Sonication સાથે SARS-CoV-2 કોરોનાવાયરસ નિષ્ક્રિયકરણ માટે પ્રોટોકોલ

Hielscher VialTweeter એ એક અનન્ય અલ્ટ્રાસોનિક મલ્ટિ-સેમ્પલ તૈયારી એકમ છે, જેનો ઉપયોગ કોરોનાવાયરસ SARS-COV-2 ને નિષ્ક્રિય કરવા માટે થાય છે. VialTweeter એકસાથે 10 નમૂનાની શીશીઓ તૈયાર કરવાની મંજૂરી આપે છે અને આ રીતે સામૂહિક નમૂનાની પ્રક્રિયા માટે આદર્શ એકમ છે.

VialTweeter સાથે SARS-CoV-2 કોરોનાવાયરસનું નિષ્ક્રિયકરણ

ફિક્સેટિવને દૂર કર્યા પછી, 1mL MEM/5% FBS માં કોષોને સ્ક્રેપ કરતાં પહેલાં મોનોલેયર્સને ફોસ્ફેટ-બફરડ સલાઈન (PBS) વડે ત્રણ વખત ધોવામાં આવ્યા હતા અને Hielscherનો ઉપયોગ કરીને સોનિકેટેડ (3 × 10 સેકન્ડ ચાલુ, 100% પાવર અને કંપનવિસ્તાર પર 10 સેકન્ડ બંધ) અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોસેસર VialTweeter સાથે UP200St જોડાણ સુપરનેટન્ટ્સને 10 મિનિટ માટે 3000 × g પર સેન્ટ્રીફ્યુજીંગ દ્વારા સ્પષ્ટ કરવામાં આવ્યા હતા. વેલ્ચ એટ અલ દ્વારા SARS-CoV-2 કોરોનાવાયરસ નિષ્ક્રિયકરણ માટે અહીં સંપૂર્ણ પ્રોટોકોલ વાંચો. (2020) નીચે:

કોષો અને વાયરસ

Vero E6 cells (Vero C1008; ATCC CRL-1586) were cultured in modified Eagle’s minimum essential medium (MEM) supplemented with 10% (v/v) fetal calf serum (FCS). Virus used was SARS-CoV-2 strain hCOV-19/England/2/2020, isolated by PHE from the first patient cluster in the UK on 29/01/2020. This virus was obtained at passage 1 and used for inactivation studies at passage 2 or 3.
SARS-CoV-2 નિષ્ક્રિયકરણ તેમજ રીએજન્ટ સાયટોટોક્સિસિટી દૂર કરવા માટે વપરાતા રીએજન્ટ્સ અને રસાયણો માટે કૃપા કરીને વેલ્ચ એટ અલનો વૈજ્ઞાનિક અહેવાલ જુઓ. (2020).

ડિટર્જન્ટ દ્વારા વાયરસ નિષ્ક્રિયકરણ – વેલ્ચ એટ અલ દ્વારા SARS-CoV-2 કોરોનાવાયરસ નિષ્ક્રિયકરણ પ્રોટોકોલ. 2020

