Solutions tampons préparées par ultrasons

Les tampons de lyse peuvent être préparés efficacement et rapidement à l'aide d'homogénéisateurs de tissus à ultrasons. Les ultrasons étant un outil idéal pour mélanger, dissoudre et disperser, ils permettent une préparation fiable et conviviale des tampons de lyse.

Préparation par ultrasons des tampons de lyse

Les homogénéisateurs de tissus à ultrasons sont un outil courant pour la désintégration, la lyse et l'extraction des cellules, et sont donc disponibles dans la plupart des laboratoires. La préparation des tampons de lyse est une application secondaire des ultrasons de type sonde.

La désintégration des cellules, l'extraction des protéines et la préparation du tampon de lyse par ultrasons est une méthode efficace de préparation des échantillons dans les laboratoires.Le tampon de lyse est une solution utilisée pour ouvrir (lyser) les cellules et libérer leur contenu en vue d'une analyse en aval. La composition spécifique du tampon de lyse peut varier en fonction du type de cellules à lyser et de l'application en aval. Cependant, un tampon de lyse typique contient des composants tels que des détergents, des sels et des inhibiteurs de protéase. Les sels tampons (par exemple Tris-HCl) et les sels ioniques (par exemple NaCl) sont couramment utilisés pour réguler le pH et l'osmolarité du lysat.
Pour fabriquer un tampon de lyse, les composants sont mélangés dans les concentrations et les pH appropriés. Le mélange est généralement agité ou secoué jusqu'à ce que les composants soient dissous et que la solution soit homogène.
L'homogénéisation par ultrasons est une méthode qui peut être utilisée pour obtenir un bon tampon de lyse en améliorant le mélange et la dissolution des composants. Dans cette méthode, les ondes ultrasoniques – normalement dans la gamme de 20 à 30 kHz – sont appliquées au mélange, ce qui crée des bulles de cavitation qui s'effondrent et génèrent une énergie locale intense, entraînant un cisaillement mécanique et le mélange des composants.
Le processus d'homogénéisation par ultrasons peut contribuer à briser les amas ou les agrégats des composants et à garantir que la solution est mélangée de manière uniforme. Par conséquent, ce tampon de lyse amélioré peut conduire à une désintégration cellulaire plus efficace et à des rendements plus élevés du matériel extrait. En outre, l'homogénéisation ultrasonique peut réduire le temps nécessaire à la fabrication d'un tampon de lyse par rapport aux méthodes traditionnelles d'agitation.
Dans l'ensemble, l'homogénéisation par ultrasons est un outil puissant pour améliorer la qualité et l'efficacité de la préparation du tampon de lyse.

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L'homogénéisateur à ultrasons UP200Ht monté sur un support est utilisé pour de nombreuses applications dans la recherche, l'industrie et la production.

L'homogénéisateur de laboratoire à ultrasons UP200Ht est populaire dans les laboratoires de recherche pour la préparation des échantillons, la lyse, l'extraction, la fragmentation et la dissolution de l'ADN.

Protocole de préparation du tampon de lyse ultrasonique

Il s'agit d'un protocole général pour la préparation d'un tampon de lyse à l'aide d'un appareil à ultrasons de type sonde :
 
Matériel :

  • Détergent(s) au choix (par exemple Triton X-100, SDS, CHAPS)
  • Sel(s) au choix (par exemple NaCl, KCl)
  • Inhibiteurs de protéase (par exemple PMSF, aprotinine, leupeptine)
  • appareil à ultrasons
  • agitateur
  • Eau déionisée
  • pH-mètre ou bandelettes pH

 
 
Instructions étape par étape :

  1. Déterminer la composition du tampon de lyse en fonction des cellules ou des tissus à lyser et des applications en aval pour lesquelles vous utiliserez le lysat. Préparer les solutions mères de détergents, de sels et d'inhibiteurs de protéase aux concentrations souhaitées.
  2. Ajouter les solutions mères de détergents, de sels et d'inhibiteurs de protéase dans un bécher ou une fiole.
  3. Ajouter de l'eau désionisée pour porter le volume à la quantité de tampon souhaitée.
  4. Mélanger les composants à l'aide d'un agitateur afin d'obtenir une solution pré-mélangée.
  5. Mesurer le pH du tampon à l'aide d'un pH-mètre ou de bandes pH, et ajuster le pH si nécessaire avec de petites quantités d'acide ou de base.
  6. Utiliser l'appareil à ultrasons à sonde pour homogénéiser la solution de pré-mélange afin d'obtenir une solution très homogène. Il faut donc soniquer la solution pendant quelques secondes jusqu'à ce qu'elle soit bien mélangée et que les éventuels amas ou agrégats soient brisés. La durée et la puissance de la sonication peuvent être optimisées en fonction du tampon de lyse et de l'appareil à ultrasons utilisés.
  7. Après l'ultrasonisation, mesurer à nouveau le pH du tampon et l'ajuster si nécessaire.
  8. Filtrer le tampon à travers un filtre de 0,2 micron pour éliminer tout débris ou agrégat qui aurait pu se former pendant la sonication.
  9. Le tampon de lyse est maintenant prêt à l'emploi.

