સી. એલિગન્સના નમૂનાઓની અલ્ટ્રાસોનિક તૈયારી

સી. એલિગન્સના નમૂનાઓની અલ્ટ્રાસોનિક તૈયારી

સી એલેગન્સ રાઉન્ડવોર્મ્સ છે, જેનો સંશોધન પ્રયોગશાળાઓમાં જીનોમિક્સ, ડેવલપમેન્ટલ બાયોલોજી અને રોગોની તપાસ માટે વ્યાપકપણે ઉપયોગ થાય છે. સી એલેગન્સના જીનોમમાં ઘણા જનીનોમાં મનુષ્યમાં કાર્યાત્મક સમકક્ષ હોય છે. ત્યાં, નેમાટોડ કૃમિ માનવ રોગો માટે અત્યંત ઉપયોગી મ modelડેલ છે. સી એલિગન્સના વ્યાપક ઉપયોગ માટેના અન્ય ફાયદા એ છે કે બેક્ટેરિયાવાળા પ્લેટો (દા.ત., ઇ. કોલી) પર તેની સરળ અને સસ્તી વાવેતર, તેની પારદર્શિતા, અનુકૂળ સંચાલન, તેમજ લાંબા ગાળા સુધી કૃમિ સ્થિર થવાની સંભાવના છે.
પ્રોટીન અને લિપિડ વિશ્લેષણ એ પ્રયોગશાળાઓમાં નિયમિત કાર્યવાહી છે અને અલ્ટ્રાસોનિક નમૂનાની તૈયારી એ દરેક વિકાસના તબક્કામાં એટલે કે ગર્ભ, લાર્વા એલ 1-એલ 4, પુખ્ત વયના) સી એલિગન્સ નેમાટોડ્સને લિઝ કરવાની એક સ્થાપિત પદ્ધતિ છે. સી. એલિગન્સને ઓવર-એક્સપ્રેસ લક્ષિત પ્રોટીન માટે પ્રોટીન અભિવ્યક્તિ સિસ્ટમ તરીકે પણ ઉપયોગમાં લેવામાં આવે છે, તેથી વિશ્વસનીય, પ્રજનનક્ષમ લિસીસ અને પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ પદ્ધતિ, જે ઉચ્ચ પ્રોટીન ઉપજ આપે છે, જરૂરી છે. અલ્ટ્રાસોનિક કોષ વિક્ષેપ અને નિષ્કર્ષણ સિસ્ટમો પ્રોબ-ટાઇપ હોમોજેનાઇઝર્સ અને મલ્ટિ-સેમ્પલ અલ્ટ્રાસોનાઇટર તરીકે ઉપલબ્ધ છે. અનુકૂળ નમૂનાની તૈયારી અને તમામ પ્રકારના નમૂનાના કદની સંભાળ, હિલ્સચર અલ્ટ્રાસોનિક્સમાં તમારી લેબ પ્રક્રિયા માટે આદર્શ અવાજ સેલ ડિસપ્ટર છે.

સી. એલિગન્સ વિક્ષેપ અને લિસીસ માટે અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોટોકોલ્સ

અલ્ટ્રાસોનિક હોમોજેનાઇઝેશન અને સી એલિગન્સનું લિસોસિસ અને ત્યારબાદના પ્રોટીન અને લિપિડ નિષ્કર્ષણ વિવિધ હોમોજેનાઇઝેશન અને લિસીસ બફરનો ઉપયોગ કરીને વિવિધ પ્રક્રિયાઓ દ્વારા કરી શકાય છે. નીચે, અમે તમને ઉચ્ચ ગુણવત્તાની પ્રોટીન અથવા લિપિડ ધરાવતા સી એલિગન્સ નમૂનાઓ તૈયાર કરવા માટે કેટલાક વિશ્વસનીય અને ઝડપી અલ્ટ્રાસોનિક લિસીસ અને નિષ્કર્ષણ પ્રોટોકોલ રજૂ કરીએ છીએ.

અલ્ટ્રાસોનિક સી એલિગન્સ લિસીસના ફાયદા

• વિશ્વસનીય
• પ્રજનન
• ચોક્કસપણે સાહિત્ય-નિયંત્રિત
• વિશ્વસનીય પ્રક્રિયા નિયંત્રણ
• સૌમ્ય પદ્ધતિ
• લાગુ કરવા માટે સરળ
• સલામત

એલિગન્સ નમૂનાઓમાંથી અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ

અલ્ટ્રાસોનિક લિસીસ અને સી એલિગન્સ વોર્મ્સનું પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ વિવિધ પ્રોટોકોલની મદદથી કરી શકાય છે. પ્રજનનક્ષમ પ્રોટીન નિષ્કર્ષણનાં પરિણામો માટે અમે તમને થોડા વિશ્વસનીય અને ઝડપી લિસીસ પ્રોટોકોલ રજૂ કરીએ છીએ.

