برنامه های کاربردی مافوق صوت در میمون آبله ویروس
فراصوت یک روش پردازش مهم برای جداسازی ویروس میمون آبله (MPXV) از نمونه های تحلیلی، برای تکه تکه شدن DNA ویروس و همچنین در ساخت واکسن میمون آبله است. برای آماده سازی نمونه قبل از تشخیص و تجزیه و تحلیل (PCR، الیزا و غیره) فراصوت استفاده می شود به lyse سلول به منظور انتشار ویروس میمون آبله از داخلی سلول و / یا به قطعه DNA. در تولید واکسن، برنامه های کاربردی از ذرات ویروس / آماده سازی DNA، کپسوله سازی در حامل های دارویی و فرموله کردن اینوکولا است.
در زیر شما می توانید اطلاعات دقیق در مورد آماده سازی نمونه ویروس میمون آبله مافوق صوت و همچنین تولید واکسن MPXV کمک مافوق صوت پیدا کنید.
آنچه در این صفحه پیدا خواهید کرد:
- لیز مافوق صوت برای استخراج ویروس میمون آبله
- تکه تکه شدن مافوق صوت DNA ویروس میمون آبله
- کاربردهای مافوق صوت در تولید واکسن MPXV
این سیستم از 2x 1kW فراصوت برای عملیات جریان مداوم در یک مرکز تولید واکسن نصب شده است.
لیز مافوق صوت و تکه تکه شدن DNA قبل از واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR)
یک عفونت ویروس میمون آبله با آزمایش تقویت اسید هسته ای (NAAT)، با استفاده از واکنش زنجیره ای بی درنگ یا معمولی پلیمراز (PCR)، برای تشخیص توالی های منحصر به فرد DNA ویروسی تشخیص داده می شود. نمونه (به عنوان نمونه از سوآپ nasopharyngeal یا بیوپسی پوست) حاوی ویروس در سلول ها است.
برای تجزیه و تحلیل، ویروس باید از سلول های ans آزاد DNA ویروسی باید برای PCR تکه تکه شود.
لیز مافوق صوت:
اختلال سلول های مافوق صوت / لیز یک روش قابل اعتماد و کارآمد برای جداسازی ویروس ها از نمونه های سلول و در نتیجه یک تکنیک ترجیحی بر عوامل شیمیایی، مانند لزوزیم، پروتئیناز K و شوینده های مختلف است که به طور جایگزین برای رسیدن به لیز سلول و انتشار DNA استفاده می شود.
با این حال استفاده از چنین واکنشگرهای شیمیایی نیاز به آماده سازی نمونه زمان بر در چند مرحله قبل از تجزیه و تحلیل PCR برای جلوگیری از مهار واکنش PCR دارد. از آنجا که مهارکننده های PCR بر کارایی تقویت تأثیر می گذارد، تغییرات کوچکی از میزان بازدارنده هایی که حذف نمی شوند می توانند منجر به تغییرات زیادی در تقویت محصول PCR شوند (دیاکو، ۱۹۹۵).
مزیت فراصوت برای لیز این است که اختلال کامل در ساختارهای سلولی و آزاد شدن DNA بدون نیاز به lysing reagents و آماده سازی نمونه زمان بر مطلوب است. (cf. Fykse et al., 2003)
تکه تکه شدن DNA مافوق صوت:
تکه تکه شدن DNA مافوق صوت ساده و قابل اعتماد است به عنوان تولید قطعات DNA قابل تنظیم در طول (basepairs، bp). با استفاده از سونوگرافی، DNA را می توان به طور موثر به طول DNA هدفمند تکه تکه کرد. کنترل دقیق بر پارامترهای مافوق صوت و گزینه های پیچیده خنک کننده جلوگیری از تخریب DNA.
اطلاعات بیشتر در مورد تکه تکه شدن DNA مافوق صوت!
