شستشوی آنتی بادی با فراصوت با استفاده از فراصوت با توان بالا

کروماتوگرافی میل ترکیبی یک تکنیک قدرتمند برای تصفیه پروتئین است، که نیاز به شستشوی غیر اختصاصی به کمک اولتراسونیک یک روش آماده سازی نمونه قابل اعتماد برای به دست آوردن آنتی بادی ها از کروماتوگرافی میل است. شستشوی کارآمد و تکرارپذیر آنتی بادی های هدف متصل به ماتریس های میل ترکیبی به طور قابل توجهی با فراصوت بهبود یافته است. UIP400MTP صفحه سونیکاتور با توان عملیاتی بالا به طور بهینه برای حذف تعداد نمونه های بالا در صفحات 96 چاه، میکروتیتر و چند چاه مناسب است و بازیابی آنتی بادی در کروماتوگرافی میل ترکیبی را تسهیل می کند.

چگونه Sonication شستشو را تسهیل می کند؟

با استفاده از شستشوی غیر اختصاصی تشدید شده با التراسون، کارگران آزمایشگاه و دانشمندان می توانند به طور موثر آنتی بادی های خالص شده را از ستون های کروماتوگرافی میل بازیابی. این آنتی بادی های خالص شده از طریق کاربردهای پایین دستی در زمینه های مختلف مانند ایمونولوژی، بیوتکنولوژی و تشخیص پزشکی اجرا می شوند.

Elution یک مرحله آماده سازی نمونه است که معمولا برای کروماتوگرافی میل استفاده می شود: کروماتوگرافی میل ترکیبی از فعل و انفعالات بسیار خاص بین یک مولکول هدف (مانند آنتی بادی) و یک لیگاند تثبیت شده در ماتریس کروماتوگرافی استفاده می کند. این امکان تصفیه انتخابی مولکول هدف از یک مخلوط پیچیده را با استفاده از میل اتصال خاص مولکول ها، به عنوان مثال آنتی بادی ها فراهم می کند.
اتصال اختصاصی آنتی بادی ها: آنتی بادی ها اغلب با استفاده از کروماتوگرافی میل تمایلی خالص می شوند، جایی که به طور انتخابی به لیگاندی که روی رزین کروماتوگرافی بی حرکت شده است متصل می شوند. این می تواند یک آنتی ژن، یک پروتئین A/G یا هر مولکول دیگری باشد که به طور خاص با آنتی بادی مورد نظر تعامل داشته باشد.
شستشو: پس از اتصال آنتی بادی هدف به ماتریس، مرحله بعدی شامل شستشو (یا شستشو) آنتی بادی متصل شده از رزین است. این مرحله شستشو معمولا شامل اختلال در اتصال خاص بین آنتی بادی و لیگاند است. این مرحله را می توان با فراصوت تسهیل.
التراسونیک کمک شستشو غیر اختصاصی: برخلاف روش های شستشوی خاص که فقط برهمکنش آنتی بادی-لیگاند را مختل می کنند، روش های شستشو غیر اختصاصی تمام فعل و انفعالات روی رزین از جمله موارد غیر اختصاصی را مختل می کنند. این می تواند در هنگام برخورد با آلاینده های به شدت محدود که ممکن است در روند تصفیه اختلال ایجاد کنند، سودمند باشد. در اینجا فراصوت می آید به بازی! امواج اولتراسونیک برای تولید حباب های کاویتاسیون در بافر شستشو استفاده می شود. هنگامی که این حباب ها در نزدیکی ماتریس رزین فرو می ریزند، نیروهای برشی موضعی شدید و میکرواستریم ایجاد می کنند. این اختلال مکانیکی به شکستن فعل و انفعالات غیر اختصاصی بین آنتی بادی و لیگاند کمک می کند و شستشوی آنتی بادی متصل شده از ماتریکس را تسهیل می کند.

