Sonication સાથે SARS-CoV-2 કોરોનાવાયરસ નિષ્ક્રિયકરણ માટે પ્રોટોકોલ

Hielscher VialTweeter એ એક અનન્ય અલ્ટ્રાસોનિક મલ્ટિ-સેમ્પલ તૈયારી એકમ છે, જેનો ઉપયોગ કોરોનાવાયરસ SARS-COV-2 ને નિષ્ક્રિય કરવા માટે થાય છે. VialTweeter એકસાથે 10 નમૂનાની શીશીઓ તૈયાર કરવાની મંજૂરી આપે છે અને આ રીતે સામૂહિક નમૂનાની પ્રક્રિયા માટે આદર્શ એકમ છે.

VialTweeter સાથે SARS-CoV-2 કોરોનાવાયરસનું નિષ્ક્રિયકરણ

ફિક્સેટિવને દૂર કર્યા પછી, 1mL MEM/5% FBS માં કોષોને સ્ક્રેપ કરતાં પહેલાં મોનોલેયર્સને ફોસ્ફેટ-બફરડ સલાઈન (PBS) વડે ત્રણ વખત ધોવામાં આવ્યા હતા અને Hielscherનો ઉપયોગ કરીને સોનિકેટેડ (3 × 10 સેકન્ડ ચાલુ, 100% પાવર અને કંપનવિસ્તાર પર 10 સેકન્ડ બંધ) અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોસેસર VialTweeter સાથે UP200St જોડાણ સુપરનેટન્ટ્સને 10 મિનિટ માટે 3000 × g પર સેન્ટ્રીફ્યુજીંગ દ્વારા સ્પષ્ટ કરવામાં આવ્યા હતા. વેલ્ચ એટ અલ દ્વારા SARS-CoV-2 કોરોનાવાયરસ નિષ્ક્રિયકરણ માટે અહીં સંપૂર્ણ પ્રોટોકોલ વાંચો. (2020) નીચે:

કોષો અને વાયરસ

Vero E6 કોષો (Vero C1008; ATCC CRL-1586) 10% (v/v) ફેટલ કાફ સીરમ (FCS) સાથે પૂરક સંશોધિત ઇગલના ન્યૂનતમ આવશ્યક માધ્યમ (MEM) માં સંવર્ધિત કરવામાં આવ્યા હતા. SARS-CoV-2 સ્ટ્રેન hCOV-19/England/2/2020 નો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો, જેને PHE દ્વારા 29/01/2020 ના રોજ યુકેમાં પ્રથમ દર્દી ક્લસ્ટરમાંથી અલગ કરવામાં આવ્યો હતો. આ વાયરસ પેસેજ 1 પર મેળવવામાં આવ્યો હતો અને પેસેજ 2 અથવા 3 પર નિષ્ક્રિયતા અભ્યાસ માટે ઉપયોગમાં લેવાયો હતો.
SARS-CoV-2 નિષ્ક્રિયકરણ તેમજ રીએજન્ટ સાયટોટોક્સિસિટી દૂર કરવા માટે વપરાતા રીએજન્ટ્સ અને રસાયણો માટે કૃપા કરીને વેલ્ચ એટ અલનો વૈજ્ઞાનિક અહેવાલ જુઓ. (2020).

ડિટર્જન્ટ દ્વારા વાયરસ નિષ્ક્રિયકરણ – વેલ્ચ એટ અલ દ્વારા SARS-CoV-2 કોરોનાવાયરસ નિષ્ક્રિયકરણ પ્રોટોકોલ. 2020