સોનિફિકેશન દ્વારા સી એલિગન્સ વોર્મ્સથી સાયટોસોલિક અર્કનું ઝડપી તૈયારી

નીચે આપેલા પ્રોટોકોલથી તમે સી. એલિગન્સ 30 મિનિટથી ઓછા સમયમાં લાઇટ્સ તૈયાર કરી શકો છો.
સી એલેગન્સનો સંગ્રહ
ઇચ્છિત સી. એલિગન્સના કીડાઓને 1.5 એમએલ ટ્યુબ ફોસ્ફેટ બફરર્ડ સેલાઈન (પીબીએસ) માં લો અથવા તેમને 1.5 એમએલ પીબીએસ વડે પ્લેટથી ધોઈ લો. પેલેટ કરવા માટે 2000r વાગ્યે 1 મિનિટ માટે સેન્ટ્રિફ્યુઝ. નમૂનાઓ બરફ પર બધા સમયે રાખો.
તે પછી, પી.બી.એસ. સાથે બે વાર કૃમિ ધોવા.
પછીથી, કીડાઓને ડીડીએચથી બે વાર ધોવા₂ઓ.
હોમોજેનાઇઝેશન બફર (એચબી) ના ઓછામાં ઓછા 500ul માં કૃમિને ફરીથી છોડો. કૃમિના નમૂનાઓ હવે અલ્ટ્રાસોનિક લિસીસ માટે તૈયાર છે.
ઉચ્ચ પ્રોટીન અર્કની ગુણવત્તા માટે, તમે પી.બી.એસ. અને જીવાણુનાશક, અતિ-શુદ્ધ પાણી (ડીડીએચ) માં દરેક 5 મિનિટ માટેના કૃમિને ધોઈને બેક્ટેરિયાના દૂષણને ઘટાડવા માંગો છો.₂ઓ) અથવા સુક્રોઝ ફ્લોટેશન કરો. કૃમિના નમૂનાઓ બરફ પર સતત રાખો.

અલ્ટ્રાસોનિક સી એલિગન્સ લિસીસ પ્રોટોકોલ

• ખાતરી કરો કે તમે અલ્ટ્રાસોનિકેટરનો આગળનો ભાગ તૈયાર કરો જેથી અલ્ટ્રાસોનિક હોમોજેનાઇઝર ઉપયોગ માટે તૈયાર હોય (ચકાસણી માઉન્ટ થયેલ, સોનિકેશન પ્રોગ્રામનો પૂર્વ-સેટ).

જો તમારું અલ્ટ્રાસોનિસેટર સ્ટેન્ડ-માઉન્ટ થયેલ છે, તો તમારી નમૂનાની નળીઓ સાથે બરફ-સ્નાનને અલ્ટ્રાસોનિક ચકાસણી હેઠળ મૂકો અને અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોબને 1.5 એમએલ ટ્યુબમાં દાખલ કરો.

• સી. એલિગન્સ, યુપી 200 એસટી અથવા યુપી 200 એચટી સાથે lysis માટે, માઇક્રોટિપ (દા.ત., 2 મીમી પ્રોબ S26d2; ચિત્ર ડાબી જુઓ) નો ઉપયોગ કરીને 30 સેકન્ડ વચ્ચે વચ્ચે 30 સેકસે થોભો સાથે 40% કંપનવિસ્તારનો ઉપયોગ કરીને અલ્ટ્રાસોનિકેશન કરવું જોઈએ. 30 સેકન્ડ થોભો સાથે દરેક 1 સેકંડ માટે 5 સોનિકેશન ચક્ર સી એલિગન્સ લિસીસ માટે આદર્શ છે. જો તમે પ્રથમ વખત લિસીસ કરો છો, તો તમે માઇક્રોસ્કોપનો ઉપયોગ કરીને દરેક પલ્સ પછી નમૂનાના નાના એલિકોટ્સમાં લિસીસ પ્રગતિ ચકાસી શકો છો.
• કૃમિ વિક્ષેપિત થાય છે ત્યારે લીસીસ સફળતાપૂર્વક પૂર્ણ થાય છે. ઓવર-સોનિફિકેશનના પરિણામથી ન્યુક્લિયી તૂટી જાય છે અને જ્યારે નમૂના ચીકણું અથવા ફીણ પડે છે ત્યારે દૃશ્યમાન થાય છે. નમૂનાના અધોગતિને રોકવા માટે, જરૂર પડે તો વધુ કઠોળનો ઉપયોગ કરો. ઉચ્ચ ગુણવત્તાવાળા પ્રોટીન અર્ક મેળવવા માટે દરેક અલ્ટ્રાસોનિક પલ્સ ચક્રનો સમય વધારશો નહીં.
• 4 cellC પર 10 મિનિટ માટે 14,000rpm પર અલ્ટ્રાસોનિકલી લિસ્ડ વોર્મ્સને સેન્ટ્રિફગ કરીને ક્લિયર સેલ લાયસેટ સાફ કરો.
• તે પછી, ઉપરી સ્ત્રીને તાજી નળીમાં સ્થાનાંતરિત કરો અને રોગપ્રતિકારક શક્તિ અથવા અન્ય સહાય માટે તૈયાર કરો.

