ઇલિસા જેવા સહાયનો ઉપયોગ ઇન-વિટ્રો ડાયગ્નોસ્ટિક્સ, રોગ-સંબંધિત પ્રોટીન તપાસ અને ગુણવત્તા નિયંત્રણ (દા.ત. મોનિટર ફૂડ એલર્જન) માટે થાય છે. અલ્ટ્રાસોનિક નમૂનાની તૈયારી એ લ્યુઝ સેલ અને ઇન્ટ્રાસેલ્યુલર પ્રોટીન, ડીએનએ, આરએનએ અને ઓર્ગેનેલ્સને અલગ કરવા માટે એક ઝડપી, વિશ્વસનીય અને પ્રજનનક્ષમ તકનીક છે. હિલ્સચર અલ્ટ્રાસોનિક્સ સિંગલ સેમ્પલ, મલ્ટીપલ શીશીઓ તેમજ માઇક્રોટિટર પ્લેટો અને-96-વેલ પ્લેટો માટે અનુકૂળ તૈયારી માટે વિવિધ અવાજ ઉકેલો પ્રદાન કરે છે.

એલિસા – એન્ઝાઇમ લિંક્ડ ઇમ્યુનોસોર્બન્ટ એસે

ઇલિસા એ એન્ઝાઇમ-લિંક્ડ ઇમ્યુનોસોર્બન્ટ ખંડ માટેનો અર્થ છે અને લિગાન્ડ-બંધનકર્તા એસિઝની શ્રેણીની વ્યાપકપણે ઉપયોગમાં લેવામાં આવતી બાયોકેમિકલ વિશ્લેષણ તકનીક છે. ઇલિસામાં, ખાસ બંધનકર્તા ગુણધર્મોવાળા સ્થિર નક્કર તબક્કામાં પ્રવાહી નમૂના ઉમેરવામાં આવે છે. સામાન્ય રીતે, સ્થિર નક્કર તબક્કો સારી પ્લેટ અથવા ઇલિસા પ્લેટમાં કોટિંગ તરીકે લાગુ પડે છે. તે પછી, વિવિધ પ્રવાહી રીએજેન્ટ અનુક્રમે ઉમેરવામાં આવે છે, સેવન કરે છે અને ધોવાઇ જાય છે, જેથી છેવટે ઓપ્ટિકલ પરિવર્તન (દા.ત., એન્ઝાઇમેટિક પ્રતિક્રિયાના ઉત્પાદન દ્વારા રંગ વિકાસ) કૂવામાં અંતિમ પ્રવાહીમાં થાય છે. ઓપ્ટિકલ પરિવર્તન કહેવાતા પરિમાણો દ્વારા વિશ્લેષણાત્મક માત્રાને માપવા માટે પરવાનગી આપે છે “વાંચન ”. માત્રાત્મક વાંચન માટે, પ્રસારિત પ્રકાશની તીવ્રતા શોધવા અને માપવા માટે સ્પેક્ટ્રોફોટોમીટર, ફ્લોરોમીટર અથવા લ્યુમિનોમીટરનો ઉપયોગ થાય છે. વિશ્લેષણાત્મક પ્રતિક્રિયાઓ દરમિયાન શોધની સંવેદનશીલતા સિગ્નલના વિસ્તરણ દ્વારા પ્રભાવિત થાય છે. એન્ઝાઇમની પ્રતિક્રિયાઓ સારી રીતે તપાસવામાં આવે છે અને વિશ્વસનીય એમ્પ્લીફિકેશન પ્રક્રિયાઓ હોવાથી, ઉત્સેચકોનો ઉપયોગ સિગ્નલ બનાવવા માટે થાય છે. સચોટ જથ્થાને મંજૂરી આપવા માટે ઉત્સેચકો નિશ્ચિત પ્રમાણમાં ડિટેક્શન રીએજન્ટ્સ સાથે જોડાયેલા છે, જે "એન્ઝાઇમ-લિંક્ડ" ઇમ્યુનોસોર્બન્ટ ખંડ નામ પણ સમજાવે છે.
જેમ કે ELISA એસોઝ માઇક્રોટાઇટર પ્લેટો /-96-કૂલ પ્લેટોમાં કરવામાં આવે છે, તે પ્લેટ આધારિત અસીક તકનીક તરીકે ઓળખાય છે અને દા.ત. અને હોર્મોન્સ.
એલિસા તકનીકનો ઉપયોગ દવા, બાયોટેક, પ્લાન્ટ પેથોલોજીમાં ડાયગ્નોસ્ટિક ટૂલ તરીકે વારંવાર કરવામાં આવે છે અને તે બહુવિધ ઉદ્યોગોમાં ગુણવત્તાના નિયંત્રણનું એક મહત્વપૂર્ણ માપન છે.

