સોનિફિકેશન સાથે સાર્સ-કોવી -2 કોરોનાવાયરસ નિષ્ક્રિયતા માટેનો પ્રોટોકોલ

હિલ્સચર વાયલટવીટર એક અનોખું અલ્ટ્રાસોનિક મલ્ટિ-સેમ્પલ તૈયારી એકમ છે, જેનો ઉપયોગ કોરોનાવાયરસ સાર્સ-સીઓવી -2 ને નિષ્ક્રિય કરવા માટે થાય છે. વાઈલટવીટર એક સાથે 10 જેટલા નમૂના શીશીઓ તૈયાર કરવાની મંજૂરી આપે છે અને ત્યાં સમૂહ નમૂના પ્રક્રિયા માટે આદર્શ એકમ છે.

વાયલટવીટર સાથે સાર્સ-કોવી -2 કોરોનાવાયરસનું નિષ્ક્રિયકરણ

ફિક્સેટિવને દૂર કર્યા પછી, હિલોસ્કરનો ઉપયોગ કરીને, મોનોલેયર્સ 1 એમએલ / 5% એફબીએસમાં કોષોને સ્ક્રેપ કરતા પહેલા ફોસ્ફેટ-બફર સ salલીન (પીબીએસ) સાથે ત્રણ વખત ધોવાઈ ગયા હતા અને હિએલ્શરનો ઉપયોગ કરીને સોનેકેટ (3 × 10 સેકન્ડ, 100% પાવર અને કંપનવિસ્તાર પર 10 સેકન્ડ) અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોસેસર VialTweeter સાથે UP200St જોડાણ. સુપરમેનટન્ટ્સને 10 મિનિટ માટે 3000. જી પર સેન્ટ્રીફ્યુગ દ્વારા સ્પષ્ટતા કરવામાં આવી હતી. વેલ્ચ એટ અલ દ્વારા સાર્સ-કોવી -2 કોરોનાવાયરસ નિષ્ક્રિયતા માટે અહીં સંપૂર્ણ પ્રોટોકોલ વાંચો. (2020) નીચે:

કોષો અને વાયરસ

વેરો E6 કોષો (વેરો સી 1008; એટીસીસી સીઆરએલ -1586) એ સુધારેલ ઇગલના ન્યૂનતમ આવશ્યક માધ્યમ (એમઇએમ) માં 10% (વી / વી) ગર્ભ વાછરડ સીરમ (એફસીએસ) સાથે પૂરક હતા. વાયરસનો ઉપયોગ સાર્સ-કોવી -2 સ્ટ્રેઇન એચસીઓવી -19 / ઇંગ્લેંડ / 2/2020 હતો, જે પી.એચ.ઇ દ્વારા 29/01/2020 ના રોજ યુકેના પ્રથમ દર્દી ક્લસ્ટરથી અલગ હતો. આ વાયરસ પેસેજ 1 પર પ્રાપ્ત થયો હતો અને 2 અથવા 3 પેસેજ પર નિષ્ક્રિયકરણના અભ્યાસ માટે વપરાય છે.
સાર્સ-કોવી -2 નિષ્ક્રિયકરણ માટે તેમજ રીએજન્ટ સાયટોટોક્સિસીટીને દૂર કરવા માટે વપરાયેલા રીએજન્ટ્સ અને રસાયણો માટે, કૃપા કરીને વેલ્ચ એટ અલનો વૈજ્ .ાનિક અહેવાલ જુઓ. (2020).

ડિટરજન્ટ દ્વારા વાયરસ નિષ્ક્રિયકરણ – સાર્સ-કોવી -2 કોરોનાવાયરસ ઇનએક્ટિવેશન પ્રોટોક .લ દ્વારા વેલ્ચ એટ અલ. 2020