એકરૂપતા બફર માટે નોંધ: નીચે પ્રમાણે અલ્ટ્રાસોનિક લિસીસ પ્રોટોકોલ માટે હોમોજેનાઇઝેશન બફર તૈયાર કરો:

ક્વોન્ટિટેટિવ એફિનીટી પ્યુરિફિકેશન એસિઝ માટે સી એલિગન્સનું અલ્ટ્રાસોનિક લિસીસ

સી એલિગન્સ એમ્બ્રોયો (પ્રતિકૃતિ દીઠ 2 મિલિયન ડોલર) યુવાન ગુરુત્વાકર્ષીય હર્માફ્રોડાઇટ્સ વિરંજન દ્વારા બાયોલોજિકલ ત્રિપુટીમાં તાજી કાપવામાં આવ્યા હતા અને બરફ પર સોનેટિકેટ (ચક્ર: 0.5 સે, કંપનવિસ્તાર: 40-45%, 5 સ્ટ્રોક / સત્ર, 5 સત્રો, સત્રો વચ્ચે અંતરાલ) : 30 સે; UP200S અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોસેસર લિસોસ બફરમાં માઇક્રો-ટીપ એસ 26 ડી 2 (હાયલ્શર અલ્ટ્રાસોનિક્સ જીએમબીએચ) સાથે (કુલ વોલ્યુમ: ∼600 μl; 50 મીમી ટ્રિસ-એચસીએલ, પીએચ 7.4, 100 મીમી કેસીએલ, 1 મીમી એમજીસીએલ 2, 1 મીમી ઇજીટીએ, 1 મીમી ડીટીટી, 10% ગ્લિસરોલ) , પ્રોટીઝ અવરોધક મિશ્રણ, 0.1% નોનિડેટ પી -40 સબસ્ટીટ્યુટ). સોનિકેશન પછી, નોનિડેટ પી -40 સબસ્ટીટ્યુટ 1% સુધી ઉમેરવામાં આવ્યું હતું અને લાઇસેટ્સને 30 મિનિટ માટે 4 ડિગ્રી સેલ્સિયસ પર માથું વહન કરવામાં આવ્યું હતું, ત્યારબાદ 4 ડિગ્રી સેલ્સિયસ પર 20 મિનિટ માટે 20,000. જી પર સેન્ટ્રિફ્યુગન કરવામાં આવ્યું હતું. ત્યારબાદ ક્લીઅરડ લાઇસેટને ઉપલા લિપિડ સ્તરને ખલેલ પહોંચાડ્યા વિના મહત્વાકાંક્ષી બનાવવામાં આવી હતી અને અડધા ભાગથી એન્ટી-જીએફપી એગ્રોઝ માળા અથવા અવરોધિત નિયંત્રણ મણકા (40-50 )l) માં વહેંચાયેલી હતી. 60-90 મિનિટ માટે 4 min સે ઉપર પૂંછડીની પરિભ્રમણ પછી, માળા એક વખત 0.1% નોનિડેટ પી -40 સબસ્ટીટ્યુટ ધરાવતા લિસીસ બફરથી ધોવાઈ હતી, ત્યારબાદ બે વખત બફર I (25 મીમી ટ્રિસ-એચસીએલ, પીએચ) માં બે વખત ધોવા પછી 7.4, 300 મીમી એનએસીએલ, 1 મીમી એમજીસીએલ 2) અથવા બફર II (1 મીમી ટ્રિસ-એચસીએલ, પીએચ 7.4, 150 મીમી એનએસીએલ, 1 મીમી એમજીસીએલ 2) અથવા બંને. જીએફપી માટે: એમબીકે -2 પુલ-ડાઉન્સ, વ washingશિંગની જુદી જુદી સ્થિતિનો ઉપયોગ કરીને બે અલગ પ્રયોગો કરવામાં આવ્યા હતા. પ્રોટીન ઓરબીટલ ઓરડાના તાપમાને 6 એમ યુરિયા / 2 એમ થિઅરિયાના 50 μl માં ધ્રુજારી દ્વારા ગણવામાં આવ્યું હતું. એમબીકે -1 :: જીએફપી પુલ-ડાઉન પ્રયોગો માટે, પ્રોટીનને m૦ ડિગ્રી સેલ્સિયસ તાપમાને m મી ગુઆનિડિનીયમ ક્લોરાઇડના in૦ inl માં ધ્રુજારી દ્વારા, ઇથેનોલ વરસાદના અનુસંધાનમાં બે વાર ગણતરી કરવામાં આવી હતી. ઇલ્યુટેડ પ્રોટીન નમૂનાઓ પછી ઉકેલમાં પાચન કરવામાં આવ્યાં.
(સીએફ. ચેન એટ અલ., 2016)