ઇલિસા પહેલાં અલ્ટ્રાસોનિક નમૂના પ્રેપ

ઇલિસા એસો કરી શકાય તે પહેલાં, નમૂનાઓ માટે આવા સેલ લિસીસ અને ઇન્ટ્રાસેલ્યુલર પ્રોટીન, ડીએનએ, આરએનએ વગેરેના નિષ્કર્ષણના પગલાઓની જરૂર પડે છે. ઉચ્ચ ગુણવત્તાવાળા ડાયગ્નોસ્ટિક્સ અને સંશોધન પરિણામો મેળવવા માટે આ બધા પરિબળો મહત્વપૂર્ણ છે

પ્રી-એલિસા અલ્ટ્રાસોનિક સેલ લિસીસિસ માટેનો પ્રોટોકોલ

• સેલ સંસ્કૃતિઓ માટે: અલ્ટ્રાસોનિક સેલ લિસીસ પહેલાં, માઇક્રોસેન્ટ્રિફ્યુજમાં 270 XG પર 5 મિનિટ માટે સેન્ટ્રિફ્યુજ કોષો. RIPA બફરના 30 - 100 μL માં મહાપ્રાણ અને રીસપ્પેન્ડ સેલ્સ દ્વારા સુપરનાટ .ન્ટને દૂર કરો. તે પછી, સેલ પેલેટને બરફ પર 30 મિનિટ માટે સેવન કરો.
• હવે, કોષ નમૂના અલ્ટ્રાસોનિક લિસીસ માટે તૈયાર છે:
  પ્રોબ-ટાઇપ અલ્ટ્રાસોનિસેટરનો ઉપયોગ કરો (દા.ત. Uf200 ः ટી S26d2 ચકાસણી સાથે) અથવા અલ્ટ્રાસોનિક મલ્ટિ-સેમ્પલ ડિવાઇસ (દા.ત. 10 જેટલા શીશીઓના એક સાથે સોનિકેશન માટે VialTweeter અથવા માઇક્રોટાઇટર પ્લેટો / 96-સારી પ્લેટો માટે UIP400MPT) તમારે તૈયાર કરવાના નમૂનાઓની માત્રાને આધારે.
  એક જ નમૂનાના પ્રોબ-ટાઇપ સોનિકેક્શન માટે, કોષોને 1.5 એમએલ માઇક્રોસેન્ટ્રિફ્યુજ ટ્યુબમાં મૂકો.
• અલ્ટ્રાસોનિકેટરના ડિજિટલ મેનૂમાં તમારી અલ્ટ્રાસોનિક અવધિ, કુલ energyર્જા ઇનપુટ, ચક્ર મોડ અને / અથવા તાપમાન મર્યાદાને પૂર્વ-સેટ કરો. આ ખૂબ વિશ્વસનીય સોનેક્શન અને પુનરાવર્તિતતાને સુનિશ્ચિત કરે છે.
• સોનોટ્રોડ ઇન્સેટ કરો અને અલ્ટ્રાસોનિક ડિવાઇસ ચાલુ કરો. નમૂનાને એકસરખી રીતે સોનિકેટ કરવા માટે ધીમેધીમે નમૂના દ્વારા અવાજ ચકાસણીની માઇક્રો-ટીપ ખસેડો.
  મોટાભાગના કોષો માટે, અલ્ટ્રાસોનિક લિસીસ 10 સેકન્ડ સોનિફિકેશનના 2 -4 ચક્ર પછી પૂર્ણ થશે.
• સોનિકેશન પછી, નમૂનામાંથી સોનોટ્રોડ કા .ો. નમૂનાઓ બરફ પર 5 મિનિટ માટે સેંકવા જોઈએ. તે પછી, કાટમાળને ધકેલી દેવા માટે 20 મિનિટ માટે 10,000 એક્સજી પર કેન્દ્રીત કરો. નવી માઇક્રોસેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબમાં સુપરનેટનેન્ટ્સ સ્થાનાંતરિત કરો. વિશ્લેષકોને લેબલ અને -20 ° સે.
• અલ્ટ્રાસોનિક સોનોટ્રોઇડ તેને આલ્કોહોલથી યોગ્ય રીતે સાફ કરીને અથવા દારૂથી ભરેલા બીકરમાં સોનિકેટથી સાફ કરી શકાય છે, દા.ત. 70% ઇથેનોલ. ટાઇટેનિયમથી બનેલી બધી અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોબ્સ ocટોકલેબલ છે.

