Trombotsüütiderikka seerumi ultraheli abil valmistamine
- Trombotsüütiderikas plasma (PRP) on trombotsüütidega rikastatud vereplasma, mida kasutatakse meditsiinilisteks ja esteetilisteks ravimeetoditeks.
- Ultraheli lüüs ja konditsioneerimine on väga tõhus meetod trombotsüütiderikka plasma valmistamiseks.
- Hielscher Ultrasonics pakub mitmesuguseid ultraheli süsteeme, mis vastavad vere töötlemise nõuetele (nt vere ettevalmistamiseks puhasruumis ja väljaspool puhasruumi).
Trombotsüütiderikas seerum
Ultraheli töötlus (sonikeerimine) on usaldusväärne ja lihtne meetod trombotsüütide lüüsimiseks autoloogses vereseerumis, et vabastada kasvufaktorid. Trombotsüütidest pärinevaid fraktsioone – tuntud ka kui autoloogne konditsioneeritud seerum (ACS) – kasutatakse kudede taastamiseks või esteetilisteks ravimeetoditeks. Optimaalsete tulemuste saavutamiseks rikastatakse PRP enne süstimist.
Rakkude kasvufaktoreid sisaldava rikastatud plasma valmistamisel on ultraheli töötlus (sonikeerimine) väga tõhus ja efektiivne meetod rakumembraanide lüüsimiseks ning peaaegu kõigi rakkude kasvufaktorite vabastamiseks trombotsüütidest. Ultraheli lüüsi ja konditsioneerimise abil saab kasutada isegi antikoaguleeritud verd.
PRP konditsioneerimine ultraheli töötluse (sonikeerimise) abil on mugav ja kulutõhus viis kontsentreeritud kasvufaktorite saamiseks.
Trombotsüütiderikka plasma (PRP) ultraheli lüüs
Ultraheli lüüsi mõjud
Vereseerumi ultraheli töötlus põhjustab trombotsüütide homogeense lüüsi, et vabastada kinnijäänud kasvufaktorid (kasvufaktor AB (PDGF-AB), kasvufaktor AA (PDGF-AA), kasvufaktor BB (PDGF-BB), veresoonte endoteeli kasvufaktor (VEGF), transformeeriv kasvufaktor β (TGF-β), epidermaalne kasvufaktor (EGF), insuliinitaoline kasvufaktor (IGF), epiteelirakkude kasvufaktor ECGF ja fibroblastide kasvufaktor (FGF)). Trombotsüüdid ja nende alfa-graanulid lõhutakse ultraheli töötlusega (sonikeerimisega), kasutades nähtust, mida nimetatakse akustiliseks kavitatsiooniks. Ultraheli kavitatsiooni kasutamine trombotsüütide lüüsiks vähendab korduva külmutamise ja sulatamise meetodi võimalikku negatiivset mõju kasvufaktorite aktiivsusele.
Ultraheli abil PRP valmistamise protokoll
Ligikaudu 16mL värskelt kogutud autoloogset vereproovi pööratakse õrnalt 8–10 korda katsutis ümber, et veri ja antikoagulandid seguneksid hästi. Seejärel tsentrifuugitakse proovi 1800 g juures 20 min toatemperatuuril. Pärast tsentrifuugimist moodustavad trombotsüüdid ja mononukleaarsed rakud plasmakihi põhjas valkja kihi, mida nimetatakse trombotsüütiderikkaks plasmaks (PRP). Ülemist kihti nimetatakse trombotsüütidevaeseks plasmaks (PPP). Mononukleaarsed rakud võib eemaldada või need võivad proovi jääda. Sageli jäetakse mononukleaarsed rakud PRP proovi, et vältida lisaetappe, mis kätkevad saastumisohtu.
Märkus: autoloogse PRP ultraheli töötlus tuleb teha steriilsetes tingimustes.