SARS-CoV-2 નિષ્ક્રિયકરણ

વ્યાપારી ઉત્પાદનો માટે, વાયરસની તૈયારીઓ (ટીશ્યુ કલ્ચર પ્રવાહી, 1 × 10 સુધીના ટાઇટર્સ⁶ 1 × 10 સુધી⁸ PFU/ml) નો ઉપયોગ કરવા માટે ઉત્પાદકોની સૂચનાઓમાં ભલામણ કરેલ એકાગ્રતા પર રીએજન્ટ્સ સાથે ટ્રિપ્લિકેટમાં સારવાર કરવામાં આવી હતી, જ્યાં ઉપલબ્ધ હોય, અથવા પરીક્ષણ પ્રયોગશાળાઓ દ્વારા ખાસ વિનંતી કરાયેલ સાંદ્રતા અને સમય માટે. જ્યાં ઉત્પાદક દ્વારા સાંદ્રતાની શ્રેણી આપવામાં આવી હતી, ત્યાં ઉત્પાદનના નમૂનાના સૌથી નીચા ગુણોત્તરનું પરીક્ષણ કરવામાં આવ્યું હતું (એટલે કે પરીક્ષણ ઉત્પાદનની સૌથી ઓછી ભલામણ કરેલ સાંદ્રતા). નમૂનો પરિવહન ટ્યુબ રીએજન્ટ્સનું પરીક્ષણ ટીશ્યુ કલ્ચર પ્રવાહીના એક વોલ્યુમ અને રીએજન્ટના દસ વોલ્યુમના ગુણોત્તરનો ઉપયોગ કરીને કરવામાં આવ્યું હતું, સિવાય કે ઉત્પાદક દ્વારા નમૂના પ્રવાહી અને રીએજન્ટનો વોલ્યુમ ગુણોત્તર નિર્દિષ્ટ કરવામાં આવ્યો હોય. ડિટર્જન્ટ, ફિક્સેટિવ્સ અને સોલવન્ટ્સ સૂચવેલા સમય માટે દર્શાવેલ સાંદ્રતા પર પરીક્ષણ કરવામાં આવ્યા હતા. બધા નિષ્ક્રિયતા પગલાં આસપાસના ઓરડાના તાપમાને (18 - 25 ° સે) પર કરવામાં આવ્યા હતા. વૈકલ્પિક નમૂનાના પ્રકારોના પરીક્ષણ માટે, વાયરસને 1:9 ના ગુણોત્તરમાં સૂચવેલા નમૂનાના મેટ્રિક્સમાં સ્પિક કરવામાં આવ્યો હતો, પછી ઉપર મુજબ પરીક્ષણ રીએજન્ટ્સ સાથે સારવાર કરવામાં આવી હતી. તમામ પ્રયોગોમાં ટેસ્ટ રીએજન્ટની જગ્યાએ પીબીએસના સમકક્ષ વોલ્યુમ સાથે ટ્રિપ્લિકેટ કંટ્રોલ મોક-ટ્રીટેડ નમૂનાઓનો સમાવેશ થાય છે. જરૂરી સંપર્ક સમયને તરત જ અનુસરીને, યોગ્ય રીતે પસંદ કરેલ ફિલ્ટરેશન મેટ્રિક્સનો ઉપયોગ કરીને સારવાર કરેલ નમૂનાના 1mLની પ્રક્રિયા કરવામાં આવી હતી. નિષ્ક્રિયતા પરીક્ષણ માટે રીએજન્ટ દૂર કરવાનું મોટા સ્પિન કૉલમ ફોર્મેટમાં પિયર્સ 4mL ડિટરજન્ટ રિમૂવલ સ્પિન કૉલમ્સ (થર્મો ફિશર) નો ઉપયોગ કરીને અથવા ખાલી પિયર્સ 10mL ક્ષમતાના સેન્ટ્રીફ્યુજ કૉલમ્સ (થર્મો ફિશર) ને SM2 બાયો-બીડ્સ, S-400000000 સાથે ભરીને કરવામાં આવ્યું હતું. Sephadex LH-20 4mL પેક્ડ માળા/રેઝિન આપવા માટે. એમિકોન ફિલ્ટર્સનો ઉપયોગ કરીને શુદ્ધિકરણ માટે, 2 × 500μl નમૂનાઓ અગાઉ વર્ણવેલ પદ્ધતિ દ્વારા બે કેન્દ્રત્યાગી ફિલ્ટર્સનો ઉપયોગ કરીને શુદ્ધ કરવામાં આવ્યા હતા, પછી એકસાથે એકત્રિત કરવામાં આવ્યા હતા. ગ્લુટારાલ્ડીહાઈડ દૂર કરવા સાથે ફોર્માલ્ડીહાઈડ અને ફોર્માલ્ડીહાઈડ માટે, એક ફિલ્ટરનો ઉપયોગ 1×500μl નમૂનાના જથ્થા સાથે કરવામાં આવ્યો હતો, 500μl PBS માં પ્રક્રિયા કર્યા પછી ફરીથી સસ્પેન્ડ કરવામાં આવ્યો હતો, અને 400ul MEM/5% FBS માં ઉમેરવામાં આવ્યો હતો. ચેપગ્રસ્ત ના નિષ્ક્રિયકરણ માટે મોનોલેયર્સ, 12.5 સે.મી² વેરો E6 કોષોના ફ્લાસ્ક (2.5 × 10⁶ 2.5mL MEM/5% FBS માં કોષો/ફ્લાસ્ક) MOI 0.001 પર ચેપ લાગ્યો હતો અને 37°C/5% CO પર ઉકાળવામાં આવ્યો હતો₂ 24 કલાક માટે. સુપરનેટન્ટ દૂર કરવામાં આવ્યા હતા, અને 5mL ફોર્માલ્ડીહાઈડ અથવા ફોર્માલ્ડીહાઈડ અને ગ્લુટારાલ્ડીહાઈડનો ઉપયોગ કરીને 15 અથવા 60 મિનિટ માટે ઓરડાના તાપમાને કોષો નિશ્ચિત કરવામાં આવ્યા હતા. ફિક્સેટિવ દૂર કરવામાં આવ્યું હતું, અને VialTweeter એટેચમેન્ટ (Hielscher Ultrasound) સાથે UP200St નો ઉપયોગ કરીને 1mL MEM/5% FBS માં કોષોને સ્ક્રેપ કરતાં પહેલાં મોનોલેયર્સ પીબીએસ સાથે ત્રણ વખત ધોવાયા હતા અને સોનિકેટેડ (3 × 10 સેકન્ડ ચાલુ, 100% પાવર અને કંપનવિસ્તારમાં 10 સેકન્ડ બંધ) ટેકનોલોજી). સુપરનેટન્ટ્સને 10 મિનિટ માટે 3000 × g પર સેન્ટ્રીફ્યુજીંગ દ્વારા સ્પષ્ટ કરવામાં આવ્યા હતા.