SARS-CoV-2 નિષ્ક્રિયકરણ

વ્યાપારી ઉત્પાદનો માટે, વાયરસની તૈયારીઓ (ટીશ્યુ કલ્ચર પ્રવાહી, 1 × 10 સુધીના ટાઇટર્સ⁶ 1 × 10 સુધી⁸ PFU/ml) were treated in triplicate with reagents at concentrations and for contact times recommended in the manufacturers’ instructions for use, where available, or for concentrations and times specifically requested by testing laboratories. Where a range of concentrations was given by the manufacturer, the lowest ratio of product to sample was tested (i.e. lowest recommended concentration of test product). Specimen transport tube reagents were tested using a ratio of one volume of tissue culture fluid to ten volumes of reagent, unless a volume ratio of sample fluid to reagent was specified by the manufacturer. Detergents, fixatives and solvents were tested at the indicated concentrations for the indicated times. All inactivation steps were performed at ambient room temperature (18 – 25°C). For testing of alternative sample types, virus was spiked into the indicated sample matrix at a ratio of 1:9, then treated with test reagents as above. All experiments included triplicate control mock-treated samples with an equivalent volume of PBS in place of test reagent. Immediately following the required contact time, 1mL of treated sample was processed using the appropriately selected filtration matrix. Reagent removal for inactivation testing was carried out in a larger spin column format using Pierce 4mL Detergent Removal Spin Columns (Thermo Fisher), or by filling empty Pierce 10mL capacity centrifuge columns (Thermo Fisher) with SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-400HR or Sephadex LH-20 to give 4mL packed beads/resin. For purification using Amicon filters, 2 × 500μl samples were purified using two centrifugal filters by the method previously described, then pooled together. For formaldehyde and formaldehyde with glutaraldehyde removal, one filter was used with 1× 500μl sample volume, resuspended after processing in 500μl PBS, and added to 400ul MEM/5% FBS. For inactivation of infected મોનોલેયર્સ, 12.5 સે.મી² વેરો E6 કોષોના ફ્લાસ્ક (2.5 × 10⁶ 2.5mL MEM/5% FBS માં કોષો/ફ્લાસ્ક) MOI 0.001 પર ચેપ લાગ્યો હતો અને 37°C/5% CO પર ઉકાળવામાં આવ્યો હતો₂ 24 કલાક માટે. સુપરનેટન્ટ દૂર કરવામાં આવ્યા હતા, અને 5mL ફોર્માલ્ડીહાઈડ અથવા ફોર્માલ્ડીહાઈડ અને ગ્લુટારાલ્ડીહાઈડનો ઉપયોગ કરીને 15 અથવા 60 મિનિટ માટે ઓરડાના તાપમાને કોષો નિશ્ચિત કરવામાં આવ્યા હતા. ફિક્સેટિવ દૂર કરવામાં આવ્યું હતું, અને VialTweeter એટેચમેન્ટ (Hielscher Ultrasound) સાથે UP200St નો ઉપયોગ કરીને 1mL MEM/5% FBS માં કોષોને સ્ક્રેપ કરતાં પહેલાં મોનોલેયર્સ પીબીએસ સાથે ત્રણ વખત ધોવાયા હતા અને સોનિકેટેડ (3 × 10 સેકન્ડ ચાલુ, 100% પાવર અને કંપનવિસ્તારમાં 10 સેકન્ડ બંધ) ટેકનોલોજી). સુપરનેટન્ટ્સને 10 મિનિટ માટે 3000 × g પર સેન્ટ્રીફ્યુજીંગ દ્વારા સ્પષ્ટ કરવામાં આવ્યા હતા.

વેલ્ચ એટ અલ દ્વારા પ્રોટોકોલ અનુસાર અલ્ટ્રાસોનિક VialTweeter સાથે SARS-CoV-2 કોરોનાવાયરસ નિષ્ક્રિયકરણ માટે ઉપયોગમાં લેવાતા રીએજન્ટની વિગતો. 2020

Hielscher VialTweeter નો ઉપયોગ સહિતનો સંપૂર્ણ પ્રોટોકોલ અહીં મળી શકે છે:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

અત્યાધુનિક અલ્ટ્રાસોનિક ડિસેમ્બ્રેટર્સ અને સેલ ડિસપ્ટર્સ

મલ્ટી-સેમ્પલ અલ્ટ્રાસોનિકેટર VialTweeter એ જૈવિક, બાયોકેમિકલ અને ક્લિનિકલ લેબોરેટરીઓમાં નમૂનાની તૈયારી માટેના ઘણા અલ્ટ્રાસોનિક સોલ્યુશન્સમાંનું એક છે. Hielscher Ultrasonics તમારી એપ્લિકેશન માટે આદર્શ અલ્ટ્રાસોનિક ડિસેમ્બ્રેટર ઓફર કરે છે, દા.ત. સેલ લિસિસ, સેલ એક્સટ્રેક્શન, ટિશ્યુ હોમોજેનાઇઝેશન, લિસેટ સોલ્યુબિલાઇઝેશન, ઓગળવું, સેમ્પલ ડિગાસિંગ વગેરે.
અમને જણાવો કે તમારે કલાક અને દિવસ દીઠ કેટલા નમૂનાઓ પર પ્રક્રિયા કરવાની છે, જો તમે પ્રત્યક્ષ અથવા પરોક્ષ સોનિકેશન પસંદ કરો છો અને અલ્ટ્રાસોનિક નમૂના સારવારનું લક્ષ્ય શું છે. અમે તમને તમારા રોજિંદા કામ માટે સૌથી યોગ્ય અલ્ટ્રાસોનિક યુનિટની ભલામણ કરીશું!
Hielscher Ultrasonics’ digital ultrasonic processors are equipped with smart software, automatic data recording, easy pre-setting options for temperature control, sonication duration, cycle/pulse mode as well as sample illumination and browser remote control. We strive to make our ultrasonic devices as smart as possible so that your research and work routine becomes as convenient and successful as possible.
VialTweeter સાથે અલ્ટ્રાસોનિક નમૂનાની તૈયારીના પ્રોટોકોલ સહિત વધુ એપ્લિકેશન્સ શોધવા માટે અહીં ક્લિક કરો!