અલ્ટ્રાસોનિક વોર્મ હોમોજેનાઇઝેશન અને લિસીસ

સીલેગન્સ લિસીસ અને પ્રોટીન કાractionવાની પ્રક્રિયા માટે, સંબંધિત તબક્કાના 30,000 નેમોટોડ્સ નમૂના મુજબ એકત્રિત કરવામાં આવ્યા હતા અને બરફ-કોલ્ડ એસ-બેસલમાં ધોવાયા હતા, 1500 આરપીએમ પર 2 મિનિટ માટે કેન્દ્રત્યાગી દ્વારા કેન્દ્રિત, બરફ-કોલ્ડ એસ સાથે છ વખત ધોવા. મૂળભૂત અવશેષ બેક્ટેરિયા દૂર કરવા માટે, અને પછી ઉપયોગ માટે તૈયાર ન થાય ત્યાં સુધી બરફ પર સંગ્રહિત. પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ માટે, ગ્રેવીડ-પુખ્ત કૃમિને છેલ્લા એસ-બેસલ ધોવા પછી કોમ્પેક્ટ ગોળીઓ બનાવવાની મંજૂરી આપવામાં આવી હતી. ત્યારબાદ કૃમિની ગોળીઓ 1 મિલી આઇસ આઇસ-કોલ્ડ એક્સટ્રેક્શન બફર [20 મીમી પોટેશિયમ ફોસ્ફેટ, પીએચ 7.4, 2 એમએમ ઇડીટીએ, 1% ટ્રાઇટોન-એક્સ -100, પ્રોટીઝ ઇન્હિબિટર (સિગ્મા પી 2714)] માં ફરી રજૂ કરી દેવામાં આવી હતી.
V30,000 ગ્રેવિડ-પુખ્ત કૃમિ (∼100 મિલિગ્રામ ભીના વજનને અનુરૂપ), એએ પ્રોબ-પ્રકારનાં અલ્ટ્રાસોનિસેટર (દા.ત. યુ.પી.50 એચ સાથે માઇક્રોટીપ એમએસ 2 સાથે) નો ઉપયોગ કરીને sec૦ સેકન્ડના cy૦ સેકન્ડના cy૦ સેકન્ડ પર, sec૦ સેકન્ડના અંતરે આઇસ-કોલ્ડ નિષ્કર્ષણ બફરની 1 મિલી. (સીએફ. બાસ્કરન એટ અલ. 2012)