 
Remarque : la composition exacte et le pH du tampon de lyse peuvent varier en fonction des cellules ou des tissus à lyser et des applications en aval. Le protocole ci-dessus est une ligne directrice générale et peut devoir être optimisé pour des applications spécifiques.
 
Les homogénéisateurs à ultrasons sont couramment utilisés pour la désintégration des cellules et l'extraction des molécules intracellulaires. Par conséquent, de nombreuses applications de lyse utilisent la sonication de type sonde non seulement pour la préparation du tampon de lyse, mais aussi pour la désintégration et l'extraction mécaniques des cellules.
Cela fait des homogénéisateurs de tissus à ultrasons un outil polyvalent pour les laboratoires et explique la large utilisation des ultrasons en microbiologie, en biotechnologie et dans les sciences de la vie.

Ce clip vidéo montre l'homogénéisateur à ultrasons UP100H de Hielscher, un ultrasoniseur largement utilisé pour la préparation des échantillons dans les laboratoires.

Homogénéisateur à ultrasons UP100H

Vignette vidéo

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homogénéisateurs ultrasoniques de laboratoire

Ultrasonateur de laboratoire UP200Ht (200W, 26kHz) pour la préparation d'échantillons, l'homogénéisation, la lyse cellulaire, la solubilisation de suspensions cellulaires, l'extraction de protéines, la fragmentation de l'ADN, l'émulsification, la dispersion et les applications de mélange.Hielscher Ultrasonics fabrique et fournit des homogénéisateurs à ultrasons et des sondes (sonotrodes) de différentes puissances et volumes d'échantillons. Cela nous permet de vous proposer le perturbateur ultrasonique le mieux adapté à la préparation de vos échantillons. Nous mettons l'accent sur une qualité supérieure, un confort d'utilisation exceptionnel et des résultats de sonification fiables. Tous les appareils à ultrasons numériques sont dotés d'un logiciel intelligent, de la programmation et du préréglage des protocoles de sonication, de la télécommande du navigateur, du contrôle de la température, de l'éclairage de l'échantillon ainsi que de l'enregistrement automatique des données sur une carte SD intégrée.

Conception, fabrication et conseil – Qualité Made in Germany

Les ultrasons Hielscher sont réputés pour leur qualité et leur conception de haut niveau. La robustesse et la facilité d'utilisation permettent une intégration harmonieuse de nos ultrasons dans les installations industrielles. Les conditions difficiles et les environnements exigeants sont facilement gérés par les ultrasons Hielscher.

Hielscher Ultrasonics est une entreprise certifiée ISO et met l'accent sur les ultrasons de haute performance, dotés d'une technologie de pointe et d'une grande convivialité. Bien entendu, les ultrasons Hielscher sont conformes à la norme CE et répondent aux exigences des normes UL, CSA et RoHs.

Le tableau ci-dessous vous donne un aperçu de nos différents ultrasons de laboratoire :

VialTweeter à UP200St 200W 26kHz ultrasonication de petits flacons, par exemple, Eppendorf 1,5ml
UP50H 50W 30 kHz homogénéisateur de laboratoire de poche ou colonnes individuelles
UP100H 100W 30 kHz homogénéisateur de laboratoire de poche ou colonnes individuelles
UP200Ht 200W 26kHz homogénéisateur de laboratoire de poche ou colonnes individuelles
UP200St 200W 26kHz homogénéisateur de laboratoire colonnes individuelles
UP400St 400W 24kHz homogénéisateur de laboratoire colonnes individuelles
SonoStep 200W 26kHz réacteur de laboratoire en combinant, ultrasonication, une pompe, d'un agitateur et d'un récipient
GDmini2 200W 26kHz cellule d'écoulement sans contamination
Corne de cuivre 200W 26kHz bain ultrasonique intense pour flacons et béchers
UIP400MTP 400W 24kHz système ultrasonique pour plaques multi-puits / plaques de microtitration
Cuivre à ultrasons pour la sonication uniforme et intense de jusqu'à 5 tubes et flacons fermés pour une homogénéisation uniforme et rapide des échantillons stériles.

cuphorn à ultrasons pour la sonication intense de tubes et de flacons fermés pour l'homogénéisation stérile des échantillons.

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L'homogénéisateur à sonde ultrasonique UP400St est utilisé pour dissoudre les sels et les détergents afin de former une solution tampon de lyse homogène.

Homogénéisateur de laboratoire à ultrasons UP400St est couramment utilisé pour la préparation du tampon de lyse et la désintégration cellulaire qui s'ensuit.



Littérature / Références


Des ultrasons de haute performance ! La gamme de produits Hielscher couvre l'ensemble du spectre, depuis les ultrasons compacts de laboratoire jusqu'aux systèmes ultrasoniques industriels complets, en passant par les unités de paillasse.

Hielscher Ultrasonics fabrique des homogénéisateurs à ultrasons de haute performance à partir d'une technologie de pointe. laboratoires à taille industrielle.


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