સાર્સ-કોવી -2 નિષ્ક્રિયકરણ

વ્યવસાયિક ઉત્પાદનો માટે, વાયરસની તૈયારીઓ (ટીશ્યુ કલ્ચર ફ્લુઇડ, ટાઇટર્સ 1 × 10 થી લઇને⁶ થી 1 × 10⁸ પી.એફ.યુ. / એમ.એલ. (ઇ.એફ.યુ. / એમ.એલ.) નો ઉપયોગ એકાગ્રતામાં રીએજન્ટ્સ સાથે અને સંપર્ક સમય માટે ઉત્પાદકોના ઉપયોગ માટે સૂચનો, જ્યાં ઉપલબ્ધ હોય ત્યાં, અથવા સાંદ્રતા અને ખાસ કરીને પ્રયોગશાળાઓ દ્વારા વિનંતી કરાયેલ સમય માટે કરવામાં આવે છે. ઉત્પાદક દ્વારા જ્યાં એકાગ્રતાની શ્રેણી આપવામાં આવી હતી, ત્યાં નમૂનાના ઉત્પાદનમાં ઉત્પાદનના સૌથી ઓછા ગુણોત્તરની ચકાસણી કરવામાં આવી (એટલે કે પરીક્ષણ ઉત્પાદનની સૌથી ઓછી ભલામણ કરેલ એકાગ્રતા). ઉત્પાદક દ્વારા નમૂના પ્રવાહીના વોલ્યુમ ગુણોત્તરને નિર્દિષ્ટ ન કરવામાં આવે ત્યાં સુધી સેમ્પ્યુમન્સ ટ્રાન્સપોર્ટ ટ્યુબ રીએજન્ટ્સને ટિશ્યુ કલ્ચર પ્રવાહીના એક જથ્થાના રેશિયોના દસ વોલ્યુમોના ગુણોત્તરનો ઉપયોગ કરીને પરીક્ષણ કરવામાં આવ્યું હતું. ડિટરજન્ટ્સ, ફિક્સેટિવ્સ અને સોલવન્ટ્સનો સંકેત સમય માટે સંકેતિત સાંદ્રતા પર પરીક્ષણ કરવામાં આવ્યો હતો. બધા નિષ્ક્રિયકરણના પગલાં આજુબાજુના ઓરડાના તાપમાને (18 - 25 ° સે) કરવામાં આવ્યા હતા. વૈકલ્પિક નમૂનાના પ્રકારોના પરીક્ષણ માટે, વાયરસ 1: 9 ના ગુણોત્તરમાં સૂચવેલા નમૂના મેટ્રિક્સમાં નાખ્યો હતો, ત્યારબાદ ઉપરની જેમ પરીક્ષણ રીજેન્ટ્સ દ્વારા સારવાર આપવામાં આવે છે. બધા પ્રયોગોમાં પરીક્ષણ રીજેન્ટની જગ્યાએ પીબીએસના સમકક્ષ વોલ્યુમવાળા ત્રિકોણાકાર નિયંત્રણ મોક-ટ્રીટ નમૂનાઓ શામેલ છે. તરત જ જરૂરી સંપર્ક સમયને અનુસરતા, યોગ્ય રીતે પસંદ કરેલ ગાળણ મેટ્રિક્સનો ઉપયોગ કરીને સારવાર કરેલ નમૂનાના 1 એમએલની પ્રક્રિયા કરવામાં આવી. નિષ્ક્રિયકરણ પરીક્ષણ માટે રીએજન્ટ કા removalી નાંખવું, પિયર્સ 4 એમએલ ડીટરજન્ટ રિમૂવલ સ્પિન કumnsલમ્સ (થર્મો ફિશર) નો ઉપયોગ કરીને અથવા એસએમ 2 બાયો-મણકા, સેફેક્રીલ એસ -400 એચઆર અથવા ખાલી પિયર્સ 10 એમએલ ક્ષમતાના સેન્ટ્રિફ્યુજ કumnsલમ્સ (થર્મો ફિશર) ભરીને મોટા સ્પિન ક columnલમ ફોર્મેટમાં હાથ ધરવામાં આવ્યું હતું. 4 એમએલ ભરેલા માળા / રેઝિન આપવા માટે સેફેડેક્સ એલએચ -20. એમિકોન ફિલ્ટર્સનો ઉપયોગ કરીને શુદ્ધિકરણ માટે, 2 × 500μl નમૂનાઓ અગાઉ વર્ણવેલ પદ્ધતિ દ્વારા બે સેન્ટ્રીફ્યુગલ ફિલ્ટર્સની મદદથી શુદ્ધ કરવામાં આવ્યા હતા, પછી એકસાથે પૂલ કરવામાં આવ્યા હતા. ગ્લુટેરાલ્ડીહાઇડને દૂર કરવા માટેના ફોર્માલ્ડીહાઇડ અને ફોર્મેલ્ડીહાઇડ માટે, એક ફિલ્ટરનો ઉપયોગ 1 × 500μl નમૂના વોલ્યુમ સાથે કરવામાં આવતો હતો, 500μl પીબીએસમાં પ્રક્રિયા કર્યા પછી ફરી પાછો ખેંચાયો, અને 400ul મેમ / 5% એફબીએસમાં ઉમેરવામાં આવ્યો. ચેપના નિષ્ક્રિયકરણ માટે મોનોલેયર્સ, 12.5 સે.મી.² વેરો E6 કોષોની ફ્લાસ્ક (2.5 of 10⁶ 2.5 એમએલ એમઇએમ / 5% એફબીએસ) માં કોષો / ફ્લાસ્ક) એમઓઆઈ 0.001 માં ચેપ લાગ્યો હતો અને 37 ° સે / 5% સીઓ પર સેવામાં આવ્યો હતો.₂ 24 કલાક માટે. સુપરનાટantન્ટને દૂર કરવામાં આવ્યો, અને કોષોને 5mL formaldehyde, અથવા formaldehyde અને glutaraldehyde ની મદદથી ઓરડાના તાપમાને 15 અથવા 60 મિનિટ સુધી સ્થિર કરવામાં આવ્યા. ફિક્સેટિવને દૂર કરવામાં આવ્યો, અને મોનોલેઅર્સ, વીએલટવીટર જોડાણ સાથેના યુપી 200 સ્ટેટનો ઉપયોગ કરીને 1 એમએલ એમઇએમ / 5% એફબીએસમાં કોષોને સ્ક્રેપ કરતા પહેલાં અને પીએબીએસ સાથે ત્રણ વખત ધોઈ નાખ્યો (3 × 10 સેકન્ડ, 100% પાવર અને કંપનવિસ્તાર પર 10 સેકન્ડની છૂટથી) ટેકનોલોજી). સુપરમેનટન્ટ્સને 10 મિનિટ માટે 3000. જી પર સેન્ટ્રીફ્યુગ દ્વારા સ્પષ્ટતા કરવામાં આવી હતી.