સી. એલિગન્સથી અલ્ટ્રાસોનિક લિપિડ નિષ્કર્ષણ

લિપિડોમિક્સમાં, ચયાપચયની શાખા, જૈવિક સિસ્ટમોનું લિપિડ પૂરક લાક્ષણિકતા અને વિશ્લેષણ છે. સી એલિગન્સનો ચિકિત્સા લિપિડ્સની ક્રિયાપ્રતિક્રિયા અને આરોગ્ય અને આયુષ્ય પરના પ્રભાવની તપાસ માટે લિપિડોમિક્સમાં વ્યાપકપણે ઉપયોગમાં લેવાય છે.
અલ્ટ્રાસોનિક લિસીસ અને નિષ્કર્ષણનો ઉપયોગ સી એલિગન્સ ભ્રૂણ, લાર્વા અને પુખ્ત કૃમિના સ્ફિંગોલિપિડ્સ જેવા લિપિડને મુક્ત કરવા માટે થાય છે. અલ્ટ્રાસોનિકેશનનો ઉપયોગ કૃમિ સજાતીય તૈયાર કરવા અને ત્યારબાદ નમૂનામાંથી લિપિડ્સ કા .વા માટે થાય છે.
સી એલિગન્સથી અલ્ટ્રાસોનિક લિપિડ એક્સ્ટ્રેક્શન માટેનો પ્રોટોકોલ
સી એલિગન્સની ગોળી બરફ પર ફેંકી દો અને 0.5 મિલી અલ્ટ્રાવોટર સાથે ફરી વળો. નમૂના બરફ પર સતત રાખતા વખતે, 1,5 એમએલ પરીક્ષણ ટ્યુબમાં સી એલિગન્સના નમૂનાઓ સોનિકેટ કરો.
Sonication જેમ કે પ્રોબ-અલ્ટ્રાસોનિકસ્ટરનો ઉપયોગ કરીને કરી શકાય છે Uf200 ः ટી, અવાજ નમૂનાના PReP એકમ વીયલટેવેટર (10 નમૂનાઓનું એક સાથે સોનિકિકેશન) અથવા UIP400MTP (મલ્ટિ-વેલ પ્લેટો જેવા કે-96-કૂલ પ્લેટોના સોનિકેશન માટે). યુપી 200 એચ સાથે અલ્ટ્રાસોનિક લિસીસ માટે માઇક્રો-ટીપ એસ 26 ડી 2 નો ઉપયોગ કરો. ડિજિટલ મેનૂમાં અલ્ટ્રાસોનિક ચક્ર મોડને પ્રી-સેટ કરો. કંપનવિસ્તાર 10% અને 30 સેકન્ડના વિરામ સાથે 20 ચક્રની 2 સેકન્ડ કઠોળનું સોનિકેશન ચક્ર મોડ સેટ કરો. દરેક અવાજ પલ્સશન વિસ્ફોટ વચ્ચે.
સ્ક્રુ કેપથી ગ્લાસ ટ્યુબમાં સુપરનેટનેન્ટ્સ સ્થાનાંતરિત કરો. દરેક ગ્લાસ ટ્યુબમાં 1 મિલી અલ્ટ્રાવોટર ઉમેરીને ફોલ્ચ એક્સટ્રેક્શન કરો, ત્યારબાદ દરેક ગ્લાસ ટ્યુબમાં ક્લોરોફોર્મ / મેથેનોલ (રેશિયો = 2: 1) નું મિશ્રણ 6 મિલી ઉમેરીને.
દરેક ગ્લાસ ટ્યુબને 4 સેકંડ માટે 30 સેકંડ માટે ભમરો. તબક્કાના જુદા જુદા ભાગને આગળ વધારવા માટે 15 મિનિટ (એપેન્ડorfર્ફ, 5810 આર) માટે 1,258 xg પર નળીઓનો કેન્દ્રવિભાગ કરો. ગ્લાસ પાશ્ચર પીપેટ દ્વારા સ્વચ્છ ગ્લાસ ટ્યુબમાં નીચલા હાઇડ્રોફોબિક અપૂર્ણાંકને સ્થાનાંતરિત કરો. નાઇટ્રોજન બાષ્પીભવનમાં નાઇટ્રોજન ફ્લો હેઠળ નીચલા હાઇડ્રોફોબિક અપૂર્ણાકને સૂકવો. ઉપયોગ ન થાય ત્યાં સુધી સૂકા ગોળીને -80 ° સે ફ્રીઝરમાં સ્ટોર કરો.

કૃમિ લાઇસેટ્સની અલ્ટ્રાસોનિક તૈયારી

કૃમિ લાઇસેટ: એલ 4 સ્ટેજ વોર્મ્સ લણણી અને એમ 9 બફર (42.26 એમએમ ના) સાથે ત્રણ વખત ધોવાયા₂એચપીઓ₄, 22.04 એમએમ કેએચ₂પોસ્ટ₄, 85.56 એમએમ નાસીએલ, અને 0.87 એમએમ એમજીએસઓ₄) બધા બેક્ટેરિયાને દૂર કરવા માટે. એમ 9 બફરનું શક્ય તેટલું દૂર કર્યા પછી, વોર્મ્સ લીસીસ બફરમાં ફરી વળ્યા હતા: 50 મીમી હેપ્સ, 50 એમએમ કેસીએલ, 1 એમએમ ઇડીટીએ, 1 એમએમ ઇજીટીએ, 5 એમએમ ફોસ્ફેટ-ગ્લિસરોલ, 0.1% (વી / વી) ટ્રાઇટોન એક્સ -100, 50 મીમી સોડિયમ ફ્લોરાઇડ, 1 એમએમ સોડિયમ ઓર્થોવાનાડેટ, 5 એમએમ સોડિયમ પાયરોફોસ્ફેટ, 0.2 એમએમ ફિનાઇલમેથેનેસલ્ફોનિલ્ફ્લોરાઇડ અને પ્રોટીઝ અવરોધક. કૃમિ પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં સ્થિર થઈને 37 ડિગ્રી સેલ્સિયસ ત્રણ વખત પીગળી હતી, ત્યારબાદ 10 સેમ્પલ ટ્યુબ્સની એક સાથે તૈયારી માટે અલ્ટ્રાસોનિક વાયલ્ટવીટર એકમ સાથે શુષ્ક બરફ પર કૃમિ સોનેક્ટ કરવામાં આવ્યાં હતાં. સોનિકેશન 2 સેકંડના 10 ચક્રમાં 50% કંપનવિસ્તાર પર કરવામાં આવ્યું હતું. 30 સેકંડ વિરામ સાથે સોનિફિકેશન વિસ્ફોટ સાથે. પછીથી, નમૂનાઓ 15 મિનિટ માટે 4 ° સે પર 12000 આરપીએમ પર કેન્દ્રિત કરવામાં આવ્યા. સુપરનેટંટ એકત્રિત કરવામાં આવ્યું હતું અને -70 ° સે. બરાફોર્ડ એસે દ્વારા પ્રોટીન ક્વોન્ટીકેશન માટે એક એલિકોટનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો.
કુલ ગ્લુટાથિઓન, જીએસએચ અને જીએસએસજીનું નિર્ધારણ: ગ્લુટાથિઓન જથ્થો માટે, લાઇસેટ્સ અને નિશ્ચય તે જ દિવસે કરવામાં આવ્યા હતા. ગ્લુકોઝ કંટાળી ગયેલ અને નિયંત્રણ L4 લાર્વાની લણણી ત્રણ વખત એમ 9 બફરથી કરવામાં આવી હતી અને ધોવાઇ હતી. એમ 9 બફર જેટલું શક્ય તેટલું દૂર કર્યા પછી, બરફ-કોલ્ડ મેટાફોસ્ફોરિક એસિડ (5% ડબલ્યુ / વી) માં કૃમિ ફરી હતી, પછી 2 સેકંડના દસ સોનેક્શન ચક્રમાં 50% કંપનવિસ્તાર સાથે વોર્મ્સ અલ્ટ્રાસોનિક વાઈલટવીટર સાથે બરફમાં સોનેક્ટ કરવામાં આવ્યા હતા. 30 સેકન્ડ સાથે. દરેક ચક્ર વચ્ચે થોભો. પછીથી, 12 મિનિટ આરપીએમ પર 4 મિનિટ માટે 15 મિનિટ માટે સેન્ટ્રિફ્યુગ.
(સીએફ. અલકેન્ટાર-ફર્નાન્ડિઝ એટ અલ., 2018)