مزایای استفاده از شستشو اولتراسونیک با استفاده از فراصوت

شستشوی اولتراسونیک مزایای متعددی را ارائه می دهد، به ویژه در زمینه تکنیک های تصفیه پروتئین مانند کروماتوگرافی میل تمایلی.
به عنوان مثال، فراصوت از نظر یکپارچگی پروتئین، بازیابی، خلوص، تطبیق پذیری و بهره وری از روش های جایگزین برتری دارد. این مزایا باعث می شود شستشوی اولتراسونیک یک انتخاب ارجح برای فرآیندهای تصفیه پروتئین، به ویژه در برنامه های کاربردی که در آن حفظ ساختار پروتئین و فعالیت ضروری است. علاوه بر این ، شستشو اولتراسونیک به دلیل سادگی ، کارایی ، تطبیق پذیری و سازگاری با طیف گسترده ای از پروتئین ها و ماتریس های میل ترکیبی برجسته است. با استفاده از امواج اولتراسوند برای مختل کردن فعل و انفعالات ماتریس پروتئین، شستشو اولتراسونیک یک روش ملایم و سریع برای تصفیه پروتئین ارائه می دهد، اطمینان از نرخ بازیابی بالا و حفظ یکپارچگی پروتئین برای کاربردهای پایین دستی.

ملایم تر در ساختار پروتئین: شستشوی pH پایین شامل استفاده از بافرهای اسیدی برای مختل کردن اتصال بین پروتئین هدف (به عنوان مثال، آنتی بادی ها) و ماتریس میل ترکیبی است. با این حال، قرار گرفتن در معرض pH پایین می تواند پروتئین ها را دناتوره کند و به طور بالقوه ساختار و فعالیت بیولوژیکی آنها را به خطر بیندازد. در مقابل، شستشوی اولتراسونیک در درجه اول به جای دناتوره شدن شیمیایی به اختلال مکانیکی متکی است، و آن را در ساختار پروتئین ملایم تر می کند. این امر به ویژه هنگام تصفیه پروتئین های ظریف یا آنتی بادی های حساس به تغییرات pH سودمند است.

• کاهش خطر تجمیع: شستشوی pH پایین ممکن است خطر تجمع پروتئین با توجه به آشکار شدن پروتئین و قرار گرفتن در معرض مناطق آبگریز را افزایش می دهد. تجمع می تواند منجر به از دست دادن فعالیت پروتئین و مشکلات در پردازش پایین دست شود. شستشوی اولتراسونیک، در مقایسه، خطر تجمع را با استفاده از نیروهای مکانیکی برای مختل کردن فعل و انفعالات بین پروتئین و ماتریس میل بدون تغییر قابل توجهی در ساختار بومی پروتئین به حداقل می رساند.
• بهبود بازیابی و خلوص: شستشوی اولتراسونیک می تواند به میزان بازیابی و سطح خلوص بالاتر در مقایسه با روش های شستشو جایگزین دست یابد. اختلال مکانیکی ارائه شده توسط فراصوت به طور موثر آزاد پروتئین های محدود از ماتریس میل در حالی که به حداقل رساندن فعل و انفعالات غیر خاص. این منجر به افزایش بازیابی پروتئین هدف با کاهش آلودگی از مولکول های غیر متصل به طور خاص می شود که به خلوص بالاتر کسر شسته شده کمک می کند.
• پردازش با توان عملیاتی بالا: Hielscher مافوق صوت ارائه می دهد فراصوت های مختلف برای سونوگرافی کمکی تصفیه پروتئین, شستشو و biopanning. UIP400MTP میکروتیتر صفحه فراصوت اجازه می دهد تا برای پردازش انبوه نمونه ها در 96 چاه و دیگر صفحات چند چاه. VialTweeter ایده آل برای بدون دردسر است, فراصوت همزمان تا 10 لوله مانند ویال Eppendorf تحت شرایط مشابه. CupHorn یک فراصوت همه کاره ایده آل برای چندین لوله، لیوان های کوچک و عروق دیگر است. و البته، کلاسیک پروب نوع فراصوت با microtips یک ابزار آزمایشگاهی به خوبی تثبیت شده برای آماده سازی نمونه است. محدوده محصول Hielscher Ultrasonics دارای سونیک ایده آل برای راه اندازی آزمایش خود و اندازه نمونه خود را.
• تطبیق پذیری و سازگاری: شستشوی اولتراسونیک با طیف گسترده ای از پروتئین ها و ماتریس های میل سازگار است و تطبیق پذیری را در برنامه های کاربردی تصفیه ارائه می دهد. در مقابل، شستشوی pH پایین ممکن است برای پروتئین های خاصی که به شرایط اسیدی حساس هستند یا برای ماتریس های میل ترکیبی که مستعد تخریب یا شستشوی در pH پایین هستند، مناسب نباشد. شستشوی اولتراسونیک فراهم می کند یک جایگزین ملایم و جهانی قابل اجرا است که می تواند به نیازهای تصفیه خاص بدون به خطر انداختن یکپارچگی پروتئین و یا ثبات ماتریس طراحی شده.
• زمان و کارایی: شستشوی اولتراسونیک معمولا در مقایسه با سایر روش های شستشو به زمان شستشو کوتاه تری نیاز دارد. انتشار سریع و کارآمد پروتئین های محدود تسهیل شده توسط سونفراسونیک زمان پردازش را کاهش می دهد و راندمان تصفیه کلی را افزایش می دهد و آن را به گزینه ای جذاب برای برنامه های کاربردی با توان بالا و یا زمانی که نتایج حساس به زمان مورد نیاز است.

