ELISA Assays માટે અલ્ટ્રાસોનિક નમૂનાની તૈયારી

ELISA જેવા એસેસનો વ્યાપકપણે ઇન-વિટ્રો ડાયગ્નોસ્ટિક્સ, રોગ-સંબંધિત પ્રોટીન શોધ અને ગુણવત્તા નિયંત્રણ (દા.ત. ફૂડ એલર્જનનું નિરીક્ષણ) માટે ઉપયોગ થાય છે. અલ્ટ્રાસોનિક નમૂનાની તૈયારી એ કોષને લીઝ કરવા અને અંતઃકોશિક પ્રોટીન, ડીએનએ, આરએનએ અને ઓર્ગેનેલ્સને અલગ કરવા માટે ઝડપી, વિશ્વસનીય અને પુનઃઉત્પાદન કરી શકાય તેવી તકનીક છે. Hielscher Ultrasonics સિંગલ સેમ્પલ, બહુવિધ શીશીઓ તેમજ માઇક્રોટાઇટર પ્લેટ્સ અને 96-વેલ પ્લેટ્સની અનુકૂળ તૈયારી માટે વિવિધ અલ્ટ્રાસોનિક સોલ્યુશન્સ ઓફર કરે છે.

એલિસા – એન્ઝાઇમ-લિંક્ડ ઇમ્યુનોસોર્બન્ટ એસે

ELISA એ એન્ઝાઇમ-લિંક્ડ ઇમ્યુનોસોર્બન્ટ એસે માટે વપરાય છે અને લિગાન્ડ-બાઈન્ડિંગ એસેની શ્રેણીની વ્યાપકપણે ઉપયોગમાં લેવાતી બાયોકેમિકલ વિશ્લેષણ તકનીક છે. ELISA માં, વિશિષ્ટ બંધનકર્તા ગુણધર્મો સાથે સ્થિર નક્કર તબક્કામાં પ્રવાહી નમૂના ઉમેરવામાં આવે છે. સામાન્ય રીતે, સ્થિર નક્કર તબક્કો વેલ પ્લેટ અથવા ELISA પ્લેટ પર કોટિંગ તરીકે લાગુ કરવામાં આવે છે. પછી, વિવિધ પ્રવાહી રીએજન્ટ્સ ક્રમિક રીતે ઉમેરવામાં આવે છે, ઉકાળવામાં આવે છે અને ધોવાઇ જાય છે, જેથી અંતે કૂવામાંના અંતિમ પ્રવાહીમાં ઓપ્ટિકલ ફેરફાર (દા.ત., એન્ઝાઈમેટિક પ્રતિક્રિયાના ઉત્પાદન દ્વારા રંગનો વિકાસ) થાય છે. ઓપ્ટિકલ ફેરફાર કહેવાતા જથ્થાત્મક દ્વારા વિશ્લેષકના જથ્થાને માપવા માટે પરવાનગી આપે છે “વાંચન ". માત્રાત્મક વાંચન માટે, સ્પેક્ટ્રોફોટોમીટર, ફ્લોરોમીટર અથવા લ્યુમિનોમીટરનો ઉપયોગ પ્રસારિત પ્રકાશની તીવ્રતાને શોધવા અને માપવા માટે થાય છે. તપાસની સંવેદનશીલતા વિશ્લેષણાત્મક પ્રતિક્રિયાઓ દરમિયાન સિગ્નલના એમ્પ્લીફિકેશન દ્વારા પ્રભાવિત થાય છે. એન્ઝાઇમ પ્રતિક્રિયાઓ સારી રીતે તપાસવામાં આવે છે અને વિશ્વસનીય એમ્પ્લીફિકેશન પ્રક્રિયાઓ હોવાથી, ઉત્સેચકોનો ઉપયોગ સિગ્નલ બનાવવા માટે થાય છે. ઉત્સેચકો ચોક્કસ માત્રામાં ડિટેક્શન રીએજન્ટ્સ સાથે જોડાયેલા હોય છે જેથી ચોક્કસ પ્રમાણીકરણ થાય, જે "એન્ઝાઇમ-લિંક્ડ" ઇમ્યુનોસોર્બન્ટ એસે નામ પણ સમજાવે છે.
જેમ જેમ ELISA એસેસ માઇક્રોટાઇટર પ્લેટ્સ / 96-વેલ પ્લેટ્સમાં કરવામાં આવે છે, તે પ્લેટ-આધારિત એસે ટેકનિક તરીકે ઓળખાય છે અને તેનો ઉપયોગ ક્લિનિકલ ઇન-વિટ્રો ડાયગ્નોસ્ટિક, રિસર્ચ, ડ્રગ ડેવલપમેન્ટ વગેરેમાં એન્ટિબોડીઝ, પેપ્ટાઇડ્સ, પ્રોટીન, શોધવા અને તેનું પ્રમાણ નક્કી કરવા માટે થાય છે. અને હોર્મોન્સ.
ELISA ટેકનિકનો વારંવાર દવા, બાયોટેક, પ્લાન્ટ પેથોલોજીમાં ડાયગ્નોસ્ટિક ટૂલ તરીકે ઉપયોગ થાય છે અને બહુવિધ ઉદ્યોગોમાં તે એક મહત્વપૂર્ણ ગુણવત્તા નિયંત્રણ માપન પણ છે.

