, અને એક સ્થાનથી બીજા સ્થાને અણુઓના પરિવહનનો ઉદ્દીપન સમાવેશ થાય છે. પ્રોટીન મુખ્યત્વે એમિનો ઍસિડની શ્રેણીમાં એક બીજાથી જુદા હોય છે, જે તેમના જનીનની ન્યુક્લિયોટાઇડ ક્રમ દ્વારા નક્કી થાય છે, અને જે સામાન્ય રીતે તેની પ્રવૃત્તિને નિર્ધારિત કરતા ચોક્કસ ત્રિપરિમાણીય માળખામાં પ્રોટીનની ગડીને પરિણમે છે. પ્રોટીન્સ છે – peptides ઉપરાંત – ખોરાક એક મહત્વનો ઘટક છે. તેથી, પ્રોટિઓમિક્સ પ્રક્રિયાઓ ખોરાકની સલામતી અને પોષણ આકારણી ઑપ્ટિમાઇઝ કરવા ખાદ્ય વિજ્ઞાનના એક શક્તિશાળી સાધન છે.
Cloud Point Extraction
Cloud Point Extraction વિશ્લેષકોને અલગ કરવા અને પૂર્વ-સંકલિત કરવા માટેની પૂર્વ-વિશ્લેષણાત્મક પ્રક્રિયા છે. અલ્ટ્રાસોનિકેશન સાથે સંયોજનમાં, ક્લાઉડ પોઈન્ટ એક્સટ્રેક્શન પ્રક્રિયાને વધુ કાર્યક્ષમ, ઝડપી અને પર્યાવરણ-મૈત્રીપૂર્ણ બનાવીને વધુ તીવ્ર બનાવી શકાય છે. અલ્ટ્રાસોનિકેશન સાથે, ક્લાઉડ પોઈન્ટ એક્સ્ટ્રક્શન એ વિશ્લેષક તૈયારીની નોંધપાત્ર રીતે વધુ કાર્યક્ષમ પદ્ધતિ છે. અલ્ટ્રાસોનિકલી સહાયિત ક્લાઉડ પોઇન્ટ નિષ્કર્ષણ વિશે વધુ વાંચો!જેલ ઇલેક્ટ્રોફોરેસિસ
જેલ ઇલેક્ટ્રોફોરેસિસ અલગ અને આવા ડીએનએ આરએનએ અને પ્રોટીન તેમજ તેમના ટુકડાઓ, તેમના કદ અને ચાર્જ પર આધારિત macromolecules વિશ્લેષણ માટે મુખ્ય પદ્ધતિ છે. (IEF agarose, અનિવાર્યપણે કદ સ્વતંત્ર) અને જૈવરાસાયણિક માં, મોલેક્યુલર બાયોલોજી અને પ્રટિઓમિક્સ ડીએનએ અને આરએનએ ટુકડાઓ મિશ્ર વસ્તી લંબાઈ દ્વારા અલગ તે ચાર્જ અને / અથવા કદ દ્વારા પ્રોટીન અલગ ક્લિનિકલ રસાયણશાસ્ત્ર ઉપયોગ કરવામાં આવે છે, ડીએનએ માપ અંદાજ અને આરએનએ ટુકડાઓ અથવા ચાર્જનો દ્વારા પ્રોટીન અલગ છે.
સેલ કલ્ચર્સ
સેલ સંસ્કૃતિ નિયંત્રિત વધતી પ્રક્રિયા છે જેના દ્વારા કોશિકાઓ નિયંત્રિત પરિસ્થિતિમાં હેઠળ ઉગાડવામાં આવે છે. સેલ સંસ્કૃતિ શરતો દરેક કોષ પ્રકાર માટે અલગ અલગ છે. સામાન્ય રીતે, સેલ સંસ્કૃતિ પર્યાવરણ યોગ્ય જહાજ (દા.ત. પેટ્રી ડિશ) સબસ્ટ્રેટને માં મધ્યમ કે આવશ્યક પોષક તત્વો (એમિનો એસિડ, કાર્બોહાઇડ્રેટ, વિટામિન્સ, ખનિજો), વૃદ્ધિ પરિબળો, અંતઃસ્રાવો પુરવઠો અને વાયુઓ (સીઓ સાથે સમાવે2,2), અને શારીરિક-રાસાયણિક પર્યાવરણ (પીએચ બફર ઓસ્મોટિક દબાણ, તાપમાન) નિયમન કરે છે. મોટા ભાગના કોષો સપાટી અથવા કૃત્રિમ પદાર્થ જરૂર જયારે અન્ય સેલ કલ્ચર્સ સંસ્કૃતિ માધ્યમ (સસ્પેન્શન સંસ્કૃતિ, સેલ સસ્પેન્શન) તરતી મફત ખેતી કરી શકાય છે.