التراسونیک کمک Biopanning

بیوپانینگ یک تکنیک حیاتی در تصفیه آنتی بادی است، به ویژه زمانی که آنتی بادی های بسیار اختصاصی برای تحقیق یا تشخیص پزشکی باید به دست آید. بیوپانینگ فرآیندی است که در آن آنتی بادی ها از مخلوطی از آنتی بادی ها جدا می شوند، به اصطلاح کتابخانه آنتی بادی.

Biopanning اولتراسونیک چگونه کار می کند؟

این کار با کتابخانه ای از آنتی بادی ها، مخلوطی از آنتی بادی های مختلف شروع می شود. هر آنتی بادی با شکل و ویژگی منحصر به فرد خود مشخص می شود. برای تجزیه و تحلیل و درمان، آنتی بادی های خاصی که یک هدف خاص را تشخیص می دهند، مانند ویروس یا سلول سرطانی، باید جدا شوند. با استفاده از بیوپانینگ می توان این آنتی بادی های خاص را جدا کرد. امواج فراصوت کمک می کند تا برای تسهیل فرآیند biopanning و تصفیه آنتی بادی کارآمد تر.

با شروع با کتابخانه ای از آنتی بادی ها، آنتی بادی ها معمولا روی سطح باکتریوفاژ، سلول مخمر یا سایر سیستم های نمایش نمایش داده می شوند. این کتابخانه طیف متنوعی از آنتی بادی ها را نشان می دهد.
در مرحله اول، این کتابخانه در معرض مولکول هدف شما قرار می گیرد. آنتی بادی هایی که به هدف متصل می شوند می چسبند، در حالی که بقیه شسته می شوند. برای حذف آنتی بادی های نامحدود، نمونه ها چندین بار با محلول بافر شسته می شوند.

اکنون، ما نمونه هایی داریم که فقط حاوی آنتی بادی های متصل هستند. با این حال، این بدان معناست که آنتی بادی ها هنوز به سیستم نمایشگر خود متصل هستند. برای آزاد کردن آنها، برهمکنش آنتی بادی-لیگاند باید شکسته شود. این مرحله به عنوان شستشو شناخته می شود. نمونه ها را می توان با استفاده از محلولی که اتصال را مختل می کند، شسته کرد، به عنوان مثال با استفاده از یک بافر شستشوی خاص، یک آشوب، کاهش مقدار pH، اعمال گرما و غیره. این تکنیک های شستشو اتصال آنتی بادی-لیگاند را از بین می برند، اما می توانند خود آنتی بادی ها را نیز خراب کنند. به همین دلیل است که فراصوت به عنوان تکنیک جایگزین برای حذف آرام آنتی بادی ها از هدف خود استفاده می شود.

