Protocole ASTM E2799-22 pour l’évaluation antimicrobienne

Le Hielscher UIP400MTP est un sonicateur pour plaques multipuits puissant et efficace, conçu pour rationaliser l’étape de sonication du protocole ASTM E2799-22. En délivrant une énergie ultrasonore uniforme sur l’ensemble de la plaque de microtitration, l’UIP400MTP garantit un détachement constant et fiable des biofilms des couvercles à picots, sans endommager les cellules ni compromettre l’intégrité des échantillons. Sa capacité de traitement à haute cadence et sa simplicité d’utilisation réduisent considérablement le temps de traitement tout en améliorant la reproductibilité, ce qui en fait une solution idéale pour les laboratoires réalisant des tests de viabilité des biofilms et des essais d’efficacité antimicrobienne.

ASTM E2799

La norme ASTM E2799 est une méthode d’essai normalisée conçue pour évaluer l’efficacité des agents antimicrobiens contre les biofilms, en se concentrant spécifiquement sur Pseudomonas aeruginosa. Les biofilms sont des communautés microbiennes complexes qui adhèrent aux surfaces et présentent une résistance accrue aux traitements antimicrobiens, ce qui en fait un défi majeur dans les contextes médicaux, industriels et environnementaux. Cette méthode utilise le test de concentration minimale d’éradication du biofilm (MBEC) afin de fournir un cadre fiable et reproductible pour tester les désinfectants dans des conditions de biofilm réalistes.

Comment la sonication contribue-t-elle à la norme ASTM E2799 ?

La sonication joue un rôle essentiel dans le protocole ASTM E2799 en facilitant le détachement des biofilms des surfaces d’essai, garantissant ainsi une évaluation précise de la viabilité microbienne après traitement. Grâce à une énergie ultrasonore contrôlée, le protocole permet une désagrégation efficace et constante des biofilms sans endommager les cellules, ce qui donne des résultats précis et reproductibles. La norme ASTM E2799 constitue ainsi un outil essentiel pour faire progresser la recherche sur les biofilms et développer des stratégies antimicrobiennes efficaces.

Comment réaliser le test MBEC conformément à la norme ASTM E2799-22

Le protocole ASTM E2799-22 décrit les étapes permettant d’évaluer l’efficacité des agents antimicrobiens contre les biofilms. Lors de l’utilisation du sonicateur pour plaques de microtitration Hielscher UIP400MTP, le protocole peut être adapté afin d’intégrer cette méthode de sonication avancée pour le détachement des biofilms. Vous trouverez ci-dessous une description des étapes adaptées à l’utilisation du sonicateur pour microplaques UIP400MTP :

1. Préparation des biofilms
   Préparer une plaque de microtitration stérile de 96 puits avec des couvercles à picots amovibles.
   Inoculer les puits avec une suspension bactérienne standardisée dans un milieu de culture approprié.
   Placer le couvercle à picots sur la plaque en veillant à ce que les picots soient entièrement immergés dans la suspension bactérienne.
   Incuber la plaque dans des conditions contrôlées (p. ex. température et durée) afin de permettre la formation du biofilm sur les picots.
2. Traitement avec des agents antimicrobiens
   Après la formation du biofilm, remplacer le milieu par un milieu frais contenant les agents antimicrobiens à tester à différentes concentrations.
   Remettre en place le couvercle à picots et incuber dans les conditions spécifiées dans le plan d’essai.
3. Préparation au détachement du biofilm
   Après le traitement, rincer le couvercle à picots en l’immergeant dans une solution de rinçage stérile afin d’éliminer les agents antimicrobiens résiduels et les cellules planctoniques faiblement adhérentes.
4. Détachement du biofilm à l’aide du sonicateur UIP400MTP
   Préparer une plaque de microtitration de 96 puits neuve contenant un milieu de récupération (p. ex. bouillon neutralisant).
   Détacher les biofilms en plaçant le couvercle à picots dans les puits de la plaque contenant le milieu de récupération.
   Insérer la plaque dans le sonicateur UIP400MTP en veillant à ce que le couvercle et la plaque soient correctement alignés.
   Régler le sonicateur sur une amplitude de 70 %–80 % et soniquer pendant 3–4 minutes en mode cycle, afin de garantir un détachement constant du biofilm sans lyse cellulaire.
5. Évaluation de la viabilité du biofilm
   Après la sonication, traiter le milieu de récupération contenant les cellules de biofilm détachées à l’aide de techniques microbiologiques ou analytiques standard, telles que :
   • Dénombrement des unités formant colonies (UFC) : effectuer des dilutions en série et ensemencer sur gélose pour le dénombrement des cellules viables.
   • Mesures de densité optique (DO) : utiliser l’analyse spectrophotométrique pour évaluer la densité cellulaire.
   • Tests de viabilité basés sur la fluorescence : quantifier les cellules vivantes et mortes à l’aide de colorants fluorescents.
6. Analyse des données
   Comparer les données de viabilité des biofilms traités et non traités afin de déterminer l’efficacité des agents antimicrobiens.
   Calculer la concentration minimale d’éradication du biofilm (MBEC) sur la base de la concentration nécessaire pour éliminer les cellules de biofilm viables.
7. Contrôle qualité
   Garantir des conditions de sonication constantes en étalonnant régulièrement l’UIP400MTP et en vérifiant que le processus de détachement du biofilm n’entraîne pas de lyse ou de destruction cellulaire significative.
   Inclure des témoins appropriés, tels que des biofilms non traités et des blancs contenant uniquement le milieu, afin de valider les résultats.

Les cellules de biofilm formées sur les picots ont été détachées par sonication (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Allemagne, UIP250MTP) pendant 5 min dans des plaques 96 puits contenant un milieu de culture frais pour la récupération des cellules.
(Image et étude : ©de Oliveira et al., 2016)

En intégrant l’UIP400MTP dans le flux de travail ASTM E2799-22, le processus de détachement du biofilm est optimisé en termes de constance, d’efficacité et d’applications à haute cadence de traitement des échantillons.