PRP ja PPP eraldatakse ja kogutakse. PPP-le lisatakse 1,5mL 10% kaltsiumkloriidilahust, PRP-le aga 0,5mL 5% etanooli. Mõlemat suspensiooni segatakse õrnalt ja lastakse seista 5 min toatemperatuuril. Lõpuks lisatakse PRP suspensioonile 1mL PPP-d ning lastakse seista, kuni moodustub fibriinitromb.
Ultraheli töötlus: Kuna moodustunud trombotsüütide geel toimib vabanenud kasvufaktorite reservuaarina, tuleb fibriinigeel lõhkuda, et olemasolevad kasvufaktorid vabastada. Ultraheli lüüsi ja kasvufaktorite vabastamise parameetrid on järgmised: sonikeerige katsutis olevat proovi seadmega UP200Ht või UP200St (200W, 26kHz) ja sonotroodiga S26d2. Vere proovi ülekuumenemise vältimiseks võib ultraheli töötlust (sonikeerimist) teha pulseerivate tsüklitena (nt 10 sek. sees, 30 sek. väljas). Proov tuleks jahutamiseks asetada jääle, nii et temperatuuri hoitakse optimaalselt vahemikus 2 – 5°C. Pärast ultraheli töötlust tsentrifuugitakse proovi 16 000 g juures 5 min. toatemperatuuril. Supernatant kogutakse ja seda võib säilitada temperatuuril -70°C.
Trombotsüütide kontsentratsioon PRP fraktsioonis oli ultraheli meetodi puhul 1,7 – 4,5 korda rikastatud võrreldes kirjanduse andmetel täisveres esineva keskmise trombotsüütide arvuga.
PRP-d on kombineeritud rasvkoest pärit tüvirakkude teraapiaga (ultraheli abil vabastatud autoloogsed tüvirakud rasvkoest, segatud PRP-ga ja süstitud tagasi patsiendi koesse taastamiseks).
Ultraheli seadmed
Hielscher Ultrasonics on ekspert keerukate ja töökindlate ultraheli tehnoloogiate vallas. Meie ultraheli seadmeid kasutatakse üle maailma lüüsiks, ekstraheerimiseks ja proovide ettevalmistamiseks – otseselt ja kaudselt. Autoklaavitavad ja ühekordsed tarvikud tagavad autoloogsete vereproovide saastevaba töötlemise. Enamikku meie süsteemidest saab kasutada tüvirakkude ja PRP ultraheli lüüsiks, mis muudab meie ultraheli seadmed majanduslikult veelgi tõhusamaks.
Alljärgnevas tabelis on loetletud meie ultraheli seadmed, mis sobivad trombotsüütiderikka plasma valmistamiseks, ning vastavalt nende soovitatavad proovimahud. Saadaval on ka suuremaid ultraheli töötlusseadmeid ja kliendi vajadustele kohandatud süsteeme.
| Seade | Võimsus [W] | Sagedus [kHz] | Tüüp | Maht [mL] | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| VialTweeter | 200 | 26 | iseseisev | 0,5 | – | 1,5 |
| UP50H | 50 | 30 | käsiseade või statiivil | 0,01 | – | 250 |
| UP100H | 100 | 30 | käsiseade või statiivil | 0,01 | – | 500 |
| UP200Ht | 200 | 26 | käsiseade või statiivil | 0,1 | – | 1000 |
| UP200St | 200 | 26 | statiivil | 0,1 | – | 1000 |
| UP400St | 400 | 24 | statiivil | 5,0 | – | 2000 |
| UP200St-SonoStep | 200 | 26 | iseseisev | 30 | – | 500 |
| GDmini2 | 200 | 26 | saastevaba läbivoolukamber | |||
Võtke meiega ühendust juba täna! Aitame hea meelega leida teile optimaalse ultraheli seadme!
Võtke meiega ühendust! / Küsige meilt!