ELISA પહેલાં અલ્ટ્રાસોનિક નમૂનાની તૈયારી

ELISA પરીક્ષા હાથ ધરવામાં આવે તે પહેલાં, નમૂનાઓને તૈયારીના પગલાઓ જેમ કે સેલ લિસિસ અને અંતઃકોશિક પ્રોટીન, DNA, RNA વગેરેના નિષ્કર્ષણની જરૂર પડે છે. અલ્ટ્રાસોનિક સેલ લિસિસ અને પ્રોટીન આઇસોલેશનનો ફાયદો તેની ઉચ્ચ કાર્યક્ષમતા, વિશ્વસનીયતા અને પુનઃઉત્પાદનક્ષમતા છે. ઉચ્ચ-ગુણવત્તાવાળા ડાયગ્નોસ્ટિક્સ અને સંશોધન પરિણામો મેળવવા માટે આ તમામ પરિબળો મહત્વપૂર્ણ છે

પ્રી-ELISA અલ્ટ્રાસોનિક સેલ લિસિસ માટે પ્રોટોકોલ

• સેલ કલ્ચર માટે: અલ્ટ્રાસોનિક સેલ લિસિસ પહેલા, માઇક્રોસેન્ટ્રીફ્યુજમાં 270 xg પર 5 મિનિટ માટે સેન્ટ્રીફ્યુજ કોષો. મહાપ્રાણ દ્વારા સુપરનેટન્ટને દૂર કરો અને RIPA બફરના 30 - 100 μL માં કોષોને પુનઃસ્થાપિત કરો. તે પછી, સેલ પેલેટને 30 મિનિટ માટે બરફ પર પકાવો.
• હવે, સેલ સેમ્પલ અલ્ટ્રાસોનિક લિસિસ માટે તૈયાર છે:
  પ્રોબ-ટાઈપ અલ્ટ્રાસોનિકેટરનો ઉપયોગ કરો (દા.ત UP200Ht S26d2 પ્રોબ સાથે) અથવા અલ્ટ્રાસોનિક મલ્ટિ-સેમ્પલ ડિવાઇસ (દા.ત. 10 શીશીઓ સુધીના એકસાથે સોનિકેશન માટે VialTweeter અથવા માઇક્રોટાઇટર પ્લેટ્સ / 96-વેલ પ્લેટ્સ માટે UIP400MPT) તમારે કેટલા નમૂનાઓ તૈયાર કરવાની જરૂર છે તેના આધારે.
  એક જ નમૂનાના પ્રોબ-ટાઈપ સોનિકેશન માટે, કોષોને 1.5 એમએલ માઇક્રોસેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબમાં મૂકો.
• અલ્ટ્રાસોનિકેટરના ડિજિટલ મેનૂમાં તમારી અલ્ટ્રાસોનિક અવધિ, કુલ ઊર્જા ઇનપુટ, સાયકલ મોડ અને/અથવા તાપમાન મર્યાદા પ્રી-સેટ કરો. આ અત્યંત વિશ્વસનીય sonication અને પુનરાવર્તિતતા સુનિશ્ચિત કરે છે.
• સોનોટ્રોડ ઇનસેટ કરો અને અલ્ટ્રાસોનિક ઉપકરણને ચાલુ કરો. નમૂનાને એકસરખી રીતે સોનીકેટ કરવા માટે નમૂના દ્વારા અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોબની માઇક્રો-ટીપને નરમાશથી ખસેડો.
  મોટાભાગના કોષો માટે, અલ્ટ્રાસોનિક લિસિસ 10 સેકન્ડ સોનિકેશનના 2 -4 ચક્ર પછી પૂર્ણ થશે.
• સોનિકેશન પછી, નમૂનામાંથી સોનોટ્રોડ દૂર કરો. નમૂનાઓ 5 મિનિટ માટે બરફ પર ઉકાળવા જોઈએ. પછી, કાટમાળને છરો કરવા માટે 20 મિનિટ માટે 10,000 xg પર સેન્ટ્રીફ્યુજ કરો. સુપરનેટન્ટ્સને નવી માઇક્રોસેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબમાં સ્થાનાંતરિત કરો. વિશ્લેષકોને લેબલ કરો અને -20 ડિગ્રી સેલ્સિયસ પર સ્ટોર કરો.
• અલ્ટ્રાસોનિક સોનોટ્રોડને આલ્કોહોલથી યોગ્ય રીતે લૂછીને અથવા આલ્કોહોલથી ભરેલા બીકરમાં સોનીકેટ દ્વારા સાફ કરી શકાય છે, દા.ત. 70% ઇથેનોલ. ટાઇટેનિયમમાંથી બનાવેલ તમામ અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોબ્સ ઓટોક્લેવેબલ છે.