پس از نهایی شدن مرحله شستشو، آنتی بادی های خالص شده را به دست می آوریم که آماده استفاده در تحقیقات، تشخیص یا درمان هستند.

Biopanning یک تکنیک قدرتمند در تصفیه آنتی بادی است و شستشو اولتراسونیک اثربخشی را تسهیل و تشدید می کند – در نتیجه آنتی بادی های بسیار خالص و آسیب ندیده ایجاد می شود. biopanning اولتراسونیک دانشمندان را قادر می سازد تا آنتی بادی های بسیار خاص را از نمونه های پیچیده جدا کنند و درها را به طیف گسترده ای از برنامه ها باز کنند.

Sonicators برای تصفیه آنتی بادی

صوتی Hielscher ابزار به خوبی تثبیت شده در بهترین امکانات تحقیقاتی در سراسر جهان استفاده می شود. ارزش برای دولت از هنر طراحی و عملکرد برتر, صوتی Hielscher به عنوان ابزار آزمایشگاهی ضروری در زمینه های بیوتکنولوژی و زیست شناسی مولکولی در نظر گرفته. Hielscher مافوق صوت ارائه می دهد فراصوت برای تک نمونه و همچنین آماده سازی نمونه با توان بالا, که تسهیل تصفیه کارآمد آنتی بادی ها و شستشو مولکول های هدف محدود, و فعال کردن برای biopanning کارآمد به جداسازی آنتی بادی های خاص با دقت و سرعت.
در زمینه تصفیه آنتی بادی، فراصوت Hielscher در تسهیل مراحل شستشو و شستشو با از بین بردن موثر آنتی بادی های نامحدود در حالی که حفظ یکپارچگی مجتمع های هدف محدود برتری دارند. کنترل دقیق و مقیاس پذیری آنها شرایط پردازش متناسب را فراهم می کند و نتایج تصفیه بهینه را در طیف گسترده ای از حجم ها و پیچیدگی های نمونه تضمین می کند.
فراصوت Hielscher نشان دهنده نوآوری های تکنولوژیکی در پردازش اولتراسونیک، ارائه قابلیت های بی نظیر برای تصفیه آنتی بادی، شستشو، و biopanning. سیستم های مختلف اولتراسونیک با دقت، قابلیت اطمینان و سهولت کارکرد، کارایی و تطبیق پذیری مطلوب را برای تحقیقات بیودارویی، تشخیص و درمان ارائه می دهند.
تماس با ما در حال حاضر برای کسب اطلاعات بیشتر در مورد فراصوت Hielscher برای تصفیه آنتی بادی, شستشو, و biopanning! کادر فنی با تجربه ما خوشحال هستند که در مورد برنامه مربوط به آنتی بادی شما صحبت می کنند!

طراحی، ساخت و مشاوره – کیفیت ساخت آلمان

مافوق صوت Hielscher به خوبی برای بالاترین کیفیت و استانداردهای طراحی خود را شناخته شده. استحکام و بهره برداری آسان اجازه می دهد تا ادغام صاف از ultrasonicators ما به امکانات صنعتی. شرایط خشن و محیط های خواستار به راحتی توسط مافوق صوت Hielscher رسیده.

Hielscher اولتراسونیک یک شرکت دارای گواهینامه ISO است و تاکید ویژه ای بر مافوق صوت با کارایی بالا با ویژگی های دولت از هنر فن آوری و کاربر پسند قرار داده است. البته، مافوق صوت Hielscher مطابق با CE و دیدار با الزامات UL، CSA و RoHs.

