کاربردهای اولتراسونیک در ویروس آبله میمون
سونوگرافی یک روش پردازش مهم برای جداسازی ویروس آبله میمون (MPXV) از نمونه های تحلیلی، برای تکه تکه شدن DNA ویروس و همچنین در تولید واکسن آبله میمون است. برای آماده سازی نمونه قبل از تشخیص و تجزیه و تحلیل (PCR ، ELISA و غیره) از سونوگرافی برای لیز سلول ها به منظور انتشار ویروس آبله میمون از داخل سلول و / یا قطعه DNA استفاده می شود. در تولید واکسن، کاربردها از آماده سازی ذرات ویروس/DNA، کپسوله سازی در حامل های دارویی و فرمولاسیون چشمه را شامل می شود.
در زیر می توانید اطلاعات دقیقی در مورد آماده سازی نمونه ویروس آبله میمون اولتراسونیک و همچنین تولید واکسن MPXV با کمک اولتراسونیک پیدا کنید.
آنچه در این صفحه خواهید یافت:
- لیز التراسونیک برای استخراج ویروس آبله میمون
- تکه تکه شدن التراسونیک DNA ویروس آبله میمون
- کاربردهای اولتراسونیک در تولید واکسن MPXV
این سیستم از 2x 1kW ultrasonicators برای عملیات جریان مداوم در یک مرکز تولید واکسن نصب شده است.
لیز اولتراسونیک و تکه تکه شدن DNA قبل از واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR)
عفونت ویروس آبله میمون با آزمایش تکثیر اسید نوکلئیک (NAAT)، با استفاده از واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) در زمان واقعی یا معمولی، برای تشخیص توالی های منحصر به فرد DNA ویروسی تشخیص داده می شود. نمونه (به عنوان مثال از تعویض نازوفارنکس یا بیوپسی پوست) حاوی ویروس در سلول ها است.
برای تجزیه و تحلیل، ویروس باید از سلول ها آزاد شود و DNA ویروسی باید برای PCR تکه تکه شود.
لیز اولتراسونیک:
اختلال سلول اولتراسونیک / لیز یک روش قابل اعتماد و کارآمد برای جداسازی ویروس ها از نمونه های سلولی و در نتیجه یک روش ارجح نسبت به عوامل شیمیایی، مانند لیزوزیم، پروتئیناز K و مواد شوینده مختلف است که به طور متناوب برای دستیابی به لیز سلولی و انتشار DNA استفاده می شود.
با این حال، استفاده از این معرف های شیمیایی نیاز به آماده سازی نمونه در چند مرحله قبل از آنالیز PCR دارد تا از مهار واکنش PCR جلوگیری شود. از آنجا که مهارکننده های PCR بر کارایی تقویت تأثیر می گذارند ، تغییرات کوچک مقدار مهارکننده هایی که حذف نمی شوند می تواند منجر به تغییرات زیادی در تقویت محصول PCR شود (Diaco ، 1995).
مزیت اولتراسونیک برای لیز این است که اختلال کامل در ساختارهای سلولی و انتشار DNA بدون نیاز به معرف های لیز و آماده سازی نمونه وقت گیر مطلوب است. (رجوع کنید به Fykse و همکاران، 2003)
تکه تکه شدن DNA اولتراسونیک:
تکه تکه شدن DNA مافوق صوت ساده و قابل اعتماد است که قطعات DNA قابل تنظیم در طول (basepairs، bp) تولید می کند. با استفاده از سونوگرافی، DNA را می توان به طور موثر به طول DNA مورد نظر تقسیم کرد. کنترل دقیق بر پارامترهای اولتراسونیک و گزینه های خنک کننده پیچیده از تخریب DNA جلوگیری می کند.
اطلاعات بیشتر در مورد تکه تکه شدن DNA اولتراسونیک!