GDmini2 koos UP200St-TD muunduriga (200 vatti)
Kirjandus ja viited
- Fortunato, T. M.; Beltrami, Ch.; Emanueli, C.; De Bank, P.A:; Pula, G. (2016): Trombotsüütide lüsaadi geel ja endoteeli eellased stimuleerivad mikrovaskulaarse võrgustiku moodustumist in vitro: koetehnoloogia mõju. Sci. Rep. 6, 2016.
- Hamid, M.S.A.; Yusof, Ashril; Ali, Mohamed Razif Mohamed (2014): trombotsüütide rikas plasma (PRP) ägeda lihaskahjustuse korral: süstemaatiline ülevaade. PLOS ONE köide 9, väljaanne 2, 2014.
Väärt teada
Trombotsüütiderikas plasma
Trombotsüütiderikas plasma sisaldab kasvufaktorit AB (PDGF-AB), trombotsüütidest pärinevat kasvufaktorit AA (PDGF-AA), trombotsüütidest pärinevat kasvufaktorit BB (PDGF-BB), veresoonte endoteeli kasvufaktorit (VEGF), transformeerivat kasvufaktorit β (TGF-β), epidermaalset kasvufaktorit (EGF), insuliinitaolist kasvufaktorit (IGF), epiteelirakkude kasvufaktorit ECGF ja fibroblastide kasvufaktorit (FGF), mis on olulised rakkude kasvu ja uuenemise stimulaatorid.
Autoloogne konditsioneeritud seerum (ACS)
Autoloogne konditsioneeritud plasma (ACP) on trombotsüütiderikas plasma, mis eraldatakse autoloogsest verest ja mida kasutatakse regeneratsiooni toetamiseks mitmesuguste ortopeediliste seisundite ja kirurgiliste protseduuride korral. Konditsioneeritud seerum valmistatakse plasma eraldamisega teistest verekomponentidest (nt erütrotsüütidest) ja selle kontsentreerimisega. ACP on trombotsüütiderikas plasma (PRP). PRP on üldmõiste plasmatüübi kohta, mis sisaldab täisverega võrreldes oluliselt suuremat trombotsüütide kontsentratsiooni. See eraldatakse täisverest. ACP peamised komponendid on trombotsüüdid ja mitmed kasvufaktorid, mis on paranemisprotsessides võtmetähtsusega. Erinevalt teistest trombotsüütiderikka plasma preparaatidest iseloomustab ACP-d madal valgevereliblede, näiteks neutrofiilsete granulotsüütide kontsentratsioon, mis võivad suurtes kontsentratsioonides paranemisprotsessi kahjustada.
Trombotsüütiderikka plasma süstid
Trombotsüütiderikast plasmat kasutatakse süstina regeneratiivses meditsiinis ning kosmeetilistes protseduurides. PRP kasutamine lubab oluliselt kiirendada lihaste paranemist ja taastumist. Lisaks kasutatakse seda edukalt põletiku, artriidi, valu, haavade, aeglaselt paranevate lahtiste haavade ja raskete nahapõletuste raviks. PRP sisaldab kõrgel tasemel kasvufaktoreid, mis stimuleerivad ja kaitsevad paranevaid rakke, nii et kahjustatud kude taastub.
Kosmeetilistes ravimeetodites on PRP osutunud tõhusaks juuksekasvu ja naha uuenemise stimuleerimisel (tuntud ka kui vampiiriravi).
Trombotsüütidest pärinevad kasvufaktorid (PDGF)
Mõiste trombotsüütidest pärinev kasvufaktor (PDGF) viitab faktoritele PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C ja PDGF-D. See on signaalivõrgustik, mis koosneb neljast ligandist (PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C ja PDGF-D) ning kahest retseptorist, PDGFR-alfa ja PDGFR-beeta.
Kasvufaktorid ehk valgud reguleerivad rakkude kasvu ja jagunemist. Kuna see on imetajate seerumis leiduv peamine mitogeen, mis vabaneb trombotsüütidest trombi moodustumise ajal, on sellel oluline roll veresoonte moodustumisel (angiogeneesis), see tähendab veresoonte kasvul juba olemasolevast veresoonekoest.