مقایسه روش های التراسونیک در مقابل تکنیک های سنتی شستشو

1. شستشوی گرادیان: در شستشوی گرادیان، استحکام اتصال بین پروتئین هدف و ماتریس میل ترکیبی به تدریج با تغییر ترکیب بافر شستشو کاهش می یابد. این می تواند شامل عوامل تغییر دهنده ای مانند pH، غلظت نمک یا غلظت لیگاندهای رقیب باشد. شستشوی گرادیان امکان تنظیم دقیق شرایط شستشو را فراهم می کند تا پروتئین مورد نظر را به طور انتخابی آزاد کند و در عین حال اتصال غیر اختصاصی را به حداقل برساند.
   مزایای شستشوی اولتراسونیک: شستشو اولتراسونیک ارائه می دهد انتشار سریع تر و یکنواخت پروتئین های محدود در مقایسه با شستشوی گرادیان. در حالی که شستشوی گرادیان نیاز به بهینه سازی دقیق و نظارت بر شرایط شستشو دارد، شستشوی اولتراسونیک روش ساده تر و کارآمدتری را برای بازیابی پروتئین فراهم می کند.
2. شستشوی رقابتی: در شستشوی رقابتی، غلظت بالایی از یک لیگاند رقیب به بافر شستشو وارد می شود تا اتصال بین پروتئین هدف و ماتریس میل ترکیبی را مختل کند. لیگاند رقیب برای مکان های اتصال روی ماتریس با پروتئین هدف رقابت می کند و در نتیجه پروتئین را جابجا کرده و آن را در لافتن آزاد می کند.
   مزایای شستشوی اولتراسونیک: شستشوی اولتراسونیک جایگزین ملایم تر و همه کاره تری برای شستشوی رقابتی ارائه می دهد. شستشوی رقابتی ممکن است نیاز به استفاده از غلظت های بالای عوامل آشوب شناختی (یعنی املاح مشترک که شبکه پیوند هیدروژنی بین مولکول های آب را مختل می کند و با تضعیف اثر آبگریز ثبات حالت بومی پروتئین ها را کاهش می دهد) یا مواد شیمیایی خشن باشد که می تواند بر پایداری و فعالیت پروتئین تأثیر بگذارد. در مقابل، شستشوی اولتراسونیک اختلال مکانیکی را بدون نیاز به عوامل شیمیایی اضافی فراهم می کند، یکپارچگی پروتئین را حفظ می کند و از نرخ بازیابی بالا اطمینان حاصل می کند.
3. شستشوی ناشی از دما: شستشوی ناشی از دما شامل تغییر دمای بافر شستشو برای مختل کردن اتصال بین پروتئین هدف و ماتریس میل است. این را می توان با افزایش یا کاهش دما، بسته به برهمکنش خاص پروتئین-ماتریس به دست آورد.
   مزایای شستشوی اولتراسونیک: شستشوی اولتراسونیک ارائه می دهد یک روش سریع تر و کنترل شده برای شستشوی پروتئین در مقایسه با روش های ناشی از دما. در حالی که شستشوی ناشی از دما ممکن است نیاز به کنترل دقیق شیب دما و زمان تعادل طولانی تر داشته باشد، شستشوی اولتراسونیک اختلال مکانیکی فوری را ایجاد می کند و در نتیجه زمان شستشو کوتاه تر و کارایی بهبود می یابد.
4. شستشوی آنزیمی: شستشوی آنزیمی از آنزیم های خاصی استفاده می کند که پیوندهای بین پروتئین هدف و ماتریس میل ترکیبی را می شکافند و پروتئین را در آبشویی آزاد می کنند. این روش به ویژه برای پروتئین هایی که به شدت به ماتریس متصل هستند یا برای کاربردهایی که نیاز به کنترل دقیق بر شرایط شستشو دارند مفید است.
   مزایای شستشوی اولتراسونیک: شستشوی اولتراسونیک یک جایگزین غیر آنزیمی و بدون مواد شیمیایی برای شستشوی آنزیمی ارائه می دهد. در حالی که شستشوی آنزیمی ممکن است نیاز به بهینه سازی غلظت آنزیم، زمان انکوباسیون و شرایط pH داشته باشد، شستشوی اولتراسونیک یک روش ساده و جهانی قابل اجرا برای بازیابی پروتئین بدون نیاز به معرف های اضافی یا تجهیزات تخصصی فراهم می کند.