کاربردهای اولتراسونیک در واکسن ویروس آبله میمون
واکسن های مورد استفاده علیه ویروس آبله میمون در حال حاضر واکسن های زنده ویروس هستند. واکسن های تازه توسعه یافته ممکن است از پلتفرم های دیگری مانند واکسن های مبتنی بر DNA استفاده کنند که در حال حاضر حاوی یک واکسن آنکارا اصلاح شده است، یک ویروس ارتوپوکس ضعیف و غیر تکثیر شونده. همچنین حاوی تریس (تریس آمینومتان) و کلرید سدیم است. این واکسن همچنین ممکن است حاوی مقادیر کمی DNA و پروتئین از سلول های فیبروبلاست جنین مرغ باشد که برای رشد ویروس واکسن، بنزوناز و ترکیبات آنتی بیوتیکی مانند جنتامایسین و سیپروفلوکساسین استفاده می شود.
همگن سازی اولتراسونیک در تولید واکسن های ویروسی ضعیف زنده، واکسن های DNA، کوکتل های DNA چند ظرفیتی، واکسن های mRNA، واکسن های پروتئین نوترکیب، واکسن های ذرات مانند ویروس و غیره استفاده می شود.
- پراکندگی ذرات و عوامل ویروس
- امولسیون سازی
- غیرفعال کردن ویروس ها
- فرمولاسیون حامل دارو (NLC، SLN)
- کپسوله سازی
- انحلال عوامل
- تهیه ادجوانت ها
- گاززدایی / هوادهی
می توانید اطلاعات عمیق تری در مورد کاربردهای اولتراسونیک برای بهبود تولید واکسن پیدا کنید!
پروتکل جداسازی اولتراسونیک ویروس آبله میمون
تیم تحقیقاتی Stittelaar (2005) از لیز اولتراسونیک برای آزاد کردن ویروس آبله میمون از کشت سلولی میزبان رشد و همچنین از سلول های به دست آمده از طریق تعویض گلو از پستانداران آلوده استفاده کرد.
آماده سازی واکسن آبله میمون:
ویروس های آبله میمون بر روی سلول های فیبروبلاست جنین مرغ بدون پاتوژن خاص رشد کردند. پس از انکوباسیون به مدت 1 تا 2 روز، سوسپانسیون سلول ویروسی با یک دور انجماد ذوب برداشت و سپس با سانتریفیوژ تغلیظ شد. گلوله دوباره به حالت تعلیق درآمده و در معرض چندین دور همگن سازی اولتراسونیک قرار گرفت.
جداسازی ویروس آبله میمون از ماکاک های واکسینه شده:
نمونه ها سه بار یخ زده ذوب شدند و در یک CupHorn اولتراسونیک فراصوت شدند. از دو رقت سازی (1:10 و 1:100) در محیط ترابری حاوی سرم جنین گاوی 1 درصد برای تلقیح تک لایه های سلول Vero در پلیت های شش چاهکی استفاده شد. پس از 1 ساعت انکوباسیون در دمای 37 درجه سانتی گراد، مایه تلقیح برداشته شد و با محیط کشت حاوی سرم جنین گاوی 1 درصد جایگزین شد. تک لایه ها به مدت 5 روز در دمای 37 درجه سانتی گراد کشت داده شدند و با محلول بنفش کریستالی رنگ آمیزی شدند.
(رجوع کنید به Stittelaar و همکاران، 2005)
اولتراسونیک برای تجزیه و تحلیل ویروس و تولید واکسن
Hielscher مافوق صوت نمونه کارها محصولات گسترده ای ارائه می دهد ultrasonicator ایده آل برای آزمایشگاه های تحقیقاتی و تحلیلی و همچنین برای تولید واکسن صنعتی.
Hielscher مافوق صوت در طراحی، ساخت و توزیع مافوق صوت با کارایی بالا و sono-bioreactors برای استفاده در آزمایشگاه های تحقیقاتی و تحلیلی و همچنین برای اجرای در تولید واکسن صنعتی تخصص دارد (به عنوان مثال. واکسن ها، Apis).
فراصوت را می توان برای رگ های باز، راکتورهای بسته به طور مداوم هم زده و راکتورهای جریان مداوم اعمال می شود. تمام قسمت های سیستم های اولتراسونیک که با محیط مایع در تماس هستند، از فولاد ضد زنگ، تیتانیوم یا شیشه ساخته شده اند. قطعات اتوکلاو و اتصالات بهداشتی تولید را تضمین می کنند شرایط درجه دارویی.