• વધારાનું હેમોલિસિસ લોહીને સારી રીતે દૂર કરવા માટે બરફ-ઠંડા પીબીએસ (0.01M, pH=7.4) વડે પેશીઓને ધોઈ નાખો.
• પેશી (કિડની, હૃદય, ફેફસા, બરોળ વગેરે) નું વજન કરો અને તેને નાના ટુકડા કરો, જે PBS માં એકરૂપ થાય છે. પીબીએસની આવશ્યક માત્રા પેશીના વજન સાથે સંબંધિત છે. અંગૂઠાના નિયમ મુજબ, 1 ગ્રામ પેશી આશરે જરૂરી છે. 9mL PBS. પીબીએસમાં કેટલાક પ્રોટીઝ અવરોધક ઉમેરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે. (આરઆઈપીએ અથવા હાયપોટોનિક લિસિસ બફર જેમાં પ્રોટીઝ અને ફોસ્ફેટેઝ ઇન્હિબિટર કોકટેલનો ઉપયોગ વૈકલ્પિક રીતે કરી શકાય છે.)
• પેશીના કદના આધારે, ટૂંકી વમળની સારવાર (અંદાજે 1-2 મિનિટ. 15 સેકન્ડમાં. કઠોળ) પેશીની પૂર્વ-સારવાર માટે મદદરૂપ થઈ શકે છે.
• તમારા અલ્ટ્રાસોનિકેટરમાં માઇક્રો-ટીપ, દા.ત. S26d2, માઉન્ટ કરો. સેમ્પલ ટ્યુબને પેશી સાથે બરફના સ્નાનમાં મૂકો.
• તમારા અલ્ટ્રાસોનિકેટર વડે નમૂનાને સોનીકેટ કરો, દા.ત. UP200St (80% કંપનવિસ્તાર) 1 મિનિટ માટે. પલ્સ મોડમાં (15 સેકન્ડ ચાલુ, 15 સેકન્ડ પોઝ). નમૂનાને બરફના સ્નાનમાં રાખો.
• પછી વિશ્લેષણ માટે પ્રોટીનને સમૃદ્ધ બનાવવા માટે હોમોજેનેટ્સને ચોક્કસ પૂલ (સાયટોસોલિક, ન્યુક્લિયર, મિટોકોન્ડ્રીયલ અથવા લિસોસોમલ) મેળવવા માટે સેન્ટ્રીફ્યુજ કરવામાં આવે છે. નમૂનાને 5000×g પર 5 મિનિટ માટે સેન્ટ્રીફ્યુગ કરીને, સુપરનેટન્ટ પુનઃપ્રાપ્ત થાય છે.

Sonication દરમિયાન વિશ્વસનીય તાપમાન નિયંત્રણ

તાપમાન એ એક નિર્ણાયક પ્રક્રિયાને પ્રભાવિત કરનાર પરિબળ છે જે ખાસ કરીને જૈવિક નમૂનાઓની સારવાર માટે મહત્વપૂર્ણ છે, દા.ત. પ્રોટીનના થર્મલ ડિગ્રેડેશનને રોકવા માટે. તમામ યાંત્રિક નમૂના તૈયારી તકનીકો તરીકે, sonication ગરમી બનાવે છે. જો કે, Hielscher Ultrasonics ઉપકરણોનો ઉપયોગ કરતી વખતે નમૂનાઓનું તાપમાન સારી રીતે નિયંત્રિત કરી શકાય છે. પ્રોબ-ટાઈપ અલ્ટ્રાસોનિકેટર અથવા VialTweeter સાથે પૂર્વ-વિશ્લેષણાત્મક રીતે તૈયાર કરતી વખતે અમે તમને તમારા નમૂનાઓના તાપમાનને મોનિટર કરવા અને નિયંત્રિત કરવા માટે વિવિધ વિકલ્પો રજૂ કરીએ છીએ.