સી. એલિગન્સ સેમ્યુલ પ્રેપ ઇમ્યુનોપ્રિસિપેશન અને વેસ્ટર્ન બ્લotટિંગ પહેલાં

ટૂંકમાં, ગર્ભના અર્ક માટે, સી એલિગન્સ એલ 1 લાર્વા મોટા કદના પ્રવાહી એસ-માધ્યમ સંસ્કૃતિમાં ઉગાડવામાં આવતા હતા. એમ્બ્રોયો પ્રમાણભૂત બ્લીચ પદ્ધતિનો ઉપયોગ કરીને એકત્રિત કરવામાં આવ્યા હતા અને લિસીસ બફર (50 એમએમ ટ્રિસ, પીએચ 7.5, 100 એમએમ કેસીએલ, 1 એમએમ ઇડીટીએ, 1 એમએમ એમજીસીએલ 2, 8.7% ગ્લિસરોલ, 0.05% એનપી -40, 1- પ્રોટીઝ અવરોધક કોકટેલ, અને 1- ફોસ્ફેટ ઇન્હિબિટર કોકટેલ I અને II), ઝડપથી પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં સ્થિર, અને અલ્ટ્રાસોનિક સેલ વિક્ષેપ દ્વારા માઇક્રોટિપ જેવા અલ્ટ્રાસોનિસેટરનો ઉપયોગ કરીને Uf200 ः ટી 10% થી વધુ 30% કંપનવિસ્તાર પર 10 કઠોળ માટે એસ 26 ડી 2 સાથે. જો મોટી સંખ્યામાં નમૂનાઓ અલ્ટ્રાસોનિક તૈયાર હોવા આવશ્યક છે વીયલટેવેટર અથવા સારી પ્લેટો માટેના મલ્ટિ-સેમ્પલ-અલ્ટ્રાસોનિસેટર UIP400MTP ની ભલામણ કરવામાં આવે છે. સોનિકેક્શન પછી, અર્કને cent ડિગ્રી સેલ્સિયસ તાપમાને 20 મિનિટ માટે 30,000 ગ્રામ પર સેન્ટ્રીફ્યુગેશન દ્વારા પૂર્વ-સાફ કરવામાં આવ્યા હતા. પૂર્વ-સાફ કરેલ અર્ક (300µg કુલ પ્રોટીન) એ એન્ટિ-સીડીસી-25.1 એન્ટીબીટી-પ્યુરિફાઇડ એન્ટિબોડી (આ અભ્યાસ) ની 40µ􏰂g પ્રોટીન એ-એગોરોઝથી ક્રોસ-લિંક્ડ, અથવા નિયંત્રણ તરીકે, સસલા ઇમ્યુનોગ્લોબ્યુલિનની સમાન રકમ સાથે સેવામાં આવ્યું હતું (આઇ.જી.) પ્રોટીન એ-એગ્રોઝ સાથેના ક્રોસ કનેક્ટેડ 1% એનપી -40 ધરાવતા લિસીસ બફરના 200µl ના કુલ જથ્થામાં ઉપયોગ થતો હતો, જેનો સમાવેશ મેટ્રિક્સમાં પ્રોટીનનું અનિશ્ચિત જોડાણને ઘટાડ્યું હતું. નમૂનાઓ 1 એચ માટે 4 ડિગ્રી સેલ્સિયસ પર ફેરવવામાં આવ્યા હતા, માળા ત્રણ વખત લિસીસ બફરથી ધોવાઇ હતી, અને ગ્લાસિન / એચસીએલના 30µl અને 200 એમએમ એનએસીએલ, પીએચ 2.2 સાથે એલ્યુટેડ. રોગપ્રતિકારક શક્તિ પછી, એલ્યુએટ્સને એસડીએસ નમૂના બફરના 30µ􏰂l માં પાતળા કરવામાં આવ્યા હતા, 4 મિનિટ માટે 95 ° સે ગરમ કરવામાં આવ્યા હતા, અને સામાન્ય રીતે ઇનપુટ માટે કુલ 3% અને ચુનંદાઓ માટે 30% એસડીએસ-પેજ પર લાગુ કરવામાં આવ્યા હતા, ત્યારબાદ વિરોધી દ્વારા પશ્ચિમી બ્લોટીંગ કરવામાં આવ્યું હતું -સીડીસી -25.1 (1: 400), એન્ટી-લિં -23 (1: 750), એન્ટી-યુબીક્વિટિન (1: 1000), એન્ટી-જીએસકે 3􏰁 (1: 500), અથવા એન્ટી-એક્ટિન (1: 500) 2000) એન્ટિબોડીઝ. જ્યાં અર્કને રોગપ્રતિકારક શક્તિનો આધીન કરવામાં આવ્યો ન હતો, ત્યાં તે જ અર્કમાંથી નીકળેલા કુલ પ્રોટીનનો જથ્થો એસડીએસ સેમ્પલ બફરમાં ફેરવવામાં આવ્યો હતો, તેને 95 ડિગ્રી સેલ્સિયસ તાપમાને ગરમ કરવામાં આવ્યો હતો, અને પછી સીધા એસડીએસ-પૃષ્ઠ પર લાગુ કરવામાં આવ્યો હતો અને પશ્ચિમી બ્લોટીંગ દ્વારા વિશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું. (સીએફ. સેગ્રેફ એટ અલ. 2020)