ટીશ્યુ હોમોજેનેટ માટે:

• વધારે હિમોલિસીસ લોહીને સંપૂર્ણ રીતે દૂર કરવા માટે આઇસ-કોલ્ડ પીબીએસ (0.01 એમ, પીએચ = 7.4) સાથે પેશીઓને વીંછળવું.
• પેશી (કિડની, હૃદય, ફેફસાં, બરોળ વગેરે) નું વજન કરો અને તેને નાના ટુકડા કરો, જે પીબીએસમાં એકરૂપ થાય છે. જરૂરી પીબીએસનું વોલ્યુમ પેશીઓના વજન સાથે સંબંધિત છે. અંગૂઠાના નિયમ મુજબ, 1 જી પેશીઓને આશરે જરૂરી છે. 9 એમએલ પીબીએસ. પીબીએસમાં કેટલાક પ્રોટીઝ અવરોધક ઉમેરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે. (આરઆઇપીએ અથવા હાયપોટોનિક લિસીસ બફર જેમાં પ્રોટીઝ અને ફોસ્ફેટ ઇન્હિબિટર કોકટેલ હોય તેનો ઉપયોગ વૈકલ્પિક રીતે કરી શકાય છે.)
• પેશીઓના કદ પર આધાર રાખીને, ટૂંકા વમળની સારવાર (આશરે 1-2 મિનિટ. 15 સેકન્ડમાં. કઠોળ) પેશીઓની પૂર્વ-સારવાર માટે મદદરૂપ થઈ શકે છે.
• તમારા અલ્ટ્રાસોનિસેટર પર માઇક્રો-ટિપ, દા.ત. S26d2 માઉન્ટ કરો. બરફના સ્નાનમાં પેશીઓ સાથે નમૂના નળી મૂકો.
• તમારા અલ્ટ્રાસોનાઇટરથી નમૂનાને સોનિકેટ કરો, દા.ત. 1 મિનિટ માટે UP200St (80% કંપનવિસ્તાર) પલ્સ મોડમાં (15 સેકસ ચાલુ, 15 સેક થોભો). બરફના સ્નાનમાં નમૂના રાખો.
• વિશ્લેષણ માટે પ્રોટીનને સમૃદ્ધ બનાવવા માટે હોમોજેનેટ્સને વિશિષ્ટ પુલો (સાયટોસોલિક, પરમાણુ, મિટોકોન્ડ્રીયલ અથવા લિસોસોમલ) મેળવવા માટે કેન્દ્રત્યાગી કરવામાં આવે છે. 5000 cent જી પર 5 મિનિટ માટે નમૂનાને સેન્ટ્રીફ્યુગ કરીને, અતિસંવેદનશીલ પાછું પ્રાપ્ત થાય છે.

સોનિફિકેશન દરમિયાન વિશ્વસનીય તાપમાન નિયંત્રણ

તાપમાન એ નિર્ણાયક પ્રક્રિયાને અસરકારક પરિબળ છે જે ખાસ કરીને જૈવિક નમૂનાઓના ઉપચાર માટે મહત્વપૂર્ણ છે, દા.ત. પ્રોટીનના થર્મલ અધોગતિને રોકવા માટે. બધી યાંત્રિક નમૂનાની તૈયારીની તકનીકીઓ તરીકે, સોનિકેશન ગરમીનું નિર્માણ કરે છે. જો કે, હિલ્સચર અલ્ટ્રાસોનિક્સ ડિવાઇસેસનો ઉપયોગ કરતી વખતે નમૂનાઓનું તાપમાન સારી રીતે નિયંત્રિત કરી શકાય છે. અમે તમને તમારા નમૂનાઓના તાપમાનનું નિરીક્ષણ અને નિયંત્રણ કરવા માટે વિવિધ વિકલ્પો પ્રસ્તુત કરીએ છીએ જ્યારે તેમને પ્રોબ-ટાઇપ અલ્ટ્રાસોનિસેટર અથવા વિઆલ્ટવીટર પૂર્વ વિશ્લેષણાત્મક રીતે તૈયાર કરો.