ضبط خودکار داده ها: نرم افزار هوشمند پارامترهای فرآیند فراصوت را به طور خودکار بر روی کارت حافظه SD یکپارچه ضبط می کند. کنترل دقیق تمام پارامترهای فرآیند تضمین می کند تکرارپذیری، استاندارد سازی تولید، و تحقق استانداردهای ایمنی محصولات دارویی را تسهیل می کند.
شرکت Hielscher Ultrasonics
’ پردازنده های اولتراسونیک بسیار قابل اعتماد هستند و می توانند به طور دقیق کنترل شوند. تمام مافوق صوت صنعتی می تواند تنظیم برای ارائه طیف گسترده ای از دامنه های پایین تر تا بسیار بالا. استحکام سیستم های اولتراسونیک Hielscher را اجازه می دهد تا برای عملیات 24/7 تحت وظیفه سنگین و در محیط های خواستار.
جدول زیر به شما نشانه ای از ظرفیت پردازش تقریبی مافوق صوت ما می دهد:
| حجم دسته ای | نرخ جریان | دستگاه های توصیه شده |
|---|---|---|
| صفحات چند چاه / میکروتیتر | N / A | UIP400MTP |
| 1 تا 500 میلی لیتر | 10 تا 200 میلی لیتر در دقیقه | UP100H |
| 10 تا 2000 میلی لیتر | 20 تا 400 میلی لیتر در دقیقه | تا 200 هرتز، UP400St |
| 0.1 تا 20 لیتر | 0.2 تا 4 لیتر در دقیقه | UIP2000hdT |
| 10 تا 100 لیتر | 2 تا 10 لیتر در دقیقه | UIP4000hdT |
| N / A | 10 تا 100 لیتر در دقیقه | UIP16000 |
| N / A | بزرگتر | خوشه ای از UIP16000 |
تماس با ما! / از ما بپرسید!
برش DNA اولتراسونیک
اقتباس شده از Jkwchui تحت CC-BY-SA.03
ادبیات / منابع
- Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
- Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
- J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
- Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
- Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.
حقایقی که ارزش دانستن دارند
ویروس آبله میمون
آبله میمون (MPV، MPXV یا hMPXV) گونه ای از ویروس DNA دو رشته ای است که باعث بیماری مشترک بین انسان و دام ویروسی می شود. این بیماری به عنوان عفونت آبله میمون شناخته می شود و می تواند در انسان و حیوان رخ دهد. متعلق به تیره است Orthopoxvirus از خانواده Poxviridae. ویروس آبله میمون یکی از ویروس های ارتوپوکس انسانی به همراه ویروس های واریولا (VARV)، آبله گاوی (CPX) و واکسن (VACV) است. ارتوپوکس ویروس ها با ذرات بزرگ ویروس آجری شکل مشخص می شوند که حاوی ژنوم DNA دو رشته ای تقریبا 200000 جفت باز است.
سنجش الایزا
ELISA مخفف Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay است و یک روش ایمنی برچسب گذاری شده است که استاندارد طلایی سنجش ایمنی در نظر گرفته می شود. الایزا یک test ایمونولوژیک است که به دلیل حساسیت تشخیصی بالای آن ارزشمند است، برای شناسایی و تعیین کمیت مولکول ها از جمله آنتی بادی ها، آنتی ژن ها، پروتئین ها، گلیکوپروتئین ها و هورمون ها استفاده می شود. اصل الایزا بر اساس برهمکنش آنتی ژن-آنتی بادی است. با این برهمکنش آنتی ژن-آنتی بادی، آنتی بادی های اختصاصی به آنتی ژن هدف خود متصل می شوند. تنها زمانی که تعامل انجام می شود، بستر می تواند به آنزیم متصل شود و تبدیل بستر بعدی را می توان مشاهده کرد، به این معنی که نتیجه مثبتی به دست می آید.
Hielscher مافوق صوت تولید کننده هموژنایزرهای مافوق صوت با کارایی بالا از ازمایشگاه ها تا اندازه صنعتی.