પ્રેસસાઇઝ તાપમાન નિયંત્રણ હેઠળ અલ્ટ્રાસોનિક લિસીસ

જૈવિક નમૂનાઓનું સંચાલન કરતી વખતે ચોક્કસ અને વિશ્વસનીય તાપમાન નિયંત્રણ નિર્ણાયક છે. ઉચ્ચ તાપમાન નમૂનાઓમાં થર્મલ પ્રેરિત પ્રોટીન અધોગતિ શરૂ કરે છે.
તમામ યાંત્રિક નમૂનાની તૈયારીની તકનીકીઓ તરીકે, સોનિકેશન ગરમીનું નિર્માણ કરે છે. જો કે, VialTweeter નો ઉપયોગ કરતી વખતે નમૂનાઓનું તાપમાન સારી રીતે નિયંત્રિત કરી શકાય છે. વિશ્લેષણ માટે વાયલવીટર અને વાયલપ્રેસ સાથે તૈયાર કરતી વખતે અમે તમને તમારા નમૂનાઓના તાપમાનને મોનિટર કરવા અને તેના નિયંત્રણ માટે વિવિધ વિકલ્પો રજૂ કરીએ છીએ.

1. નમૂનાના તાપમાનનું નિરીક્ષણ કરવું: અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોસેસર યુપી 200 એસટી, જે વાયલટવીટર ચલાવે છે, એક બુદ્ધિશાળી સ softwareફ્ટવેર અને પ્લગિબલ તાપમાન સેન્સરથી સજ્જ છે. તાપમાન સેન્સરને UP200St માં પ્લગ કરો અને નમૂના ટ્યુબમાંથી એકમાં તાપમાન સેન્સરની મદદ દાખલ કરો. ડિજિટલ રંગીન ટચ-ડિસ્પ્લે દ્વારા, તમે UP200St ના મેનૂમાં તમારા નમૂના નમૂના માટે ચોક્કસ તાપમાન શ્રેણી સેટ કરી શકો છો. મહત્તમ તાપમાન પહોંચે ત્યારે અલ્ટ્રાસોનાઇટર આપમેળે બંધ થઈ જાય છે અને સેમ્પલ તાપમાન સેટ તાપમાનના નીચા મૂલ્ય સુધી નીચે ન આવે ત્યાં સુધી થોભો. પછી સોનીકેશન ફરીથી આપમેળે શરૂ થાય છે. આ સ્માર્ટ સુવિધા ગરમી-પ્રેરિત અધોગતિને અટકાવે છે.
2. VialTweeter બ્લોક પૂર્વ-ઠંડુ કરી શકાય છે. ટાઇટેનિયમ બ્લોકને પૂર્વ-ઠંડુ કરવા માટે, વાયલટવીટર બ્લોક (ટ્રાન્સડ્યુસર વિના ફક્ત સોનોટ્રોડ!) ફ્રિજમાં અથવા ફ્રીઝરમાં મૂકો, નમૂનામાં તાપમાનમાં વધારો મુલતવી રાખવામાં મદદ કરે છે. જો શક્ય હોય તો, નમૂના પોતે પણ પૂર્વ-ઠંડુ થઈ શકે છે.
3. સોનિફિકેશન દરમિયાન ઠંડુ કરવા માટે સૂકા બરફનો ઉપયોગ કરો. શુષ્ક બરફથી ભરેલી છીછરા ટ્રેનો ઉપયોગ કરો અને શુષ્ક બરફ પર વાયલટવીટર મૂકો જેથી ગરમી ઝડપથી ઓગળી શકે.

