ASTM E2799-22 Protocole d'évaluation des agents antimicrobiens
Le Hielscher UIP400MTP est un sonicateur puissant et efficace pour plaques multi-puits conçu pour rationaliser l'étape de sonication dans le protocole ASTM E2799-22. En délivrant une énergie ultrasonique uniforme sur l'ensemble de la plaque de microtitration, l'UIP400MTP assure un détachement cohérent et fiable des biofilms des couvercles des plaques sans endommager les cellules ou compromettre l'intégrité de l'échantillon. Sa capacité à haut débit et son fonctionnement convivial réduisent considérablement le temps de traitement tout en améliorant la reproductibilité, ce qui en fait une solution idéale pour les laboratoires qui effectuent des essais de viabilité des biofilms et des tests d'efficacité antimicrobienne.
ASTM E2799
L'ASTM E2799 est une méthode d'essai normalisée conçue pour évaluer l'efficacité des agents antimicrobiens contre les biofilms, en particulier contre Pseudomonas aeruginosa. Les biofilms sont des communautés microbiennes complexes qui adhèrent aux surfaces et présentent une résistance accrue aux traitements antimicrobiens, ce qui en fait un défi important dans les domaines de la santé, de l'industrie et de l'environnement. Cette méthode utilise le test de la concentration minimale d'éradication du biofilm (CMEB) pour fournir un cadre fiable et reproductible pour tester les désinfectants dans des conditions réalistes de biofilm.
Sonicateur pour plaques à 96 puits UIP400MTP pour le criblage à haut débit
Comment la sonication contribue-t-elle à la norme ASTM E2799 ?
La sonication joue un rôle essentiel dans le protocole ASTM E2799 en facilitant le détachement des biofilms des surfaces testées, ce qui garantit une évaluation précise de la viabilité microbienne après le traitement. Grâce à l'utilisation d'une énergie ultrasonique contrôlée, le protocole permet une désorganisation efficace et cohérente du biofilm sans endommager les cellules, ce qui permet d'obtenir des résultats précis et reproductibles. L'ASTM E2799 est donc un outil essentiel pour faire avancer la recherche sur les biofilms et développer des stratégies antimicrobiennes efficaces.
Comment réaliser l'essai MBEC conformément à la norme ASTM E2799-22 ?
Le protocole ASTM E2799-22 décrit les étapes de l'évaluation de l'efficacité des agents antimicrobiens contre les biofilms. Lors de l'utilisation du sonicateur pour microplaques Hielscher UIP400MTP, le protocole peut être adapté pour incorporer cette méthode de sonication avancée pour le détachement du biofilm. Vous trouverez ci-dessous une description des étapes adaptées à l'utilisation du sonicateur de microplaques UIP400MTP :
- Préparation des biofilms
Préparer une plaque de microtitration 96 puits stérile avec des couvercles amovibles.
Inoculer les puits avec une suspension bactérienne standardisée dans un milieu de croissance approprié.
Placer le couvercle sur la plaque, en veillant à ce que les chevilles soient entièrement immergées dans la suspension bactérienne.
Incuber la plaque dans des conditions contrôlées (par exemple, température et durée) pour permettre la formation d'un biofilm sur les chevilles. - Traitement par agents antimicrobiens
Après la formation du biofilm, remplacer le milieu par un milieu frais contenant les agents antimicrobiens testés à différentes concentrations.
Remettre le couvercle en place et incuber dans les conditions spécifiées dans le plan d'essai. - Préparation au détachement du biofilm
Après le traitement, rincer le couvercle de la cheville en l'immergeant dans une solution de rinçage stérile afin d'éliminer les agents antimicrobiens résiduels et les cellules planctoniques peu adhérentes. - Détachement du biofilm à l'aide du sonicateur UIP400MTP
Préparer une nouvelle plaque de microtitration à 96 puits contenant un milieu de récupération (par exemple, un bouillon de neutralisation).
Détacher les biofilms en plaçant le couvercle dans les puits de la plaque de milieu de récupération.
Insérer la plaque dans le sonicateur UIP400MTP, en veillant à ce que le couvercle et la plaque soient correctement alignés.
Régler le sonicateur sur une amplitude de 70-80 % et soniquer pendant 3-4 minutes en mode cycle, afin de garantir un détachement régulier du biofilm sans lyse cellulaire. - Évaluation de la viabilité du biofilm
Après sonication, traiter le milieu de récupération contenant les cellules de biofilm détachées à l'aide de techniques microbiologiques ou analytiques standard, par exemple :- Dénombrement des unités formant des colonies (UFC) : Effectuer des dilutions en série et ensemencer sur gélose pour le dénombrement des cellules viables.
- Mesures de la densité optique (DO) : l'analyse spectrophotométrique permet d'évaluer la densité cellulaire.