1. નમૂનાના તાપમાનનું નિરીક્ષણ કરવું: બધા Hielscher ડિજિટલ અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોસેસર્સ એક બુદ્ધિશાળી સોફ્ટવેર અને પ્લગેબલ તાપમાન સેન્સરથી સજ્જ છે. તાપમાન સેન્સરને અલ્ટ્રાસોનિક ઉપકરણમાં પ્લગ કરો (દા.ત., UP200Ht, UP200St, VialTweeter, મલ્ટી-વેલ પ્લેટ સોનિકેટર UIP400MTP) અને સેમ્પલ ટ્યુબમાંથી એકમાં તાપમાન સેન્સરની ટોચ દાખલ કરો. ડિજિટલ રંગીન ટચ-ડિસ્પ્લે દ્વારા, તમે અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોસેસરના મેનૂમાં તમારા નમૂના સોનિકેશન માટે ચોક્કસ તાપમાન શ્રેણી સેટ કરી શકો છો. જ્યારે મહત્તમ તાપમાન પહોંચી જાય ત્યારે અલ્ટ્રાસોનિકેટર આપમેળે બંધ થઈ જશે અને જ્યાં સુધી નમૂનાનું તાપમાન સેટ તાપમાન ∆ ના નીચા મૂલ્ય સુધી ન આવે ત્યાં સુધી થોભો. પછી sonication ફરીથી આપોઆપ શરૂ થાય છે. આ સ્માર્ટ ફીચર ગરમી-પ્રેરિત અધોગતિને અટકાવે છે.
2. અલ્ટ્રાસોનિક મલ્ટિ-સેમ્પલ યુનિટ VialTweeter વિશે, ટાઇટેનિયમ બ્લોક, જે સેમ્પલ ટ્યુબ ધરાવે છે, તેને પ્રી-કૂલ્ડ કરી શકાય છે. ટાઇટેનિયમ બ્લોકને પ્રી-કૂલ કરવા માટે VialTweeter બ્લોક (માત્ર ટ્રાન્સડ્યુસર વગરનો સોનોટ્રોડ!) ફ્રીજ અથવા ફ્રીઝરમાં મૂકો, નમૂનામાં તાપમાનમાં વધારો સ્થગિત કરવામાં મદદ કરે છે. જો શક્ય હોય તો, નમૂના પોતે પણ પ્રી-કૂલ્ડ કરી શકાય છે.
3. સોનિકેશન દરમિયાન ઠંડુ થવા માટે બરફના સ્નાન અથવા સૂકા બરફનો ઉપયોગ કરો. સોનિકેશન દરમિયાન તમારી સેમ્પલ ટ્યુબ(ઓ)ને બરફના સ્નાનમાં મૂકો. VialTweeter માટે, સૂકા બરફથી ભરેલી છીછરી ટ્રેનો ઉપયોગ કરો અને VialTweeterને સૂકા બરફ પર મૂકો જેથી કરીને ગરમી ઝડપથી ઓસરી શકે.

જૈવિક, બાયોકેમિકલ, મેડિકલ અને ક્લિનિકલ પ્રયોગશાળાઓમાં તેમના દૈનિક નમૂના તૈયાર કરવા માટે વિશ્વભરના ગ્રાહકો Hielscher પ્રોબ-ટાઈપ અલ્ટ્રાસોનિકેટર્સ તેમજ મલ્ટિ-સેમ્પલ સોનિકેશન યુનિટ્સ VialTweeter અને UIP400MTP નો ઉપયોગ કરે છે. Hielscher પ્રોસેસર્સનું બુદ્ધિશાળી સોફ્ટવેર અને તાપમાન નિયંત્રણ, તાપમાન વિશ્વસનીય રીતે નિયંત્રિત થાય છે અને ગરમી-પ્રેરિત નમૂનાનું અધોગતિ ટાળવામાં આવે છે. Hielscher અલ્ટ્રાસોનિક સોલ્યુશન્સ સાથે અલ્ટ્રાસોનિક નમૂનાની તૈયારી અત્યંત વિશ્વસનીય અને પુનઃઉત્પાદન કરી શકાય તેવા પરિણામો આપે છે!
મલ્ટી-વેલ પ્લેટ સોનિકેટર UIP400MTP નો ઉપયોગ કરીને ઉચ્ચ-થ્રુપુટ સોનિકેશન વિશે વધુ વાંચો!