کاربردهای مافوق صوت در واکسن ویروس میمون آبله
واکسن های مورد استفاده علیه ویروس آبله میمون در حال حاضر واکسن ویروس زنده هستند. واکسن های تازه توسعه یافته ممکن است از سکوهای دیگری مانند DNA مبتنی بر DNA استفاده کنند که در حال حاضر حاوی یک ویور اصلاح شده واکسینیا آنکارا است که یک اورتوپوس ویروس تشدید شده و غیر تکثیر کننده است. همچنین شامل تریس (تریس-امینومتان) و کلرید سدیم است. این واکسن همچنین ممکن است حاوی مقادیر کمی DNA و پروتئین از سلول های فیبروبلاست جنین مرغ باشد که برای رشد ویروس واکسن، بنزوناز و ترکیبات آنتی بیوتیکی مانند جنتامیسین و سیپروفلوکسیسین استفاده می شوند.
همگن سازی مافوق صوت در تولید واکسن های زنده آلوده به ویروس، واکسن DNA، کوکتل DNA چند والانت، واکسن mRNA، واکسن پروتئینی نوترکب، واکسن های ذرات ویروس مانند و غیره استفاده می شود.
- پراکنده شدن ذرات و عوامل ویروس
- امولسیون سازی
- غیر فعال شدن ویروس ها
- فرمولاسیون حامل مواد مخدر (NLC، SLN)
- کپسوله سازی
- انحلال عوامل
- آماده سازی کمکی ها
- Degassing / De-Aeration
پروتکل برای جداسازی مافوق صوت از ویروس میمون آبله
تیم تحقیقاتی استیتلار (۲۰۰۵) از لیز مافوق صوت برای آزاد کردن ویروس آبله میمون از کشت سلولی میزبان رشد و همچنین از سلول های به دست آمده از طریق سوآپ گلو از نخستی های آلوده استفاده کردند.
آماده سازی واکسن آبله میمون:
ویروس های آبله میمون بر روی سلول های فیبروبلاست جنین بدون بیماری زا خاص رشد کردند. به دنبال انکوباسیون به مدت ۱ تا ۲ روز، تعلیق ویروس-سلول توسط یک دور یخ زدن برداشت شد و سپس با سنتریفوژ متمرکز شد. گلوله دوباره صرف شد و به چند دور از همگن سازی مافوق صوت قرار گرفت.
میمون آبله ویروس جداسازی از Macaques واکسینه:
نمونه ها سه بار یخ زده شدند و در یک CupHorn مافوق صوت فراصوت شدند. دو رقت (1:10 و 1:100) در محیط حمل و نقل به همراه سرم گاو جنین 1 درصد برای تلقاض تکوارها سلول Vero در صفحات شش چاهه مورد استفاده قرار گرفت. پس از 1 ساعت جوجه کشی در 37 درجه سانتی گراد، اینوکولا برداشته شد و با محیط کشت با سرم گاو جنین 1 درصد جایگزین شد. تک رنگ ها به مدت 5 روز در 37 درجه سانتی گراد کشت داده شدند و با محلول بنفش کریستال رنگ آمیزی شدند.
(cf. Stittelaar et al., 2005)
امواج فراصوت برای تجزیه و تحلیل ویروس و تولید واکسن
Hielscher Ultrasonics نمونه کارها محصول گسترده ارائه می دهد مافوق صوت ایده آل برای آزمایشگاه های تحقیقاتی و تحلیلی و همچنین برای تولید واکسن صنعتی.
Hielscher Ultrasonics در طراحی ، ساخت و توزیع امواج فراصوت با کارایی بالا و سونو - bioreactors برای استفاده در آزمایشگاه های تحقیقاتی و تحلیلی و همچنین برای پیاده سازی در تولید واکسن صنعتی تخصص (به عنوان نمونه. واکسن، Apis)
فراصوت را می توان به رگ های باز، رآکتورهای پیوسته هم زده بسته و رآکتورهای جریان پیوسته به کار برد. تمام بخش های سیستم های مافوق صوت، که در تماس با محیط مایع، از فولاد ضد زنگ، تیتانیوم، و یا شیشه ساخته شده است. قطعات اتوکلاو و اتصالات بهداشتی اطمینان حاصل شود تولید تحت شرایط درجه فارما.