1. નમૂનાના તાપમાનનું નિરીક્ષણ કરવું: બધા હિલ્સચર ડિજિટલ અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોસેસર બુદ્ધિશાળી સ softwareફ્ટવેર અને પ્લગ કરવા યોગ્ય તાપમાન સેન્સરથી સજ્જ છે. તાપમાન સેન્સરને અલ્ટ્રાસોનિક ડિવાઇસમાં પ્લગ કરો (દા.ત., Uf200 ः ટી, UP200St, વીયલટેવેટર, યુઆઈપી 400 મેટીપી) અને એક નમૂના નળીઓમાં તાપમાન સેન્સરની મદદ શામેલ કરો. ડિજિટલ રંગીન ટચ-ડિસ્પ્લે દ્વારા, તમે અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોસેસરના મેનૂમાં તમારા નમૂનાના સોનિફિકેશન માટે ચોક્કસ તાપમાન શ્રેણી સેટ કરી શકો છો. મહત્તમ તાપમાન પહોંચી જાય ત્યારે અલ્ટ્રાસોનાઇટર આપમેળે બંધ થઈ જાય છે અને સેમ્પલ તાપમાન સેટ તાપમાનના નીચા મૂલ્ય સુધી નીચે ન આવે ત્યાં સુધી થોભો. પછી સોનીકેશન ફરીથી આપમેળે શરૂ થાય છે. આ સ્માર્ટ સુવિધા ગરમી-પ્રેરિત અધોગતિને અટકાવે છે.
2. અલ્ટ્રાસોનિક મલ્ટિ-સેમ્પલ યુનિટ વાયલટવીટર વિષે, સેમ્પલ ટ્યુબ ધરાવતા ટાઇટેનિયમ બ્લોક, પૂર્વ-ઠંડુ થઈ શકે છે. ટાઇટેનિયમ બ્લોકને પૂર્વ-ઠંડુ કરવા માટે, વાયલટવીટર બ્લોક (ટ્રાન્સડ્યુસર વિના ફક્ત સોનોટ્રોડ!) ફ્રીજમાં અથવા ફ્રીઝરમાં મૂકો, નમૂનામાં તાપમાનમાં વધારો મુલતવી રાખવામાં મદદ કરે છે. જો શક્ય હોય તો, નમૂના પોતે પણ પૂર્વ-ઠંડુ થઈ શકે છે.
3. સોનિકicationક્શન દરમિયાન ઠંડુ થવા માટે બરફના સ્નાન અથવા સૂકા બરફનો ઉપયોગ કરો. બરફના સ્નાનમાં સોનિકેશન દરમિયાન તમારી નમૂનાની નળી (ઓ) મૂકો. વાયલટવીટર માટે, સૂકા બરફથી ભરેલી છીછરા ટ્રેનો ઉપયોગ કરો અને શુષ્ક બરફ પર વાયલટવીટર મૂકો જેથી ગરમી ઝડપથી ઓગળી શકે.

જૈવિક, બાયોકેમિકલ, તબીબી અને ક્લિનિકલ પ્રયોગશાળાઓમાં તેમના દૈનિક નમૂના તૈયાર કરવાના કામ માટે વિશ્વભરના ગ્રાહકો હિલ્સચર પ્રોબ-અલ્ટ્રાસોનિસેટર્સ તેમજ મલ્ટિ-સેમ્પલ સોનિકેશન યુનિટ્સ વાયલટવીટર અને યુઆઈપી 400 એમટીપીનો ઉપયોગ કરે છે. બુદ્ધિશાળી સ softwareફ્ટવેર અને હિલ્સચર પ્રોસેસર્સનું તાપમાન નિયંત્રણ, તાપમાન વિશ્વસનીયરૂપે નિયંત્રિત થાય છે અને તાપ-પ્રેરિત નમૂનાના અધોગતિને ટાળી શકાય છે. હિલ્સચર અલ્ટ્રાસોનિક સોલ્યુશન્સ સાથે અલ્ટ્રાસોનિક નમૂનાની તૈયારી ખૂબ વિશ્વસનીય અને પ્રજનનક્ષમ પરિણામો પહોંચાડે છે!