Solutions tampons préparées par ultrasonication

Les tampons de lyse peuvent être préparés de manière efficace et rapide à l’aide d’homogénéisateurs tissulaires à ultrasons. Les ultrasonicateurs étant un outil rêvé pour mélanger, dissoudre et disperser, ils permettent une préparation fiable et conviviale des tampons de lyse.

Préparation des tampons de lyse par ultrasons

Les homogénéisateurs tissulaires à ultrasons sont un outil courant pour la disruption cellulaire, la lyse et l’extraction, et sont donc disponibles dans la plupart des laboratoires. Une application secondaire des ultrasonicateurs de type sonde est la préparation des tampons de lyse.

Le tampon de lyse est une solution utilisée pour rompre (lyser) les cellules et libérer leur contenu en vue d’analyses en aval. La composition spécifique du tampon de lyse peut varier selon le type de cellules à lyser et l’application en aval. Toutefois, un tampon de lyse typique contient des composants tels que des détergents, des sels et des inhibiteurs de protéases. Des sels tampons (p. ex. Tris-HCl) et des sels ioniques (p. ex. NaCl) sont couramment utilisés pour réguler le pH et l’osmolarité du lysat.
Pour préparer un tampon de lyse, les composants sont mélangés aux concentrations et au pH appropriés. Le mélange est généralement agité ou secoué jusqu’à ce que les composants soient dissous et que la solution soit homogène.
L’homogénéisation par ultrasons est une méthode qui peut contribuer à obtenir un bon tampon de lyse en améliorant le mélange et la dissolution des composants. Dans cette méthode, des ondes ultrasonores – normalement dans la plage de 20 à 30 kHz – sont appliquées au mélange, ce qui crée des bulles de cavitation qui implosent et génèrent une énergie locale intense, entraînant un cisaillement mécanique et un mélange des composants.
Le procédé d’homogénéisation par ultrasons peut aider à briser les grumeaux ou agrégats des composants et à garantir que la solution est mélangée de manière uniforme. Par conséquent, un tel tampon de lyse amélioré peut conduire à une disruption cellulaire plus efficace et à des rendements plus élevés en matière extraite. De plus, l’homogénéisation par ultrasons peut réduire le temps nécessaire à la préparation d’un tampon de lyse par rapport aux méthodes traditionnelles d’agitation ou de secouage.
Dans l’ensemble, l’homogénéisation par ultrasons est un outil puissant pour améliorer la qualité et l’efficacité de la préparation des tampons de lyse.

Protocole de préparation d’un tampon de lyse par ultrasons

Voici un protocole général pour préparer un tampon de lyse à l’aide d’un ultrasonicateur de type sonde :

Matériel :

• Détergent(s) au choix (p. ex. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Sel(s) au choix (p. ex. NaCl, KCl)
• Inhibiteurs de protéases (p. ex. PMSF, aprotinine, leupeptine)
• Ultrasonicateur
• Agitateur
• Eau déionisée
• pH-mètre ou bandelettes de pH

 
 
Instructions étape par étape :

1. Déterminez la composition du tampon de lyse en fonction des cellules ou du tissu que vous allez lyser et des applications en aval pour lesquelles vous utiliserez le lysat. Préparez les solutions mères de détergents, de sels et d’inhibiteurs de protéases aux concentrations souhaitées.
2. Ajoutez les solutions mères de détergents, de sels et d’inhibiteurs de protéases dans un bécher ou un flacon.
3. Ajoutez de l’eau déionisée pour amener le volume à la quantité de tampon souhaitée.
4. Mélangez les composants à l’aide d’un agitateur afin d’obtenir une solution de prémélange.
5. Mesurez le pH du tampon à l’aide d’un pH-mètre ou de bandelettes de pH, et ajustez le pH si nécessaire avec de petites quantités d’acide ou de base.
6. Utilisez l’ultrasonicateur de type sonde pour homogénéiser la solution de prémélange afin d’obtenir une solution très homogène. Pour cela, soumettez la solution à la sonication pendant quelques secondes jusqu’à ce qu’elle soit parfaitement mélangée et que les grumeaux ou agrégats soient désagrégés. La durée et la puissance de la sonication peuvent être optimisées en fonction du tampon de lyse spécifique et de l’ultrasonicateur utilisé.
7. Après l’ultrasonication, mesurez à nouveau le pH du tampon et ajustez-le si nécessaire.
8. Filtrez le tampon à travers un filtre de 0,2 micron afin d’éliminer les débris ou agrégats qui auraient pu se former pendant la sonication.
9. Le tampon de lyse est maintenant prêt à l’emploi.

Remarque : la composition exacte et le pH du tampon de lyse peuvent varier selon les cellules ou le tissu à lyser et les applications en aval. Le protocole ci-dessus est une ligne directrice générale et peut nécessiter une optimisation pour des applications spécifiques.

Les homogénéisateurs à ultrasons sont couramment utilisés pour la disruption cellulaire et l’extraction de molécules intracellulaires. C’est pourquoi de nombreuses applications de lyse utilisent la sonication de type sonde non seulement pour la préparation du tampon de lyse, mais aussi pour la disruption cellulaire mécanique et l’extraction.
Cela fait des homogénéisateurs tissulaires à ultrasons un outil polyvalent pour les laboratoires et explique la large utilisation des ultrasonicateurs en microbiologie, en biotechnologie et dans les sciences de la vie.

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