વેલ્ચ એટ અલ દ્વારા પ્રોટોકોલ મુજબ, અલ્ટ્રાસોનિક વાઈલટવીટર સાથે સાર્સ-કો-2 કોરોનાવાયરસ નિષ્ક્રિયતા માટે વપરાયેલ રીએજન્ટની વિગતો. 2020

હિલ્સચર વાયલટવીટરનો ઉપયોગ સહિતનો સંપૂર્ણ પ્રોટોકોલ અહીં મળી શકે છે:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

સોફિસ્ટિકેટેડ અલ્ટ્રાસોનિક ડિસેમ્બ્રેટર્સ અને સેલ ડિસપ્ટર્સ

મલ્ટિ-સેમ્પલ અલ્ટ્રાસોનિસેટર વાયલટવીટર, જૈવિક, બાયોકેમિકલ અને ક્લિનિકલ પ્રયોગશાળાઓમાં નમૂના તૈયાર કરવા માટેના ઘણા અલ્ટ્રાસોનિક ઉકેલોમાંથી એક છે. હિલ્સચર અલ્ટ્રાસોનિક્સ તમારી એપ્લિકેશન, જેમ કે સેલ લિસીસ, સેલ નિષ્કર્ષણ, ટીશ્યુ હોમોજેનાઇઝેશન, લિસ્ટે સોલ્યુબિલાઇઝેશન, ઓગળવું, સેમ્પલ ડિગ્રેસિંગ વગેરે માટે આદર્શ અવાજ વિક્ષેપ આપે છે.
અમને જણાવો કે કલાક દીઠ તમારે કેટલા નમૂનાઓ પર પ્રક્રિયા કરવી છે, જો તમે સીધા અથવા પરોક્ષ સોનીકેશનને પસંદ કરો છો અને અલ્ટ્રાસોનિક નમૂનાની સારવારનું લક્ષ્ય શું છે. અમે તમને તમારા રોજિંદા કામના નિયમિત માટે સૌથી યોગ્ય અલ્ટ્રાસોનિક એકમની ભલામણ કરીશું!
હિલ્સચર અલ્ટ્રાસોનિકસ ડિજિટલ અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોસેસરો, સ્માર્ટ સ softwareફ્ટવેર, સ્વચાલિત ડેટા રેકોર્ડિંગ, તાપમાન નિયંત્રણ માટે સરળ પ્રી-સેટિંગ વિકલ્પો, સોનીકેશન અવધિ, ચક્ર / પલ્સ મોડ તેમજ નમૂનાના પ્રકાશ અને બ્રાઉઝર રીમોટ કંટ્રોલથી સજ્જ છે. અમે અમારા અલ્ટ્રાસોનિક ડિવાઇસેસને શક્ય તેટલું સ્માર્ટ બનાવવાનો પ્રયત્ન કરીએ છીએ જેથી તમારી સંશોધન અને કાર્યની રૂટિન શક્ય તેટલું અનુકૂળ અને સફળ બને.
VialTweeter સાથે અવાજ નમૂનાની તૈયારીના પ્રોટોકોલ સહિત વધુ એપ્લિકેશનો શોધવા માટે, અહીં ક્લિક કરો!