Trombotsüütide rikka seerumi ultraheli ettevalmistamine
- Trombotsüütide rikas plasma (PRP) on trombotsüütidega rikastatud vereplasma, mida kasutatakse meditsiiniliseks ja esteetiliseks raviks.
- Ultraheli lüüs ja konditsioneerimine on väga tõhus meetod trombotsüütiderikka plasma valmistamiseks.
- Hielscher Ultrasonics pakub erinevaid ultraheli süsteeme, mis vastavad vereravi nõuetele (nt puhta ruumi ettevalmistamiseks sees ja väljas).
trombotsüütide rikas seerum
Sonikatsioon on usaldusväärne ja lihtne meetod trombotsüütide lüüsimiseks autoloogses vereseerumis, et vabastada kasvufaktorid. Trombotsüütidest saadud fraktsioonid – tuntud ka kui autoloogne konditsioneeritud seerum (ACS) – kasutatakse kudede parandamiseks või esteetiliseks raviks. Optimaalsete tulemuste saamiseks rikastatakse PRP-d enne süstimist.
Rikastatud plasma valmistamiseks rakkude kasvufaktoritega on ultrahelitöötlus väga tõhus ja tõhus meetod rakumembraanide lüüsimiseks ja peaaegu kõigi rakkude kasvufaktorite vabastamiseks trombotsüütidest. Ultraheli lüüsi ja konditsioneerimise abil võib kasutada isegi hüübimisvastast verd.
PRP konditsioneerimine ultrahelitöötluse abil on mugav ja kulutõhus viis kontsentreeritud kasvufaktorite saamiseks.
Trombotsüütide rikka plasma ultraheli lüüs (PRP)
Ultraheli lüüsi mõjud
Vereseerumi ultraheliravi tulemuseks on trombotsüütide homogeenne lüüs, et vabastada kinnipüütud kasvufaktorid (kasvufaktor AB (PDGF-AB), kasvufaktor AA (PDGF-AA), kasvufaktor BB (PDGF-BB), veresoonte endoteeli kasvufaktor (VEGF), transformeeriv kasvufaktor β (TGF-β), epidermise kasvufaktor (EGF), insuliinitaoline kasvufaktor (IGF), epiteelirakkude kasvufaktor ECGF ja fibroblastiline kasvufaktor (FGF)). Trombotsüüdid ja nende alfa-graanulid on ultrahelitöötlusega häiritud, kasutades nähtust akustiline kavitatsioon. Ultraheli kavitatsiooni kasutamine trombotsüütide lüüsiks vähendab korduva külmutamise-sulatamise meetodi võimalikku negatiivset mõju kasvufaktori aktiivsusele.
Ultraheli PRP ettevalmistamise protokoll
Umbes 16 ml värsket kogutud autoloogset vereproovi pööratakse tuubis õrnalt 8-10 korda ümber, nii et veri ja antikoagulandid on hästi segunenud. Seejärel tsentrifuugitakse proovi 1800 g juures 20 minutit toatemperatuuril. Pärast tsentrifuugimist moodustavad trombotsüüdid ja mononukleaarsed rakud plasmakihi põhja valkja kihi, mida nimetatakse trombotsüütiderikkaks plasmaks (PRP). Ülemist kihti tuntakse trombotsüütide vaese plasmana (PPP). Mononukleaarsed rakud võib eemaldada või jääda proovi. Sageli jäävad mononukleaarsed rakud PRP proovi, et vältida täiendavaid samme, mis kannavad saastumise ohtu.
Märkus: Autoloogse PRP ultraheliravi tuleb läbi viia steriilsetes tingimustes.
PRP ja PPP eraldatakse ja kogutakse. PPP-le lisatakse 1,5 ml 10% kaltsiumkloriidi lahust, samas kui PRP-le lisatakse 0,5 ml 5% etanooli. Mõlemat suspensiooni loksutatakse õrnalt ja lastakse seista 5 minutit toatemperatuuril. Lõpuks lisatakse PRP suspensioonile 1 ml PPP-d ja lastakse seista, kuni moodustub fibriinihüüve.
Ultraheli töötlemine: Kuna moodustunud trombotsüütide geel toimib vabanenud kasvufaktorite reservuaarina, tuleb fibriinigeel olemasolevate kasvufaktorite vabastamiseks katkestada. Ultraheli lüüsi ja kasvufaktori vabanemise parameetrid on järgmised: Soniaat koos UP200Ht või UP200St (200W, 26kHz) sonotrode S26d2 prooviga katseklaasis. Vereproovi ülekuumenemise vältimiseks võib ultrahelitöötlust läbi viia pulseerivates tsüklites (nt 10 sek sisse, 30 sek. välja). Proov tuleks asetada jahutamiseks jääle nii, et temperatuur püsiks optimaalselt vahemikus 2 – 5 °C. Pärast ultrahelitöötlust tsentrifuugitakse proovi 16000 g juures 5 minutit toatemperatuuril. Supernatant kogutakse kokku ja seda võib säilitada -70 °C juures.
Trombotsüütide kontsentratsioon PRP fraktsioonis rikastati 1,7 – 4, 5 korda ultraheliga töödeldud meetodil, võrreldes kirjanduse keskmise trombotsüütide arvuga täisveres.
PRP-d on kombineeritud rasvkoest saadud tüvirakuteraapiaga (Ultraheli vabanenud autoloogsed tüvirakud rasvkoest, segatakse PRP-ga ja süstitakse parandamiseks tagasi patsiendi koesse).