તમારી લિસીસ એપ્લિકેશન માટે શ્રેષ્ઠ અલ્ટ્રાસોનિક સેલ ડિસપ્ટર શોધો

હિલ્સચર અલ્ટ્રાસોનિક્સ પ્રયોગશાળાઓ, બેંચ-ટોપ અને industrialદ્યોગિક સ્કેલ સિસ્ટમો માટે ઉચ્ચ-પ્રદર્શન અલ્ટ્રાસોનિક સેલ ડિસપ્ટર્સ અને હોમોજેનાઇઝર્સના લાંબા સમયનો અનુભવી ઉત્પાદક છે. તમારી બેક્ટેરિયલ સેલ સંસ્કૃતિનું કદ, તમારું સંશોધન અથવા ઉત્પાદન લક્ષ્ય અને કલાક દીઠ અથવા દિવસ દીઠ પ્રક્રિયા કરવા માટેના કોષની માત્રા તમારી એપ્લિકેશન માટે યોગ્ય અલ્ટ્રાસોનિક સેલ ડિસપ્ટર શોધવા માટે આવશ્યક પરિબળો છે.
હિલ્સચર અલ્ટ્રાસોનિક્સ મલ્ટિ-સેમ્પલ્સ (10 શીશીઓ સુધી) ની સાથોસાથ સામૂહિક નમૂનાઓ (એટલે કે, માઇક્રોટિટર પ્લેટો / 96-વેલ પ્લેટો), 50 થી વિવિધ પાવર લેવલ સાથે ક્લાસિક પ્રોબ-ટાઇપ લેબ અલ્ટ્રાસોનિસેટર માટે વિવિધ ઉકેલો પ્રદાન કરે છે. મોટા ઉત્પાદનમાં વ્યાપારી કોષ વિક્ષેપ અને પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ માટે પ્રતિ યુનિટ દીઠ 16,000 વોટસ સાથે સંપૂર્ણ fullyદ્યોગિક અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોસેસર્સ માટે 400 વોટ. બધા હિલ્સચર અલ્ટ્રાસોનિકેટર્સ સંપૂર્ણ લોડ હેઠળ 24/7/365 ઓપરેશન માટે બનાવવામાં આવ્યા છે. મજબૂતાઈ અને વિશ્વસનીયતા એ આપણા અવાજ ઉપકરણોની મુખ્ય સુવિધાઓ છે.
બધા ડિજિટલ અલ્ટ્રાસોનિક હોમોજેનાઇઝર્સ સ્માર્ટ સ softwareફ્ટવેર, રંગીન ટચ ડિસ્પ્લે અને સ્વચાલિત ડેટા પ્રોટોકોલિંગથી સજ્જ છે, જે અલ્ટ્રાસોનિક ડિવાઇસને લેબ અને ઉત્પાદન સુવિધાઓમાં અનુકૂળ વર્ક ટૂલમાં બનાવે છે.
અમને જણાવો કે, કયા પ્રકારનાં કોષો, કયા વોલ્યુમ, કયા આવર્તન સાથે અને કયા લક્ષ્ય સાથે તમારે તમારા જૈવિક નમૂનાઓ પર પ્રક્રિયા કરવાની છે. તમારી પ્રક્રિયાની આવશ્યકતાઓ માટે અમે તમને સૌથી યોગ્ય અવાજ સેલ ડિસપ્ટરની ભલામણ કરીશું.

નીચે આપેલ કોષ્ટક તમને કોમ્પેક્ટ હાથથી પકડેલા હોમોજેનાઇઝર્સ અને મલ્ટિસ્મ્પલ અલ્ટ્રાસોનિકેટર્સથી લઈને વેપારી કાર્યક્રમો માટે industrialદ્યોગિક અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોસેસર્સ સુધીની અમારા અલ્ટ્રાસોનિક સિસ્ટમોની અંદાજિત પ્રક્રિયા ક્ષમતાનો સંકેત આપે છે: