હિલ્સચર અલ્ટ્રાસાઉન્ડ ટેકનોલોજી

ઇ. કોલીના અલ્ટ્રાસોનિક લિસિસ

  • કોલાઇ બેક્ટેરિયા માઇક્રોબાયોલોજી અને બાયોટેકનોલોજી સૌથી સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં બેક્ટેરિયા છે.
  • અલ્ટ્રાસોનિક સેલ disruptors ઇ કોલી lysis માટે વિશ્વસનીય અને પ્રજનન પરિણામો વિતરિત.
  • તીવ્ર હજુ સુધી ચોક્કસપણે નિયંત્રણક્ષમ પોલાણ અને દબાણમાં દળો સંપૂર્ણ વિક્ષેપ અને ઉચ્ચ નિષ્કર્ષણ ઉપજ (દા.ત. પ્રોટીન, ડીએનએ) માં પરિણમે છે.

પોલાણ દ્વારા સેલ વિક્ષેપ

એસ્કેરિકીયા કોલી બેક્ટેરિયા વિશ્વસનીય અવાજ પેશી homogenizers મદદથી lysed આવે છે.અલ્ટ્રાસોનિક ચકાસણી પ્રકારના homogenizers આશરે સાથે કામ કરે છે. (20kHz ખાતે) પ્રતિ સેકન્ડ 20,000 ચક્ર અને પ્રવાહી અથવા supsensions માં પોલાણ કારણ બને છે. વેક્યૂમ જેવા દબાણ અને ઊંચા તાપમાને કે જેમાં શરીરના કોશિકાઓ સિવાય તોડીને એકોસ્ટિક પોલાણ માઇક્રોસ્કોપિક વિસ્તારોમાં. જોકે તાપમાન કેટલાક હજાર ડિગ્રી સેલ્સિયસ સુધી પહોંચી શકે છે, પોલાણ વોલ્યુમો જેથી નાના તેઓ પ્રક્રિયા નોંધપાત્ર ગરમી નથી. અલ્ટ્રાસાઉન્ડ એકોસ્ટિક પોલાણ પેદા થાય છે અને દબાણમાં દળો છિદ્ર વાટે અથવા E.coli ના કોષ પટલ તૂટી – અવાજ homogenizer ઉપકરણ સેટિંગ પર આધાર રાખે છે.

અલ્ટ્રાસોનિક lysis લાભો

  • lysis ચોક્કસ નિયંત્રણ (તીવ્રતા, કંપનવિસ્તાર, તાપમાન)
  • ચોક્કસ નમૂનાઓ શ્રેષ્ઠ અનુકૂલન
  • તાપમાન નિયંત્રણ
  • ખૂબ જ નાના માટે ખૂબ જ મોટી નમૂનાઓ માટે (એમએલ લિટર)
  • શુદ્ધ યાંત્રિક સારવાર
  • રેખીય ઉત્પાદન માટે લેબ માંથી સ્કેલ અપ
અવાજ ઉપકરણ VialTweeter જ પ્રક્રિયા શરતો હેઠળ 10 શીશીઓ ના એક સાથે નમૂના તૈયાર કરવા માટે પરવાનગી આપે છે. (મોટું માટે ક્લિક કરો!)

વીયલટેવેટર અવાજ lysis માટે

માહિતી માટે ની અપીલ





જ્યારે રાસાયણિક અને enzymtic lysis સમસ્યારૂપ બની શકે – ત્યારથી રાસાયણિક lysis પ્રોટીન માળખા બદલવા અને શુદ્ધિકરણ સમસ્યાઓ અને એન્જીમેટિક lysis દાખલ કરી શકો છો લાંબા સમય સુધી સેવન વખત જરૂરી છે અને પ્રજનન નથી – અવાજ ભંગાણ એક વ્યવહારદક્ષ, ઝડપી સેલ ભંગાણ પદ્ધતિ છે.
અલ્ટ્રાસોનિક લિસિસ માત્ર યાંત્રિક દળો પર આધારિત છે. કોઈ રસાયણો ઉમેરવામાં આવતાં નથી, સોનાના દબાણથી શારિરીક દળો દ્વારા સેલ દિવાલ તૂટી જાય છે. કેમિકલ લેસિસ પ્રોટીન માળખું બદલી શકે છે અને શુદ્ધિકરણ સમસ્યાઓ પરિણમી શકે છે. એન્ઝાઇમેટિક વિક્ષેપને લાંબા ઉકાળોના સમયની જરૂર પડે છે અને તે ફરીથી બનાવતી નથી.

જનરલ ભલામણો

ફ્લો રિએક્ટર સાથે UP400St ultrasonicatorSonication સેલ સસ્પેન્શન ખૂબ નાના, મધ્યમ અને મોટા જથ્થામાં lysing માટે સૌથી વધુ લોકપ્રિય ટેકનિક છે – 100L / કલાક સુધી Pico-લિટર માંથી (એક અવાજ પ્રવાહ સેલ મદદથી). કોષ પ્રવાહી દબાણમાં અને પોલાણ દ્વારા lysed આવે છે. ડીએનએ પણ sonication દરમિયાન sheared છે, તેથી તેને સેલ સસ્પેન્શન તરફ DNase ઉમેરવા જરૂરી નથી.
તાપમાન નિયંત્રણ:
નમૂના પૂર્વ ઠંડક અને બરફ પર sonication દરમિયાન નમૂના રાખીને, નમૂના થર્મલ અધઃપતન સરળતાથી અટકાવી શકાય છે.
આદર્શ રીતે, લિસિસ દરમિયાન નમૂનાને બરફ-ઠંડુ રાખવું જોઇએ, પરંતુ મોટાભાગના નમૂનાઓ માટે જો તાપમાન તાપમાન અથવા પેશીઓના સ્રોતના તાપમાનથી ઉપર ન વધે તો તે પૂરતું છે. તેથી બરફની સસ્પેન્શન રાખવા અને 5-10 સેકંડના કેટલાક ટૂંકા અલ્ટ્રાસોનિકલ્સના કઠોળ અને 10-30 સેકન્ડના વિરામ સાથે સૉકેટ કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે. વિરામ દરમિયાન, ઉષ્ણતામાન નીચા તાપમાનને ફરીથી સ્થાપિત કરવા માટે ઓગાળી શકે છે. મોટા સેલ નમૂનાઓ માટે, કૂલિંગ જેકેટ સાથે વિવિધ ફ્લો સેલ રિએક્ટર ઉપલબ્ધ છે.

કોલાઇ Lysates તૈયાર કરવા માટે શિષ્ટાચાર

અભિવ્યક્તિ વિશ્લેષણ અને રિકોમ્બિનન્ટ પ્રોટીનના શુદ્ધિકરણ

કોલાઇ પેલેટ એક અવાજ સિસ્ટમ સાથે sonicated કરવામાં આવી હતી UP100H (Hielscher). આ હેતુ માટે, સેલ પેલેટને ઠંડું લિસિસ બફર (50 એમએમ ટ્રિસ-એચસીએલ પીએચ = 7.5, 100 એમએમ નાકેલ, 5 એમએમ ડીટીટી, 1 એમએમ પીએમએસએફ) માં રિસુસ્પેન્ડ કરવામાં આવ્યું હતું અને 10 મિનિટ માટે બરફ પર ઠંડુ કરવામાં આવ્યું હતું. ત્યારબાદ, સેલ સસ્પેન્શનને 10 સેકંડના 10 ટૂંકા વિસ્ફોટ સાથે કોન્ટ્રેકશન કરવામાં આવ્યું હતું અને ત્યારબાદ ઠંડક માટે 30 સે. છેલ્લે, સેલ કચરો 4 ડિગ્રી સેલ્સિયસ દ્વારા 14000 આરપીએમ પર 15 મિનિટ માટે અલ્ટ્રાસેન્ટ્રિફ્યુગેશન દ્વારા દૂર કરવામાં આવ્યો હતો. આરઆરપીઆર અભિવ્યક્તિની પુષ્ટિ માટે, સપાટી પરની સપાટી પર 12% પોલીક્રીલામાઇડ જેલ પર ચાલતો હતો અને SDS-PAGE અને પશ્ચિમી બ્લોટિંગ દ્વારા તેનું વિશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું. આરપીઆરની શુદ્ધિકરણ ની મદદથી કરવામાં આવી હતી2+-NTA રેઝિન (Invitrogen, યુએસએ) ઉત્પાદકની માર્ગદર્શિકા અનુસાર. આ તબક્કે, મૂળ શુદ્ધિકરણ પદ્ધતિ ઉપયોગ થતો હતો. શુદ્ધ પ્રોટીન શુદ્ધતા 12% polyacrylamide જેલ અને અનુગામી Coomassie વાદળી સ્ટેનિંગ પર ઇલેક્ટ્રો મદદથી આકારણી કરવામાં આવી હતી. શુદ્ધ પ્રોટીન એકાગ્રતા સૂક્ષ્મ BCA પ્રોટીન નિબંધ કિટ (પીયર્સ, યુએસએ) દ્વારા માપવામાં આવ્યો હતો. (Azarnezhad એટ અલ. 2016)

અલ્ટ્રાસોનિક સેલ disruptor UP100H (100W) lysis, સેલ ભંગાણ અને ડીએનએ ઉતારવાની છે.

અલ્ટ્રાસોનિક homogenizer UP100H (100 ડબ્લ્યુ)

સેલ ગ્રોથ, Crosslinking અને ઇ કોલી સેલ અર્ક ની તૈયારી

SeqA અને આરએનએ પોલિમરેઝ ચિપ-ચિપ કોલાઇ MG1655 અથવા MG1655 ΔseqA માટે OD 37 ° C પર મોટો થયો600 ફોર્મલડિહાઈડ (37%) પ્રતિ મિલી માધ્યમ (અંતિમ એકાગ્રતા 1%) ના 27 μl પહેલાં 50 મિલિગ્રામ એલબી (+ 0.2% ગ્લુકોઝ) માં 0.15 વિશે. ક્રોસલીન્કિંગ 20 મિનિટ માટે ઓરડાના તાપમાને ધીમી ઝાંખા (100 આરપીએમ) પર કરવામાં આવ્યું હતું અને તે પછી 10 મિલીલીટર 2.5 એમ ગ્લાયસીન (અંતિમ એકાગ્રતા 0.5 એમ) સાથે શ્વસન કરવામાં આવ્યું હતું. ઉષ્ણ આંચકા પ્રયોગો માટે, ઇ. કોલી એમજી1655 ઉદર 30 મીટર સેલ્સિયસના ઉમરથી 65 મીલી એલબી માધ્યમમાં ઉગાડવામાં આવ્યો હતો.600 લગભગ 0.3. ત્યારબાદ 30 મીલીયન સંસ્કૃતિ પૂર્વ-ગરમ ફ્લાસ્કને 43 ડીગ્રી સેલ્સિયસમાં તબદિલ કરવામાં આવી હતી અને બાકીના 30 ડિગ્રી સેલ્સિયસ રાખવામાં આવ્યા હતા. ઓરડાના તાપમાને વધુ ધુમાડો થતાં પહેલાં કોશિકાઓએ 30 અથવા 43 ડિગ્રી સેલ્સિયસ રાખ્યા બાદ ક્રોસલીંકિંગ અને ક્વીનિંગને ઉપર વર્ણવ્યા અનુસાર કરવામાં આવી હતી. કોષોને સેન્ટ્રિફ્યુગેશન દ્વારા એકત્રિત કરવામાં આવ્યાં અને ઠંડા ટીબીએસ (પીએચ 7.5) સાથે બે વખત ધોવાઇ. 1 મિલિલેશન બફર (10 એમએમ ટ્રીસ (પીએચ 8.0), 20% સુક્રોઝ, 50 એમએમ નાવિક, 10 એમએમ EDTA, 10 એમજી / એમએલ લાઇસોઝીમે) અને સેક્સ્યુલેશન પછી 30 મીટર માટે 37 ડિગ્રી સેલ્સિયસમાં રિસુસ્પેન કર્યા પછી 4 એમએલ આઈપી બફર, કોશિકાઓ બરફ પર 12 વખત 30 સેકંડ અને 30 સેકંડના બ્રેક સાથેનું એકીકરણ કરવામાં આવતું હતું UP400St અવાજ પ્રોસેસર 100% શક્તિ સાથે (Hielscher Ultrasonics જીએમબીએચ). 9000 ગ્રામ 10 મિનિટ માટે સેન્ટ્રીફ્યુગેશન પછી, 800 supernatant ના એમએલ aliquotes -20 ° C પર સંગ્રહિત કરવામાં આવી હતી. (Waldminghaus 2010)

ઉત્પાદન અને ઉત્સેચકો શુદ્ધિકરણ.

decahistidine (His10) -tagged પ્રોટીન ઉત્પાદન માટે, કોલાઇ BL21 (DE3) pET19b સર્જન સાથે રૂપાંતરિત કરવામાં આવી હતી. રાતોરાત preculture સેન્ટ્રીફ્યુગેશન દ્વારા ખેતી કરવામાં આવી હતી, અને 1% અભિવ્યક્તિ સંસ્કૃતિ રોગપ્રતિબંધક રસી મૂકવી માટે થતો હતો. pET19mgtB વહન કોશિકાઓ (OD 600 nm ના સ્તરે ઓપ્ટિકલ ઘનતા સુધી 22 ° C તાપમાને ઉગાડવામાં આવતા હતા600) 0.7 છે. સંસ્કૃતિ 17 ° સે બદલી કરવામાં આવી અને 100 μM IPTG દ્વારા પ્રેરિત કરવામાં આવી હતી. 16 એચ પછી, સંસ્કૃતિ 4 ° C ખાતે 7500 × ગ્રામ સેન્ટ્રીફ્યુગેશન દ્વારા ખેતી કરવામાં આવી હતી. કોષ એક S2 સૂક્ષ્મ-ટિપ Sonotrode સાથે પીએચ 7.4 ખાતે 50 એમએમ ફોસ્ફેટ બફર ખારા (PBS) 0.3 m NaCl સાથે resuspended અને અલ્ટ્રાસાઉન્ડ દ્વારા વિક્ષેપ પાડ્યો હતા UP200St ultrasonicator (Hielscher, Teltow, જર્મની) 0.5 એક ચક્ર અને 75% ની કંપનવિસ્તાર છે.
decahistidine-ટેગ કર્યાં GtfC જરૂરિયાતથી ઘણું વધારે ઉત્પાદન એક OD ખાતે 37 ° C તાપમાને પ્રેરિત કરવામાં આવી હતી600 100 μM IPTG સાથે 0.6 છે. કોષ પછી, 4 કલાક માટે સેવવામાંઆવે ખેતી, અને MgtB માટે ઉપર જણાવ્યું lysed કરવામાં આવી હતી.
ક્રૂડ સેલ અર્ક 15,000 × ગ્રામ અને 4 ° C તાપમાને સેન્ટ્રિફ્યુજ હતા સેલ ભંગાર કાંપ છે. સ્પષ્ટતા અર્ક 1 મિલી HisTrap એફએફ ક્રૂડ કૉલમ એક ÄKTAprime પ્લસ સિસ્ટમ (જીઈ હેલ્થકેર) ના ઉપયોગ પર લોડ કરવામાં આવી હતી. ઉત્સેચકો તેમના-ટેગ કર્યાં પ્રોટીન ઢોળાવ elution માટે ઉત્પાદકની પ્રોટોકોલ અનુસાર શુદ્ધ કરવામાં આવી હતી. Eluted પ્રોટીન ઉકેલો 4 ° C તાપમાને 50 એમએમ પીબીએસ, પીએચ 7.4, 0.3 એમ NaCl સાથે 1,000 વોલ્યુમો સામે તેણે બે વાર dialyzed કરવામાં આવી હતી. શુદ્ધિકરણ 12% એસડીએસ પાનાની દ્વારા પૃથક્કરણ કરવામાં આવ્યું હતું. પ્રોટીન એકાગ્રતા રોટી-કોન્ટના (કાર્લ રોથ જીએમબીએચ, કાર્લસ્રૂ, જર્મની) ની મદદથી બ્રેડફોર્ડ પદ્ધતિ દ્વારા નક્કી કરવામાં આવ્યું છે. (Rabausch એટ અલ. 2013)

કોલાઇ બેક્ટેરિયા પ્રોટીન ના નિષ્કર્ષણ
રસ એક બાઈટ પ્રોટીન (આ કિસ્સામાં, આર્બિડોપ્સિસ થલિયાના ના MTV1) એક જીએસટી ટેગ કરવા એકીકૃત અને BL21 એસ્કેરિકીયા કોલી (ઇ કોલી) કોષો વ્યક્ત કરવામાં આવે છે.
1. જીએસટી-MTV1 અને જીએસટી એક પેલેટ લો (50 મિલી અનુરૂપ બેક્ટેરીયલ સંસ્કૃતિ) અને 2.5 એમએલ બરફ ઠંડા નિષ્કર્ષણ બફર દરેક resuspend.
2. એક ultrasonicator વાપરો UP100H ત્યાં સુધી તેઓ lysed આવે છે ઘટાડો અસ્પષ્ટ અને વધતા સ્નિગ્ધતા દ્વારા સૂચવવામાં આવે છે બેક્ટેરીયલ કોશિકાઓનો પણ વિધ્વંસ ((2-5mL) નાના વોલ્યુમો માટે MS3 microtip-Sonotrode સજ્જ). આ બરફ પર હાથ ધરવામાં કરી શકાય છે, અને તે (દા.ત. 10 સેકન્ડ sonicating બરફ પર 10 સેકન્ડ અને તેથી અનુસરતા) અંતરાલો માં sonicate ભલામણ કરવામાં આવે છે. કેર ખૂબ ઊંચો તીવ્રતા સાથે sonicate નથી લેવામાં આવશે ધરાવે છે. જો foaming અથવા સફેદ અવક્ષેપ રચના શોધ્યું છે, તીવ્રતા ઘટાડો કરવાની જરૂર છે.
3. 4 ° C 16,000 x 20 મિનિટ માટે જી 1.5 એમએલ microcentrifuge ટ્યુબ માટે lysed બેક્ટેરિયા ઉકેલ અને સેન્ટ્રિફ્યુજ સ્થાનાંતરિત કરો.

કોલાઇ માં Allicin સુધારેલા પ્રોટીન્સ

VialTweeter નાના નમૂના સમાંગીકરણ માટે આરામદાયક ultrasonicator છે5,5'-Dithiobis (2-nitrobenzoic એસિડ) (DTNB) ટચ દ્વારા Sulfhydryl કન્ટેન્ટ્સ નિર્ધારણ
એક કોલાઇ MG1655 રાતોરાત સંસ્કૃતિ Mops ન્યૂનતમ મધ્યમ (: 100 1) રોગપ્રતિબંધક રસી મૂકવી માટે થતો હતો. સંસ્કૃતિ aerobically મોટો થયો ત્યાં સુધી 0.4 એક A600 પર પહોંચી હતી. સંસ્કૃતિ તણાવ સારવાર માટે ત્રણ 15 મિલી સંસ્કૃતિઓ વિભાજિત કરવામાં આવી હતી. એક સારવાર ન સંસ્કૃતિ નકારાત્મક નિયંત્રણ તરીકે સેવા આપી હતી. 0.79 mM allicin (128 યુજી મિલી-1) અથવા 1 મિમી diamide બાકીના બે સંસ્કૃતિઓ દરેક એક ઉમેરવામાં આવ્યું હતું. કલ્ચર્સ 15 મિનિટ માટે સેવવામાંઆવે આવી હતી. દરેક સંસ્કૃતિ 5 મિલી સેન્ટ્રીફ્યુગેશન (8,525 × જી, 4 ° C, 10 મિનિટ) દ્વારા ખેતી કરવામાં આવી હતી. કોષ પીબીએસ (137 mM NaCl, 2.7 mM કેસીએલ, 10 mm ના 1 મિલી સાથે બે વાર ધોવાઇ કરવામાં આવી હતી2એચપીઓ4, 2 મીમી કેએચ2પોસ્ટ4, પીએચ 7.4, ઍનોરોબિકલી ઉપયોગ પહેલાં) અને સેન્ટ્રીફ્યુડ (13,000 × જી, 4 ° સે, 10 મિનિટ). સેલ્સને લિસિસ બફર (પીબીએસ સાથે 6 એમએમ ગ્યુનેડીનિયમ એચસીએલ, પીએચ 7.4) માં રિસુસ્પેન્ડ કરવામાં આવ્યું હતું.વીયલટેવેટર ultrasonicator, Hielscher જીએમબીએચ, જર્મની) (3 × 1 મિનિટ). સેલ ભંગાર સેન્ટ્રીફ્યુગેશન (13,000 × જી, 4 ° C થી 15 મિનિટ) દ્વારા pelleted હતી. supernatant ચુંબકીય હલચલ બાર સાથે 3.5 મિલી ક્યુએસ સ્થૂળ Cuvette (10 મિમી) બદલી કરવામાં આવી અને lysis બફર 1 મિલી સાથે મિશ્ર કરવામાં આવી હતી. નમૂનાઓની લુપ્તતા એક Jasco વી 650 PSC-718 તાપમાન નિયંત્રિત સેલ ધારક (Jasco) ઓરડાના તાપમાને સજ્જ Spectrophotometer સાથે 412 nm ના સ્તરે મોનીટર કરવામાં આવી હતી. એક 3 મીમી dithiobis (2-nitrobenzoic એસિડ) ઉકેલ 100μl ઉમેરવામાં આવ્યા હતા. લુપ્તતા મોનીટર કરવામાં આવી હતી ત્યાં સુધી તે સંતૃપ્તિ સુધી પહોંચી હતી. thiol એકાગ્રતા ગણતરી લુપ્ત ગુણાંક ε ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો412 = 13.700 એમ-1 સે.મી.-1 thio-2-nitrobenzoic એસિડ (TNB માટે). સેલ્યુલર thiol સાંદ્રતા 6.7 × 10 કોલાઇ કોશિકાઓ વોલ્યુમ પર આધારિત ગણતરી કરવામાં આવી હતી-15 લિટર અને એ સેલ ઘનતા600 = 0.5 (સમકક્ષ 1 × 108 કોષો મિલી-1 સંસ્કૃતિ). (મુલર એટ અલ. 2016)

Vivo Glutathione નિર્ધારણમાં

E.coli MG1655 એ સુધી 200ml કુલ વોલ્યુમ Mops ન્યૂનતમ મધ્યમ ઉગાડવામાં આવી હતી600 0.5 ની અંદર પહોંચી હતી. તણાવની સારવાર માટે સંસ્કૃતિને 50-એમએલ સંસ્કૃતિઓમાં વિભાજિત કરવામાં આવી હતી. 0.79 એમએમ એરિકિન, 1 એમએમ હીરાડ, અથવા ડાઇમેથાઇલ સલ્ફોક્સાઈડ (નિયંત્રણ) સાથેના સેવનના 15 મિનિટ પછી, કોશિકાઓ 4,000 ગ્રામ 4 ડિગ્રી સે કેપીએ બફરના 700μl માં ગોળીઓના રિસુપેન્શન પહેલાં કેપ્સ બફર સાથે બે વખત કોષો ધોવાઇ ગયા હતા. Deprotination માટે, 10% ની 300l (w / v) sulfosalicylic એસિડ ultrasonication દ્વારા કોષો વિક્ષેપ પહેલાં ઉમેરવામાં આવ્યા હતા (3 x 1 મિનિટ; વીયલટેવેટર ultrasonicator). Supernatants (30 મિ, 13,000g, 4 ° સે) સેન્ટ્રીફ્યુગેશન પછી એકત્રિત કરવામાં આવ્યા હતા. Sulfosalicylic એસિડ સાંદ્રતા KPE બફર 3 વોલ્યુમો ઉમેરાથી 1% ઘટાડો કરવામાં આવ્યો હતો. કુલ glutathione અને GSSG માપદંડ ઉપર વર્ણવ્યા કરવામાં આવી હતી. સેલ્યુલર glutathione સાંદ્રતા ઇ એક વોલ્યુમ પર આધારિત ગણતરી કરવામાં આવી હતી 6.7 કોશિકાઓ કોલી×10-15 લિટર અને એ સેલ ઘનતા600 0.5 (1 સમકક્ષ×108 કોષો મિલી-1 સંસ્કૃતિ). GSH સાંદ્રતા 2 [GSSG] કુલ glutathione થી બાદબાકી દ્વારા ગણતરી કરવામાં આવી હતી. (મુલર એટ અલ. 2016)

સેલ lysis અને જૈવિક સામગ્રી નિષ્કર્ષણ માટે અવાજ disruptor (મોટું માટે ક્લિક કરો!)

ચકાસણી પ્રકારના ultrasonicator UP400St

કોલાઇ હ્યુમન mAspAT અભિવ્યક્તિ

અલ્ટ્રાસોનિક સેલ disruptor UP400St (400W) અંતઃકોશિક બાબત ના નિષ્કર્ષણ માટે (દા.ત. પ્રોટીન, અંગોમાં, ડીએનએ, આરએનએ વગેરે)કોલાઇ BL21 એક વસાહત (DE3) Luria-Bertani (lb) મધ્યમ સમાવતી 100μg / એમએલ ampicillin 30 એમએલ અભિવ્યક્તિના વેક્ટર આશ્રય, અને પછી ઓપ્ટિકલ ઘનતા સુધી 37ºC વાવવામાં (OD600) 0.6 સુધી પહોંચી હતી. કોષો 10 મિનિટ માટે ઓછા 4,000 × ગ્રામ સેન્ટ્રીફ્યુગેશન દ્વારા ખેતી અને 100μg / એમએલ ampicillin સમાવતી 3L તાજા LB માધ્યમમાં resuspended કરવામાં આવી હતી.
ત્યાર બાદ, પ્રોટીન અભિવ્યક્તિ 1 મિમી isopropyl 16ºC 20 એચ માટે β-ᴅ-1-thiogalactopyranoside (IPTG) સાથે પ્રેરિત હતી. કોષો 15 મિનિટ માટે 8000 × ત સેન્ટ્રીફ્યુગેશન દ્વારા ખેતી અને બફર એ (20 મીમી NaH2PO4, 0.5 એમ NaCl, પીએચ 7.4) સાથે ધોવાઇ કરવામાં આવી હતી. આશરે 45g (ભીના વજન) કોષો 3 એલ સંસ્કૃતિ મેળવી રહ્યા હતા. સેન્ટ્રીફ્યુગેશન પછી, સેલ ગોળીઓ બરફ ઠંડા નિષ્કર્ષણ બફર એક (1 એલ સંસ્કૃતિ માટે) 40 એમએલ માં resuspended કરવામાં આવી હતી, અને એક ની મદદથી બરફ ઠંડા તાપમાન પર અલ્ટ્રાસાઉન્ડ દ્વારા lysed UP400St સાધન (ડૉ Hielscher જીએમબીએચ, જર્મની). સેલ lysis 15 મિનિટ માટે 12,000 આરપીએમ પર સેન્ટ્રિફ્યુજ કરવામાં આવી હતી અલગ દ્રાવ્ય (supernatant) અને ઉભૂં (પેલેટ) અપૂર્ણાંક. (જિઆંગ એટ અલ., 2015)

નીચે આપેલ કોષ્ટક તમને અમારા અલ્ટ્રાસોનાનેટર્સની અંદાજિત પ્રક્રિયા ક્ષમતા વિશે સંકેત આપે છે:

બેચ વોલ્યુમ પ્રવાહ દર ભલામણ ઉપકરણો
0.5 થી 1.5 એમએલ ના વીયલટેવેટર
1 થી 500 એમએલ 10 થી 200 એમએલ / મિનિટ UP100H
10 થી 2000 એમએલ 20 થી 400 એમએલ / મિનિટ Uf200 ः ટી, UP400St
0.1 થી 20 એલ 0.2 થી 4 એલ / મીન UIP2000hdT
10 થી 100 એલ 2 થી 10 એલ / મિ UIP4000
ના 10 થી 100 લિ / મિનિટ યુઆઇપી 16000
ના મોટા ના ક્લસ્ટર યુઆઇપી 16000

અમારો સંપર્ક કરો! / અમારો કહો!

તમે અલ્ટ્રાસોનોગ્રામ સમાંગીકરણ વિશે વધારાની માહિતી વિનંતી કરવા માંગો છો, તો નીચેનું ફોર્મ ઉપયોગ કરો. અમે તમારી જરૂરિયાતો બેઠક એક અલ્ટ્રાસોનોગ્રાફી સિસ્ટમ ઓફર કરવા માટે પ્રસન્ન રહેશે.









મહેરબાની કરીને નોંધ કરો ગોપનીયતા નીતિ.


સાહિત્ય / સંદર્ભો



જાણવાનું વર્થ હકીકતો

ઇ. કોળી

એસ્ચેરીચીયા કોલી (ઇ. કોલી) એક ગ્રામ-નેગેટિવ, ફેકલ્ટીલી એએરોબિક, લાકડી-આકારના, જીનસ એસચેરિચિયાના કોલિફાઈડ બેક્ટેરિયમ છે જે સામાન્ય રીતે ગરમ લોહીવાળું જીવતંત્ર (એન્ડોર્થમ્સ) ની નીચલા આંતરડાના ભાગમાં જોવા મળે છે. વિવિધ લાક્ષણિકતાઓ ધરાવતા ઇ. કોલી સ્ટ્રેન્સ (અથવા પેટાપ્રકારો) ની મોટી સંખ્યા છે. મોટાભાગની ઇ. કોલી જાતો મનુષ્યો માટે હાનિકારક છે, દા.ત. બી અને કે -12 સ્ટ્રેઇન્સ જે પ્રયોગશાળાઓમાં સંશોધન કાર્યક્રમો માટે સામાન્ય રીતે વપરાય છે. જો કે, કેટલાક જાતો નુકસાનકારક છે અને ગંભીર બીમારીનું કારણ બની શકે છે.
કોલાઇ આધુનિક જૈવિક ઈજનેરી અને ઔદ્યોગિક માઇક્રોબાયોલોજી એક મહત્વપૂર્ણ ભૂમિકા ભજવે છે, કારણ કે બેક્ટેરિયા સાથે ચેડાં કરવા સરળ છે. સામાન્ય પ્રયોગશાળા કાર્યક્રમો જે ઘણીવાર કોલાઇ, ઉ.દા. ઉપયોગનો સમાવેશ થાય છે રિકોમ્બિનન્ટ deoxyribonucleic એસિડ (ડીએનએ) બનાવવા માટે અથવા એક મોડેલ જીવતંત્ર તરીકે કાર્ય કરે છે.
કોલાઇ heterologous પ્રોટીન ઉત્પાદન માટે ખૂબ જ સર્વતોમુખી યજમાન છે, અને મેનીફોલ્ડ પ્રોટીન અભિવ્યક્તિ સિસ્ટમો કોલાઇ માં રિકોમ્બિનન્ટ પ્રોટીનના પેદા કરવા માટે ઉપલબ્ધ છે. plasmids જે પ્રોટીન ઉચ્ચ સ્તરનો અભિવ્યક્તિ પરવાનગી વાપરીને, જનીનો બેક્ટેરિયા, જે ઔદ્યોગિક આથો પ્રક્રિયાઓ ઉચ્ચ માત્રામાં આવા પ્રોટીન પેદા કરવા સક્ષમ દાખલ કરી શકાય છે.
E.coli ઇન્સ્યુલિન ઉત્પન્ન કરવા માટે સેલ ફેક્ટરીઓ તરીકે ઉપયોગ થાય છે. વધુ કાર્યક્રમો સુધારી કોલાઇ કોશિકાઓના ઉપયોગ વિકાસ અને રસીઓ અને immobilized ઉત્સેચકો, બાયોફ્યુઅલ પેદા તેમજ બાયરીમેડિએશન માટે પેદા કરવા માટે સમાવેશ થાય છે.
તાણ K-12 ઇ એક મ્યુટન્ટ ફોર્મ કોલી કે એન્ઝાઇમ આલ્કલાઈન ફોસ્ફેટ (ALP) ઓવર વ્યક્ત કરે છે. આ પરિવર્તન જનીન કે જે સતત એન્ઝાઇમ માટે કોડ્સ એક ખામી કારણે થાય છે. જનીન કોઇ અંકુશ વગર ઉત્પાદન પેદા જો આ મૂળરૂપ પ્રવૃત્તિ તરીકે ઓળખાય છે. આ ચોક્કસ મ્યુટન્ટ ફોર્મ એકલતા અને શુદ્ધિકરણ ALP એન્ઝાઇમ માટે વપરાય છે.

અલ્ટ્રાસોનિક ડીએનએ ઊન ઉતારવાની પ્રક્રિયા

અલ્ટ્રાસોનિક દબાણમાં દળો સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં પદ્ધતિ કોષમાંથી અલગ અને ટુકડામાં ડીએનએ સેર તોડી છે. એકોસ્ટિક પોલાણ સેલ દિવાલો અને પટલમાં કોશિકાઓમાંથી ડીએનએ બહાર કાઢે છે અને 600 વિશે ટુકડાઓ પેદા કરવા માટે તોડે – લંબાઈ 800 બીપી, જે વિશ્લેષણ માટે આદર્શ છે.
ડીએનએ વિભાજન માટે અવાજ homogenizers વિશે વધુ જાણવા માટે અહીં ક્લિક કરો!