વેલ્ચ એટ અલ દ્વારા પ્રોટોકોલ અનુસાર અલ્ટ્રાસોનિક VialTweeter સાથે SARS-CoV-2 કોરોનાવાયરસ નિષ્ક્રિયકરણ માટે ઉપયોગમાં લેવાતા રીએજન્ટની વિગતો. 2020

Hielscher VialTweeter નો ઉપયોગ સહિતનો સંપૂર્ણ પ્રોટોકોલ અહીં મળી શકે છે:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

અત્યાધુનિક અલ્ટ્રાસોનિક ડિસેમ્બ્રેટર્સ અને સેલ ડિસપ્ટર્સ

મલ્ટી-સેમ્પલ અલ્ટ્રાસોનિકેટર VialTweeter એ જૈવિક, બાયોકેમિકલ અને ક્લિનિકલ લેબોરેટરીઓમાં નમૂનાની તૈયારી માટેના ઘણા અલ્ટ્રાસોનિક સોલ્યુશન્સમાંનું એક છે. Hielscher Ultrasonics તમારી એપ્લિકેશન માટે આદર્શ અલ્ટ્રાસોનિક ડિસેમ્બ્રેટર ઓફર કરે છે, દા.ત. સેલ લિસિસ, સેલ એક્સટ્રેક્શન, ટિશ્યુ હોમોજેનાઇઝેશન, લિસેટ સોલ્યુબિલાઇઝેશન, ઓગળવું, સેમ્પલ ડિગાસિંગ વગેરે.
અમને જણાવો કે તમારે કલાક અને દિવસ દીઠ કેટલા નમૂનાઓ પર પ્રક્રિયા કરવાની છે, જો તમે પ્રત્યક્ષ અથવા પરોક્ષ સોનિકેશન પસંદ કરો છો અને અલ્ટ્રાસોનિક નમૂના સારવારનું લક્ષ્ય શું છે. અમે તમને તમારા રોજિંદા કામ માટે સૌથી યોગ્ય અલ્ટ્રાસોનિક યુનિટની ભલામણ કરીશું!
Hielscher Ultrasonicsના ડિજિટલ અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોસેસર્સ સ્માર્ટ સોફ્ટવેર, ઓટોમેટિક ડેટા રેકોર્ડિંગ, તાપમાન નિયંત્રણ માટે સરળ પૂર્વ-સેટિંગ વિકલ્પો, સોનિકેશન સમયગાળો, સાયકલ/પલ્સ મોડ તેમજ સેમ્પલ લાઇટિંગ અને બ્રાઉઝર રિમોટ કંટ્રોલથી સજ્જ છે. અમે અમારા અલ્ટ્રાસોનિક ઉપકરણોને શક્ય તેટલું સ્માર્ટ બનાવવાનો પ્રયત્ન કરીએ છીએ જેથી તમારું સંશોધન અને કાર્ય નિયમિત બને તેટલું અનુકૂળ અને સફળ બને.
VialTweeter સાથે અલ્ટ્રાસોનિક નમૂનાની તૈયારીના પ્રોટોકોલ સહિત વધુ એપ્લિકેશન્સ શોધવા માટે અહીં ક્લિક કરો!