પશુ કોશિકા રેખાઓ સામૂહિક સંસ્કૃતિઓ વાયરલ રસીઓ અને અન્ય biotechnologically વ્યુત્પન્ન ઉત્પાદનોની ઔદ્યોગિક ઉત્પાદનમાં ઉપયોગમાં લેવામાં આવે છે. માનવ સ્ટેમ કોશિકાઓ કોષો સંખ્યા વધારવા અને પ્રત્યારોપણ હેતુઓ માટે વિવિધ સોમેટિક સેલ પ્રકારોમાં વહેંચી કોષો અલગ પાડવા સંસ્કારી છે.
ટીશ્યુ નમૂનાઓ
શબ્દ પેશી, સેલ્યુલર મધ્યવર્તી વર્ણવે જ્યાં સેલ સામગ્રી કોશિકાઓ અને સંપૂર્ણ અંગ વચ્ચે સંગઠનાત્મક સ્તર પર છે. પેશી, સમાન કોષો, તે જ મૂળ છે કે જે એકસાથે એક ચોક્કસ કાર્ય હાથ ધરવા ઉપરાંત એસેમ્બલ કરવામાં આવે છે. બહુવિધ પેશીઓ કાર્યાત્મક જૂથ દ્વારા, અંગો જટિલ માળખાં રચના કરવામાં આવે છે.
ટીશ્યુ જીવવિજ્ઞાન, હિસ્ટોલોજી / histopathology, પરજીવી-વિજ્ઞાન, જીવરસાયણ, ઇમ્યુનોહિસ્ટોકેમિસ્ટ્રી સંશોધન તેમજ ખેતી અને ડીએનએ બહાર કાઢવા માટે નમૂનારૂપી છે. અને પ્લાન્ટ પેશીઓ: તે પ્રાણી (સસ્તન પેશી પેટાવિભાગ) વચ્ચે અલગ કરી શકાય છે. પ્રાણીઓની પેશીઓમાં બંધન, સ્નાયુ, ચેતા, અને ઉપકલા પેશીઓ ચાર મૂળભૂત પ્રકારના વહેંચવામાં આવે છે. બાહ્ય ત્વચા, જમીન પેશી, અને વાહિની પેશી છોડની પેશી નીચેના ત્રણ પેશી સિસ્ટમો વિભાજિત કરવામાં આવે છે.
ટીશ્યુ નમૂનાઓ પ્રાણીઓ અથવા છોડના ભાગો, દા.ત. તૈયાર કરી શકાય છે અસ્થિ, સ્નાયુ, પાંદડા, વગેરે
શરીરના પ્રવાહી તત્વો પૈકીનું
બ્લડ સીરમ, પ્લાઝ્મા, cerebrospinal પ્રવાહી, લાળ અને સાયનોવિયલ પ્રવાહી શરીરના પ્રવાહી તત્વો પૈકીનું, જે નૈદાનિક સંબંધિત જાણકારી એક મહાન સ્ત્રોત આપે છે. તેથી, વિશ્લેષણ માટે શરીરમાં પ્રવાહી હિસ્સાનું નમૂનાઓની એક વ્યવહારદક્ષ તૈયારી મહત્વનું છે. પ્રથમ મુશ્કેલી શરીરના પ્રવાહી તત્વો પૈકીનું હાજર ઘટકો વ્યાપક ગતિશીલ શ્રેણી સાથે સંકળાયેલ છે.
પ્રોટીન એકાગ્રતા નિર્ધારણ
બ્રેડફોર્ડ નિબંધ, લૌઅરી નિબંધ અને bicinchoninic એસિડ (BCA) નિબંધ સામાન્ય એસે પ્રોટીન એકાગ્રતા નક્કી કરવા માટે હોય છે. બોવાઇન સીરમ એલ્બુમિન (બીએસએ) મોટા ભાગના વારંવાર ઉપયોગ પ્રોટીન ધોરણ પૈકી એક છે.
lysis બફર
Lysis બફર સેલ સામગ્રી અથવા પેશી (ટીસ્યુ કલ્ચર, પ્લાન્ટ, બેક્ટેરિયા, ફૂગ વગેરે) અનુસાર પસંદ હોવું જ જોઈએ, અને શું કોશિકાઓ માળખું અને કેવા પ્રકારનું માળખું છે. lysis એક વ્યાપક શ્રેણી પ્રોટીન, મેમ્બ્રેનને નિષ્કર્ષણ માટે બફરો અને અંગોમાં એક અથવા વધુ ડિટર્જન્ટથી સાથે ઘડવામાં આવે છે. ડિટર્જન્ટ સામાન્ય ટ્રાયલ-એન્ડ-એરર પરીક્ષણો અથવા મારફતે પસંદ થયેલ છે – જો હોય તો – હાલની પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ પ્રોટોકોલ અનુસાર. ડિટર્જન્ટ પેશી સ્ત્રોત અને પ્રોટીન સાથે સુસંગત હોવી જોઈએ. સામાન્ય રીતે, mildest ડિટર્જન્ટ ચોક્કસ પેશી / પ્રોટીન માટે કામ કરે છે, ક્રમમાં અર્ક મહત્તમ કાર્યક્ષમતા જાળવી રાખવા માટે કરવામાં આવે છે. વધુમાં, પટ અને ઓર્ગાનેલિસ એક નિષ્કર્ષણ કિસ્સામાં, હળવા સફાઈકારક પટલ અકબંધ રાખે છે. lysis બફરો માં સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં ડિટર્જન્ટથી મોટે ભાગે nonionic અથવા zwitterionic, દા.ત. છે Chaps, deoxycholate ટ્રાઇટોન ™ એક્સ 100, NP40, અને ટ્વિન 20.