- Tests de viabilité basés sur la fluorescence : quantifier les cellules vivantes et mortes à l'aide de colorants fluorescents.
- l'analyse des données
Comparer les données de viabilité des biofilms traités et non traités pour déterminer l'efficacité des agents antimicrobiens.
Calculer la concentration minimale d'éradication du biofilm (CMEB) sur la base de la concentration requise pour éliminer les cellules viables du biofilm. - le contrôle de la qualité
Assurer des conditions de sonication cohérentes en calibrant régulièrement l'UIP400MTP et en vérifiant que le processus de détachement du biofilm n'entraîne pas de lyse ou de destruction significative des cellules.
Inclure des contrôles appropriés, tels que des biofilms non traités et des blancs de milieu, pour valider les résultats.
Les cellules du biofilm formées sur les broches ont été délogées par sonication (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Allemagne, UIP250MTP) pendant 5 minutes dans des plaques à 96 puits contenant un milieu de culture frais pour la récupération des cellules.
(Image et étude : ©de Oliveira et al., 2016)
En intégrant l'UIP400MTP dans le flux de travail de l'ASTM E2799-22, le processus de détachement du biofilm est optimisé pour la cohérence, l'efficacité et les applications à haut débit.
Littérature / Références
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- ASTM E2799-22 Standard Test Method for Testing Disinfectant Efficacy against Pseudomonas aeruginosa Biofilm using the MBEC Assay
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
questions fréquemment posées
Qu'est-ce que l'ASTM E2799 ?
ASTM E2799 est une méthode d'essai normalisée établie par ASTM International pour tester l'efficacité des désinfectants contre le biofilm de Pseudomonas aeruginosa à l'aide de l'essai MBEC. Cette méthode est largement utilisée pour évaluer la formation de biofilms, l'efficacité antimicrobienne et les interactions avec la surface des matériaux, ce qui permet des comparaisons normalisées dans la recherche sur les biofilms.
Quelle est la différence entre les normes ASTM E2799-22 et ASTM E2799-11, ASTM E2799-12 et ASTM E2799-17 ?
L'ASTM E2799 est une méthode d'essai normalisée qui évalue l'efficacité des désinfectants contre les biofilms de Pseudomonas aeruginosa à l'aide de l'essai MBEC (concentration minimale d'éradication des biofilms). Cette méthode a fait l'objet de plusieurs révisions afin d'améliorer sa précision et son applicabilité.
- ASTM E2799-11 : Il s'agit de la première version de la norme, qui établit les procédures de base pour évaluer l'efficacité des désinfectants contre les biofilms de P. aeruginosa à l'aide de l'essai MBEC.
- ASTM E2799-12 : Cette révision a incorporé des mises à jour techniques mineures pour améliorer la clarté et résoudre les ambiguïtés identifiées dans la version 2011.
- ASTM E2799-17 : Dans cette mise à jour, des modifications plus importantes ont été apportées au protocole, notamment des ajustements au processus de culture du biofilm, à l'application du traitement et aux procédures de neutralisation, dans le but d'améliorer la reproductibilité et l'alignement sur les progrès de la recherche sur les biofilms.
- ASTM E2799-22 : la révision la plus récente reflète les dernières connaissances scientifiques et les avancées technologiques en matière d'études sur les biofilms. Elle inclut des méthodologies affinées pour la croissance, le traitement et l'analyse des biofilms, garantissant que la méthode d'essai reste pertinente et efficace pour les évaluations actuelles de l'efficacité des désinfectants.
Chaque révision de l'ASTM E2799 a été faite pour améliorer la fiabilité, la reproductibilité et la pertinence de la méthode, en veillant à ce qu'elle reste en phase avec les progrès scientifiques et technologiques dans le domaine de la recherche sur les biofilms.
Quelle est la différence entre les tests MBEC et MBIC ?
La principale différence entre les essais MBEC (concentration minimale d'éradication du biofilm) et MBIC (concentration minimale d'inhibition du biofilm) réside dans leur objectif :
Essais MBEC mesurer la concentration la plus faible d'un agent antimicrobien nécessaire pour éradiquer complètement les biofilms préformés, en évaluant la capacité d'une substance à tuer les micro-organismes intégrés dans un biofilm.
Essais MBIC déterminer la concentration la plus faible d'un agent antimicrobien qui empêche la formation initiale de biofilms, en évaluant sa capacité à inhiber le développement des biofilms.
Ces deux essais sont essentiels pour comprendre l'efficacité des antimicrobiens contre les biofilms, mais ils ciblent des étapes différentes du cycle de vie des biofilms.
Découvrez comment le sonicateur pour microplaques UIP400MTP est utilisé pour déloger le biofilm dans les essais MBIC !
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