ضبط خودکار داده ها: نرم افزار هوشمند ثبت پارامترهای فرایند فراصوت به طور خودکار بر روی کارت حافظه SD یکپارچه. کنترل دقیق از تمام پارامترهای فرایند اطمینان از قابلیت تکثیر، استاندارد سازی تولید، و تسهیل در تحقق استانداردهای ایمنی محصول دارویی است.
شرکت Hielscher Ultrasonics
’ پردازنده های مافوق صوت بسیار قابل اعتماد هستند و می تواند به طور دقیق کنترل. تمام فراصوت صنعتی می تواند تنظیم برای ارائه محدوده کامل از دامنه های پایین تر به بسیار بالا. استحکام سیستم های مافوق صوت Hielscher اجازه می دهد تا برای عملیات 24/7 تحت وظیفه سنگین و در محیط های خواستار.
جدول زیر به شما می دهد که نشانه ای از ظرفیت پردازش تقریبی ultrasonicators ما:
| دسته ای دوره | نرخ جریان | دستگاه های توصیه شده |
|---|---|---|
| چند چاه / صفحات میکروتیتر | n/a | UIP400MTP |
| 1 تا 500ML | 10 تا پوست 200ml / دقیقه | UP100H |
| 10 به 2000mL | 20 تا 400ML / دقیقه | UP200Ht، UP400St |
| 00.1 به 20L | 00.2 به 4L / دقیقه | UIP2000hdT |
| 10 تا 100L | 2 تا 10L / دقیقه | UIP4000hdT |
| n/a | 10 تا 100L / min و | UIP16000 |
| n/a | بزرگتر | خوشه UIP16000 |
تماس با ما! / از ما بپرسید!
DNA برش التراسونیک
اقتباس شده از Jkwchui تحت CC-BY-SA.03
ادبیات/منابع
- Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
- Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
- J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
- Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
- Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.
آمار ارزشمند دانستن
میمون آبله ویروس
میمون آبله (MPV, MPXV, یا hMPXV) گونه ای از ویروس DNA دو رشته ای است که باعث یک بیماری جانورنتیک ویروسی می شود. این بیماری به عنوان عفونت میمون آبله شناخته می شود و می تواند در انسان و حیوانات رخ دهد. این جنس متعلق به جنس Orthopoxvirus در خانواده Poxviridae است. ویروس میمون آبله یکی از ویروس های ارتوپوکسی ویروس انسان به همراه ویروس های واریولا (VARV)، آبله گاوی (CPX)، و واکسینیا (VACV) است. اورکوپوکس ویروس ها با ذرات بزرگ ویروس آجری شکل مشخص می شوند که حاوی یک ژنوم DNA دو رشته ای تقریباً ۲۰۰٬۰ بی پی است.
الایزا آسی
الیزا مخفف آنزیم مرتبط با ImmunoSorbent Assay است و یک ایمونواسی برچسب دار است که استاندارد طلای ایمونواسی ها محسوب می شود. الیزا یک آزمایش ایمنی شناختی است که برای حساسیت تشخیصی بالای آن ارزش گذاری شده است، برای تشخیص و کمی سازی مولکول ها از جمله آنتی بادی ها، آنتیوژن ها، پروتئین ها، گلیکوپروتین ها، و هورمون ها استفاده می شود. اصل الیزا بر اساس یک برهم کنش آنتیژن-آنتی بادی است. با این تعامل آنتی بادی آنتی بادی، آنتی بادی های خاص به آنتیژن هدف خود متصل می شوند. تنها زمانی که برهم کنش صورت می گیرد، بستر می تواند به آنزیم متصل شود و یک تبدیل بستر بعدی را می توان مشاهده کرد که به این معنی است که نتیجه مثبتی به دست می آید.
Hielscher Ultrasonics تولید هموژنیزرهای مافوق صوت با کارایی بالا از ازمایشگاه ها تا اندازه صنعتی.