દાખલા તરીકે, જેમ કે મગજ, યકૃત, આંતરડામાં, કિડની કારણ કે પેશીઓ, બરોળ વગેરે ફક્ત Ripa સાથે બફર શકાય – જોકે પ્રોટીઝ બાધક અને DTT (દા.ત. જેલ ઇલેક્ટ્રો માટે) સમાવેશ કરવો જોઇએ.
20 મીમી Tris (7.8 પીએચ), 137 mM NaCl, 2.7 mM કેસીએલ, 1 મિમી MgCl2 1% ટ્રાઇટોન એક્સ 100, 10% (ડબલ્યુ / વી) glycerol, 1 મિમી EDTA: કંકાલ સ્નાયુ પેશી (બરફ ઠંડા) માટે lysis બફર , 1 મિમી પ્રોટીઝ અને ફોસ્ફેટ બાધક કોકટેલ સાથે પડાય dithiothreitol
સામાન્ય બફરો કોષ્ટક અને તેમના પીએચ શ્રેણી. સામાન્ય રીતે, આ બફરો સામાન્ય 20-50 એમએમ સાંદ્ર ઉપયોગ થાય છે.
| બફર | પીએચ શ્રેણી |
|---|---|
| સાઇટ્રિક એસીડ – NaOH | 2.2 – 6.5 |
| સોડિયમ સાઇટ્રેટ – સાઇટ્રિક એસીડ | 3.0 – 6.2 |
| સોડિયમ એસિટેટ – એસિટિક એસિડ | 3.6 – 5.6 |
| Cacodylic એસિડ સોડિયમ ક્ષાર – એચ.સી.સી. | 5.0 – 7.4 |
| મારી – NaOH | 5.6 – 6.8 |
| સોડિયમ ડાઇહાઇડ્રોજન ફોસ્ફેટનો – disodium હાઇડ્રોજન ફોસ્ફેટ | 5.8 – 8.0 |
| ઇમિડાઝોલ – એચ.સી.સી. | 6.2 – 7.8 |
| Mops – કોહ | 6.6 – 7.8 |
| Triethanolamine Hydrochloride – NaOH | 6.8 – 8.8 |
| ટ્રિસ – એચ.સી.સી. | 7.0 – 9 .0 |
| હિપ્સ – NaOH | 7.2 – 8.2 |
| ટ્રાઇસીન – NaOH | 7.6 – 8.6 |
| સોડિયમ tetraborate – બોરિક એસિડ | 7.6 – 9.2 |
| બેસીન – NaOH | 7.7 – 8.9 |
| ગ્લાયસીન – NaOH | 8.6 – 10.6 |
સૌથી બફરો તાપમાન સાથે પીએચ-પરાધીનતા બતાવે છે. આ Tris બફરો માટે ખાસ કરીને સાચું છે. pKa 0 ° C તાપમાને 25 ° સે 8.85 પર 8.06 થી બદલે છે.
(પીએચ અને pKa બફર ની પીએચ દ્રાવણ હાઇડ્રોજન આયન માપે pKa (= એસિડ વિયોજન સતત) એક સંબંધિત છે, પરંતુ વધુ ચોક્કસ માપ તેને કેવી રીતે પરમાણુ એક ચોક્કસ સમયે કાર્ય કરશે આગાહી કરે છે છે. પીએચ મૂલ્ય.)
ટ્રાઇઝોલ
TRIzol રાસાયણિક guanidinium thiocyanate-PHENOL-કલોરોફોર્મ નિષ્કર્ષણ દરમિયાન આરએનએ / ડીએનએ / પ્રોટીન કાઢવા માટે વપરાય ઉકેલ છે. એ જ નમૂના ઉચ્ચ ડીએનએ આરએનએ અને પ્રોટીનની ઉપજમાં ultrasonically આસિસ્ટેડ TRIzol નિષ્કર્ષણ પરિણામો ઉપયોગ અને તેથી અન્ય નિષ્કર્ષણ પદ્ધતિઓ સારી રીતે કરી શકતો.
સાહિત્ય / સંદર્ભો
- Chittapalo T, Noomhorm A (2009): Ultrasonic assisted alkali extraction of protein from defatted rice bran and properties of the protein concentrates. Int J Food Sci Technol 44: 1843–1849.
- Simões, André E.S:; Pereira, Diane M.; Amaral, Joana D.; Nunes, Ana F.; Gomes, Sofia E.; Rodrigues, Pedro M.; Lo, Adrian C.; D’Hooge, Rudi; Steer, Clifford J.; Thibodeau, Stephen N.; Borralho, Pedro M.; Rodrigues, Cecília M.P. (2013): Efficient recovery of proteins from multiple source samples after trizol or trizol LS RNA extraction and long-term storage. BMC Genomics 2013, 14:181.