Ultraheli seadmed
Hielscher Ultrasonics on kogenud ja usaldusväärse ultraheli tehnoloogia ekspert. Meie ultraheli seadmeid kasutatakse kogu maailmas lüüsimiseks, ekstraheerimiseks ja proovide ettevalmistamiseks – otsese ja kaudse kaudu. Autoklaavitav samuti Ühekordseks kasutamiseks tarvikud tagavad saastevaba autoloogsete vereproovide töötlemine. Enamikku meie süsteeme saab kasutada ultraheli lüüsiks Tüvirakkude ja PRP, mis muudab meie ultraheli seadmed majanduslikult veelgi tõhusamaks.
Alljärgnevas tabelis on loetletud meie ultraheli seadmed, mis sobivad trombotsüütide rikka plasma valmistamiseks, ja nende soovitatav proovimaht. Saadaval on ka suuremad ultrasonikaatorid ja kohandatud süsteemid.
| Seadme | Võimsus [W] | Freq. [kHz] | Liik | Maht [ml] | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| VialTweeter | 200 | 26 | eraldiseisev | 0.5 | – | 1.5 |
| UP50H | 50 | 30 | pihu- või standmount | 0.01 | – | 250 |
| UP100H | 100 | 30 | pihu- või standmount | 0.01 | – | 500 |
| UP200Ht | 200 | 26 | pihu- või standmount | 0.1 | – | 1000 |
| UP200St | 200 | 26 | seisnud | 0.1 | – | 1000 |
| UP400St | 400 | 24 | seisnud | 5.0 | – | 2000 |
| UP200St-SonoStep | 200 | 26 | eraldiseisev | 30 | – | 500 |
| GDmini2 | 200 | 26 | saastevaba voolukamber | |||
Palun võtke meiega ühendust juba täna! Meil on hea meel aidata teil leida optimaalne ultraheli seade!
Võta meiega ühendust! / Küsi meilt!
GDmini2 UP200St-TD anduril (200 vatti)
Kirjandus / viited
- Fortunato, T. M.; Beltrami, Ch.; Emanueli, C.; De Bank, P.A:; Pula, G. (2016): Trombotsüütide lüsaadi geel ja endoteeli eellased stimuleerivad mikrovaskulaarse võrgustiku moodustumist in vitro: koetehnoloogia mõju. Sci. Rep. 6, 2016.
- Hamid, M.S.A.; Yusof, Ashril; Ali, Mohamed Razif Mohamed (2014): trombotsüütide rikas plasma (PRP) ägeda lihaskahjustuse korral: süstemaatiline ülevaade. PLOS ONE köide 9, väljaanne 2, 2014.
Faktid, mida tasub teada
Trombotsüütide rikas plasma
Trombotsüütide rikas plasma sisaldab kasvufaktorit AB (PDGF-AB), trombotsüütide tuletatud kasvufaktorit AA (PDGF-AA), trombotsüütide tuletatud kasvufaktorit BB (PDGF-BB), veresoonte endoteeli kasvufaktorit (VEGF), transformeerivat kasvufaktorit β (TGF-β), epidermise kasvufaktorit (EGF), insuliinitaolist kasvufaktorit (IGF), epiteelirakkude kasvufaktorit ECGF ja fibroblastilist kasvufaktorit (FGF), mis on rakkude kasvu ja uuenemise olulised stimulaatorid.
Autoloogne konditsioneeritud seerum (ACS)
Autoloogne konditsioneeritud plasma (ACP) on autoloogsest verest ekstraheeritud trombotsüütiderikas plasma, mida kasutatakse regenereerimise toetamiseks mitmesugustes ortopeedilistes tingimustes ja kirurgilistes protseduurides. Konditsioneeritud seerum valmistatakse, eraldades plasma teistest verekomponentidest (näiteks erütrotsüütidest) ja kontsentreerides selle. ACP on trombotsüütide rikas plasma (PRP). PRP on üldine termin plasma tüübi kohta, mis sisaldab täisverega võrreldes oluliselt suuremat trombotsüütide kontsentratsiooni. Seda ekstraheeritakse täisverest. AKV põhikomponentide hulka kuuluvad trombotsüüdid (trombotsüüdid) ja mitmed kasvufaktorid, millel on paranemisprotsessis oluline roll. Erinevalt teistest trombotsüütide rikastest plasmapreparaatidest eristab ACP-d valgete vereliblede, näiteks neutrofiilide granulotsüütide madal kontsentratsioon, mis võib kõrge kontsentratsiooni korral kahjustada paranemisprotsessi.
trombotsüütiderikkad plasmasüstid
Trombotsüütide rikast plasmat kasutatakse süstina nii regeneratiivses meditsiinis kui ka kosmeetilistes protseduurides. PRP rakendamine lubab lihaste paranemise ja taastumise olulist kiirenemist. lisaks, seda kasutatakse edukalt põletiku, artriidi, valu, haavade, avatud haavade aeglase paranemise ja tõsiste nahapõletuste raviks. PRP sisaldab kõrgel tasemel kasvufaktoreid, mis stimuleerivad ja kaitsevad tervendavaid rakke ao kahjustatud koe parandamine.
Kosmeetiliste reetmiste puhul on PRP osutunud tõhusaks juuste kasvu, naha uuenemise (tuntud ka kui vampiiriravi) stimuleerimiseks.
Trombotsüütidest saadud kasvufaktorid (PDGF)
Trombotsüütidest tuletatud kasvufaktor (PDGF) viitab teguritele PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C ja PDGF-D. See on signaalivõrk, mis koosneb neljast ligandist (PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C ja PDGF-D) ja kahest retseptorist, PDGFR-alfa ja PDGFR-beeta.
Kasvufaktorid ehk valgud reguleerivad rakkude kasvu ja jagunemist. Imetajate seerumis leiduva peamise mitogeenina, mis vabaneb trombotsüütidest trombide moodustumise ajal, mängib see olulist rolli veresoonte moodustumisel (angiogeneesil), veresoonte kasvul juba olemasolevast veresoonte koest.